NOTES 1479

Moyen de predire le pourcentage de degradation de la fluorescence induite par impulsions de lumiere laserienne dam la technique d'immunofluorescence FTA-ABS

N. G. L A ~ I B E R T E-I-A. R. Si-E-MARIE lli~~c,c,tio~l tic.\ Lohorotoil.rs, h , l i~~is f i~~ .c~ c1c.t rljJi~i~.c,s .soc,iolc,.\. 20045. ~ . / ~ c I ~ I ~ I I SIL,-M{II.IC 011~51. SIP-AIIIIC ilc Bc,Ilc,c~10 (Ql i i . ) ,

Corrot1(1 H9X 3L2

Approuve le 23 aout 1979

L A ~ I B ~ I I - I . N . G . . et A. R . S-I L-MARIE. 1979. Moyen de predire le poul-centage tle degradation de la fluol-escence induite par impulsions de lumitre las21-iennr clans la technique d'im- munofluorescence FTA-ABS. Can. J . Microbiol. 25: 1479-1480.

La puissance, le diamttre et le temps d'irnpulsion des rayons lasers ~ltilises dans la techniq~le tl'immunofluorescence FTA-ABS. nous permettent de calculer et de predire quel sera le pour- centage de degradation cle la fluorescence Pmise pour les conditions d'operation ou cette tlegl-a- tlation se produit.

Lh\re~:n-r, N . G . , and A. R. S I ~ . - M A R I L . 1979. Moyen de predire le pourcentage de degradation de la fluorescence intluite par impulsions de lumitre laserienne dans la technique d'im- munofluo~-escence FTA-ABS. Can. J. Mic~.obiol. 25: 1479-1480.

The force. diamcter. and pulse time of laser ~ x y s used in the FTA-ABS irnmunofluorescence technique permit us to calculate and to predict what the percentage of degradation of the emitted fluorescence will be for the operating conditions in which this deglxdation is produced.

[Translated by thejournal]

Introduction Appareillage D~~~ les nombreux travaux d'application du L'appareill;rge comprenait un laser i~ impulsions et i colorant

rayon lase r cornme source d'excitation pour les liquide (7 mg tle 7-diethylamino-4-methyl coumarine par litse tl'ethanol) d e longueurs d'ondes variables par un resecru optique

techniques d'immunofluorescence en bacteria- utilise a 470 n m ti^^ ct 1974) (Synergetics Resezlrch, logie. le choix des hsel-s utilises a toujours ete fait Princetown. New Jersey. Chromabeam. modtle 1070);un laser soit pour augmenter I'intensite de la fluorescence r'l rayon continu h I'argon d'une longueur d'onde de 488 nm

pal- rappol-t aux methodes c o n v e n t i o n n e l l e s ou (Control. Laser Corporation, Orlantlo, Florida. niodelr 902) transforme en un laser r'l impulsions B I'aide d'un obturateu~- pour stabiliser I'intensite de cette derniere en di- les temps d.ouverture pouv:lient de I

minuant le temps d'excitation des specimens a ,, 9 9 , (()ptikon, Kitchenel-, Ont;lrio, modtle 23X2AoX5); un analyser. Kaufman c t 01. (1971) ont utilise un rayon agl-andisseur de myon laser muni d'un filtre spatial (Optikon. laser continu comme source de lumiere excitante et ils ont demontre une augmentation considerable de I'intensite de la fluorescence. Ils suggerent qu'en I-eduisant le temps d'excitation des specimens dans I'ordre du I millieme de seconde (ms) la degl-ada- tion de la fluorescence pourrait t tre de beaucoup diminuee et mtme stabilisee. Bergquist (1973), Kasatiya c t uI. ( 1974). Drapeau et Laurence ( 1977). et Lambert et Ste-Marie (1975) rapportent, dans leurs etudes sur des techniques d'immunofluo~-es- cence. avoir stabilise I'intensite de la fluorescence en utilisant des lasers ;I impulsions de courtes durees (11s) comme source de lumiere excitante.

Notre etude porte sur la possibilite de calculer et de corrigel- au besoin, le pourcentage de degrada- tion de la fluorescence induite pal- rayon laser dans la technique d'immunofluorescence FTA-ABS, ceci en tenant compte de la puissance par mm2 du I-ayon laser, du temps d'excitation des specimens a analyser par cette lumiere excitante et du nombre d'impulsions lumineuses regues par les specimens.

