圆园17 年第 5 期（总第 198 期）

中兽医学杂志2017 年第 5 期（总第 198 期）

目 次

中兽医学杂志 圆017 年第 5 期（总第 198 期） ·1·

ZHONGSHOUYIXUE ZAZHI

Chinese Journal of Traditional Veterinary Science

双月刊 公开发行 1957 年创刊

2017年第 5期（总第 198 期）

2017 年 10 月 15日出版

主 管：江西省农业厅

主 办：江西省中兽医研究所

江西省畜牧兽医学会

编辑出版：中兽医学杂志编辑部

编委顾问：张泉鑫 许剑琴

主 编：张敬义

副 主 编：高 琳 段载金

责任编辑：万鑫琳 罗美凤

地 址：南昌市东湖区省府南一路 5 号,

粮食局 3 楼

邮 编院330046

电 话：0791-86266819

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网 址：//zsyxzz.periodicals.net.cn

印刷单位：南昌市百花印刷厂

国内发行：江西省报刊发行局

国内订购：全国各地邮局（所）

国外发行：中国国际图书贸易总公司

（北京 399 信箱）

统一刊号：ISSN 1003-8655

CN36-1096/S

国内邮发代号：44-46

国外代号：4391-BM

广告经营许可证：3601004000057

国内每册定价：7.00 元

试验研究

高效液相色谱内标法测定三叶青块根中槲皮素和β-谷甾醇的含量

何丽针,夏 骏袁姜文娟袁徐国茂袁李 勇袁吴金刚渊3冤14种中药乙醇提取物对大肠杆菌的体外抑菌试验

南苹瑶袁王小莺渊6冤防治牦牛“腹泻性疾病”的中藏药制剂“索罗格卓夏久

曼口服液”的应用示范··········余忠华, 何世明,唐木克,雍 军,陆 勇,邱 韵,斯高让,求 准,仁 科渊9冤四黄止痢泡腾颗粒有效成分在鸡体内代谢动力学研究梁群超袁李引乾袁宋志元袁储 君袁孙雪峰袁张要齐渊12冤

日粮中添加木麻黄尧地胆草对文昌鸡生长性能的影响俞 浩袁张 艳袁刘海隆袁晁 哲袁郑心力袁孙瑞萍渊15冤

复方中草药对热应激产蛋鸡采食量和生产性能的影响窑窑窑窑窑窑窑窑窑窑窑窑窑窑窑窑窑窑窑窑窑窑刘 武, 何 斌 , 陈 洁, 陈夏冰,邵志勇,金尔光,姚艳丰,周 华,王莲芳,杨文海 渊18冤威克仔猪灵防治仔猪腹泻效果观察 王俊贤渊21冤中草药添加剂对雏鸡增重及血清蛋白的试验研究

黄 宁袁陈生锦渊23冤高寒牧区青贮饲用玉米补喂甘肃高山细毛羊试验观察

徐菊梅渊24冤临床金鉴

中西兽医结合治疗仔猪黄痢苏治国袁陈文芳袁解慧梅（25）

仔猪白痢的诊断与防治 张满平 渊27冤中西医结合治疗猪睾丸炎 王宝宝 渊28冤牛放线菌病的中西医治疗方法 刘颖国 渊29冤奶牛子宫内膜炎的诊治 李玉秀 （30）奶牛腐蹄病的防治措施 赵彦龙 （31）马铃薯中毒的防治措施 马全胜 渊32冤中西医结合治疗牛子宫脱出 景自文 渊33冤小反刍兽疫防疫措施 姚红英 渊34冤羊口疮的防治措施 王 婧 （35）绵羊痘的中西医结合治疗方法 陈文中 渊36冤羊产后不食症的病因及防治 汪雪英 （37）母羊的同期发情技术的应用 王永来 （38）兔病毒性出血病防治措施 霍应栋渊39冤獭兔胃肠炎的防治 赵艳丽渊40冤小夹板固定整复结合中西药物治疗马骡四肢骨折

仲佳文袁仲富萍渊42冤简论中兽医学中的阳虚证 黄 宁渊43冤对叶伤寒论曳理中汤和四逆汤疗效的验证

李国军袁张登鹤, 马正文渊44冤羊肠毒血症预防和治疗 江晓丽渊45冤奶牛流行热的防控措施 王 岚 渊46冤羊破伤风的中西医救治与预防

张绕良袁 王明轩 渊47冤

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江西兽药

讯息动态

江西博莱大药厂有限公司 （114）

江西中成药业集团有限公司 （115）

临症资料猪传染性胃肠炎的防治 闫占云渊56冤中西医防治猪副伤寒病 罗玲芳 渊57冤中西医结合治疗猪流行性感冒 李健周 渊58冤猪无名高热综合征的中西医防治 姚兴成 渊59冤生猪高热病诊治原则及防控措施 梁光跃渊60冤一起奶牛瘤胃酸中毒的诊治体会 朱晓文渊61冤中西医结合治疗牛瘤胃臌气 史玉萍渊62冤奶牛蹄病的护理和中西医结合治疗 王锐明渊63冤中药复方治疗奶牛卵巢静止和持久黄体的疗效

观察 黄 宁渊64冤奶牛乳房炎的预防和中医治疗

蔡文贤袁王多全袁王晓平渊65冤一例奶牛乳房炎的诊治 褚长增,任 强渊66冤一例羊小反刍兽疫的诊治 达热玛渊67冤新生仔鹿痢疾病的诊治体会 孙万文渊68冤简论兔瘟的预防与控制 段雪梅渊69冤对叶痊骥通玄论曳无失丹和马价丸疗效的验证

董旭云袁张登鹤袁宗得祥袁马全胜渊70冤探析鸡传染性喉气管炎疾病的诊断与防治

李吉平渊71冤北方池塘中草药治疗草鱼常见病浅析

郭慧玲渊72冤羔羊痢疾的诊治体会 王选慧袁任作宝渊73冤

宠物医院“根瘟灵”试治犬瘟热病例报告

胡宗阳,傅三荣,廖启武渊74冤临床诊治犬巴贝斯虫病的理论与实践

谈仕旦渊75冤

中兽药当归在畜禽养殖中的应用潘 丽,仲富萍渊77冤

中兽药在兽医临床应用及发展前景周贵邦渊78冤

中药材在养殖业饲料中的应用及意义 周绪红渊80冤抗菌中草药在猪预防保健中的应用探讨

刘翠立,黄浩晟渊81冤当前畜牧业养殖中存在的环境污染及治理措施

赵红星渊82冤病死畜禽无害化处理现状方法及对策 郑 禧渊83冤肃南高寒牧区养殖小区渊舍饲冤发展思考

冯明廷渊84冤简论动物卫生监督执法工作中存在的问题与对策

李国良渊86冤

定点屠宰场的生猪检疫流程及操作 李钰春渊87冤基层兽医在畜禽疾病防治中存在的问题及对策

吴春贤渊88冤我国奶业发展现状分析 段雪梅渊89冤生猪养殖业中生猪疾病的防治 哈金兰渊90冤试论油脂饲料的应用和推广 王 鹏渊91冤浅谈母羊的同情发情技术的应用 王永来渊93冤若尔盖县和色达县清热解毒类藏兽医验方用药规

律比较分析郭思银袁陈朝喜袁孙 艳袁徐静伟袁刘 群渊94冤

热应激对蛋鸡的危害及防治 刘 伟渊98冤黄芪多糖在畜禽养殖中的应用 陆 梅渊99冤鸡主要组织相容性复合体渊MHC冤研究进展

张富寿渊100冤

纳豆芽孢菌剂对黑天鹅在放养初期生长状态及抗氧化应激的影响

陈 斌袁张占侠袁赵洪妹袁孔佳佳袁李勇军袁董 超渊102冤

肃北牧区开展动物检疫工作现状及建议宝力德渊106冤

家庭种养结合肉牛养殖场经济效益分析齐振庆袁王兴珍袁陈 伟渊107冤

天祝县安远镇白牦牛发展现状与存在的问题李 玲渊108冤

腹腔注射在病危猪治疗中的运用 段会斌渊109冤中西医结合治疗牛真胃炎 王永生渊110冤中西医结合治疗奶牛多汗症 刘 晟渊110冤常见猪疾病的预防及治疗 崔家仁渊111冤牛肺疫的中西医防治 陈菊苍渊112冤牛瘤胃臌气的中西医防治 冯怀玉渊113冤

江西嘉博生物工程有限公司 渊封面袁封二冤江西邦诚动物药业有限公司 渊前彩 1冤江西中成中药原料有限公司 （前彩 2尧3）南昌科王兽药厂 渊封三袁116冤江西新天地药业有限公司 渊中插 1尧4冤江西博莱大药厂有限公司 渊中插 2尧3冤江西创导动物保健品有限公司 渊封底冤订阅、邮购补订《中兽医学杂志》办法 （79）

·2· 中兽医学杂志 圆园17 年第 5 期（总第 198 期）

期刊基本参数：CN36-1096/S*1957*b*A4*116*zh*P*￥7.00*80*2017-10

猪巴氏杆菌病的诊断与防治 李富强 渊48）亚硝酸盐中毒的防治 马全胜 渊50冤奶牛乳房炎的预防措施 丁 慧 渊51冤新生犊牛疾病预防及治疗 王艾秉渊52冤牛羊绦虫病的预防和中西医治疗 焦小华渊53冤肉羊尿石症的中西医结合治疗 陈菊红渊54冤牛瘤胃积食的诊断与防治 王旭杰渊55冤

圆园17 年第 5 期（总第 198 期）

三叶青为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤的块根或全草袁其具有抗肿瘤尧清热解毒尧祛风化痰尧活血止痛作用袁可用于治疗小儿高热惊厥尧肺炎及各类肿瘤的辅助治疗[1]三叶青的主要活性成份包括黄酮类尧甾体类化合物和氨基酸[2]等袁其中有实验表明袁槲皮素和 β- 谷甾醇在三叶青中含量较高袁且具有特定药理作用[3]遥 目前国内对于三叶青中该两种活性成份的含量测定方法有一定的研究袁许文[4 利用液相色谱串联质谱对三叶青中的多种黄酮类成份进行了测定遥 刘洋[5]利用高效液相色谱法同时测定三叶青中槲皮素和 β-谷甾醇的方法未见报道遥 本实验采用了高效液相色谱结合内标物定量方法应用于三叶青块根中槲皮素和 β- 谷甾醇的同时测定袁并对不同产地的三叶青含量进行了测定遥1 材料与方法

1.1 仪器与试剂三叶青块根袁人工栽培品种袁于 2015 年 4 月

分别购自于湖南省长沙市袁湖北省武汉市及浙江省杭州市遥

槲皮素标准品渊纯度大于 99.0%冤尧大黄素甲醚内标物渊纯度大于 99.0%冤和 β- 谷甾醇标准品渊纯度不低于 99.1%冤袁中国食品药品检定研究院曰盐酸渊分析纯冤尧三氯甲烷渊分析纯冤袁西陇化工股份有限公司曰甲醇渊色谱纯冤袁霍尼韦尔试剂有限公司渊韩国冤曰

1260 高效液相色谱仪袁 美国安捷伦公司曰BS224S 电子天平袁北京赛多利斯仪器系统有限公

司曰RE52CS1 旋转蒸发仪袁上海亚荣生化仪器厂曰实验室纯水系统袁法国威立雅有限公司遥1.2 标准溶液配制

渊1冤标准储备液院分别准确称取标准品槲皮素尧β- 谷甾醇及内标大黄素甲醚各 10.00 mg袁置于 10 mL 容量瓶中袁 用甲醇溶解并稀释到刻度袁摇匀袁制成 1000.0 μg/mL 标准储备液遥

渊2冤标准工作液院分别准确量取槲皮素尧β-谷甾醇标准储备液尧大黄素甲醚内标标准储备液0.1 mL袁置于 10 mL 容量瓶中袁用甲醇溶解并稀释到刻度袁摇匀袁制成 10.0 μg/mL 标准工作液遥1.3 提取

取三叶青块根袁粉碎袁过三号筛遥 取本品约0.5g袁精密称定袁置 100 mL 圆底烧瓶中袁加大黄素甲醚标准储备液 0.05 mL袁混匀遥 加甲醇 -25%盐酸渊1:4, v/v冤溶液 25 mL袁回流提取 1 h袁滤过遥 将滤纸上残渣洗入圆底烧瓶后袁 重复上述步骤提取 2次遥 合并提取液袁55℃下旋转蒸干遥 用三氯甲烷20 mL 复溶袁 旋转蒸干遥 用甲醇 5 mL 复溶袁经0.45 μm 微孔滤膜过滤袁上机测定遥1.4 色谱条件

