UNIVERSIDAD POLITCNICA DEL VALLE DE TOLUCA
CULTIVO DE ORQUDEAS POR TCNICAS DE MICRO PROPAGACIN IN VITRO
ING. BIOTECNOLOGA
ASIGNATURA: INGENIERIA DE PROYECTOS
EIBT:NUEZ ORTIZ ANGEL ISAAC 1208IBT291ROMERO LOPEZ ARIATNA
JANITZI 1208 IBT108 ASESORM CM. OLVERA QUIROZ HECTOR EMILIO
IntroduccinDesde hace miles de aos, las orqudeas han sido
conocidas y valoradas, un ejemplo es su uso en la antigua Grecia,
donde a esta planta se le atribuan propiedades curativas y
afrodisiacas. La palabra orqudea viene del griego orchis que
significa testculo, por la forma de los tubrculos de algunas
especies terrestres y porque crecen en pares. En nuestro pas desde
hace mucho tiempo ya se conocan y eran apreciadas varias especies
de orqudeas, como la vainilla, aunque tambin se sabe que las
utilizaban como ornato. Las primeras orqudeas llegaron a Europa por
casualidad, ya que los tallos gruesos de la especie Cattleya
labiata se utilizaban como empaque de mercanca en los barcos. Lord
Cattley, reconocido horticultor, las observ y le parecieron
extraas, por lo que decidi cultivarlas. Al cabo de unos meses, una
de ellas floreci dejando asombrado al horticultor, quien decidi
darle su nombre, y al poco tiempo, sus hermosas pero raras flores
despertaron en todo el mundo el inters por coleccionarlas. La
propagacin de orqudeas es el inters principal de este proyecto,
para lo cual tomamos como referencia trabajos de investigacin que
nos brinden nuevos conocimientos y tecnologas para reducir el
riesgo de fracaso. La informacin que se obtuvo servir como material
de consulta para lograr la propagacin de orqudeas de una manera
fcil y eficiente, aumentando en cantidad y calidad su produccin.
(Dra. Rebeca Alicia Menchaca Garca, Micropropagacin de orqudeas.
Una estrategia para revalorizarlas como recurso forestal no
maderable, Primera edicin, 2011).Las semillas de orqudeas son
conocidas usualmente como semillas de polvo porque son minsculas y
contienen pocas reservas de alimento. Usualmente estas semillas no
germinan en el medio natural a menos que sean infectadas por un
hongo micorriza, el mismo que abastece a las plantas jvenes con
azcares y nutrientes que necesitan hasta que sean lo
suficientemente grandes para fabricar su propio alimento. Cuando la
semilla germina produce una masa indiferenciada de clulas llamada
protocormo. Manteniendo las condiciones normales, el protocormo
continuar su crecimiento por varias semanas, meses o incluso aos
dependiendo de la especie hasta que alcance la edad apropiada para
producir races y hojas. En el caso de orqudeas terrestres, es de
vital importancia que la relacin orqudea-hongo se conserve durante
los estados tempranos del ciclo de vida de la planta ya que el
protocormo enterrado no puede fabricar alimento por s mismo. Por
otro lado, los protocormos de las orqudeas epfitas son comnmente
verdes, lo que les posibilita producir parte de su alimento. La
relacin orqudea-hongo no ha sido en su totalidad investigada para
el caso de las orqudeas tropicales.
