โครงสร�างของยี�นประกอบด้�วยีลำ�าด้�บเบสของ DNA ที่��ต่�อเน��องบนโครโมโซม ม�ที่��งส�วนที่��เป น เอ!กซอน (exon) ค�อส�วนที่��ใช้�แปลำรหั�สเป น

โปรต่�น แลำะ อ&นที่รอน (intron) ค�อส�วนที่��ไม�ใช้�แปลำรหั�สเป นโปรต่�น ยี�นต่�างๆ ที่��กระจายีต่�วอยี*�บนโครโมโซม

แต่�ลำะแที่�ง ที่�าหัน�าที่��สร�างโปรต่�นแต่กต่�างก�น

โด้ยีที่��วไปประกอบไปด้�วยี 3 ข��นต่อนหัลำ�กค�อ 1. การที่�าใหั�เซลำลำ+แต่ก

(Homogenization) 2. การก�าจ�ด้โปรต่�น

(Deproteinization) แลำะสารช้�วโมเลำก,ลำอ��นๆ เช้�น polysaccharide แลำะ

RNA 3. การต่กต่ะกอน DNA (DNA

Precipitation) พี�ซ�อาร+เป นการเพี&�มปร&มาณสารพี�นธุ,กรรมภายีนอกเซลำลำ+ด้�วยีเคร��องม�อ โด้ยีเลำ�ยีนแบบกระบวนการจ�าลำอง DNA ภายีในเซลำลำ+ การเพี&�มปร&มาณ DNA ใน

กระบวนการพี�ซ�อาร+แบ�งเป น 3 ข��นต่อนค�อ ข��นแรก ค�อ denature เป นการใช้�ความร�อนส*งแยีกสายี DNA ที่��เป น 2 สายีออก

จากก�น ข��นที่��สองค�อ annealing เป นการลำด้อ,ณหัภ*ม&ลำงเพี��อใหั�ไพีรเมอร+เข�า

เกาะก�บ DNA สายีเด้��ยีวเพี��อที่�าการส�งเคราะหั+ DNA สายีใหัม�ในข��นต่�อไป แลำะในข��นส,ด้ที่�ายีค�อ extension เป นการใช้�เอนไซม+ด้�เอนเอโพีลำ�เมอเรสที่��ที่นต่�อความร�อนได้�ด้� น�าน&วคลำ�โอไที่ด้+เข�าเต่&มที่�� DNA สายีเด้��ยีวเพี��อส�งเคราะหั+สายี DNA เพี&�มเต่&ม ในแต่�ลำะรอบของการที่�าพี�ซ�อาร+จะได้� DNA เพี&�มข1�นมา 2 เที่�า ด้�งน��นเม��อที่�าพี�ซ�อาร+ไปหัลำายีส&บรอบจ1งได้ � DNA เพี&�มข1�น

มาเป นจ�านวนมากหัลำายีลำ�านโมเลำก,ลำ

โครงสร�างน&วคลำ�โอไที่ด้+

กระบวนการ PCR

ข�อม*ลำจากข�อม*ลำจาก: http: http://://wwwwww..ilil..mahidolmahidol..acac..thth//coursecourse//dnadna//chapterchapter//chapter2geneticmaterialchapter2geneticmaterial..htmhtm

DNA โด้ยีที่��วไปม�ลำ�กษณะเป นเกลำ�ยีวค*� ประกอบด้�วยีน��าต่าลำด้�ออกซ�

ไรโบส หัม*�ฟอสเฟต่ แลำะเบสจ�บก�นด้�วยีพี�นธุะโควาเลำนที่+ รวมเร�ยีกว�าน&วคลำ�โอไที่ด้+ เก&ด้เป นโพีลำ�น&วคลำ�โอไที่ด้+ (polynucleotide ) เก&ด้จากน&วคลำ�โอไที่ด้+หัลำายีโมเลำก,ลำเร�ยีงต่�อก�นด้�วยีพี�นธุะฟอสโฟได้เอสเที่อร+