色谱柱为 Agilent Paroshell EC-C18 (4.6×50mm, 2.7 μm)曰流动相 A 为纯水袁B 为甲醇曰梯度洗脱程度见表 1曰柱温 25℃袁流速 0.7 ml/min袁进样量 5 μl袁波长 210 nm曰内标法定量遥

表 1 梯度洗脱程序

时间渊min冤 A 相渊%冤 B 相渊%冤0 80 20

1.0 80 20

4.0 50 50

8.5 50 50

8.6 0 100

17.30 0 100

高效液相色谱内标法测定三叶青块根中槲皮素和 β- 谷甾醇的含量

何丽针 1,夏 骏 2袁姜文娟 2袁徐国茂 2袁李 勇 2袁吴金刚 2(1.江西医学高等专科学校, 江西 上饶 334000曰2.江西省兽药饲料监察所袁江西 南昌 330096冤

中图分类号院 S853.7 文献标识码院B 文章编号院1003-8655 渊2017冤 05-0003-03

试验研究

摘 要院为了准确测定三叶青块根中槲皮素和 β- 谷甾醇的含量袁本实验以甲醇 - 盐酸水为提取溶剂袁利用回流法对不同产地的三叶青块根中有效成份进行了提取袁 建立并采用高效液相色谱 - 内标法对提取物中槲皮素和 β- 谷甾醇含量进行了测定遥 结果表明院槲皮素和 β- 谷甾醇之间分离度大于 1.5袁两者的线性范围为 0.5~50 μg/mL袁相关系数均大于 0.999遥 槲皮素尧β- 谷甾醇的检测限分别为 0.2 mg/kg 和 0.5mg/kg袁回收率分别为 88.3-108.3%及 80.1-103.3%袁RSD 分别为 2.8~4.3%和5.5~7.2%遥 该方法具有良好的回收率和重复性袁能够对三叶青块根中的槲皮素和 β- 谷甾醇实现准确尧快速的测定遥关键词院高效液相色谱法曰内标法曰三叶青曰槲皮素曰β- 谷甾醇

该项目为 2014 年高校科学技术研究项目渊GJJ14794冤遥收稿日期院2017-08-07作者简介院何丽针渊1965要冤袁女袁副教授遥 研究方向为

药物分析化学遥

圆园17 年第 5 期（总第 198 期）

表 2 添加回收试验结果(n=3)指标 样品含量 (mg/kg) 添加量(mg/kg) 平均测得量/(mg/kg) 平均回收率(%) RSD(%)

槲皮素 1.570 2.0 3.154 88.3 4.3

4.0 6.034 108.3 2.8

6.0 7.570 91.9 3.4

β- 谷甾醇 1.051 0.5 1.242 80.1 6.4

1.0 2.118 103.3 7.2

2.0 2.899 95.0 5.5

试验研究

1.5 标准曲线绘制准确量取一定量的标准储备液配制成 0.5尧

1.0尧5.0尧10.0尧20.0尧50.0 μg/mL 的标准溶液袁其中大黄素甲醚内标浓度均为 10.0 μg/mL遥 按照 1.4中的色谱条件测定峰面积与内标峰面积比值遥 以峰面积比为纵坐标袁质量浓度为横坐标进行回归袁绘制槲皮素和 β- 谷甾醇的标准曲线并计算回归方程遥2 结果与分析

2.1 波长和内标的选择结果根据相关文献报道袁 槲皮素有三组紫外吸收

峰袁波长分别为 210袁250袁360 nm [7]袁为了能够达到实验目的袁对两种物质的紫外光谱进行扫描袁结果发现袁在 210 nm 处两种物质均有吸收袁故采用210 nm 波长遥 紫外光谱扫描结果见图 1遥

由于槲皮素和 β- 谷甾醇的分子极性差异较大袁经试验大黄素甲醚的极性介于两者之间[8]袁不会对目标峰产生干扰袁在波长 210 nm 处有较大吸收袁且三叶青中不含有该成份 [9,10]袁因此选择大黄素甲醚作为该实验的内标物质遥

渊注院上图为槲皮素袁中图为 β- 谷甾醇袁下图为大黄素甲醚冤2.2 标准曲线

以峰面积比为纵坐标袁质量浓度为横坐标袁绘制槲皮素和 β- 谷甾醇的标准曲线袁分别得出槲皮素的回归方程为 y=1.7385x-0.2742袁R2=0.9994曰β- 谷甾醇的回归方程为 y=0.1649x-0.0012袁R2=0.9996遥2.3 灵敏度和精密度

以 2～5 倍基线噪音响应对应的浓度测定混合标准样袁以 3 倍信噪比渊S/N冤折算前处理方法估算方法检出限袁槲皮素的检出限为 0.2 mg/kg袁β-谷甾醇的检出限为 0.5 mg/kg遥 混合标准样及样品色谱图如图 2 所示遥

精密吸取标准工作液 5 μl袁 连续进样 6 次袁测定槲皮素和 β- 谷甾醇的峰面积比遥 结果测得袁槲皮素峰面积比 RSD 为 0.68%袁β- 谷甾醇峰面积比 RSD 为 0.98%遥 表明仪器及色谱方法和精密度良好遥

图 2 三叶青提取物色谱图

渊A院混合标准液曰B院三叶青样品冤2.4 重复性

随机选取相同三叶青样品 5 份袁 按照 1.3 步骤提取后测定槲皮素和 β- 谷甾醇的峰面积比遥结果显示袁槲皮素的峰面积比 RSD 为 2.28%袁β-谷甾醇峰面积比 RSD 为 4.32%遥

图 1 槲皮素与 β-谷甾醇紫外光谱图

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试验研究

2.5 样品测定及回收试验结果将标准工作液尧 不同产地的三叶青样品及添

加回收样品按照 1.3 步骤提取后分别进样分析遥三个不同产地的三叶青测定结果如表 2 所示遥

选取已知含量的三叶青块根样品 0.5g 渊浙江样品 院 槲皮素 1.570 mg/kg袁β- 谷甾醇 1.051

mg/kg冤袁 添加一定量的槲皮素及 β- 谷甾醇对照品袁按照 1.3步骤提取后进样分析袁结果如表 3所示遥

试验结果表明袁 槲皮素在添加量为 2.0~6.0mg/kg 范围时袁 回收率为 88.3-108.3%袁RSD 为2.8~4.3%曰β- 谷甾醇在添加量为 0.5~2.0 mg/kg时袁回收率在 80.1-103.3%袁RSD 为 5.5~7.2%遥

表 3 三叶青提取物含量测定结果渊n=3冤样品产地 槲皮素 β- 谷甾醇

平均含量(mg/kg) RSD/(%) 平均含量(mg/kg) RSD/(%)

湖南 1.998 2.15 0.752 4.38

湖北 2.094 3.28 0.685 4.15

浙江 1.570 1.98 1.051 3.68

3 讨论与小结3.1 提取条件的选择

在样品提取过程中袁 由于槲皮素极性较强袁三叶青中与其极性相近的成份较多袁会对色谱分离产生干扰[11,12]袁因此本实验依次利用甲醇 - 强酸溶液和三氯甲烷溶液两步液液萃取对三叶青块根进行梯度萃取[13,14]袁可以有效的去除三叶青中其它杂质的干扰袁达到理想的分离效果遥3.2 色谱条件的优化

由于槲皮素与 β- 谷甾醇的极性差异较大袁因此必须采用梯度洗脱方式进行分离遥 本实验比较了不同比例的乙腈 - 水尧乙腈 - 磷酸盐尧甲醇 -水和甲醇 - 磷酸盐流动相系统遥 结果表明袁当流动相采用 100%乙腈时袁60 min 内未观察到 β-谷甾醇袁 只有使用浓度大于 90%甲醇的洗脱系统袁β- 谷甾醇才能够被检测到遥同时当甲醇比例大于 50%时袁样品中槲皮素受其它组份干扰较为严重袁无法达到有效分离遥 因此本实验采用了甲醇 - 水作为流用相袁 用梯度洗脱方式进行分离遥结果表明其中槲皮素的保留时间约为 7.95 min袁内标大黄素甲醚约为 11.90min袁β- 谷甾醇的保留时间约为 16.90 min遥 分离度大于 1.5袁理论塔板数均大于 20000遥

但是由于甲醇在 210 nm 波长处有末端吸收袁因此会对其灵敏度产生一定影响袁标准品和样品的色谱图表明的 10 min 后基线平台上升的现象也与该因素有关袁需要在后续的研究中进一步改进遥 另外袁由于目前对三叶青中黄酮类药物的测定技术较为成熟袁因此可在今后的研究中袁可对建立三叶青中黄酮类药物和植物甾醇类药物高通量的检测方法进行摸索袁并进一步完善三叶青指纹图谱袁最终建立三叶青药物的质量标准遥

本实验建立了利用高效液相色谱仪对三叶青块根中槲皮素和 β- 谷甾醇含量测定的方法遥该方法采用内标法定量袁 可有效的消除误差袁尤其是提取步骤的偶然误差袁 使得结果更加准确遥

同时本实验对方法的线性尧灵敏度尧精密度尧重复性和回收率等进行了考察袁并对不同产地的三叶青块根进行了测定遥 结果表明袁该方法相对准确袁稳定性强袁 能够实现对三叶青块根中槲皮素和β- 谷甾醇含量的测定遥参考文献[1] 杨雄志. 中药三叶青的药理作用与临床应用. 吉林中

医药, 2009, 29(6): 517-518.[2] 黄 真, 毛庆秋, 魏佳平. 三叶青提取物抗炎尧镇痛及解

热作用的实验研究. 中国新药杂志, 2005, 14(7):861-864.

[3] 陈丽芸. 三叶青化学成分及抗肿瘤活性研究[D]. 福建中医药大学, 2014.

[4] 许文, 傅志勤, 林婧, 等. UPLC-MS/MS 法同时测定三叶青中 10 种黄酮类成分[J]. 药学学报, 2014, 12:1711-1717.

[5] 刘洋, 钱丽华. HPLC 法测定三叶青中槲皮素和山奈酚含量研究[J]. 安微农学通报, 2015, 21: 26-27

[6] 浦锦宝, 梁卫青, 郑军献, 等. HPLC 测定三叶青中槲皮素尧山奈酚的含量[J]. 中国中医药科技, 2011, 2:134-136

[7] 王雅琼, 邵强, 沙鸥. β- 谷甾醇酯化反应过程中的反相高效液相色谱分析[J]. 扬州大学学报, 2005, 8:31-33

[8] 闻永举, 梁爱军. 聚酰胺对大黄素和大黄素甲醚分离研究[J]. 宜春学院学报, 2009, 06: 53-54.

[9] 陈丽芸, 郭素华. 三叶青的化学成分及药理作用研究进展[J]. 浙江中医药大学学报, 2012, 12: 1368-1370.

[10] 林婧, 纪明妹, 黄泽豪, 等. 三叶青的化学成分及其体外抗肿瘤活性研究[J]. 中国药学杂志, 2015, 08:658-663.

[11] 许文, 傅志勤, 林婧, 等. HPLC-Q-TOF-MS 和UPLC-QqQ-MS 的三叶青主要成分定性与定量研究[J]. 中国中药杂志, 2014, 22: 4365-4372

[12] Xu CJ, Ding GQ, Fu JY, et al. Immunoregulatory effectsof ethylacetate fraction of extracts From tetrastigmahemsleyanum diels et. Gilg on immune function of ICRmice[J]．Biomed Environ Sci, 2008, 21: 325－331．

[13] 霍昕, 杨迺嘉, 刘文炜, 等. 三叶青块根乙醚提取物成分研究[J]. 药物分析杂志, 2008, 10: 1651-1653.

