Mr Civel – ABM1 / Microbiologie Le laboratoire de Microbiologie

Mr Civel – ABM1 / Microbiologie

Le laboratoire de

Microbiologie

Les établissements d’enseignement entrent dans le champ d’application du Code du travail.

Évaluation des risques par le classement des agents biologiques en 4 groupes en fonction du risque infectieux .

Etablissement de mesures adaptées pour la protection collective et individuelle : les mesures vont conditionner le degré de confinement, c’est-à-

dire la conception du laboratoire de bactériologie, et vont influencer l’organisation du poste de travail.

Etablissement de procédures adaptées : elles constituent les consignes de sécurité.

Aspects réglementaires

Les agents biologiques et leur classement

Classe de

risque

Risque pour le

manipulateur

Risque pour la population

Pouvoir pathogène reconnu

Traitement et/ou moyen efficace de prévention

Exemples d’agents

1 Faible Aucun 0 Inutile

- Saccharomyces cerevisiae (levure de boulangerie)- Bactéries lactiques (Yaourt)- Penicillium roqueforti- Escherichia coli K12

2 Modéré Faible + +

- Escherichia coli UPEC- Staphylococcus aureus- Listeria monocytogenes- Cytomégalovirus

3 Élevé Faible ++/+++ +- Mycobacterium tuberculosis- VIH, VHB, Prions- Yersinia pestis

4 Élevé Élevé +++ 0

- Agents des fièvres hémorragiques : virus Ebola, virus de Lassa

- Virus de la variole

MESURES DE CONFINEMENT A METTRE EN ŒUVRE DANS LES LABORATOIRES DE RECHERCHE, DE DÉVELOPPEMENT ET D'ENSEIGNEMENT

NIVEAUX DE CONFINEMENT

2 3 4

A Conception du laboratoire

1. Signalisation du laboratoire (pictogramme " danger biologique ").

Oui Oui Oui

2. Laboratoire séparé des autres locaux au moins par une porte. Oui Oui Oui

3. Accès au laboratoire via un sas. * (oui si pression négative)

Non Optionnel * Oui

4. Accès réglementé et verrouillable. - Accès possible pour les seuls travailleurs autorisés.

Oui Oui Oui par sas

5. Possibilité de fermer hermétiquement le lieu de travail pour permettre la désinfection.

Optionnel Oui Oui

6. Filtration de l’air extrait du lieu de travail (filtre HEPA) avec évacuation de l'air à l'extérieur.

Non Oui Oui

7. Filtration de l'air entrant dans le lieu de travail. Non Optionnel Oui

8. Présence d'une fenêtre d'observation ou d'un système équivalent permettant de voir les occupants.

Optionnel Oui Oui

9. Moyen de communication avec l'extérieur. Non Optionnel Oui

10. Maintien d'une pression négative dans le laboratoire par rapport aux zones voisines.

Non Oui (1) Oui

11. Système d'alarme pour détecter tout changement inacceptable de la pression de l'air.

Non Oui Oui

12 Approvisionnement en énergie électrique de secours. Non Optionnel Oui

13. Système de ventilation de secours. Non Non OuiB Aménagements internes

Conception et équipement du laboratoire de microbiologie(Mesures de confinement)

* Oui : exigence. Non : pas d’exigence. Optionnel : doit être décidé, au cas par cas

Mesures de confinement des laboratoires



2 3 4


B Aménagements internes1. Poste de sécurité microbiologique. Oui (2) Oui (2) Oui, type

