NANCY MARTINEZ RODR~GUEZ 18555 EXPERIMENTAL LUGAR DE148.206.53.84/tesiuami/UAMI12894.pdf · ... estudios de migración y evolución en población humana. ... caracterización de la

NOMBRE: NANCY LUCERO MARTINEZ RODR~GUEZ

MATRICULA: 993 18555

LICENCIATURA: BIOLOGIA EXPERIMENTAL

TITULO DEL TRABAJO: Determinacidn del Polimorfismo de 10s genes HLA- DR en pacientes maicanos con Cardiomiopatia Dilatada usando la Tkcnica de PCR (Reaccidn en cadena de la polimerasa) y Dot Blot Reverso.

LUGAR DE REALIZACION: Instituto Nacional de Cardiologia Ignacio Chavez, Departamento de Fisiologia, Laboratorio de Biologia Molecular.

ASESOR WTERNO:

Dr. Jose Luis Gomez Olivares h e a de Biologia Celular Departamento de Ciencias de la Salud Division de Ciencias Biologicas y de la Salud Unidad Iztapalapa

INDICE Páginas. 1. INTRODUCCIÓN 1

2. GENERALIDADES

2.1. EL SISTEMA PRINCIPAL DE HISTOCOMPATIBILIDAD 3

2.1.1. Genes clase I 6

2.1.2. Genes clase II 8

2.1.3. Genes clase III 11

2.2 PAPEL FISIOLÓGICO DEL SPH 11

2.3 PROCESAMIENTO Y PRESENTACIÓN DE ANTIGENOS

POR EL SPH CLASE I Y II. 12

2.4. APLICACIONES CLINICAS DEL SPH 15

2.5 ASOCIACION DE HLA CON ENFERMEDADES 15

2.6. Antigenos DE linfocito Humano (HLA) Y Cardiomiopatia

Dilatada 17

2.7. CARDIOMIOPATIA DILATADA 17

2.7.1. Etiología de la Cardiomiopatía Dilatada 20

2.7.1.1. Factores Genéticos. 21

2.7.1.2. Factores virales. 23

2.7.1.3. Inmunidad humoral. 25

3. JUSTIFICACIÓN. 26

4. HIPÓTESIS 27

5. OBJETIVO 27

6. METODOLOGÍA 28

6.1. SUJETOS DE ESTUDIO 28

6.2.EXTRACCIÓN DE DNA (técnica de triton) 29

6.3. DETERMINACIÓN DE ALELOS HLA-DR 30

6.4. ANÁLISIS ESTADÍSTICO 31

7. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 32

8. CONCLUSIÓN 33

9. BIBLIOGRAFÍA 34

Determinación del Polimorfismo de los genes HLA-DR en pacientes mexicanos con Cardiomiopatía Dilatada, usando la Técnica de PCR (Reaccion en Cadena de la Polimerasa) y Dot Blot Reverso

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1

1. INTRODUCCIÓN

La Cardiomiopatía Dilatada (CD) es una enfermedad del músculo

cardiaco que produce dilatación y daño principalmente en el ventrículo

izquierdo, aunque en algunos casos puede llegar a afectar a ambos

ventrículos. La destrucción difusa de las fibras miocárdicas ocasiona que las

miofibrillas restantes no logren desarrollar eficientemente la función de bombeo

(función propia del corazón). Es decir, a mayor destrucción miocárdica mayor

deterioro de la función contráctil. La disminución en la función cardíaca afecta a

pulmones, hígado y otros sistemas del organismo; se puede llegar a presentar

en ambos sexos y a cualquier edad, pero suele a menudo presentarse en

hombres de mediana edad 1.

Estudios anatomopatológicos e histológicos muestran extensas zonas de

fibrosis que han sustituido al tejido miocárdico. Las fibras del miocardio se

encuentran hipertrofiadas e incluso hay presencia de miocitos en procesos de

degeneración. Debido a que la miocardiopatía dilatada forma parte de un

estado final de lesión miocárdica se puede llegar a encontrar inflamación,

necrosis por isquemia u ocasionando lisis por efecto tóxico o sobrecarga

hemodinámica crónica2,3.

A pesar de que la etiología de la CD es desconocida, se han reportado

varias anormalidades a nivel del sistema inmune. En la inmunidad mediada por

células se ha observado déficit en la función de los linfocitos T citotóxicos y

reducida o ausente actividad de las células NK (asesinas naturales). También,

se ha sugerido que la baja actividad de las células T citotóxicas conlleva a una

producción alterada de algunos autoanticuerpos. Con respecto a la inmunidad

humoral, se ha reportado la presencia de autoanticuerpos específicos del

órgano cardiaco tales como anti-miosina y anti-actina. Dichos autoanticuerpos

se han encontrado de forma más frecuente en familiares afectados y no

afectados de pacientes con CD, sugiriendo que la carga genética puede estar

jugando un papel relevante en la patogénesis de la enfermedad 4,5,6.

Aunque en las últimas décadas la CD se ha investigando, en la

actualidad su etiología sigue siendo desconocida y se le considera por varios


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autores como una enfermedad autoinmune. A partir de una infección

principalmente de origen viral (adenovirus, enterovirus) se ocasiona un daño a

nivel celular exponiendo antígenos intracelulares como la miosina y disparando

la autoinmunidad en individuos genéticamente susceptibles7.

Otro mecanismo implica una reactividad cruzada entre los antígenos

presentes en los virus y las estructuras del miocardio, las cuales por éste

fenómeno son reconocidas como extrañas y son blanco del ataque

autoinmune. Recientemente, se ha reportado que anticuerpos monoclonales

dirigidos contra el virus Coxsackie B4 reaccionan con el músculo cardiaco y

otros anticuerpos dirigidos contra la cápside del mismo virus, produciéndose

una reacción de forma cruzada con la miosina cardiaca8.9.

Debido a la importante participación de la respuesta inmune en el

desarrollo de la enfermedad, los factores genéticos implicados en su

desencadenamiento podrían incluir a los genes del Sistema Principal de

Histocompatibilidad (SPH)10.

El sistema HLA está constituido por un conjunto de genes localizados en

el brazo corto del cromosoma 6. Debido a su participación crucial en la

fisiología sus aplicaciones son muy diversas, entre las más importantes esta: a)

trasplante de órganos y tejidos, b) asociación con etiología de enfermedades

con un fondo autoinmune y crónico-degenerativas, así como algunas

infecciones, c) medicina forense y d) estudios de migración y evolución en

población humana.


