Upload
istiqomah-kalalla
View
26
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
5/26/2018 modul
1/26
P TOLOGI KLINIKA. SESI 1
A.1. HEMOGLOBIN (metode Cyanmethemoglobin)
Prinsip
Seluruh darah akan ditambahkan ke Cyanmethemoglobin (HiCN) reagen. Kalium
ferricyanide di reagen mengubah besi hemoglobin dari besi ferro (Fe++) ke besi ferri (Fe+++) untuk
membentuk methemoglobin (Hi) yang kemudian menggabungkan dengan potasium sianida
untuk membentuk pigmen yang stabil, Cyanmethemoglobin (HiCN). (Hi = hemoglobin =
hemoglobin yang setrika sudah teroksidasi ke keadaan besi. HiCN = hemoglobin sianida = hi yang
telah banded terhadap ion sianida). Kehadiran deterjen nonionik di reagen meningkatkan lisis
dari sel-sel darah merah dan menurunkan jumlah kekeruhan yang dihasilkan dari protein
abnormal, seperti lipoprotein. Intensitas warna campuran ini diukur dalam spektrofotometer
pada panjang gelombang 540 nm. Kepadatan optik dari solusi sebanding dengan konsentrasi
hemoglobin. Semua bentuk hemoglobin diukur dengan metode ini kecuali sulfhemoglobin.
Spesimen
Seluruh darah, menggunakan EDTA sebagai antikoagulan tersebut. Darah kapiler juga
dapat digunakan.
Reagen dan Equiment
1. Cyanmethemoglobin (hemiglobincyanide) (HiCN) / reagen Drabkin berisi potasium sianida(50 mg), potasium ferricyanide (200 mg), potasium dihidrogen fosfat (KH2PO4) (140 mg),
dan detergen nonionik (1 mL) dalam 1 L air suling.2. Tabung uji, 10 x 75 mm3. Pipet, 0,02 mL.4. Spektrofotometer (540 nm)
Prosedur
1. Tempatkan tepat 5.0 mL reagen HiCN ke dalam sebuah tabung tes dengan tepatberlabel. Tempat 5.0 mL reagen ke dalam tabung reaksi untuk digunakan sebagai blanko.
5/26/2018 modul
2/26
2. Tambahkan 0,02 mL tercampur darah darah atau kontrol secara keseluruhan untuk tabungtepat berlabel. Bilas pipet 3 sampai 5 kali dengan reagen HiCN sampai semua darah akan
dihapus dari pipet tersebut
3. Campur larutan sebelumnya baik dan memungkinkan untuk didiamkan pada suhu kamarselama akhirnya 3 menit untuk memberikan waktu yang memadai untuk pembentukan
HiCN
4. Transfer campuran untuk kuvet dan dibaca dalam spektrofotometer pada panjanggelombang 540 nm dengan menggunakan reagen HiCN dalam tabung blanko untuk
mengatur densitas optik (OD) pada 0,0. Catat pembacaan untuk sampel pasien dan kontrol
dari OD skala dan melihat tabel siap untuk nilai sebenarnya dari hemoglobin dalam g/dL.
A.2. PENGHITUNGAN SEL DARAH MERAH
Jumlah sel darah merah (RBC) dinyatakan sebagai jumlah sel darah merah / liter (L) dari
darah. RBC normal adalah 3,6-5,6 x 1012/L untuk wanita dan 4,2-6,0 x 1012/L untuk laki-laki. Bayi
yang baru lahir menunjukkan RBC 5,0-6,5 x 1012/L saat lahir, yang secara bertahap menurun hingga
3,5-5,1 x 1012/L pada usia 1 tahun.
Prinsip
Untuk memudahkan penghitungan dan mencegah lisis dari sel-sel darah merah, darahkeseluruhan diencerkan dengan cairan isotonik menipiskan.
Reagen dan Peralatan
1. Thoma merah hitungan pipet2. Solusi Hayem (count Merah menipiskan cairan)
Sodium sulfat 2,5 g
Sodium klorida 0,5 g
Merkuri klorida 0,25 g
Aquades 100 ml
3. Mikroskop4. Kasa bersih atau kim tisu5. Hemositometer dan kaca penutup. Alun-alun tengah besar berisi 25 kotak kecil dengan
ukuran yang sama digunakan untuk RBC.
a. Lima kotak kecil berlabel 'R' adalah wilayah yang akan menghitung RBC (Gambar 1)
5/26/2018 modul
3/26
b. Alun-alun pusat besar memiliki volume 0,1 uL. Oleh karena itu, volume masing-masingdari 25 kotak yang lebih kecil adalah 0,004 uL selama lima kotak kecil.
Spesimen
Seluruh darah, menggunakan EDTA atau heparin sebagai antikoagulan tersebut. Darah
kapiler juga dapat digunakan.
Prosedur
1. Mengambil darah sampai persis tanda 0,5 dalam pipet hitungan merah dan encerkansampai tanda 101 dengan jumlah cairan merah menipiskan, sehingga membuat 1:200
pengenceran darah.
2. Campur jumlah sel darah merah yang diencerkan selama 3 menit3. Bersihkan ruang penghitungan4. Mengisi ruang menghitung (satu pengenceran hitungan merah mengisi setiap sisi
hemositometer itu). Setelah menghitung ruang penuh, memungkinkan sekitar 3 menit
untuk sel darah merah untuk menyelesaikan sebelum menghitung.
5. Hitung sel darah merah.a. Hati-hati tempat ruang penghitungan diisi di panggung mikroskop.b. Menggunakan daya yang rendah (perbesaran 10 x). menempatkan alun-alun pusat
besar di kemudian tengah lapangan penglihatan. Periksa persegi besar untuk seluruh
pemerataan sel darah merah
c. Hati-hati mengubah ke perbesaran tinggi (40x)d. Pindahkan ruang menghitung sehingga persegi sudut kecil bagian atas kiri adalah
sepenuhnya dalam bidang visi. Persegi ini dibagi lagi menjadi 16 kotak yang lebih kecil
untuk kemudahan menghitung.
e. Menghitung semua sel darah merah di alun-alun ini, mengingat untuk menghitung selpada dua dari margin luar tetapi tidak termasuk yang tergeletak di dua sisi lain di luar.
f. Beberapa sel darah merah dapat berbaring di sisi mereka dan, karenanya, tidak munculsebagai bulat. Sel-sel ini dimasukkan dalam hitungan.
g. Jika ada sel-sel darah putih di daerah yang sedang dihitung, tidak termasuk sel-seldalam hitungan Anda. (Sel darah putih biasanya jauh lebih besar dari sel darah merah
dan tidak memiliki sebagai menghaluskan penampilan)
h. Hitung sel darah merah yang masing-masing lima kotak kecil
5/26/2018 modul
4/26
i. Hitung sel darah merah di sisi berlawanan dari ruang penghitungan suara di lima kotakyang sesuai kecil.