Mediante la germinacin in vitro, se reproducen semillas en
frascos de vidrio o plstico sobre un medio de agar nutritivo que
contiene los azcares y minerales necesarios para que las semillas
germinen y crezcan. Hay dos tipos bsicos de germinacin in vitro:
simbitica y no simbitica.En la germinacin simbitica, las semillas
se siembran con una pequea porcin del hongo micorriza apropiada. El
hongo crece en el medio, coloniza a las semillas en proceso de
germinacin y se origina una relacin simbitica que se espera
alimente al protocormo hasta que ste produzca hojas y se vuelva
autotrfico. Esta tcnica es ampliamente usada para la propagacin de
orqudeas terrestres en zonas templadas.Tiene la ventaja de usar un
medio simple (uno de los ms comnmente usados consiste en avena en
polvo con una pequea cantidad de extracto de levadura), y como
resultado las plantas micorrizales suelen ser ms fuertes y
resistentes a infecciones que sus contrapartes cultivadas
asimbiticamente. Sin embargo, la desventaja es que se necesita
seleccionar el tipo de hongo micorriza adecuado para que se origine
la simbiosis y prevenir parasitismo y la consecuente muerte de las
semillas. Se ha realizado poca investigacin sobre la relacin del
hongo micorriza con las orqudeas tropicales, y por lo tanto no se
dispone del hongo micorriza apropiado.La germinacin asimbitica es
usualmente usada en la propagacin de orqudeas tropicales, las
mismas que tienden a crecer fcilmente en comparacin con sus
parientes en zonas templadas. El medio usado para la germinacin
asimbitica es ms complejo que para la germinacin simbitica, ya que
todos los nutrientes orgnicos e inorgnicos y los azcares deben
estar disponibles para la orqudea en una forma apropiada puesto que
ya no existe la intermediacin del hongo. La germinacin asimbitica
es un mtodo empleado actualmente en el programa de germinacin in
vitro en la Reserva Orquideolgica El Pahuma. En caso de disponer
del hongo a partir de siembras in situ, habra la posibilidad de
usar tcnicas simbiticas en el futuro.
AntecedentesLas orqudeas habitan en casi todos los rincones del
planeta: las hay en todos los climas y en todos los continentes.
Mxico es un pas afortunado por albergar una gran cantidad de ellas.
En nuestro pas, el cultivo de orqudeas se dio hace ms de 500 aos.
Antes de la conquista espaola, en nuestras tierras ya eran
cultivadas por los aristcratas aztecas e incluso una de sus
especies serva para hacer tortillas. Un mdico espaol de Felipe II
llamado Francisco Hernndez, vino a Mxico para realizar una
investigacin acerca de las plantas medicinales encontradas en el
nuevo continente, y junto con los sabios indgenas describi y pidi
dibujaran un gran conjunto de plantas desconocidas hasta entonces
en Europa. Tales dibujos eran de cinco orqudeas mexicanas:
Stanhopea, Laelia, Encyclia, Bletia y Vanilla planifolia. A fines
del siglo XVII, el Rey Carlos III de Espaa envi varias expediciones
cientficas a sus dominios americanos; en stas se describieron y
clasificaron la flora de Amrica, entre ella, orqudeas cuyos
ejemplares ms bellos mandaron a los Reales Jardines de Aranjuez,
donde la mayora muri debido al clima. Las que sobrevivieron se
mandaron al l Jardn Botnico de La Orotava en las Islas Canarias, en
especial las del gnero Sobralia. Luego de la Guerra de
Independencia de Mxico y a pesar de la inestabilidad poltica, se
mantuvo el inters por las orqudeas. El Sacerdote Pablo De la Llave
y un militar llamado Juan Lexarza, describieron y clasificaron gran
cantidad de especies. El inters por estudiarla y cultivarla se
mantuvo en la poca porfiriana y aument en el periodo
posrevolucionario; especialmente en regiones como Uruapan y
Morelia, Mich.; Jalapa y Crdoba, Ver y en la Ciudad de Mxico en
Coyoacn y Milpa Alta.Hoy en da, Mexico cuenta con una asociacin
civil que se interesa por el cuidado y la conservacin de esta bella
flor y cuyos orgenes se remotan alrededor de 1940. EL grupo es
llamado "Amigos de las Orqudeas" que se organiz en Chiapas el
Primer Congreso Internacional de Orquideologa, bajo el patrocinio
de Don Rafael Pascasio Gamboa, gobernador entonces de ese estado.
