TEMA: CINETICA DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

CURSO: biotecnología de los pai

ALUMNO:

MEDINA GARCIA SANDRAminchola gutierrez Rosmer edgarVILLANUEVA CHUNQUE YONEL

DOCENTE: MsC. Guillermo linares lujan

CICLO: IX

TRUJILLO – PERÚ

2011

OBTENCION DE PREPARADO ENZIMATICO CRUDO

I. INTRODUCCIÓN

La tecnología enzimática   tiene   como objetivo la   superación   de   todos   aquellos inconvenientes   que   parecen   retrasar   la   aplicación   de   las enzimas en   estos procesos a escala industrial,   las enzimas son proteínas cuya función biológica es catalizar las   reacciones  que suceden  en   las células.  Esta  área  tiene aplicaciones  desde tiempos remotos como la fermentación, actualmente en diferentes industrias a diferentes niveles, ya   que   implica   la   utilización   de  sistemas enzimáticos   diversos   que   optimizan   el procesamiento en la obtención de detergente, aditivos alimenticios, productos químicos y farmacéuticos.   La   tecnología   enzimática   se   presenta   como   alternativa   biotecnológica basada en que las  industrias desarrollen productos de calidad  homogénea, aprovechen óptimamente   sus   materias   primas,   aceleres   sus   procesos   de producción,   minimicen desperdicios y disminuyan el deterioro del medio ambiente.Las enzimas son catalizadores de origen biológico que parecen cumplir  muchos de los requisitos   necesarios   para   impulsar   esta   nueva industria química.   Son   catalizadores muy activos en medios acuosos y en condiciones muy suaves de temperatura, presión, pH, etc.   Son   catalizadores  muy   específicos:   pueden  modificar  un   único   substrato  en  una mezcla de substratos muy similares e incluso pueden discernir entre dos isómeros de una mezcla   racémica   de   un   compuesto   quiral,   Son   catalizadores  muy   selectivos:   pueden modificar un único enlace o un único grupo funcional en una molécula que tenga varias posiciones modificables.A pesar de esas excelentes propiedades catalíticas, las enzimas han ido evolucionando a través de los siglos para cumplir mejor las necesidades fisiológicas de los seres vivos y no para ser utilizadas en sistemas químicos industriales.  Así,   las enzimas son catalizadores solubles,   generalmente   muy   inestables   y   que   sufren   inhibiciones   por   substratos   y productos. Además, las enzimas muchas veces no poseen todas las propiedades ideales (actividad,  selectividad,  etc.)  cuando queremos que catalicen procesos distintos de  los naturales   (por síntesis en   lugar   de   hidrólisis),   sobre   substratos   no   naturales,   en condiciones experimentales no convencionales (en disolventes orgánicos no-tóxicos).

II. OBJETIVOS

Obtener preparados enzimáticos crudos a partir de   semillas de habas, de guaba, hígado de pollo, pulpa de papaya.

III. MATERIALES Y MÉTODOS

A. Material

a. Material BiológicoSemillas de guabaPulpa de papaya.Hígado de polloSemillas de haba.

b. Reactivos y SolucionesPrueba de yodoSolución de KCl  0.54 M.HCl 0.1 N

c. Material de Vidrio y otrosBeaker de 400 mlMatraces de 100 mlPipetas de 1 y 2 mlPipetas de 5 y 10 mlTubos de ensayo.MorterosGradillasCuchillos

d. EquiposBalanza analítica

Equipo de baño maría

Centrífuga

B. Metodología

Se procedió a triturar cada muestra respectiva en el mortero (20g), en un medio frio para evitar la desnaturalización de las proteínas al momento de presionar contra la muestra.Luego   se   adiciono   el   KCL   para   lograr   un   medio   isotónico   parecido   a   la concentración celular.

Seguidamente se procedió a filtrar el medio atravez de una gasa doblada en cuatro.

Se centrifugo a 4000 rpm por 10 minutos. Separar   el   sobrenadante   en   tubos   de   ensayos   lo   cual   sería   el   preparado 

enzimático crudo.