6. Hitung jumlah sel darah merah untuk masing-masing jumlah merah dilakukan dan rata-ratadua hasil untuk laporan akhir
# Sel dalam lima kotak x Koreksi untuk Pengenceran x 106
RBC / L = ---------------------------------------------------------------- ------------------------
Koreksi untuk Volume
# Sel dalam lima kotak x 200 x 106
RBC / L = ----------- ---------------------------------------------
5 x 0,2 x 0,2 x 0,1
Sebagai contoh:
# Sel dalam lima kotak kecil = 400
Pengenceran = 1: 200
Jumlah volume = lima kotak kecil
Konversi ke liter = x 106
400 x 1,0 x 200 x 106
RBC / L = ------------------------------------0,2
= 4.0 x 1012
A.3. PENGUKURAN HEMATOKRIT (METODE MIKROHEMATOKRIT)
Prinsip
Seluruh darah disentrifugasi untuk kemasan sel darah merah maksimum. Ruang yang
ditempati oleh sel-sel darah merah diukur dan dinyatakan sebagai persentase dari volume darah.
Spesimen
Seluruh darah, menggunakan dipotassium ethyIene diaminetetraacetic asam (EDTA)
sebagai antikoagulan tersebut. (EDTA cair diduga menyebabkan penurunan 2 sampai 3% pada
hematokrit karena penyusutan sedikit dari sel-sel darah merah)
5/26/2018 modul
5/26
Reagen dan Peralatan
1. Mikrohematokrit tabung, sekitar 75 mm dengan lubang bagian dalam sekitar 1,2 mm.Duajenis tabung mikrohematokrit bisa dibeli: (1) mereka yang berisi heparin (kode warna
dengan pita merah) sebagai antikoagulan, untuk digunakan dengan non-antikoagulasi
darah secara keseluruhan, dan (2) warna tabung biasa (dikodekan dengan pita biru ) untuk
digunakan dengan seluruh darah antikoagulasi. Tabung mikrohematokrit memiliki sekitar
0,05 mL darah.
2. Seperti tanah liat darah penyegelan.3. Mikrohematokrit centrifuge mampu menghasilkan RCF dari 10000 menjadi 15.000 g.
Centrifuge harus mampu mencapai kecepatan maksimum dalam waktu 30 detik.
4. Microhernatocrit tabung pembaca.
Prosedur
1. Biarkan darah kapiler atau tercampur seluruh antikoagulasi untuk memasukkan dua tabungmikrohematokrit sampai mereka sekitar tvvo pertiga penuh dengan darah. (Gelembung
udara menunjukkan teknik yang buruk tetapi tidak mempengaruhi hasil tes).
2. Tanda salah satu ujung tabung mikrohematokrit dengan bahan tanah liat denganmenempatkan ujung kering tabung ke dalam tanah liat dalam posisi vertikal (tabung
mikrohematokrit membentuk sudut 900 dengan baki tanah liat). Steker harus 4 sampai 6mm. Membuat darah tertentu tidak dipaksa keluar bagian atas tabung mikrohematokrit
selama proses ini
3. Tempatkan dua tabung mikrohematokrit dalam alur radial kepala centrifuge persisberhadapan, dengan ujung tertutup dari pusat dari sentrifus.
4. Centrifuge selama 5 menit5. Lepaskan tabung hematokrit sesegera centrifuge telah berhenti berputar. Tentukan hasil
bagi kedua microhematocrits, dengan menggunakan perangkat tabung membaca
mikrohematokrit. Hasil duplikat harus setuju dalam 1 unit (%). Jika tidak, ulangi
prosedur.Hematokrit dapat dinyatakan dalam salah satu dari dua cara: (1) sebagai
persentase, misalnya, 42%, atau, (2) sebagai pecahan desimal, misalnya, 0,42.
A.4. PERHITUNGAN RETIKULOSIT
Pendahuluan
Sel darah merah berjalan melalui enam tahap perkembangan: sel pronormoblast,
normoblast basofilik, normoblast orthochromic, retikulosit, dan matang darah merah.Empat
5/26/2018 modul
6/26
tahap pertama biasanya terbatas pada sumsum tulang. Retikulosit, bagaimanapun, ditemukan di
kedua sumsum tulang dan darah perifer. Jumlah retikulosit merupakan alat diagnostik yang
penting. Hal ini merupakan cerminan dari jumlah produksi sel darah merah yang efektif terjadi di
sumsum tulang.
Prinsip Metode
Setelah normoblast orthochromic kehilangan intinya, sejumlah kecil RNA tetap dalam sel
darah merah, dan sel ini dikenal sebagai sebuah retticulocyte. Untuk mendeteksi keberadaan
RNA, sel-sel darah merah harus ternoda saat mereka masih hidup. Proses ini disebut pewarnaan
supravital.
Reagen dan Peralatan
1. Pewarna retikulosit dapat dipilih salah satu dari berikut:a. Larutan pewarna Metilen biru yang baru:
Metilen biru yang baru (Cl 52030) 1,0 g
Sodium klorida 0,89 g
Air suling 100 mL
b. BriIliant cresyl biru:Brilliant cresyl biru 1,0 gNatrium klorida 0,85% 99 ml
Campur selama minimal 15 menit, filter, dan tempatkan pada suhu kamar. Saring
kembali pada hari penggunaan.
2. Kaca slide3. Tabung mikrohematokrit4. Tabung uji yang kecil5. Mikroskop
Spesimen
Seluruh darah (1 mL), menggunakan EDTA sebagai antikoagulan tersebut. Darah kapiler
juga dapat digunakan.
Prosedur
1. Tempat tiga tetes retikulosit disaring noda dalam tabung reaksi kecil2. Tambahkan tiga tetes tercampur seluruh darah ke tabung yang berisi noda
5/26/2018 modul
7/26
3. Campur tabung dan biarkan berdiri pada suhu kamar, atau inkubasi pada 37C, selama 15menit. Hal ini memungkinkan retikulosit waktu yang cukup untuk mengambil noda
4. Pada akhir 15 menit, campuran isi tabung dengan baik5. Siapkan irisan beberapa atau pap berputar dan biarkan mengering.6. Tempatkan slide pertama di panggung mikroskop dan, dengan menggunakan tujuan daya
rendah (10x), menemukan suatu wilayah di bagian tipis dari BTA dimana sel darah merah
yang merata dan tidak menyentuh satu sama lain. Hati-hati mengubah ke tujuan
perendaman minyak (100x) dan selanjutnya mencari area di mana ada sekitar 100 sampai
200 sel darah merah per lapangan minyak imersi.
