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AllplexTM
Panel Respiratorio 1
(Flu / VSR / Subtipificación Flu A)
(Cat. No. RP9801X)
Sistema de PCR en tiempo real múltiplex con RT (Transcripción Inversa) en un solo
paso para la detección de virus de la Influenza A, virus de la Influenza B, virus sincitial
respiratorio humano A, virus sincitial respiratorio humano B, y la subtipificación del
virus de Influenza A (Virus de la Influenza Humana A subtipos H1, H3, y H1pdm09) en
aspirados nasofaríngeos, hisopados nasofaríngeos y lavados broncoalveolares.
Para uso exclusivo con el MICROLAB NIMBUS IVD y MICROLAB STARlet
Para su uso con el
1. Sistema de PCR en Tiempo Real CFX96TM (Bio-Rad)
(Uso para Diagnóstico In Vitro)
Éste producto puede ser usado con propósitos IVD en países autorizados.
(Únicamente para uso en investigación)
Este producto debe usarse para propósitos RUO en otros países.
No disponible en los Estados Unidos
2 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
TABLA DE CONTENIDOS
NOTIFICACIONES------------------------------------------------------------------------------------------------------ 3
USO PREVISTO --------------------------------------------------------------------------------------------------------- 4
PRINCIPIOS Y DESCRIPCIÓN GENERAL DEL PROCEDIMIENTO --------------------------------------------- 5
ANTECEDENTES ------------------------------------------------------------------------------------------------------- 6
REACTIVOS ------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 9
MANEJO Y ALMACENAMIENTO ----------------------------------------------------------------------------------- 9
MATERIAL REQUERIDO NO INCLUIDO ------------------------------------------------------------------------- 10
PROTOCOLO --------------------------------------------------------------------------------------------------------- 11
CONFIGURACIÓN DEL EQUIPO PARA PCR EN TIEMPO REAL Y ANÁLISIS DE RESULTADOS ------- 16
RESULTADOS --------------------------------------------------------------------------------------------------------- 25
SOLUCIÓN DE PROBLEMAS -------------------------------------------------------------------------------------- 28
RENDIMIENTO ------------------------------------------------------------------------------------------------------- 30
REFERENCIAS -------------------------------------------------------------------------------------------------------- 34
SIMBOLOGÍA --------------------------------------------------------------------------------------------------------- 36
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Panel Respiratorio AllplexTM 1
NOTIFICACIONES
Este producto se puede utilizar con propósitos IVD (Diagnóstico In Vitro) en la UE dado que
la Marca IVD CE está aprobada por la Directiva de la UE (98/79/EC) y países autorizados,
pero debe utilizarse para propósitos RUO (Uso Exclusivo en Investigación) en otros países.
La confiabilidad de los resultados depende de la toma adecuada de la muestra, el
almacenamiento, el transporte y la ejecución de procesamiento.
Es posible usar el mismo ácido nucleico aislado para los Paneles Respiratorios
AllplexTM 1, 2, y 3.
Si la misma muestra será evaluada también con el kit del Panel Respiratorio AllplexTM
4 adicionar ambos RP-V IC y RP-B IC al ácido nucleico aislado (Véase página 12).
Este producto es para uso exclusivo con el MICROLAB NIMBUS IVD y MICROLAB
STARlet, máximo 5 ensayos separados.
Ésta prueba ha sido validada para los siguientes tipos de muestras: aspirados
nasofaríngeos, hisopados nasofaríngeos y lavados broncoalveolares. Ésta prueba no
ha sido validada para otros tipos de muestras.
Almacene las muestras de ADN/ARN a ≤ -20℃ hasta su uso y manténgalas en hielo
durante su uso.
La sensibilidad del ensayo puede disminuir en las muestras que son congeladas y
descongeladas repetidamente o almacenadas por largos periodos de tiempo.
El flujo de trabajo en el laboratorio debe proceder de manera unidireccional.
Use siempre guantes desechables en cada área y cámbielos antes de ingresar a áreas
diferentes. Cambie los guantes inmediatamente si se contaminan o trátelos con un reactivo
descontaminante de ADN.
Asigne suministros y equipos a las áreas de trabajo separadas y no los mueva de un área
a la otra.
No pipetee con la boca.
No coma, beba o fume en las áreas de trabajo del laboratorio. Use guantes desechables
libres de talco, batas de laboratorio y gafas protectoras cuando manipule muestras y
reactivos. Lávese bien las manos después de manipular muestras y los reactivos de la
prueba.
Evite contaminar los reactivos al extraer las alícuotas de los tubos de reactivos. Se
recomienda el uso de puntas para pipetas estériles, desechables y con filtro resistente a
aerosoles
No mezcle los reactivos de diferentes lotes o de tubos diferentes del mismo lote.
No use este producto después de la fecha de vencimiento.
Todos los elementos desechables se pueden usar una sola vez. No los reutilice.
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Panel Respiratorio AllplexTM 1
Use tubos de tapa rosca y evite las posibles salpicaduras o contaminación cruzada de
muestras durante la preparación.
Sea cuidadoso de no contaminar los reactivos con ácidos nucleicos aislados, productos de
la PCR, y control positivo. Para prevenir la contaminación de los reactivos, se recomienda
usar puntas con filtro.
Use áreas separadas para cada experimento.
Prepare y use un set diferente de pipetas para cada una de las siguientes áreas:
aislamiento de ácido nucleico, mezcla de reactivos, la adición del ácido nucleico molde y la
adición de productos de PCR.