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2. GENERALIDADES

2.1 EL SISTEMA PRINCIPAL DE HISTOCOMPATIBILIDAD

El Sistema Principal de Histocompatibilidad (SPH) comprende una serie

de genes estrechamente relacionados cuyos productos están comprometidos

con la regulación de la respuesta inmune. Cada uno de estos genes es

extraordinariamente polimórfico y son heredados de manera mendeliana

codominante; lo cual ha permitido que sean usados como marcadores

genéticos en el estudio de las enfermedades y también se han empleado en la

caracterización de la estructura genética de algunas poblaciones, en la

selección de individuos candidatos como donadores para transplante11.

El SPH se encuentra localizado en el brazo corto del cromosoma 6

humano (6p), en la porción distal de la banda p21.3. Este sistema ha sido

dividido en tres grupos en base a las características estructurales y funcionales

de los productos de los genes.

La región clase I del SPH (Figura 1), se localiza hacia el telómero y tiene

por lo menos 17 genes relacionados entre sí y que incluye los loci HLA-A, HLA-

B, HLA-C, HLA-E, HLA-F , HLA-G . Hacia el centrómero está la región clase II,

que se divide en cuatro subregiones (DP, DO/DZ, DQ y DR), cada una por lo

menos con un par de genes α y β ; además encontramos a los genes TAP

(Transportador Asociado al Procesamiento de antígenos) y LMP (Proteínas de

bajo peso molecular). Entre las regiones clase I y clase II, se encuentra la

región clase III, cuyos genes codifican para los componentes del complemento

C2, factor B (fb), C4A y C4B, como los genes estructurales de la 21-hidroxilasa

A y B (21-OHA y 21-OHB).

Dentro del SPH se incluyen el gen de la glicoxilasa I, el más

centromérico de todos, así como los genes del factor de necrosis tumoral (TNF)

α y β. Que están entre el HLA-B y la región de clase III. Recientemente se han

encontrado otros cinco genes asociados con el locus HLA-B, llamados

“transcritos asociados” a B, que se designan como BAT-1,-2, -3, -4 y –5. En


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1989 se detectaron dos loci de la proteína de choque térmico HSP70 HSP70-1

y HSP70-2 situados entre los genes de clase III y el TNF α.

Las moléculas clase I se expresan en la membrana de todas las células

nucleadas del cuerpo, excepto en neuronas y trofoblastos maduros y son

difíciles de detectar en eritrocitos. De los tres loci de clase I (HLA-A, -B y –C),

el locus de C es el que menos adecuadamente se expresa. Las moléculas

clase II se expresan sólo en células como macrófagos, linfocitos B, células

endoteliales, células dendríticas y células de Langerhans. No se expresan en

eritocitos maduros, granulocitos ni en linfocitos T no activados, pero su

expresión puede inducirse con mitógenos o estímulos antígeno específico.

Tanto los eritrocitos maduros como los granulocitos no expresan moléculas

de clase II.

La frecuencia de recombinación génica dentro del SPH es muy baja

(menos del 2%) debido a que este conjunto de genes ocupa solamente unas

3,800 kb. El entrecruzamiento entre cromosomas homólogos que incluya a los

genes HLA-A y –B o a HLA-B y –DR ocurre con una frecuencia un poco menor

de 1% del total de meiosis. Por esta razón el complejo génico puede

considerarse como una sola unidad genética.

Los alelos de los loci del SPH de un cromosoma en particular

constituyen un haplotipo (el genotipo de un individuo está dado por dos

haplotipos, uno de origen materno y otro de origen paterno). Una combinación

dada de alelos de los loci B, C2, C4A y C4B conforman el complotipo o

haplotipo de genes del complemento12,13,14.


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Figura.1 Localización cromosómica de los genes del Sistema Principal de Histocompatibilidad en humano.

CROMOSOMA 6

q

p (21.3)


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2.1.1. Genes Clase I

Las moléculas del SPH clase I se encuentran en todas las células

nucleadas y plaquetas del organismo, razón por la cual su presencia es nula

en los glóbulos rojos, su expresión es intensa en las células linfoides, menos

intensa en el hígado, riñón y pulmón y escasa en el cerebro, músculo

esquelético y trofoblasto velloso. Esta distribución en los tejidos implica que

actúan como marcadores de reconocimiento de las células propias, condición

necesaria para que el organismo distinga los agentes extraños de los internos,

y se defienda contra ellos. Su expresión es coordinada: A, B y C, se expresan

al mismo tiempo en la superficie celular15.

Koller y colaboradores en 1989 construyeron un mapa de los genes clase-I

que incluye 6 loci: HLA-A, HLA-B, HLA-C; HLA-E, HLA-F, HLA-G , que ocupan

11 centimorgans (cM).

Los principales locus son: HLA-A, B y C llamados clásicos y comprenden

una extensión de 2000 Kb, separados entre sí por largas fibras de ADN, y su

función es la presentación a linfocitos T de péptidos de 8 a 10 aminoácidos de

largo. Los linfocitos T participan en el reconocimiento, rechazo y destrucción de

virus e injertos de tejido extraño. La identificación serológica de las moléculas

tipo C ha sido difícil e imprecisa, sin embargo ellas parecen ser muy

importantes en la interacción con las células asesinas NK 16.

Existen otros locus menos polimórficos que se expresan poco, los cuales

son HLA-E, F, G, H, y J, cuyas funciones aún no están bien establecidas,

aunque algunas evidencias y la restricción tisular del HLA-G, sugieren la

participación de éstas moléculas en la tolerancia materno-fetal.

Los antígenos de clase I son mediadores de la eliminación alogénica y de

la restricción de linfocitos T efectores. Se constituyen en par de cadenas

polipeptídicas unidas no covalentemente: una cadena pesada α, que es

glicoproteíca, transmembranal de 45 kd y una cadena ligera α, también

glicoproteíca, de 12 kd. La cadena α es polimórfica y es codificada por el HLA-


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A, -B ó –C y la cadena β, monomórfica, es la β2-microglobulina, codificada por

un gen en el cromosoma.

La estructura de los antígenos de clase I del SPH, se dedujo inicialmente

a partir de la determinación de la secuencia de aminoácidos del material

purificado de una línea celular humana linfoblastoide. Estas moléculas tienen

dominios extracelulares, una región transmembranal y una cola citoplásmica

corta. Se ha podido encontrar además la estructura tridimensional del antígeno

HLA-A2 por medio de cristalografía de rayos X. La cadena pesada α consta de

tres dominios externos (α1, α2 y α3). Los dominios α1 y α2 son los más distales

a la membrana celular y son los que contienen los residuos polimórficos que

conforman el sitio de unión a un antígeno, y así son presentados por la

molécula del HLA al receptor del linfocito T17.