III

2. Vêtements de protection. Oui Oui adaptés Oui adaptés

3. Aménagements pour le rangement des vêtements de protection dans le laboratoire ou l'unité.

Oui Oui Oui

4. Douche pour la décontamination des travailleurs. Non Optionnel Oui

5. Lavage des mains : lavabos dont les robinets peuvent être manœuvrés sans utiliser les mains.

Oui (3) Oui Oui

6. Résistance des surfaces à l'eau, nettoyage aisé sans endroits inaccessibles au nettoyage.

Oui (sols) Oui Oui

7. Surfaces des paillasses imperméables à l'eau, résistantes aux acides, alcalis, solvants et désinfectants.

Oui Oui Oui

8. Lutte efficace contre les vecteurs, par exemple rongeurs et insectes.

Oui Oui Oui

9. Présence d'un autoclave. * facilement accessible

Oui* Oui* Oui dans le labo

10. Présence dans le laboratoire d'un équipement de base spécifique (matériel marqué)

Non Oui Oui

C Pratiques opératoires






2 3 4


B Aménagements internes

C Pratiques opératoires

1. Stockage des agents biologiques en lieu sûr. Oui Oui Oui lieu protégé

2. Manipulation des matières infectées et de tout animal contaminé dans un système approprié de confinement (5)

Optionnel Oui Oui

3. Utilisation de conteneurs spécifiques pour aiguilles contaminées, objets piquants ou tranchants souillés.

Oui Oui Oui

4. Minimisation de la formation d'aérosols. Oui Oui Oui

5. Contrôle de la dissémination des aérosols formés. Minimiser Empêcher Empêcher

6. Gants Optionnel Oui Oui

7. Inactivation du matériel contaminé et des déchets. Oui Oui Oui

8. Sortie du laboratoire après décontamination des équipements susceptibles d'être contaminés (centrifugeuses. PSM...).

Oui Oui Oui

9. Inactivation des effluents des éviers et des douches. Non Oui Oui




PictogrammesDe

Sécurité

Risques biologiques

PictogrammesDe

Sécurité

Exemple de phrases de risque :

R1 Explosif à l'état sec.R2 Risque d'explosion par le choc, la friction, le feu ou d'autres sources d'ignition.R5 Danger d'explosion sous l'action de la chaleur.R10 Inflammable. R12 Extrêmement inflammable.R68 Possibilité d'effets irréversibles

R39/26/27/28 Très toxique : danger d'effets irréversibles très graves par inhalation, par contact avec la peau et par ingestion. …

Exemple de phrases de sécurité :

S1 Conserver sous clé. S2 Conserver hors de la portée des enfantsS3 Conserver dans un endroit fraisS4 Conserver à l'écart de tout local d'habitationS8 Conserver le récipient à l'abri de l'humidité. S9 Conserver le récipient dans un endroit bien ventiléS64 En cas d'ingestion, rincer la bouche avec de l'eau ( seulement si la personne est consciente ).

S36/39 Porter un vêtement de protection approprié et un appareil de protection des yeux / du visage. …

Les risques au laboratoire de Microbiologie

Matériel utilisé Nature du risque Geste sécurité - Prévention

Le bec électrique BRULURESPort d'une blouse non inflammable. Cheveux courts ou attachés. Vigilance. Ne pas approcher un produit inflammable

Verres (lame, pipette) COUPURES Port de gants. Vigilance.

Pipettes Pasteur :- stériles

- contaminées

PIQURES

Les poser sur leur support.Ne pas laisser de fragments sur la paillasse.

Les jeter immédiatement après usage dans le bac de Javel.

Matériel électrique ELECTROCUTIONSols et paillasses secs.Ne pas toucher une prise ou une fiche d'appareil avec les mains mouillées. Signaler au professeur tout appareil abîmé (fil dénudé).

Produits chimiques

INHALATIONMaintenir les flacons fermés.Ne pas respirer au-dessus d'un flacon ouvert.

INGESTIONNe jamais prélever à la bouche.Utiliser une poire aspirante ou une pipette automatique.

PROJECTIONS Utiliser une blouse, des gants, des lunettes et travailler sous hotte.

COMBUSTIONNe pas manipuler les produits inflammables à proximité d'une flamme ou d'une source d'étincelles ou de chaleur.

Micro-organismes

INHALATIONPort de masque. Manipulation de souches dangereuses sous la hotte.

INGESTIONUtilisation de poires aspirantes, de système d'aspiration Ne pas porter les mains à la bouche.

