Paediatrica IndonesianaOriginal ArticleAntigen kuantitatif NS1 dan keparahan infeksi virus dengueNi Made Adi Purnami, Mohammad Juffrie, Made Gede Dwi Lingga UtamaabstrakLatar Belakang Infeksi Dengue merupakan salah satu penyebab utama morbiditas dan mortalitas pada anak-anak di Indonesia. Karena diketahui bahwa terapi pengobatan sejak dini dan terapi suportif dapat menurunkan tingkat kematian pada kasus demam berdarah dengue (DBD), identifikasi anak-anak yang memiliki risiko untuk menderita DBD harus cepat diidentifikasi, terutama di daerah-daerah endemik.

Tujuan Untuk menemukan korelasi antara peningkatan kuantitatif disekresikan protein-1 nonstruktural (sNS1) dengan perjalanan klinis infeksi dengue berat.

Metode Ini merupakan studi cross-sectional yang dilakukan pada anak-anak dengan infeksi dengue di Divisi Infeksi tropis anak departemen kesehatan, Rumah Sakit Sanglah, Denpasar. Deteksi antigen dengue dibuat dengan memeriksa sNS1 immuno-assay kuantitatif. analisis korelasi uji Spearman digunakan untuk melihat hubungan antara peningkatan sNS1 kuantitatif dengan klinis infeksi dengue berat.

Hasil Ada hubungan positif antara kuantitatif sNS1 dan perjalanan klinis infeksi dengue berat dengan nilair = 0,903, P = 0,001. Peningkatan tingkat sNS1 memiliki korelasi positif dengan infeksi dengue lebih parah.Kesimpulan titer sNS1 kuantitatif memiliki korelasi positif yang kuat dengan perjalanan klinis infeksi dengue berat.[Paediatri Indonesia. 2015; 55: 87-90].Kata kunci: infeksi dengue, keparahan, sNS1

D

emam berdarah dengue (DBD) dan dengue shock syndrome (DSS) adalah komplikasi yang berpotensi yang parah dan fatal infeksi oleh virus dengue. Prevalensi dengue shock syndrome masih dilaporkan tinggi di Rumah Sakit Sardjito Yogyakarta. Antara Januari 2002 sampai Agustus 2003 dilaporkan bahwa 41% pasien DBD memiliki dengue shock syndrome. Organisasi Kesehatan Dunia melaporkan bahwa DSS terjadi pada 35,2% dari kasus DBD. Tingkat kematian kasar DBD di Indonesia adalah 4,6% .Intervensi dini dan manajemen yang efektif kebocoran plasma, dengan substitusi cairan plasma (plasma expander) atau dengan larutan elektrolit, secara cepat, tepat, dan cara yang memadai, dapat mengurangi kematian DBD untuk syok berkepanjangan.

Identifikasi awal pasien yang memiliki risiko potensi untuk berkembang menjadi DHF yang parah atau DSS sangat penting untuk mendorong terapi suportif untuk mengurangi jumlah kematian. Sampai saat ini, masih belumada pemeriksaan infeksi dengue yang dapat mebimbing kita untuk memprediksi apakah infeksi ini akan pertumbuhan menjadi derajat lebih parah.

Virus dengue nonstruktural protein-1 (NS1) ditemukan pada saat virus dengue mengalami replikasi. pemeriksaan protein NS1 ditampilan bentuk membran terkait protein (mNS1) dan bentuk disekresikan (sNS1). sNS1 terkait dengan patogenesis infeksi virus dengue yang parah. Sebuah studi awal menunjukkan keterlibatan NS1 di replikasi virus RNA. Tingkat bentuk disekresikan dari NS1 (sNS1) dalam plasma memiliki korelasi yang kuat dengan titer virus, di mana tingkat yang lebih tinggi dari sNS1 ditemukan lebih sering pada pasien dengan DBD dibandingkan dengan demam dengue .Oleh karena itu tujuan utama dari studi ini adalah untuk menentukan korelasi antara pengukuran sNS1 kuantitatif dengan klinis infeksi dengue dari ringan sampai bentuk parah.