FIGURA 2. Estructura de una molécula Clase I del SPH.


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2.1.2. Genes Clase II

El sistema clase II está subdividido en varios grupos: Los HLA-DR, DQ,

DZ, DO, DP, DM, y DN. En el humano se han definido bioquímicamente tres

isotipos de las moléculas clase II, DR, DQ y DP, que son coexpresados en la

superficie de las células presentadoras de antígeno, cada una de ellas

constituida por un dímero: DRα/DRβ, DQα/DQβ y DPα/DPβ. Algunos individuos

expresan además un cuarto producto denominado DRw52, DRw53 o DRB51;

además de los genes TAP1 y TAP2 y los genes LMP2 y LMP718.

Los antígenos de clase II son determinantes primarios en la generación

de respuestas proliferativas de linfocitos T y pueden presentar antígenos al

receptor de linfocito T. Se constituyen de cadenas glicoproteícas, unidas no

covalentemente, una pesada α monomórfica de 33 kd y una cadena ligera β

polimórfica de 28 kd, ambas codificadas por loci del HLA. DR/DR

La molécula de clase II tiene cuatro dominios externos: α 1, α2, b1 y

b2, análogos a los dominios a1, a2, a3 y a la β2-microglobulina, de la

molécula de clase I, respectivamente. Los dominios α 2 y β2 son del tipo de las

inmunoglobulinas, muy conservados y los dominios β1 y α 1 son polimórficos.

La molécula de clase II tiene asociada a las cadenas α y β una

glucoproteína transmembranal de 31 Kd, conocida como cadena gamma o

cadena invariante. Esta cadena no se detecta con anticuerpos en la superficie

celular, por lo que se piensa que se asocia al complejo entre el paso por el

aparato de Golgi y el arribo a la membrana celular.

De las cuatro subregiones de los genes de las moléculas de clase II, la

subregión DP consta de dos pares de loci α y dos β , de los cuales DP α 2 y DP

β 2 parecen ser pseudogenes (genes que no codifican para proteínas). La

subregión DZ/DO se constituye de los genes DZ α y DO β, pero como estos

dos loci están separados por varios cientos de kilobases, quizá no forman un

dímero α / β.


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La subregión DQ tiene dos genes α y dos β: incluye dos genes DX (α y

β) y un gen DVα entre los genes DQ y DX. La subregión DR tiene cuatro genes

β: el β 1 codifica para las variantes de DR de DR1 a DR18, el β2 es

pseudogen, el β3 codifica para el determinante DRW 52 y el β4 para el

determinante DRW 53, hay un gen DR α no polimórfico . Se expresan tres

tipos de productos de clase II: DP, DQ y DR. No hay evidencias de que DZβ y

DOβ se expresen como proteínas, aunque se ha encontrado RNA mensajero

normalmente poliadenilado, de ambos genes en células B. Pueden formarse

pares de cadenas de DQβ y DQ α en “trans”, es decir, la cadena α 1 y β1

codificadas cada una por uno de dos los cromosomas homólogos de un

individuo.

Los genes de la región β son los llamados "genes IR" (de respuesta

inmune). El HLA DM participa en el proceso de liberación, transporte y

ensamblaje del péptido exógeno al complejo. El HLA DZ al parecer, tiene

genes incompletos que no se expresan, y que solo lo hacen en células muy

especializadas aún no identificadas. El HLA DP se encuentra en las células

presentadoras de antígeno, y estimulan a los linfocitos T; participan en la

presentación de antígenos de influenza y Herpes simplex y se ha encontrado

asociada a artritis reumatoidea juvenil y a infecciones por Onchocerca valvulus.

El HLA DO frena la presentación de antígenos a los LT-CD4+ actuando

sobre las moléculas HLA DM a las cuales inhibe, impidiendo la liberación de la

molécula CLIP con lo cual interviene en el acoplamiento de los antígenos a los

HLA Clase I.

El polimorfismo de las moléculas clase II se encuentra en las cadenas α

de los antígenos HLA-DP, -DQ y –DR. Los residuos polimórficos están en

cuatro cúmulos en los dominios β1 de DQ y DR, así como en un cúmulo de �1

de DQ. El polimorfismo de la cadena DPβ es limitado.

Otros genes que se encuentran dentro de la clase II del SPH, son los

TAP y los LMP, cuya importancia radica en su participación durante el

procesamiento y presentación antígenica mediados por clase I. Los genes del


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LMP son polimórficos y sus productos constituyen dos subunidades del

complejo proteosomal, las cuales se les ha atribuido que participan en la

degradación de proteínas citosólicas y en la generación de peptidos

antigénicos; mientras que las TAP (TAP1 y TAP2) forman un heterodímero y

participan en el transporte de péptidos generados por las proteasas, desde el

citosol hacia el retículo endoplásmico.

El polimorfismo alélico de los antígenos de clase I y II se reconoce

fenotípicamente por serología y por técnicas moleculares.

FIGURA3. Estructura de una molécula Clase II del SPH


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2.1.3. Genes Clase III

La región clase III contiene por lo menos 70 genes, con una densidad de

aproximadamente un gen cada 10 kb en promedio. Los genes de clase III del

SPH, después del HLA, forman el conjunto de marcadores genéticos más

polimórficos del humano19.

Los cuatro loci de esta región (C2, Factor B, C4A y C4B), se heredan en

bloque. Las moléculas del factor B y C2 son glicoproteínas de una sola cadena

de 90 kDa y 102 kDa, respectivamente. Estos circulan en el plasma en forma

de pro-enzimas20.

La molécula de C4, pesa 200 Kd y tiene tres subunidades acopladas por

puentes disulfuro: α (95 Kd), β (75 Kd) y τ (30 Kd). Se sintetiza como una sola

cadena en el orden α-β-τ que luego se glicosila y se procesa intracelularmente;

secretándose como una estructura de tres cadenas. En los últimos años se ha

estudiado el hecho de que muchos de los genes en la región clase III, codifican

proteínas con funciones relacionadas con el sistema inmune como los genes

del complemento, el factor B, las proteínas de choque térmico (hsp70) y el

factor de necrosis tumoral (TNF)21,22,23,24,25.