[14] 程林, 胡轶娟, 浦锦宝, 等. 三叶青的高效液相色谱指纹图谱研究[J]. 浙江中医杂志, 2013, 4, 297-298

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试验研究

在人和家畜的生活环境中存在着各种细菌袁而长期使用化学药物会导致药物毒副作用尧细菌耐药性尧 药物残留所致的畜产品安全等问题袁且抗生素渐渐不能满足畜产品无公害化生产的要

求遥 而中草药是我国特有的中医药理论和实践的产物袁价格低廉袁药源广泛袁具有广泛的发展潜力袁它主要是通过调整机体功能状态来实现抗菌作用[1]遥 大部分中草药具有毒副作用小尧无残留尧无耐药性的特点 [2]袁中药作为替代化学药物解决药残和抗药性的重要途径袁越来越受到重视遥 为了寻求抗菌作用强的药物袁我们对十四种中药进行了体外抑菌试验遥1 材料与方法

1.1 试验材料

药材院选用白芍尧乌梅尧苦参尧蒲公英尧丁香尧黄连尧山楂尧黄柏尧大黄尧连翘尧柴胡尧穿心莲尧郁金尧白芷 14 种中药袁均购于江西农业大学医院遥

菌种院 大肠埃希菌 ATCC25922 购于广东省

微生物菌种保藏中心遥仪器与设备院旋转蒸发器渊RE5298A,上海亚

荣生化仪器厂冤曰粉碎机(DFT-100袁温岭市林大机械有限公司)曰 双人单面净化工作台渊SW-CJ-2D,苏州净化设备有限公司冤曰生化培养箱渊韶关市泰宏医疗器械有限公司冤曰 立式压力蒸汽灭菌器渊LDZX-50KBS,上海申安医疗器械厂冤曰数显恒温水浴锅渊HH-4袁国华电器有限公司冤曰移液枪遥1.2 方法

1.2.1 培养基的制备

麦康凯琼脂培养基院 取麦康凯琼脂粉末12.5g袁加入装有 250mL 蒸馏水的锥形瓶中袁加热煮沸溶解并搅拌袁121℃高温灭菌 20min 后备用遥未冷却凝固时分别倒入 12 个灭菌干燥的培养皿

中袁等待琼脂冷却凝固遥 冷却后 4℃冷藏备用遥MH 肉汤培养液院MH 肉汤粉末 7.5g袁 加入装

有 250mL 蒸馏水的锥形瓶中加热煮沸溶解并搅

拌袁121℃高温灭菌 20min 后备用遥 冷却后 4℃冷藏备用遥1.2.2 菌液的制备

取冷冻保存的塑料冻存管袁立即放置在 38~40 ℃水浴中快速复苏并适当摇动遥 直到内部结冰完全溶解为止袁一般约 50~100s袁开启塑料冻存管袁吸取菌液移植于麦康凯琼脂培养基上袁37 ℃恒温培养 18~24h遥挑取该麦康凯琼脂培养基上的单个菌

14 种中药乙醇提取物对大肠杆菌的体外抑菌试验

南苹瑶袁王小莺 *渊江西农业大学动物科技学院袁江西南昌 330045冤

中图分类号院 S853.74 文献标识码院B 文章编号院1003-8655 渊2017冤 05-0006-03

摘要院目的院丁香等 14 味中药对大肠埃希菌 ATCC25922 的体外抑菌试验遥方法院选用 14 种中药渊白芍尧乌梅尧苦参尧蒲公英尧丁香尧黄连尧山楂尧黄柏尧大黄尧连翘尧柴胡尧穿心莲尧郁金尧白芷冤袁分别采用乙醇回流法制备出生药浓度为 1g/L遥前 4 种中药提取出膏状物全部用无水乙醇溶解袁后 10 种中药精密称取两份分别用无水乙醇尧70%乙醇溶解袁通过琼脂打洞法测定不同中药对大肠杆菌的抑制作用遥 结果院连翘尧柴胡尧穿心莲尧郁金尧白芷的中药提取物对大肠杆菌几乎没有抑菌作用袁白芍尧乌梅尧苦参尧蒲公英的中药提取物用无水乙醇溶解在琼脂打洞法中平均抑菌圈分别为 17.7mm尧26.0mm尧16.7mm尧12.0mm袁丁香尧黄连尧 山楂尧 黄柏尧 大黄的中药提取物用无水乙醇溶解对大肠杆菌的平均抑菌圈为 17.0mm尧10.5mm尧21.5mm尧15.5mm尧17.5mm曰用 70%乙醇溶解所测平均抑菌圈分别为 21.5mm尧23.5mm尧23.0mm尧21.5mm尧21.5mm遥 结论院9 种中药的乙醇提取物对大肠杆菌的体外抑菌强度大小为乌梅＞山楂＞白芍＞大黄＞丁香＞苦参＞黄柏＞蒲公英＞黄连曰 中药膏状物提取物用70%乙醇溶解可以获得更大的抑菌圈袁说明溶解于水中的中药提取物也含有抑菌成分不容忽视遥关键词院中药曰大肠杆菌曰乙醇提取曰琼脂打洞法

基金项目院江西省科技厅重点研发计划项目

渊20161BBF60088冤作者简介院南苹瑶渊1995-冤袁女袁山西省袁硕士研究生袁研究

方向为兽医药理学及毒理学袁E-mail:2280425155@qq.com.

通讯作者院王小莺渊1969-冤袁女袁江西省袁硕士袁副教授袁E-mail:wangxiaoying6969@126.com.

圆园17 年第 5 期（总第 198 期）

试验研究

落接种至另一麦康凯琼脂培养基上进行菌种复

苏遥 采用平板计数法进行细菌计数袁勾取平板上菌落 1~2 个袁 置于 MH 肉汤中袁37 ℃恒温振荡培养至对数生长期后进行细菌计数遥 菌液 4 ℃冰箱保存备用袁临用前稀释为 106CFU窑mL-1遥1.2.3 中药提取物的制备

1.2.3.1 白芍尧乌梅尧苦参尧蒲公英药材各称取 10g袁粉粹成粉末袁70%乙醇加热回流提取袁 合并提取液遥 取滤渣后袁50~60℃下旋转蒸发至膏状物[3]袁用无水乙醇以生药浓度为 1g/L 在超声波下溶解配

成药液遥 过滤除菌袁置冰箱 4℃冷藏保存遥1.2.3.2 丁香尧黄连尧山楂尧黄柏尧大黄尧连翘尧柴胡尧穿心莲尧郁金尧白芷药材各称取 10g袁分别粉粹成粉末袁70%乙醇加热回流提取袁合并滤液袁精密量取 2 份分别用无水乙醇尧70%乙醇溶解袁生药浓度为 1g/L遥 过滤除菌袁置冰箱 4℃冷藏保存遥1.3 体外抑菌试验

根据李敏珍等人的研究 [4]袁选用琼脂打洞法做体外抑菌袁拿灭菌棉签将菌液均匀涂抹在平板

上袁室温干燥 5min 后袁用无菌打孔器打孔袁以无菌针头挑出孔内琼脂遥 滴少量的未凝固的琼脂于孔内封底袁防止药液从孔底流走遥 以无水乙醇为溶剂对照袁每个孔滴药液 100μL袁重复 2 或 3 次袁放置 30min 后袁37℃培养箱中培养 18~24h 后观察抑菌圈大小袁求平均值遥1.4 结果判定标准

打孔法院抑菌圈直径≥20mm 为极敏袁抑菌圈直径在 15～19mm 为高敏袁抑菌圈直径在 10～14为中敏袁抑菌圈直径＜10mm 为低敏袁无抑菌圈为耐药[5]遥2 结果与分析

2.1 无水乙醇溶解中药提取物体外抑菌试验

白芍尧乌梅尧苦参尧蒲公英乙醇提取物对大肠杆菌均有抑制作用袁所测的平均抑菌圈大小分别为 17.7mm尧26.0mm尧16.7mm尧12.0mm袁其中乌梅的抑菌作用最强袁为极度敏感袁蒲公英的抑菌作用最差袁为中度敏感遥 结果见表 1遥

表 1 无水乙醇溶解中药提取物体外抑菌试验结果

中药 抑菌圈直径渊mm冤 抑菌圈平均直径渊mm冤 敏感程度白芍 18 18 17 17.7 高敏

乌梅 27 25 26 26 极敏

苦参 17 16 17 16.7 高敏

蒲公英 12 10 14 12 中敏

注院抑菌圈直径包括孔径尧牛津杯直径和滤纸片直径遥

A B

C D图 1

注院A 白芍袁B 乌梅袁C 苦参袁D 蒲公英曰a1尧a2尧a3.尧b1尧b2尧b3尧c1尧c2尧c3尧d1尧d2尧d3 均加无水乙醇

溶解中药膏状物所成药液袁Ⅰ均加 100μL 无水乙醇遥

2.2 不同浓度乙醇溶解中药提取物体外抑菌试验

连翘尧柴胡尧穿心莲尧郁金尧白芷的中药提取物对大肠杆菌几乎没有抑制作用袁 根据判定标准袁表现为耐药遥

由表 2 得知袁对于丁香尧黄连尧山楂尧黄柏尧大黄的中药提取的膏状物分别用无水乙醇和 70%

乙醇溶解袁用 70%乙醇溶解的所测的平均抑菌圈均更大遥 其中黄连相差最大袁山楂差距最相近袁均为极度敏感遥 说明溶解于水中的中药提取物也有抑菌成分袁 且那部分抑菌成分对于不同中药袁其抑菌效果又是不同的遥 结合前四种中药袁同样的生药浓度 1g/L袁 相同的用量每个孔 100μL袁9 种中药对大肠杆菌的抑制强度大小为乌梅＞山

楂＞白芍＞大黄＞丁香＞苦参＞黄柏＞蒲公

英＞黄连袁用 70%乙醇溶解中药提取物抑菌强度大小为山楂＞大黄＞丁香＞黄柏＞黄连遥

圆园17 年第 5 期（总第 198 期）

注院渊1冤野无水乙醇溶解冶指中药提取出的膏状物用无水乙醇溶解袁野70%乙醇溶解冶 指中药提取出的膏状物用70%乙醇溶解遥

渊2冤抑菌圈直径包括孔径尧牛津杯直径和滤纸片直径遥

E F

G H

J

图 2注院E 丁香袁F 黄连袁G 山楂袁H 黄柏袁J 大黄曰e1尧e2尧f1尧f2尧g1尧g2尧h1尧h2尧j1尧j2 指均加 100μL 无水

乙醇溶解中药膏状物所成药液袁E1尧E2尧F1尧F2尧G1尧G2尧H1尧H2尧J1尧J2 指均加 100μL70%乙醇溶解中药膏状物所成药液袁Ⅰ指均加 100μL 无水乙醇袁Ⅱ指均加 50μL 无水乙醇遥3 讨论

不同中药对大肠杆菌的抑制作用不同袁 而将

中药有效抑菌成分更多地提取出来并发挥它的药

效至关重要遥 对于不同的中药袁提取有效成分尧浓缩尧溶解膏状物的条件不同袁抑菌效果可能有很大不同遥 黄连与山楂提取出的膏状物精密称取两份分别用无水乙醇和 70%乙醇溶解袁 配成的药液做琼脂扩散法测抑菌直径袁70%乙醇溶解下两种药物抑菌圈大小相近袁 但无水乙醇溶解下两种药物抑菌圈相差较大遥

中药不同于西药袁 中草药提取物可以消除大肠杆菌耐药性及耐药质粒袁从而达到抑杀目的遥耐药质粒是造成大肠杆菌耐药性的主要原因[6]遥临床上使用中药进行治疗袁 可对抗菌药物耐药和敏感的大肠杆菌产生相同的治疗效果袁 这对于临床用药具有积极的指导意义[7]遥

图 1尧2 可以看出加乙醇的孔不规则袁 可能是无水乙醇出现渗透的原因导致袁 由于无菌操作台不平导致平板倒置不均匀袁 同样是加 100μL 溶液袁部分孔溶液会渗出袁或是无菌针头挑琼脂不均匀导致.但从图中可以明显看出袁溶解中药膏状物用 70%乙醇更为合适遥参考文献

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外抑菌试验[J]. 四川畜牧兽医,2004,03:24-25+28.