MetodePenelitian ini merupakan penelitian cross sectional, dilakukan pada Divisi Infeksi Tropis Pediatrik Rumah sakit Sanglah di Denpasar, pada anak-anak yang dicurigai infeksi dengue. Kriteria inklusi adalah anak-anak yang memiliki demam pada hari ke-4, dengan dua atau lebih dari gejala berikut: sakit kepala, nyeri retroorbital, mialgia atau artralgia, ruam makulopapular, petechiae,dan uji torniquet positif. Sebuah informed consent di berikan oleh orang tua atau pengasuh. pengasuh anak-anak yang menolak untuk memberikan informed consent akan dikeluarkan. Ukuran sampel dihitung untuk uji korelasi dengan = 0,05, power = 80%, dengan koefisien korelasi dari penelitian sebelumnya adalah 0,6, mengungkapkan subyek minimum untuk penelitian ini adalah 37.

Pemeriksaan NS1 kuantitatif adalah pengukuran titer antigen NS1 dengan metode immuno-assay menggunakan satu langkah format lempeng Sandwich ELISA,tes Platelia TM Dengue Ag NS1 (Biorad Laboratories Marnes-La-genit, Perancis). Pemeriksaan Enzim immuno-assay dilakukan dengan menggunakan sampel serum 50L yang diinkubasi secara langsung dan bersamaan dengan 50L pengencer (buffer fosfat) dan 100L pengencer terkonjugasi (anti NS1 Mab ditambah dengan lobak peroksidase) selama 90 menit dengan menggunakan lempeng di suhu 37 C. Setelah 30 menit, microplates dicuci dan respon imun kompleks terdeteksi dengan perubahan warna.

Kemudian perubahan warna dilihat melalui kerapatan optik, pembacaan dengan spektrofotometer yang telah diprogram dengan pengaturan pada 450/620 nm untuk mendeteksi antigen bebas sNS1 di sampel. Keparahan infeksi dengue dapat dilihat melalui temuan klinis yang bermanifestasi sebagai diagnosis klinis yang sesuai dengan kriteria WHO 1997, yang diklasifikasikan sebagai demam berdarah (DF), grade DBD 1,2,3, dan 4. infeksi Dengue yang disertai dengan syok didefinisikan sebagai DBD kelas 3 dan 4. Data dianalisis dengan menggunakan uji korelasi Spearman karena data tidak terdistribusi normal. Analisis ini dilakukan untuk menemukan hubungan antara tingkat NS1 kuantitatif dengan DF, DHF grade 1, 2, 3, dan 4. Etical clereance di keluarkan oleh Dewan Penelitian Dan Pengembangan Fakultas Kedokteran Universitas Udayana dan izin penelitian di keluarkan oleh Rumah Sakit Umum Sanglah.

HasilSelama masa penelitian total 37 subjek dengan Infeksi dengue memenuhi kriteria yang memenuhi syarat, terdiri dari 9 dengan DF, 13 subyek dengan DBD grade 1, 2 dengan DBD grade 2, 9 subyek dengan DBD grade 3, dan 4 subyek DBD grade 4. Skema penelitian ditunjukkan pada Gambar 1. Karakteristik subyek penelitian ditampilkan dalamTabel 1. Usia rata-rata dari subyek penelitian adalah 86, 7 bulan (SD 3,7), dengan 20/37 subjek perempuan. Rata rata jumlah leukosit, tingkat hematokrit, dan jumlah trombosit , masing-masing adalah 4,62 / uL, (3,06 SD) , 43,77%, (SD 5,12), 69,12 / uL, (SD 22,91). Korelasi antara tingkat sNS1 dengan spektrum klinis infeksi dengue dilakukan pada Gambar 2. Analisis korelasi Spearman menunjukkan korelasi yang signifikan antara tingkat sNS1 kuantitatif dengan keparahan infeksi dengue ,nilai r = 0,903 (Nilai P = 0,001).