V. RESULTADOS

COMPONENTES TESTIGO PROBLEMA BLANCOSolución almidón 400 ppm (ml) 2.5 2.5 --Agua destilada (ml). 0.4 0.4 2.9Pre incubar a 35°C por 5´.Preparado enzimático crudo (ml) -- 0.1 0.1Incubar a 35°C por 15´HCl 0.1N, (ml). 2.5 2.5 2.5Preparado enzimático crudo (ml) 0.1 -- --Solución yodada, (ml) 0.5 0.5 0.5Mezclar y dejar en reposo 5´

Figura 1. Prueba cualitativa de actividad enzimática en las 4 muestras tomadas

(T: testigo, P: problema, B: blanco)

Figura 2. Muestra cualitativa de enzimas de semillas de guabas

T P B

SEMILLAS DE GUABA

T P B

PULPA DE PAPAYA

T P B

MUESTRA DE HIGADO

T P B

SEMILLAS DE HABAS

Figura 3. Muestra cualitativa de enzimas de papaya

Figura 4. Muestra cualitativa de enzimas de higado

Figura 5. Muestra cualitativa de enzimas de semillas de habas.

VI. DISCUSIONES

En el   laboratorio   se   realizó   la  extracción  de enzimas  de cuatro   fuentes  diferentes   las cuales producían sus propias enzimas, añadiendo que para la obtención de enzimas a gran escala, es de gran importancia seleccionar el organismo adecuado y el órgano, tejido o tipo   celular   apropiado   que   sea   capaz   de   sintetizar   una   gran   cantidad   de   la   enzima deseada. Normalmente se utilizan microorganismos, ya que son una fuente apropiada de la mayoría de las enzimas industriales y son fáciles de manipular y de cultivar en grandes fermentadores industriales. (Castillo, 2005)

Generalmente, los organismos sintetizan sus enzimas en pequeñas cantidades, por lo que en muchas ocasiones se recurre a utilizar como material de partida organismos mutantes seleccionados por su capacidad de producir en gran cantidad la enzima deseada.(Castillo, 2005)

Las enzimas juegan un papel importante en las reacciones químicas que tiene lugar en los organismos,  el  identificar y conocer los cambios y  los efectos que ejercen  los factores externos son aspectos que facilitan el entendimiento en los procesos fisiológicos durante el desarrollo ontogénico. Estos parámetros ayudan a la industria alimentaria para buscar, desarrollar y formular dietas especializadas que optimicen los recursos y resultados en la acuacultura, particularmente en la larvicultura. (Arenal, 2002).

En el laboratorio se procedió a inactivar enzimas con el   HCL,   logrando   bajar el pH y aumentando los iones H+ ayudando a desdoblar las cadenas y cambiando las estructuras. Logrando así desactivar las enzimas  ya que a pH bajos se produce una desnaturalización enzimática. (Mathews, 1998)

Toda reacción enzimática dependerá siempre de la temperatura a la que se encuentre, ya que si  aumentamos la temperatura aumentara la reacción enzimática hasta que cierto punto máximo sea alcanzado, así el número de moléculas estarían aumentando estando ricas en energía pasando la barrera energética del estado de transición. Si la temperatura es excesiva en el medio enzimático, empezara a disminuir la velocidad de reacción ya que estas   se   estarán  desnaturalizando,   fue  por   esto  que   se   tomó   siempre   el   valor  de   la temperatura   y   acompañando   con   hielo   al  momento   de   triturar   las  muestras   con   el mortero para así evitar la desnaturalización de las enzimas. (Doran, 1998)

VII. CONCLUSIONES

Se Obtuvo los preparados enzimáticos respectivos de hígado de pollo, pulpa de papaya, 

semillas de haba y guaba.

VIII. RECOMENDACIONES

Tener cuidado de no triturar las muestras en un medio con temperatura ambiente ya que 

puede haber una desnaturalización de las proteínas de la muestra al momento de triturar, 

por ello se procederá a colocar hielo para un mejor trabajo.

Triturar bien las muestras para así obtener mayor solución ante el filtrado.

Lavar bien las pipetas ante el cambio de muestra a pipetear.

IX. BIBLIOGRAFÍA

Castillo  Rodríguez F.  y  col.,  BIOTECNOLOGIA AMBIENTAL,  Editorial  TEBAR S.L.,  Madrid, 

2005.

Arenal,  F.,  A.  Espinosa,  C.  garcía,  A.  Arenal,   J.  Fajardo,  E.  Cabrera,  E.  Pimentel.  2002. 

Estudio   de   la   actividad   enzimática   de   ß-Galactosidasa   en   la   ontogenia   del   camarón 

Litopenaeus   schmitti   (Crustacea-Decapoda).   I   Congreso   Iberoamericano   Virtual   de 

Acuicultura. Pp 898-805.

MATHEWS, C. K. Y VAN HOLDE, K. E. 1998. Bioquímica, McGraw Hill Interamericana, 2ª. Ed., España,1998.

DORAN, P. “Principios de Ingeniería de los bioprocesos”. Editorial acribia SA. Zaragoza–

España,1998.