"Los Amigos de las Orqudeas" funcionaron 15 aos y despus, por
desaparicin de sus miembros dej de funcionar. En 1966, Don Joaqun
Ibarrola tuvo la idea de revivir a los "Amigos de las Orqudeas" y
en 1971 la asociacin fue legalmente registrada por el Ing. Eric
Hagsater como "Asociacin Mexicana de Orquideologa, A. C."
JUSTIFICACINDebido a la necesidad de preservar y reproducir
especies de orqudeas de inters cultural y econmico en nuestro pas,
nos dimos a la tarea de buscar la mejor forma de realizarlo
implementando metodologas con fundamento terico que permiten
obtener mrgenes de referencia para la produccin de orqudeas,
tomando en cuenta que durante su crecimiento tengan los factores
ambientales necesarios para tener una ptima produccin. Una vez
estas distribuidas tengan una alta vida para cumplir con el largo
proceso que les leva llegar desde el invernadero hasta las manos de
compradores. Logrando aportar informacin de una nueva forma de
produccin e innovacin en la forma de su venta y traslad a las reas
de compra. Validando de una forma confiable que resulta ser
practico y que pasos de la metodologa pueden ser omitidos o
cambiados por otros ms funcionales, obteniendo beneficios tericos,
prcticos y econmicos lo cual permitir buenos cimientos para la
formacin de una microempresa que ms all de estar interesado en lo
econmico tenga por igual un inters ambiental logrando que el
cliente no sea solo comprador sino inculcarle una forma de
conservacin de una especie en extincin.
OBJETIVOSGeneral Ofrecer un producto de buena calidad que
permita benficos en cadena desde los cultivadores hasta los
clientes logrando una total satisfaccin.Especficos Crear conciencia
en los compradores dicindoles que una orqudea es ms que una flor
extica ya que ayudara a su preservacin.Poder expandir orqudeas
endmicas presentes en Mxico a otros pases.
LMITESEspacio El proyecto se pretende llevar a cabo en el
municipio de Joquicingo Estado de Mxico perteneciente a las VI
regin del mismo; en un rea de 20 x 30 metros cuadrados lo que
permite una perfecta adaptacin para el cultivo de orqudeas.Tiempo
La realizacin del proyecto se llevara a cabo del 21 de marzo al 25
jde julio del presente ao y su evaluacin se realizara durante todo
el proceso para cumplir con la normalizacin requerida.
METODOLOGIA1) Preparacin del medio El medio puede ser preparado
ya sea utilizando ingredientes bsicos (Thompson, 1977, Apndice 1) o
comprarlo en polvo con proveedores. Hay diferentes tipos de medios
disponibles para la venta as como otros especficos para ciertas
especies diseados por expertos profesionales. Cuando se inicia el
proceso de germinacin de una nueva especie es aconsejable probar
con diferentes medios a una concentracin total y parcial para
determinar cul es el mejor medio para dicha especie. Por ejemplo,
el gnero Masdevallias es conocido como un gnero "escogedor" del
medio sobre el cual se va a desarrollar (Richard Warren,
conversacin personal). El nivel de pH es tambin importante. La
mayora de orqudeas germinan en un medio de pH 5.5, sin embargo,
especies andinas prefieren niveles ms altos de pH, 5.6 al 5.9
(Mnica de Navarro, conversacin personal). Al experimentar con el pH
se debe considerar que el pH del medio ser ms alto luego de aadir
el agar que antes de hacerlo. Las preparaciones comerciales de
Phytamax (Qumicos Sigma, Aldrich, Inglaterra) y Murashige y Skoog
han sido los principales medios usados en el proyecto de El Pahuma
(Marzo del 2000). Cualquiera de estos medios pueden ser preparados
tanto a una concentracin parcial o total (la concentracin parcial
es recomendada para Murashige y Skoog).El mtodo general para la
preparacin de estos medios es el que se detalla a continuacin.1.1
Mtodo general para la preparacin del medio1. Medir la cantidad
correcta del medio en polvo utilizando una botella de 1 litro y
evitando el contacto con el polvo del ambiente.2. Slo para
Murashige y Skoog: aadir la cantidad correcta de azcar y 2 gr/l de
carbn activado.3. Aadir una barra magntica y una pequea cantidad de
agua destilada y mezclar hasta que se disuelva.4. Llenar el envase
con agua destilada hasta tener 1 litro y agite continuamente.5.