7. Segera setelah daerah yang tepat dipilih, retikulosit dapat dihitung. Sel-sel darah merahakan menjadi lampu hijau untuk media dalam warna. RNA hadir dalam retikulosit noda biru
tua. Retikulum mungkin berlebihan atau jarang, tergantung pada tahap sel pembangunan;
yang retikulosit termuda menunjukkan sejumlah besar RNA sedangkan retikulosit lebih
dewasa menunjukkan hanya sejumlah kecil RNA. Menghitung semua sel darah merah
dalam kemudian field pertama pada satu counter sel. Pada saat yang sama, penghitungan
retikulosit di bidang yang sama dengan counter sel kedua. Untuk dipertimbangkan sebagai
retikulosit sel merah harus berisi dua atau lebih biru pewarnaan partikel. Pindahkan
kemudian geser seperti yang dijelaskan dalam prosedur your diferensial Count,
menggunakan metode cross-sectional, sampai semua retikulosit dalam 1000 sel darahmerah telah dihitung.
8. Rata-rata dua hasil dan menghitung jumlah retikulosit seperti yang ditunjukkan di bawahini.
Jumlah retikulosit
Retikulosit =% dalam 1000 sel darah merah
---------------------------------------------
10
A.5. INDEKS ERITROSIT
Para sel darah merah (RBC) indeks yang digunakan untuk menentukan isi ukuran dan
hemoglobin sel darah merah. Mereka terdiri dari volume sel hidup rata-rata (MCV), Mean
corpuscular hemoglobin (MCH), dan Mean konsentrasi hemoglobin sel hidup (MCHC).Dengan
meluasnya penggunaan counter sel otomatis yang secara rutin menentukan indeks RBC pada
5/26/2018 modul
8/26
setiap sampel darah diuji, indeks yang biasa digunakan sebagai bantuan dalam diagnosisng dan
membedakan anemia.
Mean corpuscular volume (MCV)
MCV dihitung dari jumlah RBC dan hematokrit dan menunjukkan volume rata-rata RBC di
femtoliters (FL).
Rumusnya:
Hct x 103fL
MCV = -----------------
RBC/L
Contoh:
Hct = 45% (or 0,45 L)
RBC = 5.0x10l2/L
1 L = 1015/L
0.45 x 1015/L
MCV = ------------------
5.0 x 1012/L
= 0.09 x 103
fL= 90 fL
Normal range untuk MCV: 80 sampai 100 fL
Mean corpuscular hemoglobin (MCH)
MCH dihitung dari HB dan RBC count, menunjukkan berat rata-rata Hb di RBC, dan harus
selalu berkorelasi dengan MCV dan MCHC.
Rumusnya:
Hb (g/L)
MCH = -------------- pg
RBC/L
Example:
Hb = 15.0 g/dL
5/26/2018 modul
9/26
RBC = 5.0 x 1012/L
1 g = 1012pg
15 x 1013pg/L
MCH = ---------------------
1.0 x 1012/L15 x 10pg/L
= -------------------
5.0/L
= 30 pg
Normal range untuk MCH: 27 sampai 31 pg
Konsentrasi mean corpuscular hemoglobin (MCHC)
MCHC dihitung dari Hb dan Hct dan merupakan ekspresi dari konsentrasi rata-rata Hb di
RBC.
Rumusnya:
Hb (g/dL) x 100%
MCHC = -------------------------
Hct
atau,
Hb g/dL
MCHC = ---------------------------------------
Hct (expressed as a fraction)
Contoh:
Hb = 15.0 g/dL
Hct = 45% (or 0.45)
1 g = 1012pg
15.0 g/dL x 100%
MCHC = --------------------------
45 g /dL
5/26/2018 modul
10/26
= 0.333 x 100%
= 33.3%
atau ,
15.0 g/dL
MCHC = ----------------
0.45
= 33.3 g /dL
Normal range untuk MCHC: 31 sampai 36%, atau 31 sampai 36 g/dL
A.6. PERIPHERAL FILM DARAH
Pemeriksaan apus darah perifer (PBF) adalah bagian penting dari setiap pemeriksaan
hematologis dan dapat memberikan banyak petunjuk untuk membantu diagnosis klinis.Film
darah harus dipersiapkan dengan baik, juga ternoda dan diperiksa secara sistematis.
PERSIAPAN: harap ingat bagaimana mendapatkan hapusan darah ideal (laboratorium skiII itu
pedoman blok 8)
PROSEDUR
Film ini pertama harus diperiksa di bawah daya yang rendah untuk menilai kualitas dari
persiapan, jumlah dan distribusi, dan pewarnaan sel, dan untuk mencari daerah di mana sel-
sel merah yang merata dan tidak terdistorsi.
Periksa hapusan darah menggunakan kekuatan objektif (10x) rendah.
Sel-sel darah merah dan putih dan trombosit harus benar ternoda
Periksa bahkan ada distribusi dari sel darah putih pada smear.
Perkirakan jumlah sel darah putih (dengan mencatat jumlah sel putih / lapangan dan jumlah
sel darah putih dalam kaitannya dengan jumlah sel darah merah). Ini harus setuju dengan
hasil tes yang diperoleh. Jika tidak, jumlah putih harus diulang.
Periksa tepi perifer tipis dari BTA (ekor) jika pap baji sedang digunakan). Jika ada
peningkatan jumlah sel darah putih di daerah ini jumlah sel diferensial mungkin tidak
akurat. Jika ada gumpalan trombosit, tubuh Pap kemudian dapat menunjukkan penurunan
trombosit. Dalam situasi seperti itu, hapusan darah harus dibuang dan satu lagi dibuat.
5/26/2018 modul
11/26
Ketika memindai hapusan darah, penting untuk dicatat sesuatu yang tidak biasa atau tidakteratur, seperti besar, sel-sel abnormal atau mencari rouleaux pembentukan sel darah
merah.
Pilih daerah hapusan darah di mana penghitungan diferensial adalah untuk memulai,
menempatkan setetes minyak pada slide dan hati-hati mengubah ke tujuan minyak imersi
(100 x)
Setelah memilih area yang cocok, perbesaran 40 x dapat digunakan untuk penilaian yang
lebih kritis. Akhirnya, tujuan daya tinggi (100 x) harus digunakan untuk melihat detail halus dalam
sel-sel atau sesuatu yang mencurigakan. Sel-sel merah, dan platelet Ieucocytes semua harus
sistematis diperiksa.