2.2. PAPEL FISIOLÓGICO DEL SPH.

Los antígenos de histocompatibilidad se descubrieron por su

participación en el rechazo de injertos. La capacidad de distinguir lo propio de

lo extraño, es una característica de todos los organismos pluricelulares,

apareciendo ya en los tunicados y los celenterados (Pepinos de mar y estrellas

de mar), como un mecanismo para mantener la identidad de la especie; Estos

han evolucionado hasta aparecer en los anfibios y probablemente ya en los

peces y permiten la alta variabilidad interindividual dentro de una misma

especie, asegurando un sistema adecuado de unidades de reconocimiento

sobre las células propias.


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En la etapa de diferenciación intratímica, los linfocitos T (LT) aprenden a

reconocer los antígenos extraños en el contexto de lo propio, según si van a

ser célula CD4+ (Clase II), o célula T CD8+ (Clase I). Ahí se produce la

selección positiva, y el linfocito que no tiene la capacidad de reconocer I o II va

a la apoptosis26,27.

Los antígenos del SPH son indispensables para la inducción de la

respuesta ya que el LT reconoce muy pobremente al antígeno que llega en

forma soluble, y requiere del contexto de SPH en la membrana de la célula

presentadora; por eso la expresión de sus antígenos, regula en cierta forma la

respuesta, ya que determina qué va a ser reconocido y cómo. A nivel

intracelular, los antígenos del SPH en la célula presentadora participan en el

procesamiento del antígeno y son críticos en la presentación antigénica28,29.

2.3. PROCESAMIENTO Y PRESENTACION DE ANTIGENOS POR EL

SPH CLASE I Y II.

Las células T sólo reconocen antígenos sobre la superficie de células

accesorias en asociación a los productos de los genes del SPH propio. Los

linfocitos T colaboradores CD4+ reconocen antígenos asociados a los productos

de los genes del SPH clase II (reconocimiento restringido por SPH clase II) y

los linfocitos T citotóxicos (CD8+) reconocen antígenos asociados a los

productos de los genes del SPH clase I (reconocimiento restringido por SPH

clase I)30.

El procesamiento del antígeno consiste en la introducción de los

antígenos proteicos en las células presentadoras de antígenos (APC), la

degradación proteolítica de estas proteínas en péptidos, la unión de los

péptidos a las moléculas de SPH recién ensambladas y la exposición de los

complejos péptido-SPH sobre la superficie de una APC para el reconocimiento

potencial de células T.


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Las vías del procesamiento del antígeno en las APC utilizan los

mecanismos celulares básicos de proteólisis, que también operan

independientemente del sistema inmunitario. Tanto las proteínas extra como

intracelulares son mostradas a través de estas vías de procesamiento del

antígeno y los péptidos derivados de las proteínas normales propias y de las

proteínas extrañas son a su vez expuestos por las moléculas del SPH para la

vigilancia a través de los linfocitos T.

Las APC especializadas entre ellas macrófagos, linfocitos B y células

dendríticas internalizan las proteínas extracelulares en los endosomas para su

procesamiento a través de la vía del SPH clase II. Estas proteínas sufren

proteólisis por enzimas que actúan a pH ácido en las vesículas de la vía

endosómica. Los heterodímeros del SPH clase II recién sintetizados se asocian

a la cadena invariable y son dirigidos desde el retículo endoplásmico rugoso

(RER) hacia las vesículas endosómicas, donde la cadena invariable sufre

proteólisis, eliminándose a partir de la hendidura de unión del péptido en la

molécula del SPH por la acción de moléculas DM, un pequeño péptido residual

de la cadena invariable. Los péptidos generados a partir de proteínas

extracelulares se unen después a la molécula del SPH clase II, y el complejo

trimérico (cadenas αy β del SPH clase II y el péptido) se traslada hacia la

superficie de la célula.

Las proteínas citosólicas en célula infectadas por virus siguen la vía del

SPH clase I para la presentación del antígeno. El proteosoma es un complejo

citoplasmático multiproteico que degrada mediante proteólisis las proteínas

citoplasmáticas marcadas con ubiquitina y genera probablemente, una gran

cantidad de péptidos cuyo destino es la exposición por las moléculas del SPH

clase I.

Los péptidos son distribuidos desde el citoplasma al RER a través de las

moléculas proteínas transportadoras de antígenos (TAP). Los dímeros del SPH

clase I recién formados en el RE se asocian y se unen a los péptidos

distribuidos por TAP. La unión del péptido estabiliza las moléculas del SPH


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clase I y permite su movimiento desde el RER a través del aparato de Golgi,

hacia la superficie. Estas vías de presentación de antígeno restringidas por el

SPH garantizan que sean escrutadas la mayor parte de las proteínas del

organismo buscando la presencia de posibles antígenos extraños.

Las vías aseguran igualmente que las proteínas de los microorganismos

extracelulares probablemente generen péptidos unidos a moléculas del SPH

clase II para su reconocimiento con células T colaboradoras CD4+, mientras

que las proteínas codificadas por microorganismos intracelulares generan

péptidos unidas a moléculas del SPH clase I para su reconocimiento por CTL

CD8+. La inmunogenicidad de las proteínas microbianas depende de la

capacidad de las vías de procesamiento del antígeno para generar péptidos

derivados de estas proteínas que se unen a moléculas del SPH propias.

FIGURA 4. Vías de procesamiento y presentación de antígenos.


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2.4. APLICACIONES CLINICAS DEL SPH

La capacidad de resistencia de un individuo a determinado

microorganismo está programada por SPH y es altamente probable que en un

futuro próximo pueda establecerse contra cuáles microorganismos es

resistente cada persona. Por lo pronto, la importancia de la determinación de

éstos antígenos tiene aplicación práctica en la asociación con enfermedades,

definición de paternidad, estudios antropológicos y trasplantes31 .

2.5. ASOCIACION DE HLA CON ENFERMEDADES

Se puede inferir que cualquier trastorno manifestado, ya sea como

aumento o defecto de la respuesta inmunitaria que involucre a cualquiera de

los anfígenos del SPH, puede traer consecuencias relevantes en el tipo de

respuesta inmunitaria que desarrolle un individuo en particular.

Desde el descubrimiento de que las moléculas HLA sirven como

elementos de restricción para el reconocimiento de muchos agentes

patógenos, se pensó que este sistema podría estar relacionado con la

predisposición para desarrollar algunas enfermedades. Los avances en el

conocimiento de la genética y la biología de las moléculas clase I, II y III han

estimulado la investigación en el área de la asociación de enfermedades con

alelos de estos genes, especialmente por el papel que tienen en la regulación

de la respuesta inmune.

En 1973 se reportó la asociación entre la espondilitis anquilosante y el

antígeno HLA-B27, desde entonces más de 700 enfermedades han sido

asociadas con uno o más antígenos del SPH. Estas enfermedades se pueden

incluir básicamente en tres grupos:

1.-Enfermedades asociadas a los antígenos clase I (principalmente las

espondiloartropatías asociadas a B27).