表 2 不同浓度乙醇溶解中药提取物体外抑菌试验结果

中药 无水乙醇溶解 70%乙醇溶解

抑菌圈直径渊mm冤 平均抑菌圈直径渊mm冤 敏感程度 抑菌圈直径渊mm冤 平均抑菌圈直径渊mm冤 敏感程度丁香 18 16 17 高敏 22 23 22.5 极敏

黄连 10 11 10.5 中敏 23 24 23.5 极敏

山楂 21 22 21.5 极敏 23 23 23 极敏

黄柏 15 16 15.5 高敏 22 21 21.5 极敏

大黄 18 17 17.5 高敏 21 22 21.5 极敏

试验研究

圆园17 年第 5 期（总第 198 期）

试验研究

长期以来袁 野腹泻性疾病冶是青藏高原牦牛尧西藏羊高发病率袁高死亡率的疾病之一袁据统计袁牧区牦牛在春季尧夏秋之交袁尤其是春季该病直接导致牦牛死亡率可达 10%以上, 犊牛病死率可

达 70%以上,给牧民生产尧生活造成巨大损失遥牦牛尧西藏羊腹泻是细菌尧病毒尧寄生虫以及

饲养管理等原因引起的一种常见症候袁特点为排粪次数增多袁粪便稀软如水袁粪便带脓血尧粘膜等遥 此病一年四季均可发生袁防治难度极大袁严重影响牦牛尧西藏羊的生产性能袁给养殖户带来很大的经济损失袁是牦牛尧西藏羊养殖业长期存在并亟待解决的生产问题遥

目前袁治疗家畜腹泻的主要手段是使用抗生素袁如磺胺类尧头孢类等药物袁这种治疗方式会导致乳肉制品药物残留严重尧严重影响乳肉的品质及销售遥 因此袁应用道地中藏药材制成的中藏药制剂袁对于确保畜产品品质尧促进养殖业的发展均具有重要意义袁目前袁市场上还鲜有治疗家畜腹泻病的中藏药制剂遥1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物

本项目应用示范选择在四川省阿坝州的阿

坝县尧若尔盖县尧红原县尧壤塘县尧松潘县尧汶川县尧 小金县七个县的牧区以及半农半牧区的牦牛尧犏牛尧西藏羊中进行遥 牛羊均自然发病袁不同程度腹泻袁有的粪便白色带粘膜袁有的粪便黑色带血并带粘膜袁有的粪便稀薄如水等尧有的粪便呈奶白色胨胶样遥1.1.2 投入应用示范的药物

索罗格卓夏久曼口服液 渊由芍药 黄芩 黄连当归 大黄 木香 槟榔 银花 马齿苋 照白杜鹃叶

珠芽蓼 岩白菜 甘草等道地中藏药材组方而成冤 袁由阿坝藏族羌族自治州畜牧科学技术研究所研

制袁四川省畜牧科学研究院采用现代加工工艺生产的用于防治牛羊腹泻性疾病的中藏药口服液遥规格院按 1ml 相当于原药 1g遥性状院本品为棕褐色或棕黄色液体遥1.2 方法

1.2.1 临床治疗

项目示范试验实施地点在在四川省阿坝州

的阿坝县尧若尔盖县尧红原县尧壤塘县尧松潘县尧汶川县尧 小金县七个县的牧区以及半农半牧区袁对自然发病的牦牛尧犏牛尧西藏羊开展临床治疗袁在

防治牦牛“腹泻性疾病”的中藏药制剂“索罗格

卓夏久曼口服液”的应用示范余忠华 1 ,何世明 1 ,唐木克 2 ,雍 军 1 ,陆 勇 1 ,邱 韵 1 ,斯高让 3 求 准 4 ,仁 科 2

渊1.阿坝州畜牧科学技术研究所 四川 红原县 624402曰2.若尔盖县农业畜牧和水务局 四川 若尔盖县 624500曰3.阿坝州动物疫病预防控制中心 四川 马尔康 624000曰 4. 红原县农业畜牧和水务局 四川 红原 624400 冤

中图分类号院 S853.9 文献标识码院B 文章编号院1003-8655 渊2017冤 05-0009-03

摘要院项目组运用研制的道地中藏药制剂 野索罗格卓夏久曼口服液冶进行了牦牛尧西藏羊中常见的腹泻性疾病的临床治疗应用示范袁目的是运用道地中藏药材防治牦牛尧西藏羊中常见的腹泻性疾病袁替代长期用于防治该病的抗生素及化学药物袁使牦牛尧西藏羊肉尧奶及副产物不受抗生素及化学药物残留影响袁确保产品的品质尧促进青藏高原生态特色畜牧产业发展袁通过临床应用示范共治疗牦牛尧犏牛 10823 头袁西藏羊 3421 只袁野索罗格卓夏久曼口服液冶对牦牛尧西藏羊的腹泻性疾病防治有效率达到 91%以上遥关键词院中藏药制剂曰腹泻性疾病曰索罗格卓夏久曼口服液

圆园17 年第 5 期（总第 198 期）

试验研究

临床使用中袁口服索罗格卓夏久曼口服液三天后效果显现和使用三天后患畜腹泻症状无任何改

善的袁为了受试动物安全袁减少受试动物损失袁采用其他方法辅助治疗遥1.2.2 用法用量

直接灌服袁 成年牛 40ml/ 次袁 犊牛尧 成年羊20ml/ 次袁羔羊 10ml/ 次袁口服袁每日两次遥1.2.3 实验室抑菌试验

将用于应用示范的索罗格卓夏久曼口服液

口服液在实验室做沙门氏菌尧 大肠杆菌抑制试验袁观察抑菌效果遥

检测方法院微量肉汤稀释法渊2 倍稀释法冤遥

处理方法院 将口服液样品稀释一倍袁 然后经0.22 微米孔径一次性滤膜除菌处理遥1.2.4 有效率判定标准

治愈院表示腹泻症状消失尧痊愈遥有效院 表示投喂索罗格卓夏久曼口服液三天

后腹泻症临床症状缓解袁为了实验动物康复袁辅助采用了其他药物遥

无效院 表示投喂索罗格卓夏久曼口服液三天后腹泻症状未改善袁辅助其他药物效果也不佳遥

总有效率院表示治愈和有效的综合数遥2 结果统计与讨论

表 1 临床治疗结果统计

动物 数量 治愈 治愈率渊%冤 显效 有效率渊%冤 无效 无效率渊%冤 总有效率渊%冤成年牛 3166 2596 82.00 286 9.03 284 8.97 91.00

犊牛 7657 6662 87.01 385 5.02 610 7.97 92.03

成年羊 1668 1485 89.03 65 3.90 118 7.07 92.78

羔羊 1753 1578 90.02 33 1.88 142 8.10 91.88

表 2 大肠杆菌 ATCC25922药敏试验原始结果统计1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

A - - - - - + + + + + + +

B - - - - - + + + + + + +

C - - - - - + + + + + + +

D - - - - - - + + + + + +

E - - - - - + + + + + + +

F - - - - - - + + + + + +

G - - - - - + + + + + + +

H - - - - - + + + + + + +

注院野-冶表示无细菌生长曰野+冶表示有细菌生长遥表 3 沙门氏菌 C77-13 药敏试验原始结果统计

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

A - - - - + + + + + + + +

B - - - - - + + + + + + +

C - - - - + + + + + + + +

D - - - - + + + + + + + +

E - - - - + + + + + + + +

F - - - - - + + + + + + +

G - - - - + + + + + + + +

H - - - - + + + + + + + +

注院野-冶表示无细菌生长曰野+冶表示有细菌生长遥

圆园17 年第 5 期（总第 198 期）表 4 药敏试验对应结果统计

菌名 结果

大肠杆菌 ATCC25922 5/5/5/6/5/6/5/5

沙门氏菌 C77-13 4/5/4/4/4/5/4/4

试验研究

结果说明院① 表中数字代表最小抑菌浓度所对应的 96

孔板孔号遥②表中数字代表使用时稀释相应的倍数后

药液对大肠杆菌和沙门沙门氏菌仍具有杀灭作

用遥表 5 最低抑菌浓度(MIC)测定结果

样 品 最低菌浓度 /mg.ml

大肠杆菌 ATCC25922 沙门氏菌 C77-13

索罗格卓夏久曼口服液 1.5625 3.1250

2.1 应用示范结果

通过对天然发病的牦牛尧犏牛 10823 头袁西藏羊 3421 只临床治疗结果显示袁野索罗格卓夏久曼口服液冶对牛羊腹泻病的治愈率为 82.00%以上渊其中成年治愈率牛 80.00%袁犊牛治愈率87.01%袁成年羊治愈率 89.03%袁羔羊治愈率90.02%冤曰显效率为成年牛 9.03%袁犊牛 5.02%袁成年羊 3.90%羔羊 1.88%院总有效率为 91.00%以上渊其中成年牛 91.00%袁犊牛 92.03%袁成年羊92.78%袁羔羊,91.88%冤遥

通过实验室对大肠杆菌尧沙门氏菌的药敏试验结果显示野索罗格卓夏久曼口服液冶稀释 320倍稀释仍对沙门氏菌仍具有杀灭作用渊MIC 位3.1250mg/ml冤袁稀释到 640 倍对大肠杆菌仍具有杀灭作用渊MIC 位 1.5625mg/ml冤袁说明两种细菌对野索罗格卓夏久曼口服液冶敏感遥 结果见表 1 至表 5遥2.2 分析讨论

牛羊腹泻病在临床上病因很多,根据病因可

以分传染性和饲养管理性腹泻两类袁传染性腹泻可以根据病原的不同分为:细菌性尧病毒性和寄生

虫性三种袁一般细菌性多数是大肠杆菌和沙门氏菌引起袁病毒性多为牛腹泻粘膜病尧牛轮状病毒尧冠状病毒引起袁寄生虫性多为吸虫尧蛔虫尧绦虫尧等寄生虫引起遥

鉴于病因的多样性袁项目在进行应用示范时袁根据项目组人员的临床经验和患畜的临床症状对原发病因为细菌性尧病毒性尧寄生虫等病例分别予以关注袁结果表明野索罗格卓夏久曼口服液冶对细菌性尤其是大肠杆菌尧沙门氏菌袁病毒性渊川西北高原主要是牛腹泻粘膜病尧冠状病毒冤疗效很好袁对肠道蛔虫尧绦虫袁肝片吸虫有很好疗效袁同时对全奶犊牛因营养过剩导致的腹泻效果较差袁项目组通过处方外另加麦芽尧建曲达到很好治疗效果袁

通过 野索罗格卓夏久曼口服液冶临床应用示范效果说明袁野索罗格卓夏久曼口服液冶对牛尧羊腹泻性疾病治疗效果显著袁方剂避开使用重金属含量高的矿物成分袁而且与目前用于治疗家畜腹泻的抗生素尧化学药品相比袁使用野索罗格卓夏久曼口服液冶不会影响畜主在牛羊挤奶期挤奶售奶袁确保了牛羊奶尧肉及其副产物的品质袁为临床治疗家畜腹泻性疾病提供了一种新的用药选择遥参考文献:

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圆园17 年第 5 期（总第 198 期）

试验研究

四黄止痢泡腾颗粒以泡腾物料为崩解剂制成的颗粒制剂袁有黄连尧黄柏尧大黄尧黄芩尧板蓝根和甘草组成遥 具有清热泻火尧止痢功效遥 有研究报道泡腾颗粒吸收好袁生物利用度高[1-4]遥 具有分散性好袁释药速度快袁充分保持有效成分的生理活性袁促进有效成分的吸收袁口感好等特点曰黄芩苷在其它动物体内动力学报道较多[5-9]袁在鸡体内动力学报道较少[10-12]遥 该药泡腾颗粒中黄芩苷在鸡体内代谢国内尚未报道袁本实验利用高效液相测定法袁芦丁为内标物袁普通颗粒做参比试剂袁测定鸡血浆中泡腾颗粒和普通颗有效成分黄芩苷的含量袁 计算四黄止痢泡腾颗粒相对生物利用度遥为该药的临床应用提供理论依据遥1 材料

1.1 仪器与设备

Agilent1100 高效液相色谱仪 渊美国惠普公司冤曰AE240 型电子天平渊梅特勒 - 托利多仪器有限公司冤曰XK96-B 快速混匀器 渊新康医疗器械有限公司冤曰KQ-250E 超声清洗仪渊昆山市超声仪器有限公司冤曰TGL-16G 台式高速离心机渊上海医用分析仪器厂冤遥1.2 药品与试剂

黄芩苷对照品渊110715-201616冤尧芦丁对照品渊100080-201610冤购于中国食品药品检定研究院曰肝素钠渊郑州中原昕泰生物科技有限公司袁批号 10067冤曰四黄止痢泡腾颗粒和普通颗粒渊河南惠通天下生物工程有限公司制备冤曰 甲醇为色谱纯曰其他均为分析纯曰水为双蒸水遥