Ketika mempelajari Pap bernoda, tidak maju terlalu jauh ke daerah tebal slide. Karakteristik
morfologi dari sel-sel sulit untuk membedakan di daerah ini. Sebaliknya, tidak
menggunakan porsi yang sangat tipis pap mana sel-sel darah merah tampak terisi penuh
dengan hemoglobin, umumnya terdistorsi dan tidak menunjukkan gambaran morfologi
benar.
Morfologi abnormal tersebut dapat dinilai sebagai 1+ (ringan), 2+ (moderat) atau 3+
(ditandai) untuk menunjukkan derajat keparahan.
DAFTAR ISTILAH YANG DIGUNAKAN UNTUK DESCRIBE MORFOLOGI SEL MERAH
Periksa morfologi sel darah merah adalah daerah tipis slide dimana daerah terbaik pada
hapusan darah untuk sel merah yang hampir menyentuh tetapi tidak tumpang tindih hanya
sedikit dari sel-sel darah merah yang sedikit tumpang tindih. Perhatikan setiap variasi dari normal
dan mengklasifikasikan penyimpangan ini sebagai ringan, sedang, atau ditandai (atau 1 +, 2 +, 3 +).
Sel darah merah biasanya ukuran seragam dan bentuk. Mereka memiliki bulat, garis halus
dan noda dengan komponen zat warna eosin Romanowsky, terutama di pinggiran sel karena
bentuk cekung ganda.
Pada penyakit, kelainan pada gambar merah-sel berasal dari empat penyebab utama:
1. Abnormal eritropoiesis2. Tidak memadai sintesis hemoglobin3. Kerusakan pada sel setelah meninggalkan sumsum tulang4. Upaya oleh sumsum tulang untuk mengkompensasi anemia dengan mempercepat
eritropoiesis.
5/26/2018 modul
12/26
SEL DARAH MERAH
Periksa untuk:
a) Ukuran dan bentukb)Relatif isi hemoglobinc) Polychromatophiliad) Inklusie) Pembentukan rouleaux atau aglutinasi
DIBANDINGKAN DENGAN UKURAN
Anisocytosis: variasi dalam ukuran. Ini adalah penemuan yang umum dan tidak spesifik
Normositik: ukuran normal. Mean diameter sel (MDC) = 7,2 im
Makrositik: lebih besar dari biasanya. Mungkin menunjukkan perubahan megaloblastik atau
retikulositosis
Mikrositik: lebih kecil dari biasanya. Anemia mikrositik termasuk defisiensi Fe dan talasemia
DIBANDINGKAN DENGAN WARNA
Normokromik: warna sel normal (pucat di tengah lebar 1/3 rd lebar). Defisiensi Fe adalah yang paling umum
tetapi tidak satu-satunya penyebab
Polychromasia: warna biru abu-abu. Mencerminkan adanya retikulosit yang mengandung
RNA basofilik.
RELATIF SHAPE
Poikilocytosis: Variasi dalam bentuk. Panjang non spesifik. Mungkin mencerminkan
dyserythropoiesis atau kerusakan pada sirkulasi sel.
Ovalocytosis: berbentuk oval atau telur, misalnya keturunan ovalocytosis. Macrocytes oval
fitur pada anemia megaloblastik
Elliptocytosis: Sel adalah elips (berbentuk cerutu), misalnya keturunan elliptocytosis. "sel
pensil " terlihat pada defisiensi Fe
5/26/2018 modul
13/26
Sferositosis: keturunan bulat atau akibat dari kerusakan sel, misalnya luka bakar hemolisis,kekebalan atau sepsis
Schistocytosis: fragmentasi (fragmen kurang dari setengah volume sel merah normal),
misalnya kerusakan mekanis.
Stomatocytes: sel memiliki celah-seperti daerah pucat pusat, misalnya keturunan jenis,
penyakit hati dan sindrom Rhnull.
Sasaran sel: patri daerah Pusat. Relatif kelebihan membran terhadap isi sel. Penyakit hati,
Hb-pathies
Sel tear drop: pear berbentuk memanjang dengan titik tunggal atau ekor. Fitur ekstra-
medullar eritropoiesis
Helm Sel / Sel Bite: satu permukaan yang tidak teratur dengan proyeksi penunjuk (tanduk)
pada satu atau kedua ujungnya
Sickle cell: sel merah berbentuk sabit, karakteristik penyakit sel sabit, misalnya HbSS, HbSC,
HbSD
Spiculated Sel Merah
a) Echinocytes / Crenation: regulary berspekulasi (biasanya reversibel). 10-30 distribusi merataspikula
b)Acanthocytes: tidak teratur berspekulasi (ireversibel). Spikula 5-10 dari berbagai panjang,tidak teratur didistribusikan. "ceil duri" istilah telah bingung dengan baik (a) dan (b) dan
dengan demikian telah kehilangan dukungan
INKLUSI SEL MERAH
Erythroblastaemia: eritroblast (berinti sel darah merah) dapat ditemukan dalam setiap
anemia berat, misalnya thalassemia mayor. Karakteristik penyakit hemolitik pada bayi
baru lahir. Sejumlah kecil dapat ditemukan pada bayi normal saat lahir dan jumlah besar
pada bayi prematur.
Howell-Jolly Badan: Ini adalah sisa-sisa nuklir (DNA) dan ditemukan ketika limpa telah
dihapus atau tidak berfungsi. Juga fitur anemia megaloblastik.
Basofilik stippling: Hasil dari agregasi dari RNA
a) Belang-belang (baik) Basophilia: terkait dengan polychromasiab)Kursus basofilik stippling: didefinisikan dengan baik, hitam inklusi, tersebar di sel
5/26/2018 modul
14/26
Siderotic / Pappenheimer Badan: butiran yang mengandung besi. Indikasi anemiasidferoblastic
PEMBAGIAN SEL
Rouleaux Formasi: Non-spesifik fenomena ditingkatkan dengan protein plasma tinggi.Sel-
sel merah agregat dan kebohongan tatap muka di sisi mereka seperti tumpukan koin.
