Microscopia y tinción

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  • 1. El telescopio empequeece el universo y el microscopio lo agranda

2. *Colorante: Sustancia capaz de teir las fibras vegetales y animales. *Mordiente: Favorece la fijacin del colorante en las fibras. *Microscopa : Es el conjunto de tcnicas y mtodos destinados a hacer visible los objetos de estudio que por su pequeez estn fuera del rango de resolucin del ojo normal. 3. COMPONENTES MECNICOS Son aquellos que sostn, movimiento. Base, brazo, platina, tor nillos, revolver, tubo y cabezal.sirvende 4. COMPONENTES PTICOS Son los objetivos, los oculares, el condensador. Estn constituidos por sistemas de lentes. 5. Sistema de iluminacin: Fuente de luz, filtros y diafragma. 6. Aplicaciones del Microscopio ptico*Se da uso en laboratorio de histologa y anatoma patolgica, la microscopa permite determinadas aplicaciones diagnsticas. Numerosas estructuras cristalinas, pigmentos, lpidos, protenas, depsitos seos. 7. Microscopa ptica normal (de campo brillante coloreado) El material a observar se colorea con colorantes especficos que aumentan el contraste y revelan detalles que no aprecian de otra manera. 8. El microscopio de contraste de fase permite observar clulas sin colorear y resulta especialmente til para clulas vivas. 9. Cuando la luz pasa a travs de una clula viva, la fase de la onda luminosa vara en relacin al ndice de refraccin de la clula la luz que pasa a travs de una zona gruesa o densa de la clula (ncleo), se retrasa y su fase queda desplazada de forma correspondiente respecto a la de la luz que ha pasado a travs de una regin adyacente de citoplasma, ms fina 10. Microscopa de Campo Oscuro 11. El microscopio de campo oscuro se encuentra catalogado entre los microscopios pticos.El microscopio ptico se compone de dos partes principalmente:1.- Parte Mecnica: Sirve de soporte. 2.- Parte ptica: constituida por tres sistemas de lentes.*Condensador. * Objetivo.* Ocular. 12. El microscopio de campo oscuro esta constituido por un microscopio ptico al cual se le acondiciona un condensador especial, este tiene como fin producir una disfracen de los rayos luminosos envindolos lateralmente sobre el objeto en forma de un cono luminosos, y de esta forma tampoco penetrandirectamente al objetivo. 13. Existendosclasesdecondensador de campo oscuro: * Cardiode * Paraboloide.Ambos son utilizados con el mismo fin, pero el cardiode tiene mayor aplicabilidad en la investigacin con Treponemas. 14. Para que el efecto de campo oscuro se logre , la aperturanumrica del condensador debe ser mayor que la de el objetivo, lo cual ocurre con los objetivos de pequeo y gran aumento no as con los de inmersin los cuales debernadicionarse de un diagrama de suspensin para la reducir la apertura numrica. 15. RESOLUCIN DE MICROSCOPIA EN CAMPO OSCURO Se llama poder de resolucin de un sistema ptico a la capacidad de separar detalles y es expresado por el limite de resolucin que es la menor distancia que existe entre dos puntos para que estos aparezcan individualizados. 16. El limite de resolucin depende de la apertura numrica (AN) del objetivoydelalongituddeondadelaluzutilizada.En la microscopia de campo oscuro la AN no debe ser superior a 1.0 yaque el condensador debe tener siempre una apertura numrica superior a este valor. 17. VENTAJAS * Permite ver partculas dispersas en un mediohomogneo. *Hace posible la observacin del movimiento Browniano de las partculas. *Se puede utilizar para la observacin depreparaciones sin colorear. * Visualiza los bordes destacados de las muestras. *Tcnica valiosa para observar microorganismos de tipo Treponema pallidum, espiroquetas con dimetros superior a 0.2 um. 18. DESVENTAJAS*Inadecuadapreparacindelamuestra. * Difcil acceso al microscopio que posea el condensador especial por su alto costo.*Nodejavisualizarestructurascelulares especificas, solo bordes de clulas opartculas. 19. Tincin simple. Las tinciones simples son aquellas en las que se utilizan un solo colorante ytienen como objetivo permitir la observacin de la morfologa bacteriana; forma tamao y tipo de agrupacin de los microorganismos. 