1.3 实验动物海兰褐雏鸡购于河南雏鹰农牧股份有限公

司袁1 日龄购入袁雌雄兼有袁笼养袁自由饮水尧采食袁饲料为全价日粮袁常规饲养管理遥2 方法

2.1 动物分组取 120 日龄海兰褐鸡 12 只袁公母各半袁平均

体质量渊1480±50冤g袁给药前禁食 12h袁随机分成四黄止痢泡腾颗粒组和普通颗粒组袁灌服四黄止痢颗粒普通颗粒及泡腾颗粒渊30 g/kg窑W冤袁2.2 血样的采集

于 给 药 后

0.16h,0.5h,1h,2h,3h,4h,6h,8h,12h,24h, 翅静脉取血

0.5ml袁 置含有肝素抗凝的 EP 管内袁 离心 10 min渊4000r窑min-1冤分离血浆袁置 -20℃冰箱保存待测遥2.3 分析方法的建立

2.3.1 色谱条件分析柱院DiamonsilTMC18 渊4.6 mm×250 mm袁5

μm冤曰流动相院甲醇 - 水 - 磷酸渊43院57院0.2冤曰内标物院芦丁渊500 μg窑ml-1冤曰检测波长院278 nm曰流速院1.0 ml窑min-1袁柱温院35 ℃袁进样量院50 μl遥2.3.2 对照品及内标溶液的配制

精密称取黄芩苷对照品 2.65 mg袁用甲醇溶解并定溶 10 ml 量瓶袁即得浓度为 265 μg窑ml-1 黄芩苷对照品溶液袁4℃冰箱保存遥 精密称取芦丁对照品 12.5 mg袁 用双蒸水溶解并定溶 25 ml 量瓶袁即得芦丁浓度为 0.5mg窑ml-1内标溶液袁4℃冰箱保存遥2.3.3 血浆样品预处理

取 200 μl 血浆样品袁 加入 0.5 mg窑ml-1 芦丁内标液 20 μl 及高氯酸溶液 50 μl袁 涡旋 1 min曰加入甲醇 200 μl尧旋涡振荡 10 min 沉淀蛋白袁离心 10 min渊14000 r窑min-1冤袁取上清液袁进样分析遥

四黄止痢泡腾颗粒有效成分在鸡体内代谢动力学研究

梁群超 1袁李引乾 2袁宋志元 3袁储 君 3袁孙雪峰 1袁张要齐 1*渊1.河南惠通天下动物药业有限公司袁河南郑州 450002曰2.河南惠通天下生物工程有限公司袁河南新郑 451162曰

3.西北农林科技大学动物医学院袁陕西杨凌 712100冤中图分类号院 S853.74 文献标识码院B 文章编号院1003-8655 渊2017冤 05-0012-03

摘要院目的 为了了解四黄止痢泡腾颗粒相对生物利用度袁分别给鸡灌胃四黄止痢泡腾颗粒和普通颗粒袁采用 HPLC 法测定血浆中黄芩苷含量袁采用 DASS2.1.1 软件计算相关药动学参数遥 结果 鸡血浆中黄芩苷浓度出现双峰现象遥 泡腾颗粒和普通颗粒 C1max 分别为院1.03 μg窑ml-1 和 0.93 μg窑ml-1曰C2max 为 0.95 μg窑ml-1 和 0.73 μg窑ml-1曰T1max 为 0.47 h 和 0.39 h袁 T2max 为 2.43h 和 1.93 h曰AUC 为 11.6 μg窑h窑ml-1 和 10.63 μg窑h窑ml-1曰相对生物利用度为 109.13%遥 结论院四黄止痢泡腾颗粒相对生物利用度有所提高,值得推广遥关键词院四黄止痢泡腾颗粒曰黄芩苷曰相对生物利用度曰药动学

作者简介院梁群超渊1979--冤袁兽医师袁从事兽药研究与开发*通讯作者院张要齐袁硕士袁研究方向为农业推广袁

E-mail:httx0371@126.com

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试验研究

2.3.4 方法专属性分别取空白血浆尧 空白血浆加黄芩苷对照尧

空白血浆加内标物及黄芩苷对照尧 含药血浆样品袁按 2.3 项下色谱条件测定遥2.3.5 标准曲线和线性范围

精密量取空白血浆 0.2 ml袁 精密加入适量黄芩苷对照品袁配制成 0.0375尧0.075尧0.15尧0.3尧0.6尧1.2 μg窑ml-1 浓度标准血浆遥 按照样品预处理血浆方法进行操作袁依次进样 50 μl遥以黄芩苷浓度为横坐标袁黄芩苷峰面积与芦丁峰面积比值为纵坐标袁绘制标准曲线遥 求得直线回归方程2.3.6 精密度考察

配制 0.05 μg窑ml-1袁0.10 μg窑ml-1袁0.53 μg窑ml-1 浓度的标准血浆样品各 5 份袁 按血浆样品处理方法平行操作后进行袁 得到 3 个浓度样品的RSD遥 连续测定 5 天袁得到 3 个浓度样品 RSD遥2.3.7 稳定性考察

配制标准黄芩苷浓度为 0.53 μg窑ml-1的浓度的血浆样品袁分别室温放置 24 h尧冻融 3 次尧按血浆处理后冷冻袁按 2.3 项下方法测定黄芩苷含量遥2.3.8 数据处理

HPLC 法测定黄芩苷的血药浓度数据袁 将平均血药浓度数据输入 DAS2.2.1 版软件计算相应参数遥所得参数用 SPSS19.0 软件进行统计学处理遥3 结果3.1 方法专属性

按 2.3 项下色谱条件测定袁 结果芦丁在 11.03min 出峰袁黄芩苷 19.69 min 出峰袁于血浆中的内源性物质能完全区分开袁专属性好袁HPLC 图结果见图 1遥

A.空白血浆曰B.空白血浆加黄芩苷对照曰C.空白血浆加黄芩苷对照和芦丁曰D. 含药血浆曰 1.芦丁曰2. 黄芩苷

图 1 HPLC法测定鸡血浆中黄芩苷药物浓度的色谱图

3.2 标准曲线和线性范围绘制标准曲线如图 2袁 求得直线回归方程

Y=0.7141x+0.0728袁R2=0.9995遥 结 果 表 明 在0.0375-1.2 μg窑ml-1 范围内线性关系良好遥

图 2 黄芩苷与芦丁峰面积比值和黄芩苷浓度标准曲线图

3.3 最低检测限信噪比 S/N 为 3 时的质量浓度为最低检测质

量浓度袁得黄芩苷的最低检测限为 3.495 ng窑ml-1遥3.4 精密度考察

配制三个浓度的标准血浆样品日内尧日间平均回收率大于 89%曰RSD 均小于 5%袁结果见表 1遥3.5 稳定性考察

分别室温放置 24 h尧冻融 3 次尧按血浆预处理后冻存 袁 计算回收率结果 分别为 93.5%渊RSD=3.24, n=5冤曰96.7% 渊RSD=2.81袁n=3冤曰94.2%渊RSD=4.35, n=5冤袁表明黄芩苷在室温尧冷冻及反复冻融条件下稳定遥3.6 药 - 时曲线拟合及药动学参数计算

泡腾颗粒组与普通颗粒组的平均血药浓度 -时间曲线见图 3遥 达峰时间 渊Tmax冤 和达峰浓度渊Cmax冤均采用实测值袁AUC 面积采用梯形法计算袁组间药动学参数用 SPSS19.0 软件进行统计分析袁药动学主要参数见表 2遥

表 1 鸡血浆中黄芩苷含量精密度实验结果

样品 配制浓度 测定浓度 回收率 平均回收率 RSD

渊μg窑ml-1冤 渊μg窑ml-1冤 % % %日内 0.5 0.46±0.16 92.00 3.77

1.0 0.89±0.25 89.00 91.34 2.87

5.3 4.93±1.87 93.02 4.14

日间 0.5 0.45±0.34 90.00 4.81

1.0 0.91±0.90 91.00 92.03 4.93

5.3 5.04±2.67 95..09 4.17

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试验研究

图 3 灌胃鸡四黄止痢泡腾颗粒和普通颗粒黄芩苷药 -时

曲线

4 讨论4.1 四黄止痢泡腾颗粒和普通颗粒药 - 时曲线出现双峰袁有文献报道袁大鼠灌服黄芩水煎剂后袁黄芩苷等在体内过程有明显的双峰现象袁 高海[11]报道复方连翘中黄芩苷浓度也有类似的结果袁本实验结果与其一致袁其原因可能是由于给药存在肝肠循环曰也可能是双部位吸收所致[13-16]袁存在胃肠循环引起双峰现象袁但需要进一步证实遥 双峰增大了药–时曲线下面积袁 同时也延长了半衰期袁为临床制定合理的给药方案提供科学依据遥4.2 四黄止痢泡腾颗粒组与普通颗粒组比较袁T1max尧T2max 虽然延迟袁 差异不显著曰C2max 显著增加袁泡腾型颗粒组 AUC 显著增大曰表明四黄止痢泡腾颗粒生物利用度有所提高遥4.3 泡腾颗粒剂是近年来国外开发应用的一种新型制剂工艺袁以泡腾物料为崩解剂制成的一种颗粒剂袁投入水中会产生大量的气泡渊CO2冤袁使颗粒迅速崩解和融化尧起效迅速尧生物利用度高曰经过调味后的泡腾颗粒袁口味更佳袁适口性好曰同时泡腾颗粒袁工艺稳定尧贮存尧运输尧携带方便遥 本实验将普通颗粒做参照袁对泡腾型颗粒进行血浆黄芩苷含量测定袁计算四黄止痢泡腾颗粒相对生物利用度 109.13%遥 中药组分复杂袁化学成分多袁加上药材品种尧产地尧加工等因素的影响袁其有效成分一直是中药分析的难点和重点遥 大多数的中药有效成分和药理作用机制尚未明确袁其药效一般是多成分共同作用的结果遥 针对某种化学结构明确且能用定量分析法测定的以其血药浓度为研究对象遥 对成分复杂或不明的以生物效应为研究

对象[17-19]遥 本研究采用化学测定法对有效成分黄芩苷作为研究对象袁制剂中的其它成分的药动学还需进一步研究遥参考文献[1] 王长虹, 邢建国, 程雪梅, 等. 双扑伪麻泡腾颗粒剂兔

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表 2 灌胃鸡四黄止痢泡腾颗粒和

普通颗粒黄芩苷主要药动学参数

主要参数 单位 泡腾颗粒 普通颗粒

T1max h 0.47±0.08 0.39±0.02

T2max h 2.43±0.96 1.93±0.67

C1max μg窑ml-1 1.03±0.49 0.93±0.21C2max μg窑ml-1 0.95±0.39 0.73±0.83AUC (μg窑ml-1)窑h 11.60±0.38 10.63±0.46t 1/2 h 9.61±0.36 8.78±0.64

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试验研究

木麻黄 袁别名马毛树尧短枝木麻黄尧驳骨树袁为木麻黄科木麻黄属植物袁原产于澳大利亚遥 木麻黄的枝叶具有温寒行气尧止咳化痰的功效 [1]袁木麻黄小枝提取物对金黄色葡萄球菌有明显的抑制活性 [2]袁黎族民间常用木麻黄枝叶治疗腹泻尧 痢疾袁 疗效显著遥 地胆草

袁别名苦地胆尧地胆头尧磨地胆尧鹿耳草袁为菊科多年生草本植物袁以全草入药遥 广泛应用于咽炎尧扁桃体炎尧皮肤及尿路感染等多种感染性疾病的治疗[3,4]遥 木麻黄是海南沿海防护林的主要树种袁在防风固沙尧改善生态环境尧防灾减灾等方面有着重要作用遥木麻黄树 30～50年后因自然衰老需砍伐重植袁其木材可作为造纸原料和薪炭材等袁但木麻黄树皮尧枝桠和树叶等物质一直没有合理的利用途径袁 几乎被废弃袁造成巨大的资源浪费遥 地胆草在海南分布也极为广泛袁 地胆头鸡汤是海南本土最具特色的菜品之一遥 民间据说地胆头具有清热解暑尧滋阴补肾尧祛风除湿尧预防感冒尧增强免疫之功效尧增强抵抗力之作用袁常吃不会感冒遥 木麻黄和地胆草的民间疗效确实袁但在畜牧养殖上的研究很少袁为充分开发利用本地资源袁同时打造海南文昌鸡健康养殖品牌袁本试验对木麻黄和地胆草对文昌鸡生长