Autoagglutination: Sel agregat menjadi gumpalan besar. Biasanya karena jenis dingin
autoantibody
PEMERIKSAAN SEL DARAH PUTIH
1. Periksa pemerataan dan memperkirakan jumlah ini (juga, mencari adanya kelainan kasarhadir pada smear)
2. Lakukan hitungan diferensial leukosit3. Istilah meninggalkan shift dan shift kanan mengacu pada tingkat Iobulatio ditemukan di
neutrophiIs. Jika jumlah yang berbeda menunjukkan adanya sel-sel granulocytic belummatang, ini dinamakan pergeseran ke kiri dan dapat ditemukan pada gangguan seperti
Ieukemias dan infeksi bakteri. Pergeseran ke kanan mengacu pada peningkatan jumlah
neutrofil hypersegmented
4. Pemeriksaan untuk kelainan morfologi
PERHITUNGAN JUMLAH LEUKOSIT
Perbedaan manual jumlah sel darah putih dilakukan untuk menentukan jumlah relatif
masing-masing jenis sel darah putih hadir dalam darah. Selalu ada beberapa distribusi yang tidak
merata dari jenis sel dalam setiap film darah:
Neutrofil dan monosit lebih memilih tepi dan ekor
Limfosit cenderung tinggal di tengah film
Distribusi tergantung pada perbedaan gravitasi lengket, ukuran dan specihc sel.
Pada saat yang sama, sebuah studi sel darah merah, sel darah putih dan trombosit
5/26/2018 modul
15/26
morfologi dilakukan. Diferensial dan review smear harus dilakukan setelah jumlah darah telah
selesai. Dalam cara ini, pemeriksaan Pap juga dapat digunakan untuk memeriksa jumlah sel darah
putih.
Dalam keadaan penyakit jenis sel darah putih tertentu dapat menunjukkan peningkatan
mutlak dalam jumlah dalam darah. Umum penyakit yang menunjukkan peningkatan jumlah jenis
sel tertentu.
Jika jumlah yang berbeda menunjukkan adanya sel-sel granulocytic belum matang, ini
dinamakan pergeseran ke kiri dan dapat ditemukan pada gangguan seperti Ieukemias dan infeksi
bakteri. Pergeseran ke kanan mengacu pada peningkatan jumlah neutrofil hypersegmented.
Semua Ieucocytes ditemui harus diklasifikasikan. Hasil dari setiap jenis sel ini kemudian
dinyatakan sebagai persentase atau, lebih tepat sebagai jumlah mutlak dari jumlah total sel putih.
Neutrofil
Berikut ini adalah fitur untuk mencari.
Butiran: Berat, pewarnaan gelap, butiran beracun merupakan ciri khas dari infeksi
bakteri. Sebuah polys granular berhubungan dengan Ieukaemias myeloid.
Vakuola: Tidak biasanya jelas tetapi sering ditemukan pada infeksi bakteri. Vacuolation
dapat berkembang pada darah normal didiamkan in vitro.
Inti: Istilah meninggalkan shift dan shift kanan mengacu pada tingkat Iobulatio ditemukandi neutrofil. Pergeseran ke kiri, dengan band dan metamyelocytes, adalah umum pada
sepsis berat. Pergeseran ke kanan dengan hypersegmentation (5 atau lebih lobus)
menyimpulkan perubahan megaloblastik. Pelger-Huet anomali adalah karakteristik
diwariskan jinak di mana netrophils tidak pernah memiliki lebih dari dua lobus. Bentuk
Pelgeroid (pseudo-Pelger-Huet) ditemukan dalam hubungan dengan leukemia.
Eosinofil dan basofil
Hypersegmentation, agranularity dan inklusi tubuh fitur abnormal pada cosinophils dan
basofil. Temuan tersebut paralel mungkin neutrofil morfologi dan mungkin juga mencerminkan
kondisi klinis atau warisan yang mendasarinya.
Monosit
Mungkin berisi inklusi abnormal. Seperti dengan granulosit ini bisa menunjukkan salah
satu dari berbagai kondisi diwariskan. Phagocytosed merah sel dapat dilihat pada anemia
hemolitik autoimun.
5/26/2018 modul
16/26
Limfosit
Limfosit atipikal merupakan ciri khas dari infeksi virus, misalnya campak influenza, hepatitis
atau demam berdarah. Sel-sel yang digambarkan sebagai "pIasmacytoid" jika sitoplasma
mereka sangat biru, yaitu menyerupai sel plasma.
"Limfosit reaktif" khas dari mononukleosis menular. Sel-sel ini cenderung besar dan
menyerupai monosit dengan basophilicedges ke sitoplasma mereka.
PEMERIKSAAN TROMBOSIT
Trombosit:
1. Perkiraan jumlah saat ini2. Periksa untuk kelainan morfologi
Perkiraan jumlah ini atau perkiraan jumlah trombosit juga dibuat.
Seperti yang disebutkan sebelumnya, estimasi platelet dilakukan underthe 100 x lensaminyak imersi objektif. Dalam suatu daerah pap mana sel-sel darah merah hampir tidak
menyentuh, jumlah trombosit di 10 Bidang perendaman Minyak berbeda dihitung. Rata-rata
jumlah trombosit per OIF X 20000 mendekati jumlah trombosit. Sebagai contoh, 12 - 16 trombosit
per OIF akan sama dengan sekitar 280.000 platelets/mm3 (280x109/L) dan akan dianggap
memadai. Normal (baji) preparat (jumlah sel darah merah yang normal dan jumlah trombosit
normal) harus menunjukkan sekitar 8 sampai 20 trombosit per bidang di daerah ini.
Sebuah menyatakan perkiraan kasar bahwa jika ada 7-25 trombosit per OIF, jumlah
platelet adalah cukup, asalkan ada sekitar 200 sel darah merah per OIF. Dalam situasi di mana
pasien anemia atau memiliki erythrocytosis, proporsi relatif dari trombosit pada sel-sel darah
merah yang diubah. Dalam hal ini, formula yang lebih terlibat untuk perkiraan trombosit dapat
digunakan:
Rata-rata no. trombosit X Total jumlah sel darah merah
-------------------------------------------------------------------------------
200
5/26/2018 modul
17/26
200 adalah rata-rata jumlah sel darah merah per OIF di apatient dengan jumlah sel darah merah
yang normal.
Periksa untuk kelainan morfologi
Dalam keadaan patologis tertentu, trombosit mungkin muncul butiran atau
diperbesar.Trombosit besar atau raksasa muncul dalam hubungan dengan omset trombosit
meningkat (gangguan perdarahan) atau bisa menunjukkan cacat trombosit, misalnyaBernard
Soulier sindrom. Trombosit biasanya rumpun jika film dibuat langsung membentuk jari-
tusukan. Kegagalan untuk melakukannya dapat menunjukkan kelainan pada fungsi.
