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Roberto Vagner Puglia LadeiraNúcleo de Ações e Pesquisa em Apoio Diagnóstico
da Faculdade de Medicina da UFMG
O Laboratório de Triagem Neonatal
Controle de qualidade externo
Informatização e automação
Coleta
Transporte-Conservação
Cadastramento-Conferência
Geração de placas
TESTE
Resultado-Liberação
Encaminhamento
Fases
Pre-analítica
Analítica
Pós-analítica
Controles
Dados de identificação
PadronizaçãoInterna
Processo
Fundamento do teste
▪ Quantificar a fenilalanina na amostra através de um ensaio fluorimétrico;
▪ A intensidade da fluorescência é diretamente proporcional a concentração da fenilalanina na amostra.
Unidade de referência usada:
µmol/L em sangue total
Valor de referência:
Acima de 240 µmol/L ou 4,0 mg/dL são considerados elevados
Conduta laboratorial
▪ Amostras que apresentam valores entre 240 a 600 µmol/L: solicita-se nova coleta;
▪ Amostras com valores acima de 600 µmol/L: encaminhamento médico.
Fundamento do teste
▪ Método imuenzimático baseado na detecção de TSH através de anticorpos policlonais que garante a especificidade do teste.
Unidade de referência usada:
mUI/L em sangue total
Valor de referência:
Acima de 10 mUI/L em sangue total são considerados elevados
Conduta laboratorial
▪ Amostras que apresentam valores entre 10 a 20 mUI/L:solicita-se nova coleta;
▪ Amostras com valores acima de 20 mUI/L: encaminhamento médico.
Determinação quantitativa da tripsina imunoreativa humana (IRT) em
sangue seco sobre papel de filtro
Fundamento do teste
▪ Método de fluoroimunoensaio de resolução temporal, baseado na detecção de IRT através de anticorpos monoclonais;
▪ A fluorescência é proporcional à concentração da enzima IRT.
Unidade de referência usada:
ng/ml em sangue total
Valor de referência:
Acima de 70 ng/ml em sangue total são considerados elevados
Conduta laboratorial
Resultados da IRT em 1ª amostra < 70 ng/ml /resultado dentro do valor de referência>70 ng/ml / resultado alterado/ colher nova amostra
Resultados da IRT em nova amostra <70 ng/ml (idade ≤ 45 dias na coleta) resultado dentro do valor de referência.
<70 ng/ml (idade > 45 dias na coleta)/ resultado alterado/encaminhar para realização do teste do suor e biologia molecular para F508.
>70 ng/ml (independente da idade na coleta) resultado alterado/ encaminhar para realização do teste do suor e biologia molecular para F508.
Teste do suorDosagem de cloretos no suor
• Positivos - Resultado 60 mEq/ml;
Encaminhamento para consulta médica. Repetida a dosagem do suor.
• Duvidoso –
• Valores de referência para crianças <6 meses
• Resultado 30 e < 60 mEq/ml;
• Valor de referência para crianças > 6 meses e adultos
▪ Resultado 40 e < 60 mEq/ml;
Convocação para novo teste
▪ Mais de 1.000 mutações diferentes;▪ Mutação mais comum: DF508;▪ Presença de 2 mutações: confirma a doença;▪ Não detecção de mutações: não afasta a doença.
Biologia molecular
Métodos
▪ Inicial: Eletroforese por focalização isoelétrica (IEF);
▪ Confirmatório: Cromatografia líquida de alta resolução (HPLC).
Triagem neonatal para doença falciforme NUPAD
Aplicação da amostra em gel para separação das hemoglobinas de acordo com sua carga elétrica.
Eletroforese por focalização isoelétrica (IEF)
▪ As amostras passam por uma coluna cromatográfica na qual cada hemoglobina terá um tempo de retenção característico;
▪ Este tempo é comparado com controles presentes na placa;
▪ Ao final da análise de cada amostra é impresso um cromatograma.
HPLC
(*) repetir o exame para confirmação e oferecer o estudo familiar
▪ FA, AF, AA: Resultados compatíveis com ausência de hemoglobinas variantes. A conduta depende da idade e é informada no resultado liberado;
▪ FAS, FAC, FAD, FAE (AS,AC,AD, AE): Resultados compatíveis com traço para as hemoglobinas S, C, D e E. Orientar aos pais sobre o resultado;
▪ (*) FS, FSC, FSD, FSA: Resultados compatíveis com Doença Falciforme. Encaminhar para consulta médica;
▪ (*) FC, FCA, FD, FDA, FE, FEA: Resultados compatíveis com hemoglobinopatias não-falciformes (variantes C, D e E). Encaminhar para consulta médica;
▪ Inconclusivo: Resultado inconclusivo. Colher nova amostra.
Conduta do laboratório
▪ FF: Resultado compatível com β talassemia major. Encaminhar para consulta médica;
▪ Hb Bart’s: Presença de Hb Bart’s em concentração compatível com manifestação clínica (Provável α/talassemia). Encaminhar para consulta médica;
▪ Hb Var: Presença de Hb Var (variante não identificada pelos métodos utilizados na triagem) associada ou não a outras hemoglobinas.
▪ Se sugere manifestação clínica: Encaminhar para consulta médica;
▪ Caso contrário: Orientar aos pais sobre o resultado.
Em todas as situações a conduta a ser tomada consta no resultado.
Conduta do laboratório