Medir el pH y ajustarlo a 5.6 usando HCl o NaOH y mezclando
completamente con la barra magntica. *Precaucin: si se usa un
medidor de pH no se debe mezclar el medio si se encuentra dentro el
pHmetro: la membrana es muy delicada y costosa y puede romperse
fcilmente. Si no se dispone del medidor de pH, los papeles
indicadores de pH son suficientes.6. Verter la mitad del lquido en
un frasco, aadir 4 gramos de agar a cada recipiente (8 gr/l de
agar) y mezclar para que se disperse.7. Cerrar la tapa de la
botella sin asegurarla totalmente, cubrir los frascos con papel
aluminio y llevarlos a la autoclave.En condiciones ideales el medio
debe prepararse en una botella con la barra magntica durante todo
el proceso de autoclave, con el fin de que el medio sea mezclado
antes de verterlo en los frascos, logrando una mejor distribucin
del carbn activado en los mismos. Sin embargo, por razones de
seguridad la Universidad prefiere usar dos botellas o frascos de
500 ml para de esta manera mantener la barra magntica en la botella
y agitar suavemente antes de verter para dispersar el carbn
activado.
1.2 Traspaso del Medio (verter en los frascos)
Para verter el medio en los frascos o cajas petri esterilizadas,
se debe usar la cmara de flujo laminar. Los frascos deben ser
jabonados y lavados completamente cuatro veces antes de usarlos, y
desinfectados por 15 minutos a 15 p.s.i. en la autoclave. Si tiene
frascos con tapa, recuerde de cerrarlas totalmente antes de
meterlas en la autoclave. Si no se tiene tapas disponibles, se
puede cubrir los frascos con un pedazo de papel de aluminio. Tambin
se puede usar papel de empaque caf sellado con una cuerda, pero es
ms inadecuado. Se debe repetir la esterilizacin de los frascos que
salgan de la autoclave con huecos en el papel aluminio o sin el
papel aluminio.
1. Espere que el medio se enfre lo suficiente para cogerle con
las manos. Cuando el agar est menos lquido y la botella o frasco no
est tan caliente, se puede verter el medio. Si se vierte el agar
muy caliente se puede ocasionar una alta condensacin.2. Ponga en
lnea los frascos o cajas petri comenzando desde el fondo de la
cmara de flujo laminar, aflojando las tapas de los frascos.3. Saque
las tapas de los frascos o cajas petri y vierte el agar moviendo de
izquierda a derecha (si es diestro) para evitar que cualquier parte
de la mano o del mandil de laboratorio roce con un frasco o caja
abierta.4. Deje que se asiente el medio y ponga de nuevo las tapas.
Se puede tapar los frascos inmediatamente luego de que se ha
vertido el medio, pero se puede provocar condensacin. El agua
sobrante en los frascos puede o no ser til dependiendo de la
madurez de las semillas.La preparacin completa del medio desde la
mezcla de los ingredientes hasta el asentamiento del medio vertido
tiene un tiempo estimado de 4 horas de duracin. Si se ha preparado
2 litros de medio se puede utilizar una estufa para mantener la una
botella caliente hasta terminar de utilizar la otra. La estufa
caliente debe ser usada solamente por lapzos cortos de tiempo
(emergencias), ya que en caso de perodos ms prolongados (como una
media hora) se provocar la precipitacin del carbn activado.