PROJECTIONSEviter les courants d'air.Flamber l'oese progressivement (boucle en dernier !!!)Ne pas porter de lentilles.

Les règles fondamentales de la manipulation microbiologique

Ne pas contaminer les réactifs et milieux de cultureSinon risque d'erreur

technique

Ne pas contaminer l’environnement ou les personnes

Sinon risque biologique

- Le matériel de laboratoire

- L’organisation du poste microbiologique

- La manipulation aseptique (entrée du laboratoire, en cours de manipulation,

sortie du laboratoire)

1. Pipette Pasteur

5. Verre à pied

2. Anse ou oese

3. Fil droit

4. Pince

Le matériel de laboratoire


7. Bac à pipettes*

9. Portoirs

8. Bec Hoffmann (électrique)



12. Colorants Violet de Gentiane, Lugol, Fuschine et décolorant (alcool)

13. Porte lame (et bac à coloration, ici remplacé par l’évier)

11. Lamelle

et lame

10. Pissette d’eau (ou autre)

4.



8. revolver

9. Vis Macrométrique

10. Vis Micrométrique

1. Objectifs

2. Objectifs

7. potence

3. Porte Lame

4. Platine

11. Source lumineuse

12. Pied

Le microscope optique

5. Condenseur6. Diaphragme


Le microscope optique

Housse

Papier doux sous l’objectif X100

Microscope débranché

Utilisation du microscope optique, aux laboratoires du lycée Paul Eluard de Saint-Denis

L’organisation du poste de travail

A droite : Pot à instruments

propres :

.……..................................

……..…………............

..……………………

……………..………………..

A gauche : Milieux et tubes de culture ………………..… de la source de chaleur !

Bac à colorantsPosition du technicien manipulant dans la zone stérile qui doit être ……………. et disposée au milieu de la paillasse

Microscope, stylos et documents ………. de la zone de manipulationFils électriques au ……….

……. de la paillasse

A droite : Bac à Javel pour pipettes contaminées dépo-sées ……………..……….…..

Bec Hoffmann

Manchon électrique

L’organisation du poste de travail

Procédures au laboratoire de microbiologie

En entrant : Tenue appropriés et organiser son poste

- Pendant la manipulation :Attitude réfléchie et comportement adapté + utilisation de

matériel stérile

-En fin de manipulation :Rangement et nettoyage + désinfection

La manipulation aseptique

Procédure de nettoyage de la paillasse

Gestion des déchets

Procédure de nettoyage des mains

Conduite à tenir en cas d’accident

Mise en place de Procédures


Nettoyage de la paillasse

1. Nettoyage-désinfection avec de l’anios, en fin de manipulation (adaptation de la procédure)

2. En cas de désinfection après une contamination :Délimitation

Temps d’action Essuyage

Gestion des déchets


Déchets non piquants-coupants :

Tubes àHémolyse en

verre

Boites de pétriAmpoules APIPapiers contaminésEcouvillonsPlaques en carton de sérogroupageParafilmGants latexSpatules d’étirementTubes eppendorfUnopettes recapuchonnéesTubes plastiquesTubes de sang

Déchets piquants-coupants :

Pipettes pasteurPipettes plastiques

Cure-dents Agitateur

Tubes hématocriteCrochets de verre

Débris de verreCônes des

micropipettes

Bac à pipette Bac à lames

Poubelles de salle destinées à l’autoclavage

D’après la procédure M002, JN. Joffin

Grands tubes de culture

LamesLamelles


Lavage des Mains

2 - Recueillir une dose de savon liquide 3 - Se savonner 30 secondes

environ en insistant sur les espaces interdigitaux, le dos des mains et les poignets

1 - Après avoir retroussé les manches, mouiller les mains

6 - Fermer le robinet avec l'essuie-mains qui est éliminé dans une poubelle ouverte ou à commande à pédale

5 - Essuyer les mains avec un essuie-mains jetable

4 - Rincer abondamment

Le laboratoire de Microbiologie

Promotion 2009

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