性能影响进行了研究袁为其在畜牧业生产中减少抗生素的应用供试验依据遥1 材料与方法

1.1 供试药材

木麻黄采自海南省澄迈县永发镇袁地胆草采自海南省海口市东山镇遥 上述中草药采集后阴干袁 做常规粉碎和超微粉碎袁 常规粉碎过 40 目筛袁超微粉碎过 300 目筛遥1.2 试验动物及处理 试验选用 1 日龄尧健康尧发育良好的文昌鸡母雏 720 只遥 试验分 4 个处理组袁每组 4 个重复袁每个重复 45 只遥 具体分组设计如下院

处理组 1院空白对照组袁饲喂基础日粮曰处理组 2院抗生素组袁饲喂基础日粮 +0.1%杆

菌肽锌曰处理组 3院 饲喂基础日粮 +1%的中药常规粉

渊木麻黄和地胆草 7:3 混合冤曰处理组 4院 饲喂基础日粮 +1%的中药超微粉

渊木麻黄和地胆草 7:3 混合冤1.3 试验期

全期 120 天袁 分三个阶段进行袁 小鸡阶段渊0-30d冤尧 中鸡阶段 渊31d-80d冤 和大鸡阶段渊81d-120d冤遥1.4 试验饲粮

试验饲粮组成和营养水平见表 1遥 其营养水平参照中国鸡饲养标准渊NY/T 33-2004冤计算遥

日粮中添加木麻黄、地胆草对文昌鸡生长性能的影响俞 浩 1袁张 艳 2袁刘海隆 2袁晁 哲 2袁郑心力 2袁孙瑞萍 2

渊1.文昌动物卫生监督所袁海南 文昌 571300曰2.海南省农业科学院 畜牧兽医研究所袁海南海口 571100冤中图分类号院 S853.75 文献标识码院B 文章编号院1003-8655 渊2017冤 05-0015-03

摘要院为研究饲料中添加木麻黄和地胆草对文昌鸡生长性能的影响遥 试验选用 720 只 1 日龄文昌鸡母雏袁随机分为 4 个处理袁每个处理 4 个重复袁每个重复 45 只鸡遥 对照组饲喂基础日粮袁试验组日粮中分别添加 0.1%杆菌肽锌尧1％的木麻黄和地胆草常规粉和超微粉渊木麻黄和地胆草质量比 7︰3冤遥 结果表明院日粮中添加 1%的木麻黄和地胆草对不同阶段的文昌鸡都有明显促进作用袁降低死亡率遥 养殖经济效益分析日粮中可以添加 1%的木麻黄尧地胆草的常规粉碎物渊7院3冤遥关键词院中草药曰文昌鸡曰产蛋性能曰蛋品质

作者简介院俞浩渊1985-冤袁男袁海南文昌人袁兽医师袁主要从事兽医技术专业岗位工作.

通讯作者院刘海隆渊1980-冤袁男袁山东聊城人袁副研究员袁研究方向院临床兽医中兽医方向.

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试验研究

表 1 试验基础日粮组成及其营养水平渊风干基础冤项目 配比渊%冤原料 1-30 d 31-80 d 81-120 d

玉米 52.59 63.60 68.75

豆粕 32.20 21.60 17.00

鱼粉 3.00 3.00 3.00

麸皮 3.00 3.00 3.00

植物油 4.50 4.20 4.00

石粉 1.28 1.25 1.10

磷酸氢钙 1.00 0.85 0.70

食盐 0.30 0.30 0.30

L- 赖氨酸盐 0.00 0.09 0.07

DL- 蛋氨酸 0.13 0.11 0.09

预混料 2.00 2.00 2.00

营养水平

代谢能渊MJ.kg-1冤12.23 12.56 12.73粗蛋白质渊%冤 21.06 17.40 15.78钙 渊%冤 0.99 0.90 0.79总磷 渊%冤 0.68 0.61 0.56有效磷 渊%冤0.45 0.40 0.37赖氨酸 1.16 0.99 0.85

蛋氨酸 0.45 0.40 0.36

蛋氨酸 + 胱氨酸0.80 0.69 0.63

注院1) 每千克预混料提供院VA 1.5×104 IU袁VD30.33×104 IU袁VE 62.5 mg袁VB1 3 mg袁VB2 9 mg袁VB6 6 mg袁V B120.03 mg袁烟酸 60 mg袁泛酸钙 18 mg袁叶酸 1.5 mg袁生物素0.36 mg袁 氯化胆碱 600 mg袁Fe 80 mg袁Cu 12 mg袁Zn 75 mg袁Mn 100 mg袁I 0.35 mg袁Se 0.15 mg曰

2) 营养水平是根据原料成分的计算值遥

1.5 饲养管理

试验鸡采用笼养袁自由采食和饮水袁小鸡阶段院 室温保持 32℃袁24 h 持续光照 渊白天自然光照袁夜间灯光照明冤曰中鸡和大鸡阶段院在开放鸡舍饲养袁采取自然光照袁不额外补充光照遥 其他按照常规饲养操作规程饲养袁执行常规免疫程序遥1.6 测定指标

试验全期袁 每天仔细观察鸡群的精神状态尧食欲尧粪便尧缺乏症尧淘汰和死亡等情况袁记录试验各组雏鸡的死亡数袁并对病死鸡逐只进行病理剖检袁查明死因遥

试鸡 0 日龄尧30 日龄尧80 日龄尧120 日龄前一晚 10:00 断料供水袁次日早 9:00 以重复为单位准确称重袁统计耗料量袁计算料重比遥 统计每栏试鸡的体重和采食量遥 体重尧体增重尧采食量尧饲料转化率和死淘率遥 同时进行经济效益分析遥1.7 数据分析和统计

试 验 数 据 采 用 SAS 软 件 (v6.12袁SASINSTITUTE袁USA)的 GLM 程序进行方差分析并进行 Duncan 氏多重比较遥 统计显著性水平为 p

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试验研究

由表 2尧 3尧4 可知袁日粮中添加木麻黄和地胆草袁无论是常规粉碎还是超微粉都不同程度提高了文昌鸡的生长性能袁降低了死亡率遥 在文昌鸡1-30d 阶段袁中药超微粉组显著提高日增重渊p

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蛋鸡体温高袁代谢旺盛袁羽毛丰厚袁无汗腺袁在高温尧高湿条件下袁主要依靠呼吸道蒸发散热释放体内产生的多余热量来平衡体温[1-3]遥 因此袁蛋鸡对极易发生高温热应激反应袁对蛋鸡的采食量和生产性能影响很大遥 随着我国集约化养鸡业的迅速发展袁高温尧高湿环境对我国南方大部分地区养鸡业的不良影响日趋严重[4-9]遥 为了缓解热应激对蛋鸡的不良影响袁 增加蛋鸡的采食量袁提高蛋鸡生产性能袁本试验通过比较 4 组复方中草药组方对热应激蛋鸡采食量和生产性能的影响袁筛选最佳的抗蛋鸡热应激组方袁为生产应用提供理论依据遥1 材料与方法

1.1 试验中草药

复方中草药由藿香尧桑叶尧青蒿尧生石膏等组成袁均购于广西玉林中药材市场袁经实验室鉴定后袁按组成药物的不同比例形成 4 种组方袁粉碎过 200 目筛袁混合均匀袁分装保存遥1.2 试验动物分组及饲养管理

将武汉市新洲区某蛋鸡场一栋鸡舍的 6300

只体质良好尧330 日龄罗曼蛋鸡袁 随机分为 6 组袁每组 1050 只袁 每组设 3 个重复袁 每个重复 350只袁A尧B尧C尧D 为复方中草药组尧E 为市售药物对照组尧F 为空白对照组袁按照表 1 所示进行饲喂遥试验于武汉夏季最热时间段进行袁试验开始前饲喂 7d 后袁开始 20 天正式饲喂试验遥 立体三层笼养袁人工光照和自然光照相结合袁每天 16h袁自然通风和机械通风相结合袁自由采食尧饮水遥每天 8院00尧15:00 喂料袁10:00尧16:00 收蛋袁 记录各组每天的饲喂量袁观察鸡群健康状况遥

表 1 试验鸡群分组及饲喂情况

组别 日粮组成

A(复方中草药组方 1) 基础日粮 +2%复方中草药组方 1

B(复方中草药组方 2) 基础日粮 +2%复方中草药组方 2

C(复方中草药组方 3) 基础日粮 +2%复方中草药组方 3

D(复方中草药组方 4) 基础日粮 +2%复方中草药组方 4

E(市售药物对照组) 基础日粮+0.05%市售药物对照组

F 空白对照组 基础日粮

1.3 试验方法

1.3.1 鸡舍温度尧湿度记录将 20 个温湿度计均匀分布于长 80 米尧宽 15

米的鸡舍四周和三层鸡笼中袁 每天 8院00尧14院00和 20院00 记录鸡舍环境温度尧相对湿度值袁将平

复方中草药对热应激产蛋鸡采食量和生产性能的影响

刘 武, 何 斌 ,陈 洁,陈夏冰,邵志勇,金尔光,姚艳丰,周 华,王莲芳,杨文海 *

渊湖北省武汉市农业科学技术研究院畜牧兽医科学研究所袁武汉 430208冤中图分类号院 S853.7 文献标识码院B 文章编号院1003-8655 渊2017冤 05-0018-03

摘要院将 6000 只体质良好尧330 日龄罗曼蛋鸡袁随机分为 6 组袁分别为 A尧B尧C尧D 复方中草药组尧E 为商品药物对照组尧F 为空白对照组袁 观察热应激蛋鸡的采食量和生产性能变化遥 结果与空白对照组相比袁 复方中草药 C 组可极显著增加采食量5.81g/d渊p

圆园17 年第 5 期（总第 198 期）均值作为当日鸡舍的温度和相对湿度遥1.3.2 测定项目

采食量院每天准确称重并记录各组的饲料饲喂量袁于每天上午饲喂前袁清扫各组料槽中的饲料并称重袁计算各组每天的饲料饲喂量遥

生产性能院每天准确记录各试验组的日产蛋量尧蛋重尧破损率袁鸡群的死淘率遥1.3.3 数据分析

试验数据采用 Excel 软件初步整理袁SPSS13.0 软件进行分析袁LSD 法进行多重比较遥2 试验结果

2.1 试验时的温尧湿度指数 THI试验期间鸡舍环境的最高温度为 34.1℃袁最

低温度为 26.2℃袁平均温度为 27.0℃曰试验期内平均湿度为 57％遥将每天平均温度与相对湿度转换成温湿度指数 THI袁公式如下院

THI=0.81Td+(0.99 Td-14.3)RH+46.3

式中 Td 表示干球温度袁RH 表示相对湿度渊用百分数表示冤遥

图 1 试验期间鸡群所处环境的温湿度指数折线图

根据 THI 研究者的结论认为袁THI 值为 66 时可视为蛋鸡最适宜温湿度袁 值为 78 时则视为轻

度热应激环境袁值为 83 时则为严重热应激环境遥由图 1 可见袁试验期间鸡群处于轻度热应激环境中袁并且温湿度的波动幅度较大[10]遥2.2 复方中草药组对热应激蛋鸡采食量的影响

由表 2 可知袁A尧B尧C尧D 四组复方中草药组和对照药物组对热应激蛋鸡的采食量均有不同程

度的影响遥 统计分析发现袁 C 组较 A 组尧D 组尧药物对照组尧空白对照组在平均采食量方面分别提高了 7.07g尧7.02 g尧4.49 g尧5.81g袁差异极显著渊p0.05冤遥

表 2 复方中草药组对热应激蛋鸡采食量的影响

组别 采食量 g

A(复方中草药组方 1) 118.27AB±3.95

B(复方中草药组方 2) 123.91±2.74

C(复方中草药组方 3) 125.34±3.08

D(复方中草药组方 4) 118.32AB±4.18

E(市售药物对照组) 120.85 AB±4.15

F 空白对照组 119.53 AB±2.44

注院 同列数据后加不同的大写字母上标表示差异极显著遥 A 表示 C 组对各组的关系曰B 表示 B 组对各组的关系曰C 表示 D 组对各组的关系曰D 表示空白组对各组的关系曰E 表示 A 组对各组的关系渊下同冤遥2.3 复方中草药组对热应激蛋鸡生产性能的影响