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2.-Enfermedades asociadas a los antígenos clase II principalmente con

el locus HLA-DR (cardiomiopatías).

3.-Enfermedades asociadas a los antígenos clase III (Lupus sistemico

eritematoso ).

La mayoría de las enfermedades incluidas en el segundo grupo son de

origen autoinmune. Las enfermedades asociadas al SPH son multifactoriales,

es decir, involucran tanto el terreno genético del individuo como también ciertos

factores ambientales, actuando conjuntamente para influir en la susceptibilidad

o resistencia al desarrollo de enfermedades especificas.

Las correlaciones con una enfermedad pueden ser positivas o negativas;

la positiva implica que un alelo predispone a la enfermedad, mientras que una

negativa sugiere que el alelo HLA puede ser protector, especialmente si tiene

un efecto dominante y no se encuentra en individuos afectados en estado

heterocigoto con un alelo putativo promotor de enfermedad. Se han reportado

varias asociaciones entre alelos del SPH y enfermedades cardiológicas, entre

éstas tenemos a la Cardiomiopatia Dilatada e hipertrófica, infarto al miocardio,

fiebre reumática y aterosclerosis. (Cuadro 1)33.


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2.6. Antígeno del linfocito Humano (HLA) y Cardiomiopatía dilatada

A pesar de la gran cantidad de estudios que se han realizado en cuanto

a los alelos asociados han mostrado resultados heterogéneos, lo cual puede

deberse a las diferencias étnicas de los grupos de estudio.

El estudio realizado por Carlquist y colaboradores en 1990 confirmaron

el incremento de la frecuencia del antígeno HLA-DR4 en un grupo de

pacientes con cardiomiopatía dilatada; a su vez encontraron una disminución

en la expresión de DRw6 en el mismo grupo de pacientes. También,

reportaron un incremento significativo del HLA-DQw4 en los pacientes cuando

se compararon con los controles.

En un estudio con pacientes del las costas del mediterráneo, los alelos

que se asociaron con la susceptibilidad al desarrollo de la enfermedad fueron

el HLA-B15 y del HLA-DQ3.

Maharaj y colaboradores demostraron un incremento en la frecuencia de los

antígenos HLA-DR1 Y DRw10 en pacientes negros con cardiomiopatía

dilatada.

En pacientes de origen caucásico se ha asociado de forma importante con el

antígeno HLA-DR4, HLA-DR1 Y HLA-DR5. Los subtipos de DR4 encontrados

en caucásicos el DR*0401, *0404 y *0407 Y en japoneses el DR *040134.

2.7. CARDIOMIOPATÍA DILATADA

La Cardiomiopatía Dilatada (CD), también denominada cardiomiopatía

congestiva provoca daños en el tejido muscular cardiaco que conforma las

cavidades de bombeo del corazón. Este daño se caracteriza por un

adelgazamiento de las paredes de las cavidades debilitándose demasiado, el

corazón no puede bombear normalmente, ya que las contracciones se vuelven


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deficientes y hay dilatación en el ventrículo izquierdo reduciéndose así la

función sistólica.

Inicialmente, las funciones del organismo seguirán siendo casi normales,

otras partes del organismo tratarán de compensar la disminución de la

capacidad de bombeo del corazón con un aumento en la cantidad de líquido

que retienen y produciendo más sangre de lo normal. Entonces, las cavidades

del corazón se agrandan (dilatan) para poder recibir este mayor volumen de

sangre1.

Pero los efectos a largo plazo del agrandamiento del corazón no son

buenos; el corazón tratará de aumentar su frecuencia para bombear más

sangre al organismo. El corazón no puede contraerse bien, afectando a la

circulación lo cual provoca una acumulación de líquido en los pulmones, en la

región superior del abdomen y las piernas. Esta acumulación de líquido dificulta

la respiración y produce hinchazón (edema); éstos son dos síntomas comunes

del síndrome de insuficiencia cardiaca congestiva.

El agrandamiento del corazón (cardiomegalia) a veces puede dar lugar a

una alteración del ritmo cardíaco (arritmia). Además, la sangre circula más

lentamente por un corazón agrandado, y por lo tanto, pueden formarse

coágulos sanguíneos fácilmente. Estos coágulos se pueden desprender y

desplazarse por la corriente sanguínea hasta llegar a los pulmones (embolia

pulmonar) u obstruir un vaso sanguíneo en el cerebro o el corazón.

Actualmente es complicado conocer la etiología de esta patología, ya

que es una enfermedad poligénica en la cual están comprometidos factores

genéticos, virales, inmunológicos y ambientales, por lo que en la mayoría de los

casos de cardiomiopatía dilatada, lo cual significa que no puede determinarse

exactamente su causa.


____________________________________________________________________________________________________________________

19

Figura 5.

Figura. 6 Figura. 5 Cardiomiopatía Dilatada: LA, atrio izq., LV ventrículo izq., RA. Atrio derecho, RV, ventrículo derecho 6, fotografias de un corazón con Cardiomiopatíz Dilatada.


____________________________________________________________________________________________________________________

20

2.7.1. Etiología de la cardiomiopatía dilatada

Su incidencia es mayor en el sexo masculino y en la raza negra. La

etiopatogenía se desconoce. Aproximadamente un tercio de los casos son de

origen genético hereditario y en el resto se reconocen causas especificas de

origen isquémico, hipertensivo, tóxico, metabólico, inflamatorio, viral, de

inmunidad celular y humoral, apoptosis celular o de otra etiología (cuadro 2)2.

CUADRO 2. CAUSAS ESPECIFICAS DE CARDIOMIOPATIA DILATADA

Isquemia

Tóxicos: alcohol, cocaína, anfetaminas, cobalto, plomo, mercurio,

monóxido de carbono, berilio.

Deficiencias nutricionales: tiamina, selenio, carnitina.

Enfermedades infecciosas:

Virus: Coxsackie, citomegalovirus, VIH, varicela, hepatitis, Epstein-Barr,

virus ECHO.

Bacterianas: fiebre reumática, fiebre tifoidea, difteria, brucelosis,

psitacosis, enfermedades por Rickettsia, enfermedad de Lyme.

Micoplasma, hongos, histoplasmosis, criptococosis.

Parasitos: enfermedad de Chagas, toxoplasmosis, esquistosomiasis,

triquinosis.

Alteraciones electrolíticas: hipocalcemia, hipofosfatemía, uremia, otros.