DiskusiVirus dengue (DENV) nonstruktural protein-1 (NS-1) adalah glikoprotein yang disekresi yang hilang dari partikel virus tetapi terakumulasi dalam supernatan dan membran plasma sel selama infeksi. Sebuah Penelitian sebelumnya menunjukkan keterlibatan NS1 di replikasi virus RNA. Sekresi NS1 (sNS1) di tingkat plasma berkorelasi dengan titer virus, di mana ditemukan lebih tinggi pada pasien dengan DBD daripada dengue fever. Tingkat Protein non struktural 1 (NS1) meningkat dalam 72 jam setelah onset dari penyakit (fase viremia), yang menunjukkan risiko penyakit berkembang ke arah DBD. Dalam sebuah penelitian, ditemukan bahwa nilai cut of titer SNS-1 bebas untuk berkembang menjadi DBD adalah 600ng /mL menggunakan metode capture ELISA dengan r = 0.6 . Selain itu, studi sebelumnya mengungkapkan bahwa Protein NS1 dapat langsung terlibat dalam proses penyakit yang menjadi lebih parah melalui kemampuannya untuk merangsang sel-sel dendritik untuk memproduksi sitokin, seperti TNF , IL-1, IL-6.11 dan juga fenomena infeksi heterolog berhubungan dengan antibodi dan diperkirakan sebagai komponen utama dalam pathogenesis komplikasi berat pada infeksi virus dengue. Di infeksi dengue sekunder, antibodi yang terbentuk di kompleks dengan virus dengue. Mekanisme kedua pathogenesis menunjukkan kemampuan sNS1 untuk menginduksi terjadinya infeksi dengue lebih parah.Hasil yang sama dengan penelitian sebelumnya diperoleh dalam penelitian ini, yang menunjukkan korelasi positif yang kuat (r = 0,903, P = 0,001) antara titer kuantitatif sNS1 dengan perjalanan klinis yang parah dari infeksi dengue. Korelasi positif menunjukkan bahwa lebih tinggi tingkat sNS1, lebih parah perjalanan klinis. Temukan kami menunjukkan korelasi tinggi antara titer sNS1 dan keparahan infeksi dengue dibandingkan dengan penelitian sebelumnya karena alat laboratorium yang berbeda digunakan. Sebelumnya Penelitian ini menggunakan Pan-E Dengue ELISA (Pan-Bio Diagnostik, Brisbane, Australia) sementara penelitian kami menggunakan Platelia TM Dengue NS1 Ag-ELISA (Biorad Labororatories Marnes-La-genit, Perancis). Pan-E dengue ELISA (Panbio) menunjukkan sensitivitas yang lebih tinggi dalam mengkonfirmasikan-DENV 1 dan DENV-3 infeksi. The PlateliaTM NS1 kit (Biorad) lebih sensitif dalam mendeteksi infeksi DENV-1 dan DENV-2. Indonesia memiliki tertinggi prevalensi infeksi DENV-2, ini mungkin menjelaskan adalah hasil yang berbeda dengan penelitian sebelumnya. Penjelasan yang sama ama dapat juga diterapkan untuk beberapa hasil dari penelitian yang sudah di keluarkan,dilihat dalam plot yang berbeda. Plot hasil penelitian yang sudah dikeluarkan mungkin mewakili serotipe virus selain infeksi DENV-2.Keterbatasan penelitian kami adalah bahwa sampel darah untuk itu sNS1 pengukuran kuantitatif diambil di hari keempat demam, sedangkan penelitian sebelumnya telah menunjukkan bahwa puncak tingkat sNS1 serum dicapai pada demam hari ketiga. Keterbatasan lain adalah kita tidak melakukan RT-PCR untuk serotipe dibedakan dari virus dengue.Kami menyimpulkan bahwa pengukuran kuantitatif sNS1 memiliki korelasi positif yang kuat dengan tingkat keparahan infeksi dengue