20. Fundamento. La tincin simple se basa en la afinidad del colorante por los componentes celulares. La tincin puede ser uniforme o presentar algunos grnulos en su interior. Utiliza un solo colorante (violeta de genciana, azul de metileno, fuscina diluida).La tincin simple se utiliza para destacar el microorganismo completo para que se vean las formas y las estructuras celulares bsicas. 21. En las tinciones simples se usa un nico reactivo, que preferentemente es de tipo bsico y contiene un cromgeno con carga positiva, ya que la pared celular de las bacterias posee componentes con carga negativa que atraen y enlazan el cromgeno.Se utilizan solamente para incrementar el contraste; todas las clulas absorbern el colorante y quedarn teidas del mismo color. 22. Tcnica. 1) Se seca y fija en un portaobjetos una suspensin de microorganismos.2) Se vierte una solucin diluida del colorante y se mantiene durante uno o dos minutos. 3) Se lava varias veces con agua y se seca. Debido a que las clulas son muy pequeas, este tipo de preparacin suele observarse con aceite de inmersin en la lente objetivo. 23. Permiten distinguir entre distintos tipos de microorganismos 24. Tincin de Gram Gram + Gram -Tincin diferencial Tincin Ziehl Neelsen Parsitos y bacterias 25. Diferencia entre capas celularesCaractersticas entre Gram positivas y Gram negativasCapa de peptidoglican os (murena) 26. Gram positivasGram negativasMedico dans Hans Christian Gram 27. STAPHYLOCOCUS AUREUS Gastroenteritis y Dermatitis estafiloccica . Hbitat piel y nariz. No hay vacuna, desinfeccin de manos y objetos.CLOSTRIDIUM TETANI Ttanos Hbitat suelo. Entra al cuerpo a travs de traumatismos en la piel. Penicilina G. Vacuna con el toxoide. STREPTOCOCUS AGALACTIAE Meningitis neonatal y neumona. Hbitat vagina, tracto gastrointestinal. Penicilina G. No hay vacunas. Aplica ampicilina antes del nacimiento . 28. SALMONELLA TYPHI. Fiebre tifoidea. Hbitat vas entricas del hombre. Ampicilina.KLEBSIELLA PNEUMONIAE. Neumona e infecciones de vas urinarias. Hbitat vas respiratorias. Se transmite por saliva. Cefalosporina.HAEMOPHILUS INFLUENZAE. Meningitis, artritis sptica y celulitis. Hbitat vas respiratorias. Ampicilina o ceftriaxona. 29. Pared celular (cidos grasos miclicos)Decoloracin cido alcohol resistenteEspecies nocardia (color rojo) de los actinomiceos (no resistentes de color azul) 30. Nocordia asteridesMycobacterium 31. cidos miclicos de lasmicobacterias y esporozoarios poseen afinidad con los flourocromos auramina y rodamina. Pergamanganato de potasio (evitafluorescencia). 32. Colorante vital: vivo fluorescencia verde, muerto rojo. El fluorocromo naranja de acridinase une al cido nucleico. Presencia de bacterias enhemocultivos 33. Colorante blanco de calcoflor sefija a la pared celular de los hongos.Hongo aseptado (Rhizopus sp) 34. Incrementan el contraste de las clulas microbianas y revelan estructuras particulares. 35. Mtodo de Wirtz ConklinMtodo de MoellerMtodo de SchaefferfultonEsporasClostridium, Sporosarcina 36. Fijado: cido crmico. Colorante carbol fuscina fenicada(rojo -espora) y azul de metileno (azul- bacteria) 37. Malaquita (verde esporas) ysafranina( bacterias-rojo) 38. Flagelos Mtodo de Fontana- Tribondeau Mordiente de Tribondeau y solucin violeta de cristal. Flagelos de color castaoMtodo de Leifson Colorante rosalina y cido tnico que engrosa los flagelos para verlos. Se fija con formol. Flagelos de color rojo y azul negruzcoMtodo de Rhodes Mordiente de Rhodes y el nitrato de plata amoniacal. 39. Mtodo de HissCpsula: capa mucosa que envuelve la pared celular de algunas bacterias. Cristal violeta y sulfato de cobre Cpsulas de color azul plido y las bacterias de color purpura.Mtodo de Tinta china o nigrosina Tincin negativa (ennegrece el medio). Fucsina (bacterias rojo)y nigrosina que revela un halo blanco (cpsula) 40. CorpsculoGrnulosAlbertLoeffler Lugol y colorante Albert. Cospsculososcuro y bacteriaclaro. Azul de metileno y Loeffler Grnulosazul y fondo azul claro