Upload
theo
View
38
Download
0
Embed Size (px)
DESCRIPTION
Možnosti regenerace in vitro – zdroje explantátů. Gamety (androgeneze, gynogeneze) Embrya (embryokultury x embryogeneze) Semena (kalusové kultury z endospermu nebo megagametofytu) Embryogeneze na zygotických embryích Klíční rostliny (dělohy, hypokotyl, listy, kořeny) - PowerPoint PPT Presentation
Citation preview
Možnosti regenerace in vitro – zdroje explantátů
• Gamety (androgeneze, gynogeneze)• Embrya (embryokultury x embryogeneze)• Semena
– (kalusové kultury z endospermu nebo megagametofytu)– Embryogeneze na zygotických embryích
• Klíční rostliny (dělohy, hypokotyl, listy, kořeny)• Meristémy (apikální, axilární)• Diferencované orgány dospělých rostlin (listy,
kořeny, lodyhy – nody)
postup regenerace in vitroorgánové kultury
Společné pro in vitro kultury
• 1/ izolace explantátu (primární kultura)
• 2/ proliferace, multiplikace (pasážování)
• 3/ rhizogeneze
• 4/ aklimace
EXPLANTÁTY Z KLÍČNÍ ROSTLINY
epikotyl
děloha
hypokotyl
Kmín (Krens,2003)
Organogeneze
přímá nepřímá
KALUS
Kalus - dediferencované pletivo• ránový obrana organismu• neorganogenní (neembryogenní)
produkce metabolitů, studium• organogenní
(prýtykořeny) selekce, mikropropagace
• embryogenní
(somatické embryo SE rostlinka) selekce, mikropropagace (nebezpečí vzniku chimér)
Kalus regenerovaný na hypokotylu hrachu
Přímá organogeneze - (nižší riziko mutací) :
• rychlé namnožení nových odrůd
(podstatné zvýšení množitelského koeficientu, urychlení šlechtitelského procesu) (brambory klasicky 1: 5 -10, mikropropagace 1: 500000)
• vzdálená křížení
• šlechtitelsky cenné mutace
• množení těžko množitelných kultur (rododendrony
apod.), cenných jedinců, vzácných druhů
Přímá organogenezeAdventivní meristémy diferenciují na listech, lodyhách nebo částech květu
Přímá organogenezeAdventivní meristémy diferenciují na listech, lodyhách nebo částech květu
Kmín (Krens,2003)
Nepřímá organogeneze - využití:
selekce
• využití přirozené somaklonální variability
• selekční tlak
• mutageneze
• (transgenoze)
Organogeneze Ch. rubrum (Flores, 2004)
Nepřímá organogeneze na segmentech hypokotylu cukrové řepy (Jacq et al, 1992)
1/ indukce kalusu (a,c, d)
2/ regenerace prýtů (e) AUX:CK
3) zakořenění (f)
bez RR nebo s IBA
4) aklimace (g)
Jak můžeme ovlivnit způsob regenerace
koncentrace cytokininu auxinu
CK: AUX
v indukci procesů
diferenciace a dediferenciace
tvorba kořenů na řízcích
tvorba buněčné suspenze
somatická embryogeneze
iniciace tvorby kalusu
indukce adventivních pupenů
proliferace prýtů
Způsoby hodnocení a dokumentace kultur
• Počet kontaminovaných/ rostoucích/nerostoucích kultur (1. Týden)
• Měření přírůstku prýtů, kořenů, kalusu (*)
• vážení - nárůst hmotnosti (*)
• počítání regenerovaných prýtů (koeficient množení), buněk (*)
• hodnocení životnosti (*)
• mitotický index (*)
*
V určitém časovém odstupu (pasáž)
A to je pro dnešek konec teorie
Máte k tomu nějaké dotazy?