表 3 复方中草药组对热应激蛋鸡生产性能的影响

组别 产蛋率% 平均蛋重 g 破损率% 死淘率%

A(复方中草药组方 1) 85.04A±4.00 64.09±0.64 0.08±0.13 0.01±0.03

B(复方中草药组方 2) 86.85±4.28 64.32±0.98 0.03±0.09 0.02±0.05

C(复方中草药组方 3) 89.34±2.89 64.53±0.38 0.08±0.08 0.01±0.03

D(复方中草药组方 4) 86.68±5.10 64.13±0.56 0.12±0.12 0.01±0.03

E(市售药物对照组) 85.61A±3.66 63.51ABCD±0.49 0.04±0.08 0.04±0.06

F 空白对照组 83.20 ABCE±5.44 64.02 A±1.02 0.04±0.12 0.02±0.05

试验研究

圆园17 年第 5 期（总第 198 期）由表 3 可知袁A尧B尧C尧D 四组复方中草药组和

对照药物组对热应激蛋鸡的产蛋率和蛋重均有

不同程度的影响遥在产蛋率方面袁4 组复方中草药组均极显著高于空白对照组渊p

圆园17 年第 5 期（总第 198 期）

本试验旨在借助定西市科学技术局下达的

叶威克仔猪灵防治仔猪腹泻技术转化应用曳项目袁把威克仔猪灵应用在仔猪腹泻病的预防与治疗上袁来探讨威克仔猪灵的实际应用功效袁以便在养殖业中推广应用袁现将试验结果报告如下遥1 威克仔猪灵预防仔猪腹泻病的应用观察

1.1 材料与方法

1.1.1 试验设计在临洮新添镇正大猪养殖基地选用 25 头繁

殖能力正常的试验母猪袁 随机分成 5 组袁 每组 5头袁所有参试母猪采取相同的饲养管理水平遥 试验设计 3 个处理袁第一处理为试验组袁分试验Ⅰ尧试验Ⅱ尧试验Ⅲ三种不同处理方式袁第二处理为传统药物对照组袁第三处理为空白对照组遥 试验Ⅰ组对每头新生仔猪在初生 2h 内肌肉注射威克仔猪灵 1ml曰试验Ⅱ组对每头新生仔猪在初生 2h内肌肉注射威克仔猪灵 1ml尧 待 7 日龄时再肌肉

威克仔猪灵防治仔猪腹泻效果观察王俊贤

渊甘肃省定西市畜牧兽医科技研究院袁甘肃 定西 743000冤中图分类号院 S853.76 文献标识码院B 文章编号院1003-8655 渊2017冤 05-0021-02

摘要院威克仔猪灵是兰州威特森生物科技有限公司经过多年的努力研制的由维生素 A尧维生素 C尧维生素 D尧维生素 E 和新鲜蚕蛹粉按特定比例混合制成的多肽生物制剂遥 主要用于预防和治疗新生仔猪腹泻袁提高仔猪机体免疫力和成活率袁尤其对新生仔猪病毒性腹泻具有良好的预防和治疗效果遥 本试验通过对新生仔猪按不同剂量注射威克仔猪灵袁与传统药物渊硫酸庆大霉素注射液冤对照组尧空白对照组进行对比分析遥 结果表明袁试验组平均日增重比传统药物对照组提高 8.85%袁差异显著渊P＜0.05冤袁比空白对照组提高 21.39%袁差异极显著渊P＜0.01冤曰试验组仔猪腹泻率比传统药物对照组和空白对照组分别下降 71.41%和 94.59%袁差异极显著渊P＜0.01冤曰试验组每头母猪一个生产周期的综合经济效益比传统药物对照组和空白对照组分别提高 17.53%和 177.86%遥关键词院威克仔猪灵曰腹泻率曰日增重

表 1 仔猪应用威克仔猪灵综合生产性能

项 目 试验组渊Ⅰ冤 试验组渊Ⅱ冤 试验组渊Ⅲ冤 药物对 照组 空白对 照组母猪头数渊头冤 5 5 5 5 5产仔头数渊头冤 53 55 55 56 52仔猪平均初重渊㎏冤 1.42 1.45 1.44 1.40 1.42仔猪平均断奶重(㎏) 6.94 7.35 7.00 6.82 6.28

平均日增重渊g冤 197.14 210.71 198.57 193.57 173.57仔猪腹泻头数渊只冤 3 2 7 15 35腹泻率渊％冤 5.66 3.64 12.73 26.79 67.31仔猪死亡数渊只冤 0 0 0 2 1 0死亡率渊％冤 0 0 0 3.57 19.23仔猪耗料费用(元) 397.50 412.50 405.00 410.00 331.15

仔猪药物费用(元) 265.00 550.00 550.00 11.20 0

仔猪支出合计(元) 662.50 962.50 955.00 421.20 331.15

仔猪出售收入(元) 16551.90 18191.25 17325.00 16572.60 11869.20

渊按仔猪 45 元 /㎏计算冤仔猪出售利润渊元冤 15889.40 17228.75 16370.00 16151.40 11538.05每头母猪毛利渊元冤 3177.88 3445.85 3274.00 3230.28 2307.61每头母猪养殖成本(元)1978.25 1976.65 1975.30 1980.20 1778.85

每头母猪利润渊元冤 1199.63 1469.20 1298.70 1250.08 528.76

试验研究

基金项目院2016 年度定西市科技计划项目叶威克仔猪灵防治仔猪腹泻技术转化应用曳渊项目编号DX2016N08冤

作者简介院王俊贤袁生于 1965 年袁男袁甘肃通渭人袁本科袁高级畜牧师袁主要从事畜牧兽医科技研究工作遥

圆园17 年第 5 期（总第 198 期）注射威克仔猪灵 1ml曰 试验Ⅲ组对每头新生仔猪在 7 日龄肌肉注射威克仔猪灵 2ml曰 传统药物对照组对每头新生仔猪在初生 2h 内肌肉注射硫酸

庆大霉素注射液渊江西康华动物药业有限公司生产袁10 ml/ 支袁0.2g冤2ml曰 空白对照组不添加任何药物遥 试验从 2017 年 3 月 10 日开始至 6 月 10日结束袁历时 90d袁每头猪试验期从产仔开始记录到 28 日龄断奶结束共 28d遥1.1.2 测定指标测定试验仔猪的初生重尧28 日龄断奶重尧 仔猪腹泻头数尧治愈头数尧死亡头数袁计算日增重尧腹泻率尧死亡率以及经济效益遥1.2 观察结果见表 1遥

由表 1 知院试验组尧药物对照组综合生产性能明显优于空白对照组袁试验Ⅱ组综合生产性能明显优于试验Ⅰ组尧试验Ⅲ和药物对照组曰试验Ⅱ组平均日增重比试验Ⅰ组尧试验Ⅲ组分别提高6.88%尧6.11%袁差异显著渊P＜0.05冤袁比药物对照组提高 8.85%袁差异显著渊P＜0.05冤袁比空白对照组提高 21.39%袁差异极显著渊P＜0.01冤曰试验Ⅱ组仔猪腹泻率比试验Ⅰ组尧试验Ⅲ组尧药物对照组分别下降 35.69%尧71.41%尧71.41%袁 差异极显著渊P＜0.01冤袁比空白对照组下降 94.59%袁差异极显著渊P＜0.01冤曰试验Ⅰ组尧试验组Ⅱ组尧试验Ⅲ组尧药物对照组每头母猪一个生产周期的利润比空

白对照组分别提高 126.88%尧177.86%尧145.61%尧136.42%袁差异极显著渊P＜0.01冤袁试验组Ⅱ每头母猪一个生产周期的利润比试验Ⅰ组尧 试验Ⅲ组尧药物对照组分别提高 22.47%尧13.13%尧17.53%袁差异显著渊P＜0.05冤袁试验Ⅰ组尧试验Ⅲ组尧药物对照组之间差异不大遥1.3 小结

1.3.1 威克仔猪灵具有预防仔猪腹泻的功效遥 本试验通过对新生仔猪采用三种不同的处理方式肌肉注射威克仔猪灵注射液袁 从初生至 28 日龄断奶袁仔猪腹泻率明显降低袁其中试验Ⅱ组仔猪腹泻率比传统药物对照组下降 86.41%袁与空白对照组相比则差异更加明显遥1.3.2 威克仔猪灵具有提高日增重的作用遥 本试验证实袁从仔猪出生至 28 日龄断奶袁试验组平均日增重比传统药物对照组尧空白对照组均有所提高袁特别是试验Ⅱ组与传统药物对照组尧空白对照组相比分别提高 8.85%尧 21.39%以上袁 差异相当明显遥1.3.3 威克仔猪灵能显著提高养猪经济效益遥 以试验Ⅱ组每头母猪一个生产周期的利润为例袁比传统药物对照组提高综合经济效益 17.53%袁比空

白对照组提高 177.86%袁 是空白对照组每头母猪生产利润的 2.8 倍遥1.3.4 威克仔猪灵在预防新生仔猪腹泻时袁 采用仔猪刚出生 2 小时以内注射威克仔猪灵 1ml/ 头袁待 7 日龄时再注射 1ml/ 头的预防措施袁其综合生产性能尧经济效益为最好遥1.3.5 威克仔猪灵在本次试验观察中无任何毒副反应出现遥2 威克仔猪灵治疗仔猪腹泻的应用观察

2.1 材料与方法选用 40 头自然发病腹泻仔猪袁 随机分成 4

组袁每组 10 头袁设试验组与传统药物渊硫酸庆大霉素注射液袁 江西康华动物药业有限公司生产袁10 ml/ 支袁0.2g冤对照组 2 种处理组遥 试验组分试验Ⅰ尧试验Ⅱ尧试验Ⅲ三种不同处理方式遥 试验Ⅰ组对每头发病仔猪每日每次肌肉注射威克仔猪

灵 1.5ml曰 试验Ⅱ组对每头发病仔猪每日每次肌肉注射威克遥

仔猪灵 2ml曰 试验Ⅲ组对每头发病仔猪每日每次肌肉注射威克仔猪灵 2.5ml曰 传统药物对照组对每头发病仔猪每日每次肌肉注射硫酸庆大霉素注射液 渊江西康华动物药业有限公司生产袁10 ml/ 支袁0.2g冤2ml遥 通过 3d 治疗袁 观察治愈头数尧好转头数尧死亡头数遥2.2 结果 观察结果见表 2遥

由表 2 可知院3d 用药后试验Ⅰ尧试验Ⅱ尧试验Ⅲ组治愈率分别为 70%尧90%尧80%袁试验Ⅱ尧试验Ⅲ组死亡率为 0曰而药物对照组的治愈率为 50%袁死亡率为 20%袁差异显著渊P＜0.05冤遥2.3 小结

2.3.1 威克仔猪灵对仔猪腹泻疾病有明显的功效遥本试验结果说明袁威克仔猪灵治疗仔猪腹泻效果优于传统用药袁治愈率达 70%以上袁试验Ⅱ组治愈率达 90%袁说明威克仔猪灵抑菌能力强遥2.3.2 经试验证明袁 威克仔猪灵具有抗菌消炎尧增加免疫力等作用曰且用量少袁疗程短袁疗效确实袁价格便宜袁使用方便等特性袁所以是预防和治疗仔猪腹泻的好药物袁值得推广应用遥

试验研究

项目 试验组渊Ⅰ冤 试验组渊Ⅱ冤 试验组渊Ⅲ冤 药物对照组仔猪头数渊只冤 10 10 10 10用药天数渊天冤 3 3 3 3治愈头数渊只冤 7 9 8 5治愈率渊％冤 70 90 80 50死亡数渊只冤 1 0 0 2死亡率渊％冤 10 0 0 20

表 2 威克仔猪灵治疗自然发热仔猪情况

圆园17 年第 5 期（总第 198 期）

中草药来源于天然的植物及矿物质袁含有丰富的蛋白质袁维生素袁微量元素和生物活性物质袁具有补充营养袁提高免疫袁增强消化吸收改善肉质的作用遥 相对其它添加剂毒副作用较低袁无残留袁不污染环境的特点遥 笔者自拟中草药添加剂对雏鸡增重及血清蛋白进行试验研究遥1 材料与方法1.1 试验动物选择