2) Siembra de las Semillas
2.1 Cpsulas verdes vs. Semillas secasSe puede sembrar semillas a
partir de cpsulas verdes o a partir de semillas secas. A
continuacin se describen las ventajas y desventajas de ambos
mtodos:
1. Siembra a partir de cpsulas verdes: El interior de las
cpsulas de orqudeas se mantiene estril si las cpsulas estn
intactas. Entonces, si se esteriliza la parte exterior de las
mismas, donde hongos y bacterias pueden desarrollarse, y se abre
las cpsulas bajo condiciones de esterilizacin las semillas podrn
mantenerse desinfectadas. La ventaja de este mtodo es que no se
requiere de la esterilizacin de las semillas, lo que podra provocar
su deterioro. Adems, algunas semillas tomadas de cpsulas casi
maduras podran germinar ms rpido que las provenientes de cpsulas
maduras a causa de los mecanismos de dormancia. La desventaja de
este mtodo es que al abrir la cpsula todas las semillas en ella
deben ser utilizadas o eliminadas (algunas semillas maduras podran
secarse y ser almacenadas). Tambin se debe considerar que las
semillas sembradas a partir de cpsulas que no han madurado lo
suficiente podran germinar lentamente o simplemente no germinar.2.
Siembra a partir de semillas secas: Una vez que la cpsula es
abierta, las semillas dejan de ser estriles y requieren de un
proceso de esterilizacin. Comnmente, se utiliza una solucin de
hipoclorito (cloro) de sodio, hipoclorito de calcio o perxido de
hidrgeno. Las semillas se agitan dentro de la solucin que adems
contiene una gota de detergente para humedecerlas, luego se las
enjuaga con agua destilada y se las siembra en el medio preparado.
La ventaja de este mtodo es que las semillas pueden ser colectadas,
secadas al aire, almacenadas por varios meses en el refrigerador y
utilizadas cuando sea necesario.Se debe considerar que lo que se
siembra est determinado por la disposicin de cualquiera de las dos
formas de encontrar las semillas de acuerdo a la poca en que se
colectan.
2.1 .1 Siembra a partir de cpsulas verdes
El mtodo general para sembrar semillas a partir de cpsulas
verdes es el siguiente:1. Con la ayuda de un bistur, remueva
cuidadosamente la flor muerta de la cpsula2. Utilice un cepillo de
dientes suave para fregar suavemente la cpsula con la solucin
jabonosa.3. Enjuague la cpsula en agua.4. Introduzca la cpsula por
10 minutos aproximadamente en una solucin de hipoclorito de sodio
al 1% a la que se ha aadido una gota de detergente (tome en cuenta
que el cloro comn es hipoclorito de sodio al 5% por lo tanto hay
que diluir lo necesario).5. Transfiera la cpsula sumergida en la
solucin de cloro a la cmara de flujo laminar.6. Saque la cpsula de
la solucin de cloro usando unas pinzas y tomndola preferiblemente
de lo que queda del peciolo. Luego sumrjala en alcohol al 100% y
psela rpidamente por el fuego (flamear). Deje que el alcohol se
queme completamente y que la cpsula y las pinzas se enfren. Repita
el proceso dos veces para las cpsulas grandes. Para el caso de las
cpsulas pequeas y frgiles decida Usted con discrecin el tiempo de
pasarlas por la llama (tal vez slo una vez). Si no es posible
sostenerlas del peciolo, cambie la posicin de las pinzas antes de
flamearlas nuevamente.7. Transfiera la cpsula a una superficie
desinfectada (como una caja Petri esterilizada). Corte
longitudinalmente la cpsula en la mitad con la ayuda de un bistur
desinfectado. Utilice una hoja de bistur nueva para cada cpsula
para prevenir la propagacin de virus.8. Levante la una mitad de la
cpsula con las pinzas y golpela ligeramente sobre el medio para
discernir las semillas.9. Repetir este paso hasta que todas las
semillas faltantes se utilicen. Las semillas menos maduras se
pueden extraer de la cpsula con las pinzas.10. Normalmente se aaden
unas gotas de agua en cada frasco de modo que ciertos grupos de
semillas se separen y se distribuyan sobre el agar.