Alteraciones endocrinas: tiroides, diabetes mellitus, feocromocitoma,

Cushing, hormona de crecimiento.

Medicamentos (quimioterapia, antirretrovirales)

Enfermedades neuromusculares (distrofia muscular de Duchene),

reumatologicas (lupus)

Misceláneas: miocardiopatía periparto y autoinmunitarias, taquicardia,

miocardiopatias autoinmunes, cardiopatias familiares,apnea de sueño,

sobrecarga de calcio, radicales libres.

Enfermedades de deposito: amiloidosis.


____________________________________________________________________________________________________________________

21

2.7.1.1. Factores genéticos

La forma familiar de cardiomiopatía dilatada es heterogénea y es

responsable de un 20 a un 30% de los casos. Existen por lo menos cinco o

más loci asociados con cardiomiopatía dilatada autosómica dominante en

adultos. Cuatro se asocian con otras manifestaciones clínicas con defectos de

las proteínas del citoesqueleto productoras de disfunción miocárdica y de

músculo esquelético.

Dentro de las mutaciones genéticas en cardiomiopatía dilatada se

encuentran las siguientes:

• Proteínas del citoesqueleto: distrofina (Xp21), desamina, taffazzin.

• Actina (cromosomas 1q32, 9q13-22 y 10q21-23).

• Cadena pesada betamiosina cardiaca y troponina T (cromosoma

14q11.2-13).

• Otros cromosomas: 2q11-22, 2q31 mitocondrial.

CUADRO 3: Alelos del SPH asociados con cardiomiopatía dilatada en otras poblaciones

POBLACION GRUPO ALELOS

ASOCIADOS

CAUCASICOS

NORTE-AMERICANOS NORTE-EUROPEOS ESPAÑOLES ISRAELITAS

HLA-DR4 *0401, *0404 *0401, *0404 *0405, *1001 *0102, *0405

ASIATICOS JAPONESES COREANOS CHINOS

HLA-DR1, DR5 *0405 *0401, *0405 *0405, *1001

NEGROIDE Oman HLA-DR4

INDÍGENAS AMERICANOS

TINGLIT YAKIMA PIMA

HLA-DRB1 *1402 *1402 *1402


____________________________________________________________________________________________________________________

22

El cuadro anterior nos da las bases sobre el reporte que se tiene sobre

la inmunogenetica de la población mexicana (mestiza e indígena). Los mestizos

mexicanos, contamos con un 56% de genes amerindios (genes indígenas), un

40% de genes caucásicos y un 4% de genes negroides.

Históricamente los primeros pobladores del continente americano fueron

los amerindios hace 30,000 a 40,000 años y ubicándose en norte América (sur

de estados unidos), centro América y Sudamérica, otra de las poblaciones

fueron los na-dene hace 10,000 a 15,000 años estando estos ubicados al norte

america (norte de estados unidos y sur de Canadá) los por ultimo la población

eskimo-aleut hace 5,000 a 8,000 años ubicados al norte de Canadá y Alaska.

La población indígena antes de que fuera descubierta América contaba

con 90-112 millones de indígenas de los cuales 14 a 30 millones eran incas y

una cantidad superior a los incas de mesoamericanos. Cuando se da el

descubrimiento de América en particular la conquista de México aparecen

muchas enfermedades, la población se incrementa de una manera

considerable, dándonos como resultado una mezcla de razas y una gran

variabilidad genética en ese entonces se contaba con 8-15 millones de

indígenas, 56 grupos étnicos 5 troncos lingüísticos (- macro-nahua, macro-

mixteco, macro-maya, macro-yuma, tarasco).

Esta combinación genética nos dio como resultado la variabilidad de

nuestros genes encontrando que los alelos más frecuentes en los mestizos

mexicanos son HLA-A: A2 (28.2%), A24 (14.5%), A28 (12.1%), A1 (7.7%),

HLA-B: B35 (27.0%), B39 (10.5%), B61 (7.5%), B18 (6.5%) , HLA-DR: DR4

(23.7%), DR8 (11.6%), DR7 (11.1%), DR14 (10.9%).

Ahora bien por que la importancia de estos datos de la población, en

primer lugar nos ayudaran a 1.- entender la evolución de los pueblos

americanos, nos servirá para 2.- establecer la relación entre ellos y 3.- detectar

nuevas variantes así como su 4.- asociación con enfermedades.


____________________________________________________________________________________________________________________

23

2.7.1.2. Factores virales: Más de 200 cepas virales son patógenas para el hombre, las más

conocidamente cardiotropas son las provenientes de los enterovirus (mucosa

digestiva), que son subgrupos de los picornavirus. De ellos el Coxsackie B y el

poliovirus son marcadamente cardiotropicos

Picornavirus

Rinovirus

Enterovirus

Coxsackie Coxsackie B Poliovirus virus ECHO

Figura 6: Familia de los Virus Cardiotropos.

Actualmente se reconoce con mayor frecuencia que el virus Coxsackie B

es el agente que provoca con mayor incidencia la cardiomiopatía dilatada, este

Coxsackie B mide 30 milésimas de micra. La vía de ingreso más común es la

oral, al adquirirse por saliva, secreciones faringeas o por heces de infectado.

Puede ser neonatal por transmisión placentaria, y puede llegar a aparecer

como epidemia.

Presenta un periodo de incubación de días que desemboca en cuadro

clínico de meningitis, encefalitis y/o miocarditis, con principio febril brusco.

Se han identificado genomas de ARN viral en material patológico

proveniente de biopsias endomiocárdicas y autopsias de pacientes con

cardiomiopatía dilatada con títulos elevados de anticuerpos contra el virus

Coxsackie B.

Existen datos que revelan que en modelos murinos, el daño en el

miocardio por el virus Coxsackie B ocurre en 2 fases; la fase aguda en la cual


____________________________________________________________________________________________________________________

24

existe una replicación viral e infiltración celular. La fase crónica que consiste

en niveles bajos persistentes del genoma viral y progresa a cardiomiopatía.

El posible mecanismo es: 1. predominantemente de daño directo: el

virus produce directamente la lesión inflamatoria; 2. pero cabe también la

posibilidad de daño indirecto: el virus desencadena una alteración inmunológica

que indirectamente daña al corazón (¿elemento genético?; se da una

respuesta autoinmune en donde el virus puede provocar autosensibilización en

las proteínas intracelulares (miosina, actina) y si existe similitud entre los

antígenos exógenos (virus) y endógenos (proteínas intracelulares), dando por

resultado una respuesta inmune cruzada, la cual provoca un daño a los

antígenos propios). Ambos mecanismos son aplicables a la fase aguda de

infección pero también a la posible crónica: 1. el episodio inicial rápidamente

degenera el corazón en escasas fibras; 2. el episodio inicial deja el daño que a

la larga, a través de respuesta inmunológica por anticuerpos anticorazón lleva a

la cardiofibrosis dilatada.

