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Roberto Vagner Puglia Ladeira Núcleo de Ações e Pesquisa em Apoio Diagnóstico da Faculdade de Medicina da UFMG O Laboratório de Triagem Neonatal

O Laboratório de Triagem Neonatal - medicina.ufmg.br · Amostras com valores acima de 600 µmol/L: encaminhamento médico. Determinação quantitativa do Hormônio Tireotrófico

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Roberto Vagner Puglia LadeiraNúcleo de Ações e Pesquisa em Apoio Diagnóstico

da Faculdade de Medicina da UFMG

O Laboratório de Triagem Neonatal

Controle de qualidade externo

Informatização e automação

Coleta

Transporte-Conservação

Cadastramento-Conferência

Geração de placas

TESTE

Resultado-Liberação

Encaminhamento

Fases

Pre-analítica

Analítica

Pós-analítica

Controles

Dados de identificação

PadronizaçãoInterna

Processo

Coleta da amostra

5º dia

Identificação e preenchimento adequado da amostra

Recepção e conferência das amostras

Cadastramento da amostra

Cadastramento da amostra

Esquema da placa

Picotagem e classificação da amostra

Picotador automático

Amostra picotada

Determinação quantitativa de Fenilalanina em sangue seco sobre

papel de filtro

Fundamento do teste

▪ Quantificar a fenilalanina na amostra através de um ensaio fluorimétrico;

▪ A intensidade da fluorescência é diretamente proporcional a concentração da fenilalanina na amostra.

Eluição

Agitação

Transferência e adição de reagentes

Leitura e quantificação

Unidade de referência usada:

µmol/L em sangue total

Valor de referência:

Acima de 240 µmol/L ou 4,0 mg/dL são considerados elevados

Conduta laboratorial

▪ Amostras que apresentam valores entre 240 a 600 µmol/L: solicita-se nova coleta;

▪ Amostras com valores acima de 600 µmol/L: encaminhamento médico.

Determinação quantitativa do HormônioTireotrófico (TSH) em sangue seco

sobre papel de filtro

Fundamento do teste

▪ Método imuenzimático baseado na detecção de TSH através de anticorpos policlonais que garante a especificidade do teste.

Unidade de referência usada:

mUI/L em sangue total

Valor de referência:

Acima de 10 mUI/L em sangue total são considerados elevados

Conduta laboratorial

▪ Amostras que apresentam valores entre 10 a 20 mUI/L:solicita-se nova coleta;

▪ Amostras com valores acima de 20 mUI/L: encaminhamento médico.

Determinação quantitativa da tripsina imunoreativa humana (IRT) em

sangue seco sobre papel de filtro

Fundamento do teste

▪ Método de fluoroimunoensaio de resolução temporal, baseado na detecção de IRT através de anticorpos monoclonais;

▪ A fluorescência é proporcional à concentração da enzima IRT.

Equipamento para dosagem de IRT

Unidade de referência usada:

ng/ml em sangue total

Valor de referência:

Acima de 70 ng/ml em sangue total são considerados elevados

Conduta laboratorial

Resultados da IRT em 1ª amostra < 70 ng/ml /resultado dentro do valor de referência>70 ng/ml / resultado alterado/ colher nova amostra

Resultados da IRT em nova amostra <70 ng/ml (idade ≤ 45 dias na coleta) resultado dentro do valor de referência.

<70 ng/ml (idade > 45 dias na coleta)/ resultado alterado/encaminhar para realização do teste do suor e biologia molecular para F508.

>70 ng/ml (independente da idade na coleta) resultado alterado/ encaminhar para realização do teste do suor e biologia molecular para F508.

Teste do suorDosagem de cloretos no suor

• Positivos - Resultado 60 mEq/ml;

Encaminhamento para consulta médica. Repetida a dosagem do suor.

• Duvidoso –

• Valores de referência para crianças <6 meses

• Resultado 30 e < 60 mEq/ml;

• Valor de referência para crianças > 6 meses e adultos

▪ Resultado 40 e < 60 mEq/ml;

Convocação para novo teste

▪ Mais de 1.000 mutações diferentes;▪ Mutação mais comum: DF508;▪ Presença de 2 mutações: confirma a doença;▪ Não detecção de mutações: não afasta a doença.

Biologia molecular

Doença Falciforme e outras hemoglobinopatias

Métodos

▪ Inicial: Eletroforese por focalização isoelétrica (IEF);

▪ Confirmatório: Cromatografia líquida de alta resolução (HPLC).

Triagem neonatal para doença falciforme NUPAD

Aplicação da amostra em gel para separação das hemoglobinas de acordo com sua carga elétrica.

Eletroforese por focalização isoelétrica (IEF)

Vedação da placa de amostras

Aplicação das amostras-teste

Gel pronto para a corrida eletroforética

Corrida eletroforética pronta

Análise dos resultados

▪ As amostras passam por uma coluna cromatográfica na qual cada hemoglobina terá um tempo de retenção característico;

▪ Este tempo é comparado com controles presentes na placa;

▪ Ao final da análise de cada amostra é impresso um cromatograma.

HPLC

HPLC - equipamento

HPLC - equipamento

FS

FAS

FAC

Suspeita de transfusão

Tempo coleta: 13 diasTempo recebimento: 2 dias

(*) repetir o exame para confirmação e oferecer o estudo familiar

▪ FA, AF, AA: Resultados compatíveis com ausência de hemoglobinas variantes. A conduta depende da idade e é informada no resultado liberado;

▪ FAS, FAC, FAD, FAE (AS,AC,AD, AE): Resultados compatíveis com traço para as hemoglobinas S, C, D e E. Orientar aos pais sobre o resultado;

▪ (*) FS, FSC, FSD, FSA: Resultados compatíveis com Doença Falciforme. Encaminhar para consulta médica;

▪ (*) FC, FCA, FD, FDA, FE, FEA: Resultados compatíveis com hemoglobinopatias não-falciformes (variantes C, D e E). Encaminhar para consulta médica;

▪ Inconclusivo: Resultado inconclusivo. Colher nova amostra.

Conduta do laboratório

▪ FF: Resultado compatível com β talassemia major. Encaminhar para consulta médica;

▪ Hb Bart’s: Presença de Hb Bart’s em concentração compatível com manifestação clínica (Provável α/talassemia). Encaminhar para consulta médica;

▪ Hb Var: Presença de Hb Var (variante não identificada pelos métodos utilizados na triagem) associada ou não a outras hemoglobinas.

▪ Se sugere manifestação clínica: Encaminhar para consulta médica;

▪ Caso contrário: Orientar aos pais sobre o resultado.

Em todas as situações a conduta a ser tomada consta no resultado.

Conduta do laboratório

Liberação de Resultados Impressos

Comunicação impressa enviada para SCT

Comunicação impressa enviada para SCT

Relatório de resultados finalListagem geral

Resultado individual