Nachweis verschiedener mRNA‘s des

Prostataspezifischen Membranantigens

in Lymphknoten von PCa-Patienten

U. Fiedler, A. Manseck, R. Kranz, J. Herrmann, M. Wirth

Klinik und Poliklinik für Urologie

Universitätsklinikum der TU-Dresden

Metastasierung beim PCa

Ansiedlung:Ansiedlung:

Lymphknoten 69 %

Knochen 68%

Lunge 48%

Leber 33%

Ausbreitung:Ausbreitung:

Lymphbahnen

peripheres Blut

Eble 1993

Diagnostik der Lymphknoten-Metastasierung

Serum-PSA

Tumorstadium, Gleason Score Bildgebende Verfahren(CT, MRT, PET)

Histopathologie

Einschätzung der Lymphknoten-Metastasierung, PSA >20 ng/ml

Wahrschein-lichkeit %

cT1a cT1b cT1c cT2a cT2b cT2c cT3a0

10

20

30

40

50

60

2-45

67

8-10

Gleason Score

Tumorstadium Partin 1997

Molekularer Nachweis von PCa-Zellen

Nachweis prostataspezifischer mRNA

DNAProstata-spezifischemRNA

ProteinRibosom

ZytoplasmaZellkern

mRNA

Nachweis prostataspezifischerTranskripte mittels RT-PCR

Lymphknoten-gewebe

Isolierung der Gesamt RNA

Dnase I-Behandlung

cDNA-Synthese

Transkript-spezifische PCR

AAAmRNA

cDNA

PCR

AAA

AAA

AAA

TTT

Das prostataspezifische Membranantigen (PSM)

Lokalisation: Plasmamembran

Funktion: Folathydrolase

Größe: 94 kDa

Gene structure

extracellular

cytosolic

HOOC

NH2

PSM

Lokalisierung des Proteins

extrazellulär

intrazellulär

PSM-Gen und Transkripte

PSM’ 2387 bp (Su et al., 1995)

X

PSM - 2653 bp (Israeli et al., 1993)

PSM-Variante (Bzdega et al., 1997)X

Deletion von Exon 18 (657-688)

Deletion im Exon 1 (114-380)

The PSM gene

11q14

11p11-12

chromosome 11

PSM mRNA (2653 bp)

19 exons, 20 introns

[Leek et al. 1995, Rinker-Schaeffer et al. 1995]

Chromosom 11

PSM-Gen

19 Exons, 20 Introns

PSM mRNA 2653 bp

Patientenkollektiv

60 PCa-Patienten (232 Lymphknoten)16 hormonell vorbehandelt17 pTN132 pT2N0

8 pT3N0 3 pT4N0

3 Patienten mit Nieren bzw. Blasentumor

2 Patienten ohne maligne Erkrankung

RT-PCR zum Nachweis von PSM-Transkripten

Urologische KlinikUniversitätsklinikum Dresden

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

1-3, 5-7: Lymphknoten von PCa-Patienten

8: pos. Kontrolle (LNCaP)

9: neg. Kontrolle

10: 123 bp DNA Standard

Nachweis von PSM-Transkripten in regionären Lymphknoten

n RT-PCR-PSM + RT-PCR-PSM -

* histologisch neg. LK, Sensitivität: 94,1%, Spezifität: 4,7%

PCa 60 57 3

RCC 3 3 0

kein Ca 2 0 0

PCa/N+ 17 16 1*

PCa/N- 43 41 2

Urologische KlinikUniversitätsklinikum Dresden

Nachweis von PSM’-Transkripten in regionären Lymphknoten

n RT-PCR-PSM’ + RT-PCR-PSM’-

PCa 60 37 23

RCC 3 2 1

kein Ca 2 0 0

PCa/N+ 17 15 2 *

PCa/N- 43 22 21

* histologisch neg. LK, Sensitivität: 88,2%, Spezifität: 48,8%Urologische KlinikUniversitätsklinikum Dresden

Verteilung der PSM- und PSM’-Transkripte bei PCa-Patienten

n RT-PCR-PSM + RT-PCR-PSM’+

pT4N0 3 3 (100%) 1 (33%)

Gls 2-3 4 4 (100%) 2 (50%)

Gls 4-6 27 26 (96%) 17 (63%)

pT2N0 32 31 (97%) 16 (50%)

pT3N0 8 7 (88%) 5 (63%)

Gls 7-9 13 12 (92%) 9 (69%)

Urologische KlinikUniversitätsklinikum Dresden

RT-PCR oder Histopathologie ?

Bestimmung der Relevanz von PSM‘ im follow up

alle histologisch positiven Lymphknoten mit der RT-PCR für PSM und PSM‘ erkannt

PSM: - hohe Sensitivität, geringe Spezifität- ungeeigneter Marker

PSM‘: - hohe Sensitivität, Spezifität von 48%- positive Korrelation zwischen PSM‘-RT-PCR und Gleason Score - sensitiverer Nachweis von PCa-Zellen gegenüber Histopathologie ?