2.1.2 Siembra a partir de cpsulas dehiscentes (abiertas con
semillas secas)
Existen diferentes mtodos para la siembra a partir de semillas
secas. Todos ellos se basan en la esterilizacin de las semillas y
el lavado en agua destilada antes de sembrarlas, pero las tcnicas
varan. El tiempo de esterilizacin tambin vara dependiendo de la
especie, del tiempo de maduracin luego que la semilla es colectada,
de las condiciones climticas a momento de la coleccin y de los
mtodos de secado y almacenamiento. Por ello, un rango de tiempos de
esterilizacin es recomendado para las nuevas semillas.El programa
de conservacin en El Pahuma usa principalmente dos tcnicas para
sembrar semillas maduras: el mtodo de la jeringuilla y el mtodo del
paquete (o funda de papel). Es posible usar otras tcnicas, como el
mtodo de filtracin usando el embudo de Buchner, pero no estn
incluidas en este manual.Tanto para el mtodo de la jeringuilla como
para el mtodo del paquete es aconsejable esterilizar los
instrumentos y el agua necesarios el da anterior, ya que el agua
demora bastante en enfriarse luego del autoclave.En general, la
tcnica de la jeringuilla es usada para la mayora de las semillas
mientras que la tcnica del paquete es utilizada para semillas ms
raras y pequeas.
2.2 Mtodo de la Jeringuilla
1. Tome una jeringuilla de 5 ml, tape la punta de la jeringuilla
con un trozo de algodn envuelto en un pedazo de tela de media nylon
(vea el diagrama), inserte el mbolo nuevamente y autoclave. Al
mismo tiempo, autoclave una cierta cantidad de agua destilada (en
frascos o botellas) y las pinzas.2. Saque el mbolo de la
jeringuilla y vierta una pequea cantidad de semillas en la jeringa.
(Una gran cantidad de semillas formar una masa en forma de pasta si
se usa la tcnica 5b para la siembra, haciendo difcil la siembra
apropiada). Inserte de nuevo el mbolo.3. Absorber con la
jeringuilla 4 ml de la solucin de cloro al 1% (a la que se le aadi
una gota de detergente). Agite la jeringa por 5 minutos (u otro
tiempo de esterilizacin), asegrese de que las semillas se mojen
completamente en la solucin y que no queden atrapadas en burbujas
de aire. Expulse esta solucin y absorba de nuevo otra porcin de
solucin fresca. Agite por otros 5 minutos y vuelva a expulsarla.4.
Lave las semillas 3-4 veces absorbiendo agua destilada y
esterilizada en la jeringuilla, agitando por un momento y luego
expulsando el lquido.5. Siembre las semillas ya sea a)
esterilizando el cuello de la jeringuilla, vertiendo las semillas
en el medio y eliminando el exceso de agua o b) expulsando todo el
exceso de agua, sacando el algodn con unas pinzas y colocando las
semillas sobre el medio.
2.3 Mtodo del Paquete (o funda de papel)
1. Elabore un paquete a partir de un pedazo de papel (vea el
diagrama)2. Esparza una pequea cantidad de semillas dentro de los
paquetes. Nuevamente, cantidades grandes de semillas provocar que
se junten e impidan la penetracin del cloro.3. Doble y selle los
paquetes usando grapas. Sumrjalos en agua destilada por 5-10
minutos, apretando suavemente para dispersar cualquier burbuja de
aire.4. Con la ayuda de pinzas, transfiera los paquetes a la
solucin de cloro al 1% y que adems contiene una gota de detergente.
Djeles en la solucin por 10 minutos (u otro tiempo de
esterilizacin), agitndoles continuamente.5. Transfiera el paquete
ms el cloro a la cmara de flujo laminar. Usando pinzas traspase el
paquete a agua destilada (en un frasco). Agite. Repite este
procedimiento 3-4 veces para enjuagar las semillas.6. Exprima
suavemente los paquetes para eliminar el exceso de agua y
transfiralos a una superficie esterilizada. Corte y abra el paquete
usando tijeras desinfectadas y siembre las semillas en el
medio.Normalmente, al emplear esta tcnica se ponen los paquetes en
un recipiente que contenga cloro y ste sobre una placa magntica. De
acuerdo con la teora, las grapas actuarn como campos magnticos y
agitarn los paquetes automticamente. Esto nunca ha funcionado en mi
experiencia personal. Tan slo agitando los paquetes frecuentemente
se obtienen los mismos resultados, y al sumergir al mismo tiempo
varios paquetes en cloro se puede acelerar el proceso de
siembra.