Satellitosis trombosit adalah fenomena yang hanya terjadi dalam darah EDTA. Trombosit
mematuhi neutrofil dan muncul seperti satelit di sekitar sel. Mungkin tidak ada signifikansi klinis
untuk fenomena ini. Jumlah trombosit yang rendah secara salah sebagai "satelit" tidak
termasuk. Darah harus teringat langsung ke dalam sistem menipiskan panduan trombosit
(menghindari EDTA) untuk mendapatkan jumlah trombosit akurat.
B. SESI 2
B.1. WAKTU PERDARAHAN (METODE IVY)
Prinsip
Sebuah manset tekanan darah ditempatkan pada lengan pasien di atas siku, inflasi, dan
dipertahankan pada tekanan konstan sepanjang prosedur. Satu (atau dua) sayatan standar yang
dibuat pada permukaan volar lengan bawah. Lamanya waktu yang diperlukan untuk
menghentikan perdarahan dicatat sebagai waktu perdarahan.
Reagen dan Peralatan
1. Manset tekanan darah2. Perangkat saat pendarahan3. Stopwatch4. Kertas filter circular5. Alkohol persiapan bantalan6. Perban kupu-kupu
5/26/2018 modul
18/26
Prosedur
1. Cari area untuk waktu perdarahan. Lengan pasien harus diperluas dengan permukaan volarmenghadap ke atas. Dimulai pada jari tengah bergerak ke atas lengan dalam garis lurus
sampai 5 cm di bawah lipatan bawah. Daerah ini di bagian otot dari permukaan Volar
lengan bawah, 5 cm di bawah lipatan dalam siku, adalah situs tes standar untuk
menusuk. Daerah ini harus bebas dari vena permukaan, memar, bekas luka, dan
pembengkakan. (Mencukur daerah tersebut jika rambut berlebihan hadir)
2. Bersihkan situs dengan spons alkohol dan biarkan kering3. Tempatkan manset tekanan darah pada lengan pasien di atas siku. Meningkatkan tekanan
sampai 40 mm Hg dan tahan tekanan ini tepat untuk seluruh prosedur. Sayatan harus
dibuat dan waktu perdarahan dimulai dalam waktu 30 sampai 60 detik setelah manset
tekanan darah telah meningkat.
4. Siapkan perangkat waktu perdarahan. Posisi itu dalam arah yang benar dan daerah yangsesuai pada lengan, dengan hanya menggunakan bahwa jumlah tekanan ke bawah
sehingga kedua ujung yang menyentuh kulit dan perangkat tidak menyebabkan
lekukan.(Terlalu banyak tekanan Jika diterapkan dan perangkat menekan kulit, sayatan
akan terlalu dalam)
5. Aktifkan memicu dan memulai stopwatch. Hapus perangkat sekitar 1 detik setelahmembuat sayatan.
6. Menghapuskan darah dari situs tusukan pada bagian yang bersih dari kertas saringmelingkar setiap 30 detik. Kertas saring tidak boleh menyentuh luka setiap saat.
7. Bila perdarahan berhenti, stop watch dan melepaskan manset tekanan darah. Catathasilnya. Ulangi pemeriksaan dua kali, melaporkan hasil rata-rata.
8. Tempatkan pembalut kupu-kupu di atas lokasi tusuk, dan menyarankan pasien untukmenjaga perban di tempat selama 24 jam.
B.2. JUMLAH TROMBOSIT (METODE LANGSUNG; REES-ECKER)
Pendahuluan
Jumlah trombosit adalah penting dalam membantu untuk mendiagnosis gangguan
perdarahan. Trombosit berfungsi terutama dalam hemostasis (penghentian perdarahan) dan
dalam menjaga integritas kapiler. Trombosit adalah sulit untuk menghitung. Mereka kecil, hancur
dengan mudah, dan sulit dibedakan dari kotoran.
Prinsip Metode
5/26/2018 modul
19/26
Darah diencerkan dengan larutan yang mengandung Biru cresyl Brilliant sehingga
trombosit tampak biru cerah. Trombosit kemudian dihitung menggunakan hemositometer. Hasil
digandakan diperiksa dengan pemeriksaan trombosit pada Pap Wright / Giemza ternoda.
Spesimen
Seluruh darah (1 mL), menggunakan EDTA sebagai antikoagulan tersebut. Darah kapiler
juga dapat digunakan.
Reagen dan Peralatan
1. Rees-Ecker (untuk mencairkan trombosit):Sodium sitrat 3,8 g
Brilliant cresyl biru 0,1 g
Formaldehid 40% 0,2 ml
Air suling 100 mL
Campur dan saring sebelum digunakan.
2. Pipa eritrosit3. Hemositometer4. Obyek kaca, Wright / Giemsa stain5. Mikroskop6. Cawan petri7. Kertas saring
Prosedur
1. Mengambil darah sampai persis tanda 0,5 dalam pipet hitungan merah dan encerkansampai tanda 101 dengan jumlah cairan merah menipiskan, sehingga membuat 1:200
pengenceran darah.
2. Campur pengenceran selama 3-5 menit. Bersihkan ruang penghitungan3. Siapkan ruang lembab sebagai berikut: mendapatkan cawan petri dan selembar kertas
filter kira-kira diameter yang sama dengan cawan petri. (Entah atas atau cawan petri
bawah dapat digunakan). Seksama membasahi kertas saring dan tempat di bagian atas
cawan petri sehingga mematuhi piring.
4. Ketika sampel darah diencerkan secara memadai dicampur, mengisi satu sisi dari ruangpenghitungan dengan dilusi tersebut.