Figura 7. Fotografía de un Virus Coxsackie B


____________________________________________________________________________________________________________________

25

2.7.1.3. Inmunidad humoral

Existe evidencia de que en pacientes con cardiomiopatía dilatada se han

encontrado una gran variedad de autoanticuerpos los cuales hablan acerca de

que tal vez su origen sea un padecimiento de tipo autoinmune. La patogénesis

de los autoanticuerpos depende de la actividad, la accesibilidad y los blancos

antigénicos, así como de las acciones de los mecanismos efectores de la

respuesta inmune.

Los diferentes autoantígenos y sus correspondientes autoanticuerpos

que se han encontrado en cardiomiopatía dilatada pueden ser clasificados

dependiendo su localización en la célula de la siguiente manera:

A) Autoantígenos de la membrana plasmática: autoanticuerpos contra el

receptor β1 adrenérgico. También se ha encontrado evidencia de

autoanticuerpos contra el receptor muscarínico (M2).

B) Autoantígenos del citoesqueleto: autoanticuerpos contra proteínas

intracelulares, tales como la miosina y actina. En algunas circunstancias en

donde existe necrosis de tejido (secundaria a una infección viral u otras

causas), se podría facilitar la exposición de estas proteínas intracelulares,

favoreciendo así una respuesta autoinmune. La exposición de las proteínas

intracelulares dentro de la inmunología podría estar relacionada entre el

autoanticuerpo y el daño al miocardio.

En pacientes con cardiomiopatía dilatada, hay autoanticuerpos contra

las cadena pesada alfa de la miosina (específicamente en el tejido atrial) y en

la beta (en el ventrículo y en el tejido músculo esquelético).

Otro autoaanticuerpo del citoesqueleto encontrado en pacientes con

cardiomiopatía dilatada son autoanticuerpos contra tropomiosina I. La

antitropomiosina también se ha encontrado en pacientes con enfermedad

valvular e isquémicos.

C) Autoantígenos de estructuras internas: Dentro de los componentes

intracelulares que tienen capacidades antígénicas. Se encuentra el

autoanticuerpo anti-mitocondrial (anti-M7), el cual es dirigido contra


____________________________________________________________________________________________________________________

26

flavoproteína de la membrana de la mitocondria. Este autoanticuerpo anti-

flavoenzima se ha observado en un 36% de pacientes con cardiomiopatía

dilatada y en 25% de pacientes con miocarditis, pero no se ha encontrado en

personas sanas.

También se han encontrado autoanticuerpos contra el nucleótido

translocador de adenina (ANT), inhibiendo el transporte de nucleótidos a nivel

transmembranal; y que participan en una respuesta dañina en la función del

miocardio. Estos anticuerpos se han encontrado en pacientes con

cardiomiopatía dilatada idiopática, pero no en pacientes con cardiomiopatía

dilatada con otras etiologías.

Es conocido que el transporte de calcio mediado por la ATP-asa

del miocito en el retículo sarcoplásmico es disminuido en pacientes con

cardiomiopatía dilatada. Hay diferencias entre pacientes con cardiomiopatía

dilatada isquémica y con cardiomiopatía dilatada idiomática, se ha observado

en los mecanismos que causan disfunción del miocito en el retículo

endoplásmico.

Los antecedentes sugieren que los genes HLA-DR tienen gran

importancia como marcadores tanto de susceptibilidad como de las

manifestaciones clínicas de la cardiomiopatía dilatada . Su alto polimorfismo y

el hecho de que su frecuencia varía de un grupo étnico a otro implica que los

datos reportados a la fecha en otras poblaciones no son extrapolables a

nuestra población8.

3. JUSTIFICACION

La Cardiomiopatía Dilatada (CD) es una de las principales causas de

falla cardiaca que conlleva a una elevada tasa de morbilidad y mortalidad en la

población mundial. Cabe añadir que es el principal indicador de trasplante

cardíaco implicando altas repercusiones sociales, productivas y económicas en

los pacientes que la padecen; además de que un alto índice de éstos pacientes

no recibe el manejo apropiado y fallecen sin mayor esperanza de vida.


____________________________________________________________________________________________________________________

27

La prevalencia e incidencia de la CD se ha incrementado de manera

notable en los últimos años, de tal forma que en 1998 la Organización Mundial

de la Salud (OMS), reveló que alrededor de 2 de cada 10,000 individuos a nivel

mundial sufría de Cardiomiopatía Dilatada 1.

En México la incidencia de Cardiomiopatía dilatada es de 1 en 10,000

individuos, mientras que en Latinoamérica y en otros países en desarrollo es de

2 de cada 10,000 individuos hasta 1999.

En particular en el Instituto Nacional de Cardiología “Ignacio Chávez” en

los últimos 3 años han ingresado un promedio de 150 casos por año de

pacientes con diagnóstico de CDI Estudios en otras poblaciones han

encontrado asociación con alelos HLA-DR. La población mestiza mexicana es

un grupo étnico muy bien caracterizado desde el punto de vista genético,

presenta una proporción del 56% de genes amerindios, 40% genes caucásicos

y 4% de genes de origen negro, dado que los estudios de asociación con HLA-

DR varían de acuerdo al grupo étnico estudiado, es importante saber cual es la

frecuencia de estos alelos en nuestra población y particularmente, saber si

alguno de estos participa en la susceptibilidad al desarrollo de esta enfermedad

en nuestro país.

4. HIPOTESIS

Si existe una relación inmunológica entre el tejido cardíaco y el antígeno

HLA clase II particularmente el HLA-DR que participa en la presentación

antigénica, entonces es posible esperar una diferencia en la frecuencia y

distribución de los alelos entre pacientes e individuos control.

5. OBJETIVO Determinar con técnicas moleculares los polimorfismos del gen HLA-DR,

en un grupo de pacientes mestizos mexicanos con cardiomiopatía dilatada

idiopática, con el fin de definir si existe alguna relación entre el polimorfismo de

HLA-DR y la susceptibilidad genética al desarrollo de esta enfermedad.


____________________________________________________________________________________________________________________

28

6. METODOLOGÍA

6.1. SUJETOS DE ESTUDIO

El estudio contemplo a 44 pacientes mestizos mexicanos con

diagnóstico de CD y como grupo control se utilizaron a 99 individuos del mismo

origen étnico y sin antecedentes de enfermedades asociadas a los genes HLA

de acuerdo con los siguientes criterios.