选择体质量接近袁发育状况良好的 1 日龄三黄鸡 60 只1.2 中草药添加剂组成

自拟中草药添加剂由土黄芩尧党参尧白术尧茯苓尧甘草尧艾叶尧苦参尧蒲公英组成遥 上述中药均购自大通县医药公司袁按一定比例干燥粉碎后备用遥1.3 试验日粮院见表 1

表 1 日粮组成及营养水平渊MJ/kg.%冤原料 组成比例 代谢能 粗蛋白 钙 总磷玉米 61 8.56 5.25 0.024 0.128麸皮 9.0 0.59 1.30 0.162 0.070豆饼 18 1.99 7.74 0.058 0.090鱼粉 10.5 1.27 6.51 0.411 0.305石粉 0.8 0.280骨粉 0.33 0.120 0.054食盐 0.37合计 100 12.41 20.8 1.055 0.647

1.4 试验方法1.4.1 将 60 只雏鸡随机分成二组遥 一组为试验组袁二组为对照组遥1.4.2 对照组饲喂上述全价饲料袁试验组在全价饲料基础上添加中草药药剂 1.5%袁共计 30 天袁每天让雏鸡自由采食袁饮水遥

中草药添加剂对雏鸡增重及血清蛋白的试验研究

黄 宁 1 袁陈生锦 2

渊1.青海省大通县长宁镇后子河畜牧兽医站袁810105曰2.青海省大通县桥头镇元朔畜牧兽医站袁810100冤中图分类号院 S853.99 文献标识码院B 文章编号院1003-8655 渊2017冤 05-0023-01

摘要院在 1 日龄三黄雏鸡日粮中添加 1.5%中草药添加剂袁饲喂 30 天袁研究其对雏鸡体重及血清蛋白的影响袁试验表明院中草药复方可使雏鸡体重增加 14.02%袁差异显著渊P＜0.05冤遥提高血清蛋白含量袁30 日龄时球蛋白提高 12%袁差异显著渊P＜0.05冤关键词院中草药添加剂曰雏鸡曰体重曰血清蛋白

表 2 中草药添加剂对雏鸡增重对比渊只尧%尧g冤

组别 试验只数 给药量 日龄

1 日龄 15 日龄 30 日龄

体重 体重 净增重 体重 净增重

1 组 30 1.5 37.7 100.4±4.2 62.7 246.8±4.2 209

2 组 30 0 37.6 93.2±6.4 55.6 220.9±14.6 183.3

表 3 饲喂中草药添加剂对雏鸡学清蛋白的影响渊只尧%尧g/a冤组别 试验只数 给药量 日龄

15 日龄 30 日龄

总蛋白 白蛋白 球蛋白 总蛋白 白蛋白 球蛋白

1 组 30 只 1.5 2.12±0.31 1.13±0.23 0.99±0.21 2.39±0.40 1.27±0.29 1.12±0.3

2 组 30 只 0 1.95±0.27 1.10±0.21 0.85±0.33 2.18±0.39 1.18±0.21 1.00±0.3

试验研究

各组分别于 1 日龄尧15 日龄尧30 日龄逐只早晨空腹称重袁15 日龄尧30 日龄测定血清蛋白含量遥2 试验结果 见表 2尧表 3遥

由表 2 可知袁30 日龄时试验组平均净增活重209.0g袁 而对照组为 183.3g 试验组平均日增重是6.96g袁 而对照组为 6.11g遥 试验组比对照组提高12.21%袁差异显著渊P＜0.05冤

由表 3 可知袁 雏鸡在 15 日龄和 30 日龄时袁试验组血清蛋白尧白蛋白尧球蛋白都高于对照组袁其中在 15 日龄时球蛋白比对照组高 16.47%袁差异显著渊P

圆园17 年第 5 期（总第 198 期）

肃南县是一个靠天然草场放牧的传统畜牧

业县袁沿祁连山一线高寒地区的 6 个乡镇牛羊在冬春季 7 个月枯草期因缺乏饲草料尧寒冷尧冰冻等因素袁甘肃高山细毛羊掉膘及抗病能力降低,采用优质牧草配合饲料补喂是有效途径遥 试验旨在研究补喂青贮饲用玉米 + 饲料对甘肃高山细毛

羊的影响遥为有效解决高寒牧区天然草地牧草营养供

应季节不平衡的矛盾袁推广以冬春季节舍饲半舍饲为主的牧区养殖方式袁2015 年在双联示范村康乐乡隆丰村开展高产尧优质饲用玉米新品种的引进示范与青贮补喂推广袁 大幅度提高饲草产量尧增加畜草的储存量和品质袁缓解牧区饲草紧缺的突出问题袁确保甘肃高山细毛羊保镖尧安全越冬袁实现天然草地畜牧业的转型跨越和牧民增收尧草地生态保护双赢目标遥1 材料及方法院1.1 试验时间院2015 年 11 月 1 日要2016 年 2 月1 日

1.2 试验地点院隆丰村甘肃高山细毛羊养殖户1.3 试验分组院 选择该村牧户张东国养殖的 60只周岁细毛羊随机分为 A尧B 两组袁每组 30 只遥2 饲养管理

2.1 试验羊只在试验前已用口蹄疫尧羊痘尧羊四防苗免疫袁用杀虫传奇长效剂渊主要成分是伊维菌素冤进行驱虫袁对试验羊只分别进行试验前称重袁耳朵缝号标记袁制定表格袁并将称重结果对应编号记录于表格中遥2.2 两组试验羊于 2015 年 11 月 1 日在隆丰村

渊牧户冬场冤开始补饲袁A 组用青贮玉米饲喂袁B 组

用玉米秸秆和其它青干草混合饲喂遥 青贮玉米饲喂时由少到多依次加量袁让羊逐渐适应遥2.3 从 2015 年 11 月 1 日开始两组羊每天早晚

共补饲精料 200g,至 2 月 1 日结束遥 从 11 月 1 日开始穿羊衣袁至次年 6 月结束遥2.4 给羊只供应充足的饮水袁 让其自由饮用袁定期做好圈舍的清扫消毒袁 勤观察羊只的精神尧饮食变化袁发现异常时及时进行诊断和隔离治疗遥3 结果

3.1 A尧B 两组羊试验前平均体重为 26.8kg 和27.4kg 袁试验结束后平均体重为 45.4kg和 39.1kg遥3.2 A 组羊平均增重 18.6kg袁 平均每只每天增重0.21kg袁B 组羊平均增重 11.7 kg 袁 平均每只每天增重 0.13 kg遥3.3 A 组羊每只出售收入为 45.4 kg×40×46%

=835.4 元袁 总收入为 25062 元袁 扣除饲料费用90×2×0.2×30=1080 元袁 青贮人工费用 3×150=450 元袁 每只收入 784.4 元袁B 组羊每只出售收入 39.1 kg×40×46%=719.4 元 , 总收入为

21582 元袁 扣除饲料费用 1080 元后每只收入683.4 元袁A 组羊比 B 组羊多增加收入 3030 元袁平均每只多增加 101 元袁 其余费用基本相同袁不再计算遥4 结论

青贮饲用玉米补喂甘肃高山细毛羊试验袁周岁羊保膘增重效果明显袁经济效益显著袁有效解决了高寒牧区冬春季节因牧草缺乏而造成养只

消瘦尧乏弱袁抵抗力下降等难题袁成为舍饲半舍饲为主的牧区补饲甘肃高山细毛羊的良策袁适宜有条件的高寒牧区大力推广开展遥

试验研究

高寒牧区青贮饲用玉米补喂甘肃高山细毛羊试验观察

徐菊梅

渊甘肃省肃南县动物疫病预防控制中心袁734400冤中图分类号院 S853.7 文献标识码院B 文章编号院1003-8655 渊2017冤 05-0024-01

圆园17 年第 5 期（总第 198 期）

临床金鉴

仔猪黄痢是一种起病急尧致死性较高的传染病袁引发此病的病原菌为某种致病性的溶血性大肠埃希菌袁此病主要感染初生仔猪袁且此病潜伏期很短袁仔猪出生后半天内便可发病遥 该病原致病性源于本身的黏附性纤毛及肠毒素遥 仔猪黄痢因其发病时间早袁故又可称之为早发性大肠埃希菌病遥 仔猪感染此病原菌后袁由病菌在体内分泌毒素袁引起仔猪肠毒血症遥 因为细菌在体内大量繁殖袁而大肠埃希菌属于产气型肠杆菌会迅速产生二氧化碳遥 本病病原受气温影响较小袁夏秋可发病袁但多见于寒冷季节袁发病仔猪主要以 7 日龄以内较多袁 特殊情况下 20 日龄左右的仔猪也可发生此病遥 卫生环境较差的猪场发病率远远高于卫生环境好的猪场,且猪舍温度越高袁该病的发病率越高遥 发生仔猪黄痢后袁病猪死亡率极高袁严重时可能达到全圈死亡遥 2017 年 4 月初,笔者接诊一例仔猪黄痢,现报道如下遥1 发病情况

2017 年 4 月底袁盐城某猪场饲养员在清晨巡圈时袁发现地面稀粪较多遥 仔细观察发现不少仔猪出现拉稀症状遥 有些仔猪出现严重的脱水现象袁被毛杂乱袁黯淡无光袁严重的仔猪出现昏迷袁当天上午有 2 只仔猪衰弱死亡袁于是求诊遥2 临床检查

2.1 临床症状

临诊发现猪群腹泻尧拉稀袁排出黄色或黄白色浆液状稀薄粪便袁部分猪粪内混杂少量白色凝乳块袁有气泡袁腥臭遥 体温正常袁病猪神情萎靡袁全身被毛稀疏粗乱袁尾部尧肛门及其附近沾满黄色

或黄白色稀粪袁重症者严重脱水遥2.2 病理变化

病死仔猪剖检袁可见颈部及腹部有不同程度的水肿袁胃内有凝乳块充斥袁气味酸臭袁肠道黏膜坏死脱落袁肠腔内多含有大量黄色或黄白色稀薄的腐败乳汁半凝固物袁有气泡混杂其中袁气味腥臭遥 肠系膜淋巴结呈炎性充血袁可见体积明显增大遥 小肠黏膜因肠道内容物刺激袁引发肠道炎症遥镜检患病仔猪肠壁袁可见其小肠绒毛萎上皮细胞缩坏死遥2.3 实验室检查

2.3.1 镜检

按照无菌操作流程袁取十二指肠内容物稀释液涂片袁革兰氏染色后镜检发现两段钝圆尧大小中等的革兰氏阴性短杆菌遥2.3.2 细菌培养

肠内容物稀释液接种于普通培养基和麦康

凯培养基上袁在 37℃环境下进行培养 24h袁结果发现在普通培养基上长出圆形突起尧表面光滑滋润呈灰白色的菌落袁在麦康凯培养基上长出红色扁平圆形菌落遥 挑取群落均匀的涂抹在载玻片上袁革兰氏染色袁在油镜下进行观察袁可见红色椭圆形短杆菌袁或单独分布或两两成对存在遥2.4 诊断

根据该病典型的腹泻症状袁 独特的粪便颜色袁特定的发病日龄等特点袁结合实验室检查结果袁初步诊断为仔猪黄痢遥3 治疗

3.1 西药疗法

苏治国袁陈文芳袁解慧梅(江苏农牧科技职业学院袁江苏泰州 225300)

中图分类号院 S858.28 文献标识码院B 文章编号院1003-8655 渊2017冤 05-0025-02

圆园17 年第 5 期（总第 198 期）

临床金鉴

肌肉注射院菌痢净渊乙酰甲喹冤袁1ml/ 头袁每天2 次袁连用 2 天遥

腹腔注射院50ml 葡萄糖生理盐水袁维生素 B5注射液尧维生素 C 注射液各一支袁混合均匀后腹腔注射袁每天 2 次遥3.2 中药疗法

白头翁汤袁剂量每头按白头翁 9g尧黄柏 5g尧黄连 5g尧秦皮 5g 水煎灌服袁每天 2 次遥3.3 其他措施

病猪隔离袁清扫污粪袁猪圈及用具全面消毒袁母猪洗澡并消毒袁特别是乳头部分遥3.4 治疗结果

综合用药治疗 2 天后袁 病情得到了控制袁西药停用遥 继续灌服白头翁汤 2 天以稳定病情遥4 预防措施

4.1 做好饲养管理

改善哺乳母猪的饲养条件袁给予易于消化富有营养的饲料袁增强母猪体质遥 给仔猪补充矿物质院新生仔猪容易发生缺铁性贫血袁会使仔猪胃肠对致病细菌的敏感度增高遥 在仔猪新生的两天内