โพีลำ�น&วคลำ�โอไที่ด้+แต่�ลำะสายีเร�ยีงต่�วจาก 5'-3' สวนที่&ศก�น ม�น��าต่าลำด้�

ออกซ�ไรโบสแลำะหัม*�ฟอสเฟต่เป นโครงหัลำ�กของแต่�ลำะสายี แลำะม�เบส 4 ช้น&ด้ เช้��อมระหัว�างสายี เบสด้�งกลำ�าวได้�แก�อะด้�น�น (Adenine; A ) กวาน�น

(Guanine; G ) ไซโต่ซ�น (Cytosine; C ) แลำะไที่ม�น

(Thymine; T ) การจ�บก�นของค*�เบสระหัว�างสายี DNA อาศ�ยีพี�นธุะไฮโด้รเจน โด้ยีม� A จ�บก�บ T แลำะ C

จ�บก�บ G เบสที่��จ�บค*�ก�นเหัลำ�าน��เร�ยีกว�า เบสค*�สม (complementary

base)

การเช้��อมต่�อของ

สายีโพีลำ�น&วคลำ�โอไที่ด้+

เคร��อง PCR

การสร�างสายีโปรต่�น

SATRIWITHAYA SATRIWITHAYA SCHOOLSCHOOL โรงเร�ยีนสต่ร�ว&ที่ยีาโรงเร�ยีนสต่ร�ว&ที่ยีา

เร�ยีนเด้�น เลำ�นด้� ม�ว&น�ยี ใฝ่7เร�ยีนเด้�น เลำ�นด้� ม�ว&น�ยี ใฝ่7พี�ฒนาพี�ฒนา

SATRIWITHAYA SATRIWITHAYA SCHOOLSCHOOL โรงเร�ยีนสต่ร�ว&ที่ยีาโรงเร�ยีนสต่ร�ว&ที่ยีา

เร�ยีนเด้�น เลำ�นด้� ม�ว&น�ยี ใฝ่7เร�ยีนเด้�น เลำ�นด้� ม�ว&น�ยี ใฝ่7พี�ฒนาพี�ฒนา

ยี�อมแผ่�นเจลำด้�วยีส�ยี�อมด้�เอ!นเอ แลำะลำ�างส�

ส�วนเก&นออก

การต่รวจว�ด้การต่รวจว�ด้ด้�เอ!นเอด้�เอ!นเอสก�ด้ด้�เอ!นเอจากต่�วอยี�าง

DNA extraction1

ต่รวจว�ด้ปร&มาณแลำะค,ณภาพีด้�วยีเคร��องว&เคราะหั+ด้�เอ!นเอ

โด้ยีการใช้�หัลำ�กการเคลำ��อนที่��

ของด้�เอ!นเอในกระแสไฟฟ:า

ผ่�านต่�วกลำางซ1�งเป นว, �นโพีลำ&เมอร+ (Agarose

Gel Electrophoresis)

22

aabb

cc

SATRIWITHAYA SATRIWITHAYA SCHOOLSCHOOL โรงเร�ยีนสต่ร�ว&ที่ยีาโรงเร�ยีนสต่ร�ว&ที่ยีา

เร�ยีนเด้�น เลำ�นด้� ม�ว&น�ยี ใฝ่7เร�ยีนเด้�น เลำ�นด้� ม�ว&น�ยี ใฝ่7พี�ฒนาพี�ฒนา

การว&เคราะหั+การว&เคราะหั+ด้�เอ!นเอด้�เอ!นเอ

หัยีอด้ต่�วอยี�างด้�เอ!นเอที่��ต่�องการต่รวจสอบลำงในหัลำ,ม

ใหั�กระแสไฟฟ:าผ่�านเจลำ

ส�งเกต่,การเคลำ��อนที่��ของ ส�อ�างอ&งบนแผ่�น

เจลำ

ยี�อมแผ่�นเจลำด้�วยีส�ยี�อมด้�เอ!นเอ เพี��อ

ต่รวจด้*แถบด้�เอ!นเอที่��ปรากฏ

ภาพีต่�วอยี�างที่��ปรากฏบนกลำ�องเม��อที่�าการยี�อมด้�วยีส�ฟลำ*ออเรสเซนต่+

หัมายีเหัต่, : M ค�อ ด้�เอ!นเอมาต่รฐานส�าหัร�บเที่�ยีบขนาด้ก�บด้�เอ!นเอต่�วอยี�าง