Kitchener. Ontario. modele 31-4053) pouvant Ctre utilise au besoin avec le laser precedent; un microscope trinoculaire B fluorescence (Leitz Wetzlar. Allemagne. modele M.P.V. 2) avec un photoniultiplicateur B ouverture variable, un systenie d'il- lumination tlxnsmise et incidentr. tles filtres d3arrCt dichroiques inter-changeables et quatre entrees pour I'eclair-age; une Iampe quartz halogene(Sylv:rnia. 100 W. FCR) utilisee pour lamise au point des specimens en lumitre tlxnsmise; un systkmededetcc- tion electronique d e la fluorescence forme d'un photomulti- plicateur sensible i un signal lumineux de I0 ns et d'un oscillos- cope enregistreus (Tektronix, Beaverton. Oregon. modele 7 113 avec ;rccessoires 7A I5A. 7A22.7B50) sensible ir un signal elec- t~-ique d e 0.5 ns.

Methodologie Les specimens (Trc,po~lc,~,rtr p~~ll i t l l r~i i) utilises comme anti-

gtne. ont ete fixes sur lames selon la methode Organon Diag- nostic (1974) et prepares selon la rnethode d e Kasatiya et Birry (1972) utilisant le meme conjugui a base d e fluoresciine. Des serums contrbles positifs a la technique FTA-ABS ont kt6 utilises pour cette etude. Les lectures d e fluorescence ont I t6 effectuees selon la methode decrite par Lambert et Ste-Marie (1975). Afin d e pouvoir evaluer les variations dans le pourcen- tage d e degradation d e la fluorescence, nous avons utilise des rayons lasers de puissance et de diametre different ainsi que des longueurs d'impulsions lumineuses variables. On reporte

0008-4 1661791 121479-02$01 .00/0 0 1 9 7 9 National Research Council of Canada/Conseil national de recherche5 du Canada

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FIG. I. Courbe representant le pourcentage d e degradation de la fluorescence (i) apres 30 lectures surun rnCme champ selon lc facteul- energetique V ) tl'excitation des specimens.

toujours nos resultats exptrlmentaux de degradat~on de fluores- cence a p r t s 30 impulsions de lum~ere excltante sur un mPme champ afin d 'obten~r des valeurs de degradat~on de la fluores- cence plus representatives et d'el~mlner. en partle, les petites varlatlons qu'il peut y avolr entre chaque lecture et q u ~ sont dues a d'autres facteurs Ceux-CI peuvent i t r e constates dans les resultats experlmentaux de Lambert et Ste-Marie (1975).

Resultats et Discussion Les points sur la Figure I representent les resul-

tats experimentaux exprimes en pourcentage de degradation de la fluot-escence ( i ) B divers facteul-s energetiques .f. L'abscisse ( L ) de cette figure represente le logal-ithme du facteur energetique.f.

L = log f

ou 11 , = puissance en watt du rayon laser, r = temps en microseconde de I'im~ulsion lumineuse. A = surface en mm' du rayon laser a I'entree du micros- cope, C = 3.6 x 10" constante pour limiter le champ du facteur f .

La courbe de regression lineaire calculee selon la methode de Thomas (1969) a partir des valeurs experimentales O < i < 100 est bien representee par I'equation:

On peut constater sur cette figure que le pour- centage de degradation de fluorescence ( i ) est, selon cette courbe, de zero pour une valeur ( L ) inferieure a 1.259 soit f < 18.16. Les valeurs experimentales a ( L ) = 0.824, - 0.155, 0.0,0.228 le demontrent bien.

La courbe representee a la Figure I , nous donne maintenant la possibilite de predire quel sera le pourcentage de degradation de la fluorescence dans la technique FTA-ABS 101-sque la lumiere excitante utilisee est du type laserienne puisque dans ce cas, I'on peut connaitre la puissance et le diamttre du rayon ainsi que le temps de I'impulsion lumineuse. De plus, si I'on se refkre a la stabilite de la fluores- cence rapportee pal- Drapeau et Laurence (1977) sur Esc.hoic.hio c,oli, ce type de courbe pourrait s'appliquer aux techniques d'immunofluorescence en general qui utilisent un conjuge a la fluoresceine.

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