5/26/2018 modul
20/26
5. Tempatkan ruang lembab lebih hemositometer dan memungkinkan persiapan untuk dudukselama 15 sampai 20 menit.
6. Hitung trombosit:a. Hati-hati tempat hemositometer pada tahap mikroskop.b. Menggunakan daya yang rendah (10 x objektif) menempatkan alun-alun pusat besar di
tengah bidang penglihatan. Hati-hati mengubah ke tujuan kering tinggi
(40x). Trombosit muncul sebagai kecil, bulat, oval, atau memanjang partikel yang
sangat ditarik dan noda warna kebiruan cahaya.
c. Hitung trombosit dalam 2 kotak besar di alun-alun sudut. Kotak disarankan untukmenggunakan adalah mereka diberi label dengan W (Gambar 2)
7. Hitung jumlah trombosit / L seperti berikut:
# Sel dihitung Koreksi x untuk Pengenceran x 106
PLTS / L = ---------------------------------------------------- -----------------
Koreksi untuk Volume
# Sel terhitung x 200 x 106
PLTS / L = ---------------------------------------
2 x 1 x 1 x 0,1
Sebagai contoh:
# Sel dalam dua kotak besar = 400
Pengenceran = 1: 200
Volume dihitung = 2 kotak besar
Konversi ke liter = x 106
400 x 1,0 x 200 x 106
PLTS / L = ----------------------------------
0.2
= 4,0 x 1011
8. Scan smear dengan pewarnaan Wright atau Giemza dan memperkirakan jumlah trombosituntuk cross check dengan hasil atas. Estimasi jumlah lubang / mmc dengan metode tidak
langsung (hapusan darah) = jumlah lubang pada 20 pandangan perendaman x 1000
5/26/2018 modul
21/26
B.3. PT (PROTHROMBIN TIME)
Prinsip
Kalsium dalam darah keseluruhan terikat dengan natrium sitrat, sehingga mencegah
koagulasi. Jaringan tromboplastin, yang telah ditambahkan kalsium, adalah dicampur dengan
plasma, dan waktu pembekuan dicatat. (Faktor VII bereaksi dengan faktor jaringan
[tromboplastin] dengan adanya ion kalsium untuk mengaktifkan faktor X. Mekanisme koagulasi
berlanjut dari sana.)
Reagen dan Peralatan
1. Tabung air, 37C2. Reagen tromboplastin-kalsium klorida3. Normal plasma kontrol4. Uji tabung, 13 x 100 mm5. Stopwatch
Spesimen
Citrated plasma: 1 bagian natrium sitrat 0,11 M sampai 9 bagian seluruh darah (0,5 ml
sitrat + 4,5 ml darah utuh). Pengujian harus dilakukan dalam waktu 2 jam setelah spesimen
diambil ketika plasma dipertahankan pada suhu kamar dan dalam waktu 2 sampai 5 hari ketikaplasma disimpan pada -20 C.
Oksalat Plasma: 1 bagian natrium oksalat dan 9 bagian darah.
Prosedur
1. Centrifuge spesimen segera mungkin setelah pengumpulan darah untuk memperolehplasma miskin trombosit (10 menit, 3000 rpm)
2. Pengujian harus dilanjutkan segera, atau tutup tabung disentrifugasi atau plasma danmenyelesaikan prosedur dalam 2 jam.
3. Pipet 0,2 mL reagen tromboplastin-kalsium dalam jumlah yang sesuai dari 13 100 mm xtabung reaksi. Hangatkan tabung reaksi dalam penangas air selama minimal 1 menit,
sampai mereka telah mencapai 370C. Masa inkubasi campuran ini tidak kritis setelah
mencapai 37C
4. Menetaskan plasma untuk 2 sampai 3 menit, hingga mencapai 37C, plasma harusdiinkubasi selama tidak lebih dari 5 menit setelah mencapai 37C
5/26/2018 modul
22/26
5. Paksa Pipet 0,1 mL plasma pasien ke dalam tabung reaksi berisi 0,2 ml tromboplastin-kalsium campuran dan sekaligus memulai stopwatch.
6. Campur isi tabung, keluarkan tabung dari air mandi, dan lap kering. Dengan lembutmemiringkan tabung bolak-balik sampai bentuk gumpalan, di mana titik waktu
dihentikan.Catat waktu koagulasi.
7. Setiap plasma uji dan kontrol harus dilakukan dalam rangkap ketika metode manual yangdigunakan.
8. Rata-rata dua kali pembekuan dan melaporkan hasil pasien bersama dengan kisaran normaluntuk tes seperti yang dilakukan di laboratorium Anda.
B.4. APTT (AKTIF PARSIAL WAKTU TROMBOPLASTIN)
APTT adalah prosedur yang paling berguna untuk skrining rutin gangguan koagulasi
dalam sistem intrinsik, untuk mendeteksi adanya sirkulasi antikoagulan (inhibitor), dan untuk
pemantauan terapi heparin. lt mengukur faktor-faktor tersebut hadir dalam mekanisme koagulasi
intrinsik kecuali untuk trombosit dan faktor XIII (VLL faktor tidak diukur karena dalam sistem
ekstrinsik).
Prinsip
Kalsium dalam darah keseluruhan terikat oleh antikoagulan natrium sitrat untukmencegah koagulasi. Plasma, setelah sentrifugasi, berisi semua faktor intrinsik kecuali kalsium
dan platelet. Kalsium, sebagai pengganti untuk fosfolipid trombosit (tromboplastin parsial), dan
penggerak (untuk memastikan aktivasi maksimal), ditambahkan dengan plasma. Waktu yang
diperlukan untuk plasma untuk membeku adalah waktu tromboplastin parsial teraktivasi.
Reagen dan Peralatan
1. Tabung air, 37C2. Kalsium klorida, 0,025 M:
Kalsium klorida-anhidrida 1,38 g
Aquades 500 ml
3. Partial tromboplastin mengandung penggerak.4. Normal kontrol plasma5. Uji tabung, 13 x 100 mm6. Stopwatch7. Tabung es
5/26/2018 modul
23/26
8. Mikropipet 0,1 ml
Spesimen
Citrated plasma: 1 bagian natrium sitrat 0,11 M sampai 9 bagian darah.
Prosedur
1. Centrifuge spesimen sesegera mungkin setelah pengumpulan untuk memperoleh plasmamiskin trombosit. Centrifuge pada 3000 rpm dalam 10 menit, kemudian menempatkan
plasma di tabung es.
2. lncubate jumlah yang cukup kalsium klorida 0,025 M pada 37C.3. Pipet 0,1 ml kontrol plasma (atau plasma pasien) ke dalam tabung reaksi 13x100 mm, taruh
dalam penangas air selama 1 menit.
4. Pipet 0,1 ml parsial tromboplastin (berisi aktivator) ke dalam tabung reaksi yang berisikontrol (atau pasien) plasma.
5. Campur isi tabung dengan cepat dan tempatkan dalam bak air 370 C selama 2-3 menit.6. Setelah tepat 3 menit, paksa pipet 0,1 ml pra-hangat klorida kalsium ke dalam tabung, dan
sekaligus memulai stopwatch.
7. Campur tabung tes segera setelah menambahkan kalsium klorida. Biarkan tabung reaksiuntuk tetap air mandi sementara lembut memiringkan tabung setiap 5 detik. Pada akhirtabung 20 detik, menghapus, tabung uji dari air mandi. Cepat menyeka bagian luar tabung
reaksi dengan kain kasa bersih sehingga isi tabung terlihat jelas.