2.4 Cobertura de los Frascos
Despus de la siembra los frascos pueden taparse ya sea usando
"cling-film" o papel celofn cortado de las bolsas transparentes
para hornear. Si se utiliza "cling-film", el film debe estar
desenrollado en la cmara de flujo, doblado el un lado sobre el
otro, y el lado ms cercano a la parte posterior de la cmara es el
que debe colocarse sobre los frascos. Luego, se asegura el
cling-film con una cinta elstica y se desprende el rollo
sobrante.Se corta el papel celofn en cuadrados, y se los autoclava
dentro de los frascos cerrados antes de ser usados. El cuadrando de
celofn se retira de los frascos usando las pinzas, se lo coloca
sobre el frasco que contiene el medio y se lo asegura usando una
cinta elstica. De las bolsas transparentes para hornear KLAR 2000
se puede obtener 20 cuadrados por bolsa y 160 cuadrados por paquete
(8 bolsas por paquete).El papel celofn es ms fcil de manejar que el
cling-film y es reusable. Por lo tanto es recomendado para usarlo
como material de cobertura.
2.5 Mantenimiento de Registros
Los registros deben mantenerse tanto en un cuaderno de
laboratorio y un sistema de tarjetas como en el computador. Los
detalles acerca del medio preparado, el proceso de siembra y las
notas observadas se deben registrar en el cuaderno. En el sistema
de tarjetas se registran todos los sembros, asignando un cdigo para
cada uno, el mismo que consiste en el cdigo de la especie (por
ejemplo TF = Trichopilia fragrans) ms el cdigo de siembra (por
ejemplo TF12 si es el dcimo segundo sembro de Trichopilia). La
fecha en que se hizo la siembra se coloca en la esquina superior
izquierda de la tarjeta, y abajo de la fecha se coloca el nmero de
frascos, tipo de medio (y la fecha en que se prepar si se la
recuerda), el cdigo y fuente de la semilla y cualquier otra
observacin durante el proceso de siembra. Los frascos son
examinados semanalmente y se debe registrar cualquier nota sobre
contaminacin y germinacin con la fecha correspondiente. Si un
frasco es eliminado se lo debe marcar con una X en alguna parte
visible y se debe registrar la causa (por ejemplo, contaminacin por
hongos o bacterias). Si todos los frascos de una siembra particular
han sido eliminados, se debe sealar con una X a lado del cdigo de
la especie y con una X grande en toda la tarjeta. La tarjeta no
debe ser desechada, puede servir posteriormente para analizar las
causas del problema.Cada frasco tiene una etiqueta con el cdigo de
siembra y cualquier otra informacin relevante y til para tenerla en
un acceso fcil y no tener que recurrir a las tarjetas, como es el
tiempo de esterilizacin. Cada frasco est tambin etiquetado con un
cdigo simple en el momento de verter el medio, con la finalidad de
prevenir cualquier confusin durante el almacenamiento o la
siembra.
3) CUIDADO DE LAS PLNTULAS.
3.1 Las semillas en los frascos.
Las semillas en la USFQ crecen 40 cm bajo tubos fluorescentes de
20 watts en un cuarto de crecimiento que est regulado a 18C con 16
horas de luz y 8 horas de oscuridad.Los frascos recientes deben ser
revisados regularmente luego de la siembra por el riesgo de
contaminacin. Si la contaminacin es detectada lo ms temprano
posible, se la puede combatir antes de que se disperse totalmente.