Criterios de inclusión:

Que tanto pacientes como controles, así como sus dos últimas generaciones

hayan nacido en México (Mestizo Mexicano).

Los pacientes y controles estuvieron entre los 18 y 70 años de edad.

Los pacientes deberán tener diagnóstico de Cardiomiopatía Dilatada por el

cuerpo médico de la consulta externa en el Instituto Nacional de Cardiología

“Ignacio Chávez”.

Los controles no deberán presentar antecedentes de enfermedades cardiacas.

Tanto pacientes como controles deberán de estar de acuerdo en participar en

el protocolo de investigación.

Criterios de exclusión: 1. Ser Extranjeros.

2. Presentar enfermedades cardíacas o tener antecedentes familiares.

3. No estar de acuerdo en participar en el protocolo de investigación.

99 CONTROLES

44 PACIENTES con Dx. CD.

MESTIZOS MEXICANOS


____________________________________________________________________________________________________________________

29

6.2. EXTRACCIÓN DEL DNA (Técnica de Triton) A partir de 5 a 10 ml de sangre periférica, se separó el plasma por medio

de centrifugación eliminándose por completo, ya que se tiene el paquete rojo

se le adiciona la solución de TKM-1 con tritón, esto con el fin de lisar los

eritrocitos, se centrífuga para obtener los leucocitos, (si el botón continua muy

rojo, se hacen varios lavados solo con TKM-1) se adiciona la solución de TKM-

2 y SDS al 20%, en este paso se lisan los leucocitos, se incuba a una

temperatura de 55°C después se le adiciona NaCl (6M ó 5M), esto es para

precipitar las proteínas, se centrífuga, el sobrenadante se pasa a un tubo

nuevo y se le agrega etanol al 100% se mezcla por inmersión hasta que

precipite el DNA, se centrífuga, se lava el botón con etanol frío al 70% se

centrífuga, se seca para después resuspender con agua estéril y por ultimo se

ajusta .

El DNA se cuantifica en un espectrofotómetro y se lleva a una

concentración de 200 ng/µl para ser utilizado.

6.3. DETERMINACIÓN DE ALELOS HLA-DR

Lisis Eritrocitos

TKM-1 +

Lisis Leucocit

os

TKM-2 + SDS al

Incubar Etanol 100%

Precipitación DNA

Etanol frío 70%

Sangre Periferica 10 ml.

H2O d. Incubar

NaCl (6M óDeseca

Cuantificación 200 ng/ul.


____________________________________________________________________________________________________________________

30

6.3. DETERMINACIÓN DE ALELOS HLA-DR

La determinación de estos alelos se realizó por la técnica de Dot Blot

reverso usando kits comerciales .(Dynal RELI SSO HLA-DRB test). Cada DNA

se amplificó empleando la técnica de reacción en cadena de la polimerasa

(PCR-SSO) con iniciadores genéricos para la región HLA-DR previamente

marcados con biotina la mezcla anterior se coloca en un termociclador 9700

(Applied Byosistems) con el siguiente programa 35 ciclos de 950 C 15’’, 600C

45’’, 720C 15’’ y una extensión de 72°C 5’.

Después de la amplificación cada muestra se visualiza en un gel de

agarosa al 1.5 % con la finalidad de corroborar la amplificación (240 pb). Los

productos amplificados se desnaturalizaron con una solución de NAOH y

acetato de amonio y se hibridaron con sondas específicas de alelos ancladas

en membranas de nitrocelulosa. El proceso de revelado incluyó un conjugado

de estreptavidina-peroxidasa y el sustrato colorido correspondiente. Para su

interpretación se usó un sofware (Dynal RELI SSO pattern Matching Program).

HLA- DR (Amplificado) GEL DE AGAROSA 1.5%

Hae III

13531078872603

310271, 281

23419411872

240 pb.


____________________________________________________________________________________________________________________

31

DOTBLOT REVERSO (Sondas)

6.4 . ANÁLISIS ESTADÍSTICO.

El diseño del estudio es transversal, prospectivo y analítico/descriptivo.

Para determinar la posible relación entre los alelos de HLA-DR y la

cardiomipatía dilatada se usaron pruebas estadísticas no paramétricas como

Chi-cuadrada (X2) y exacta de Fisher. La comparación entre dos grupos de

estudio se efectúo mediante tablas de contingencia de 2x2.El valor de p fue

corregido utilizando la corrección de Bonferroni, multiplicando por el número de

DR4 DR5 DR4 DR4 DR1


____________________________________________________________________________________________________________________

32

comparaciones realizadas, en este caso el numero alélico fue de 12 (numero

de tipos de DR).

En nuestro trabajo se tipificaron 44 pacientes mestizos mexicanos con

Cardiomiopatia Dilatada y 99 controles sanos.

7. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

TABLA 1. Frecuencias génicas (fg) de HLA-DR en controles y pacientes con Cardiomiopatía Dilatada.

_____________________________________________________________________ HLA-DR Pacientes Controles

(n= 44) (n=99)

n fg n fg p

_____________________________________________________________________

DR1 4 0.045 10 0.050

DR2 11 0.125 18 0.090

DR3 6 0.068 11 0.055

DR4 26 0.295 47 0.237

DR7 5 0.056 22 0.11

DR8 13 0.147 33 0.166

DR9 0 0.0 3 0.015

DR10 0 0.0 1 0.005

DR11 3 0.034 20 0.101

DR12 1 0.011 2 0.010

DR13 11 0.125 10 0.050 0.04

DR14 9 0.102 21 0.106

______________________________________________________________________________________________

En este estudio los datos preliminares muestran que la frecuencia de los

alelos HLA-DR es similar entre pacientes y controles. Se observa un

incremento moderado de HLA-DR 13 en pacientes y controles dándonos

una p=0.04, este valor no es significativo al ajustar la p, Es interesante


____________________________________________________________________________________________________________________

33

observar que el alelo asociado más frecuentemente en otras poblaciones es

el DR4, sin embargo esto no se observa en nuestro estudio.

8. CONCLUSIONES

En nuestros datos no se corrobora la asociación a la Cardiomiopatía

Dilatada Idiopática de alguno de los alelos HLA-DR previamente reportados.

El HLA-DR 13 esta incrementado de manera moderada en los pacientes, por

lo que es necesario incrementar el número de muestras para poder concluir

una posible asociación.


____________________________________________________________________________________________________________________

34

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