8. Dengan lembut miringkan tabung reaksi bolak-balik sampai bentuk gumpalan, di mana titikwaktu dihentikan.
9. Ketika pengujian manual dilakukan, kontrol dan pasien spesimen plasma harus dijalankandalam rangkap dua, dan hasilnya dirata-ratakan untuk memperoleh laporan akhir.
B.5. PENGELOMPOKAN DARAH
Prinsip
Prosedur tes ini didasarkan pada prinsip aglutinasi. Sel darah merah pengolahan antigen
akan mengaglutinasi saat diuji dengan antibodi yang sesuai.
Koleksi spesimen
Gambarlah sebuah spesimen darah dengan atau tanpa antikoagulan, dengan
menggunakan teknik proses mengeluarkan darah dapat diterima. Pengujian harus dilakukan
5/26/2018 modul
24/26
sesegera mungkin untuk meminimalkan kemungkinan reaksi negatif palsu positif atau palsu yang
terjadi karena kontaminasi atau penyimpanan yang tidak tepat dari spesimen.
Reagen dan Peralatan
Monoklonal reagen ABO dibuat dari supernatans budaya invitro dari hibridisasi
imunoglobulin yang mensekresi garis mouse sel. Antibodi Setiap diencerkan dalam buffer fosfat
yang mengandung natrium klorida, EDTA dan sapi albumin untuk memberikan reagen yang
dioptimalkan untuk digunakan dalam tes tabung, slide dan lempeng. Anti-A dengan asam
berwarna biru (paten biru) pewarna, Anti-B adalah berwarna dengan asam (tatrazine) pewarna
kuning, dan Anti-A, B tidak berwarna. Reagen ini mengandung natrium azida 0,1% sebagai
pengawet dan harus digunakan sebagai disediakan.
Prosedur (tehnik-slide Test)
1. Siapkan suspensi eritrosit 10%:Isi tabung gelas dengan 3 tetes darah dan garam, tutup dengan parafin atau plastik
dan campuran lembut. Centrifuge 1000 rpm dalam waktu 1 menit dan limbah
supernatan. Ulangi 3 kali, lalu encerkan dengan 27 tetes garam sehingga mendapatkansuspensi eritrosit 10%.
2. Taruh di atas slide kaca pada suhu kamar (18-25C):1 volume reagen pengelompokan ABO
1 volume sel 10% tersuspensi dalam plasma sendiri atau kelompok mereka kompatibel
atau serum
3. Menggunakan aplikator bersih, mencampur reagen dan sel di area seluas sekitar 20x40 nm.4. Perlahan-lahan miringkan slide maju mundur dan mengamati untuk aglutinasi untuk jangka
waktu tidak lebih dari dua menit.
Catat hasilnya:
Recipient (pasien) ditambah sel merah
ABO group (Reagent) Anti-A (Reagent) Anti-B (Reagent) Anti-A,B
A
B
AB
++++
-
++++
-
++++
++++
++++
++++
++++
5/26/2018 modul
25/26
O - - -
B.6. UJI SILANG = LINTAS PENCOCOKAN
Definisi:
Ujian besar adalah pemeriksaan serum pasien dan eritrosit donor.
Tes kecil adalah pemeriksaan serum plasma donor / dan eritrosit pasien.
Tujuan:
Untuk mendeteksi antibodi lengkap atau tidak lengkap yang terkandung dalam serum
pasien atau donor untuk menghindari transfusi hemolitik.
Prosedur:
1. Tahap I atau ruang fase suhu, dilakukan dalam medium garam. Antibodi dingin (antibodilengkap dari kelas M lg) dapat terdeteksi dalam contoh fase:
a) golongan darah yang tidak kompatibel sistem ABO.b)Dingin Ab: anti M, anti N, anti A1, anti Lewis, anti l dan anti IH.
Uji mayor:
Pipet dua tetes serum pasien ke dalam tabung reaksi kecil dan tambahkan dengan satu
tetes suspensi sel 5% donor.
Uji minor:
Pipet dua tetes plasma donor ke dalam tabung reaksi kecil dan tambahkan dengan satu
tetes suspensi sel 5% donor.
Kocok dan disentrifus masing-masing tabung pada 1000 ppm selama 1 menit atau 3400
ppm selama 15 detik. Watch dasar tabung. Jika ada aglutinasi atau hemolisis, hasilnyapositif, tetapi jika tidak ada aglutinasi atau hemolisis, hasilnya adalah negatif. Setelah itu,
lanjutkan ke tahap kedua.
Fase IFase I Fase I
Tab I Tab 2
Serum pasien 2 tetes - Tambahkan 2
tetes 22%
bovine albumin
Bersihkan
eritrosit
kemudian
5% donor eritrosit
susp
1 tetes -
5/26/2018 modul
26/26
Donor
serum/plasma- 2 tetes
untuk semua
tabung
tambahkan
dengan 2 tetes
Coombsserum5% pasien
eritrosit susp.
- 1 tetes
2. Tahap Il atau 37 C inkubasi fase, dilakukan di 22% dari media albumin sapi. Antibodi yangdapat direaksikan dalam fase ini adalah Rhesus antibodi sistem (anti D, anti E, anti C) dan
anti Lewis. Pada fase ini antibodi yang tidak lengkap dapat eritrosit dilapisi sehingga dalam
fase III, hasilnya akan positif setelah penambahan serum Coomb itu.
Pipet 2 tetes sapi 22% albumin untuk setiap tabung, goyang dan menetaskan pada 37 C
selama 15 menit, dari sentrifus pada 1000 ppm selama 1 menit atau 3400 ppm selama 15
menit.
Perhatikan dasar tabung, cuaca hasilnya positif atau negatif.
Jika hasilnya negatif, lanjutkan ke tahap III.
3. Tahap III atau tahap uji antiglobulin (Coombs test)Pada fase ini, Ab lengkap: D anti, anti E, anti C, anti Duffy, anti K, dll anti S yang memiliki
eritrosit dilapisi akan memiliki aglutinasi setelah penambahan Coombs serum (globulin anti
manusia). Cuci eritrosit di dalam tabung dengan garam tiga kali, setelah yang menambah
sedimen dengan 2 tetes serum Coomb, kocok dan disentrifus pada 1000 ppm selama 1
menit atau 3400 ppm selama 15 detik. Watch dasar cuaca tabung ada aglutinasi atau
hemolisis. Jika hasilnya negatif dengan menambahkan satu tetes sel kontrol Coombs
kemudian disentrifus. Hasilnya harus positif.