Sin embargo, una vez que el hongo ha producido esporas, o si existe
poco lquido en el fondo del frasco, no es aconsejable combatir
dicha contaminacin. En casos como ste, se debe eliminar el frasco.
De manera ocasional, una contaminacin de hongos podra motivar la
germinacin (Mnica de Navarro, conversacin personal). En este ltimo
caso, se puede dejar que las semillas crezcan, pero deben ser
trasplantadas antes que el hongo ocupe su espacio y las destruya
(contactarse con Mnica para consejos).Agua destilada puede ser
aadida si los frascos estn secos, usando una jeringuilla
desinfectada.Las pequeas plantas son trasplantadas cuando empiezan
a aparecer hojas y empiezan a llenar el frasco. La excepcin a esta
regla se da cuando es ms eficaz remover los protocormos de un
frasco o caja petri contaminada. Las plntulas se transfieren a
nuevos frascos que contienen el medio usando pinzas
desinfectadas.Una aguja de crochet es til en esta fase para retirar
semillas delicadasEl siguiente medio puede ser el mismo que el
primero, pero usualmente es mejor si se aade al nuevo medio
sustancias complejas (como pltano aplastado, leche de coco, jugo de
pia o vitamina B) para fomentar el desarrollo de la raz.Se puede
hacer un hueco pequeo en las tapas (si son de metal o plstico,
posiblemente en el celofn y no aconsejable en el cling-film) y
sellarlo dos o tres veces con el microporo para proporcionar una
superficie de respiracin a prueba de esporas en las tapas.Se debe
realizar algunos trasplantes antes de que las plantas estn listas
para ser plantadas en una maceta.
3.2 Transplante
En los frascos las plntulas se han desarrollado en un ambiente
cerrado y limpio por lo que deben acostumbrarse gradualmente al
ambiente externo antes de ser trasplantadas a las masetas. En el
cuarto de crecimiento, la luz es baja y tanto la luz como la
temperatura son prcticamente constantes. La humedad en los frascos
es alta y las plantas estn protegidas de ataques de hongos,
bacterias y herbvoros. En el medio natural, ambas temperatura y luz
varan constantemente. Las nuevas plantas deben estar protegidas de
manera especial de la fuerte luz solar: incluso una pequea cantidad
de luz solar podra quemar las hojas de estas plantas que usualmente
crecen en la sombra. Adems, las plntulas que han crecido en
condiciones de alta humedad tendrn cutculas dbiles por lo que
necesitan acostumbrarse gradualmente a medios ms secos antes de ser
trasplantadas. Finalmente, tanto en la fase de aclimatacin como en
la de trasplante, las plntulas deben ser cuidadas diariamente para
evitar problemas, y ms que una vez al da si el clima es seco y muy
soleado.A continuacin se detallan algunos consejos para el
trasplante. El tiempo de duracin de cada fase puede variar con
respecto al especificado: el monitoreo constante debera dar una
idea de lo ms apropiado para cada especie bajo ciertas condiciones.
Modifique estos pasos cuando sea necesario.
1. Si es posible empiece la fase de trasplante al inicio de un
perodo lluvioso. Los bajos niveles de luz y la alta humedad en esta
poca ayudaran a que las semillas se aclimaten y se establezcan.
(Sin embargo hay que considerar que una elevada humedad podra
fomentar un ataque de hongos cuando se plante en esta poca).2.
Coloque los frascos en un lugar sombreado y protegido de la lluvia
para que se aclimaten a las nuevas condiciones de luz y
temperatura. Djelos por 2 a 4 semanas con las tapas puestas.3.
Afloje las tapas para permitir la entrada de pequeas cantidades de
aire. Djelas as por 1 semana. Revise diariamente si existen hojas
marchitas y asegrese de que el medio est hmedo pero no
completamente mojado.4. Abra los frascos un poco ms. Djelos por
unos pocos das y revise diariamente.5. Abra las tapas hasta la
mitad de la abertura. Djelas as por otros pocos das y revise
diariamente.