Solo en un espacio designado, abra los tubos de reacción o tiras de PCR después de la
amplificación, para evitar la contaminación con amplicones.
Almacene el material positivo aparte de los reactivos del kit.
Los procedimientos de seguridad en el laboratorio (remitirse a Bioseguridad en laboratorios
microbiológicos y biomédicos y Documentos del CLSI) se deben tener en cuenta para
manipular las muestras. Limpie y desinfecte a fondo todas la superficies de trabajo con
hipoclorito de sodio al 0.5% (en agua desionizada o destilada). Los componentes del
producto (residuos del producto, empaque) se pueden considerar residuos de laboratorio.
Deseche los reactivos no usados y los residuos de conformidad con los reglamentos
federales, estatales y locales aplicables.
USO PREVISTO
El Panel Respiratorio AllplexTM 1 es un ensayo cualitativo in vitro para la detección simple o
múltiple de virus de Influenza A (Flu A), virus de Influenza B (Flu B), virus sincitial respiratorio
humano A (VSR A), virus sincitial respiratorio humano B (VSR B), virus de Influenza humana A
subtipo H1 (Flu A-H1), virus de Influenza humana A subtipo H3 (Flu A-H3) y virus de Influenza
humana A subtipo H1pdm09 (Flu A-H1pdm09) en muestras de aspirados nasofaríngeos,
hisopados nasofaríngeos y lavados broncoalveolares.
Flu A: Los primers están diseñados en regiones conservadas en el gen matriz (M1) para
detectar distintos subtipos del virus de influenza A. Con base en el análisis in silico, pueden
detectar secuencias del subtipo H5N1 que causa la gripe aviar altamente patogénica, y el
nuevo virus de influenza A (subtipo H7N9) de origen aviar que se detectó por primera vez en
China en marzo de 2013.
5 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
Subtipos de Flu A: Los primers están diseñados en regiones conservadas del gen de la
hemaglutinina (HA). Detectan casi todos y cada uno de los subtipos (H1, H3, y H1pdm09) del
virus de influenza humana A.
PRINCIPIOS Y DESCRIPCIÓN GENERAL DEL PROCEDIMIENTO
1. Principios
El Panel Respiratorio AllplexTM 1 es representativo de la tecnología patentada de Seegene
MuDT™, la cual proporciona valores multi-Ct (ciclo umbral) en un solo canal de fluorescencia
sin análisis de curvas de melting en los instrumentos para PCR en tiempo real.
El Panel Respiratorio AllplexTM 1 es un ensayo de RT-PCR en tiempo real multiplex en un solo
paso que permite la amplificación simultánea y la detección de ácidos nucleicos objetivo de Flu
A, Flu B, VSR A, VSR B, Flu A-H1, Flu A-H3, Flu A-H1pdm09 y el Control Interno (IC).
En la PCR, la eficiencia de amplificación puede reducirse usualmente por inhibidores que se
pueden presentar en las muestras clínicas. Por ende, el control interno (IC) es incorporado
dentro del producto como un control exógeno de todo el proceso para monitorear el aislamiento
de ácidos nucleicos y verificar una posible inhibición de la RT-PCR. El IC es co-amplificado con
los ácidos nucleicos objetivos en las muestras clínicas.
2. Descripción General del Procedimiento
< Descripción general del procedimiento del Panel Respiratorio AllplexTM 1 >
Muestras
(Aspirados nasofaríngeos, hisopados
nasofaríngeos y lavados broncoalveolares)
Aislamiento de ácidos
nucleicos
ADN/ARN Viral
RT-PCR en tiempo real
en un solo paso
utilizando el sistema
AllplexTM
Análisis de resultados
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Panel Respiratorio AllplexTM 1
ANTECEDENTES
1. Infección por Virus Respiratorios
La Infección Respiratoria tiene dos categorías: la infección del tracto respiratorio superior y la
infección del tracto respiratorio inferior. La infección del tracto respiratorio superior es causada
por patógenos que invaden por vía nasal, faríngea, auris media, espenculus, etc. Cualquier
infección detectada en el tracto respiratorio que se encuentre por debajo de la laringe es
categorizada como una infección del tracto respiratorio inferior. Entre las infecciones del tracto
respiratorio inferior, las infecciones virales pueden dividirse en cuatro grupos principales
denominados, neumonía, bronquiolitis, laringotraqueobronquitis y traqueobronquitis. Las
diferencias de edad para cada virus se presentan en las víctimas que se infectan. Además, los
síntomas pueden diferir en pacientes que incluso tengan el mismo tipo de virus. Aunque cada
virus puede causar síntomas para todos los cuatro tipos de infecciones del tracto respiratorio
inferior, algunos síntomas aparecen con frecuencia en una infección específica que en otras.
Por ejemplo, el VSR puede aparecer en todas las edades desde infantes a adultos, pero este
causa una infección del tracto respiratorio superior en adultos y bronquiolitis en bebés.
Usualmente, el VSR causa neumonía en infantes, y la mayoría de pacientes que son
diagnosticados con infecciones del tracto respiratorio inferior son niños con menos de dos
años, en su mayoría niños con menos de seis meses de edad.
Aunque los adultos tienen buenos niveles de inmunidad por las repetidas infecciones por virus
respiratorios desde su infancia, el sistema inmune es limitado, imperfecto y vulnerable a los
virus respiratorios, usualmente infecciones del tracto respiratorio superior. Sin embargo, los
pacientes con un sistema inmune decaído pueden desarrollar infecciones del tracto respiratorio
inferior tales como neumonía. En casos de influenza, debido a que es una variación antigénica
del virus, los pacientes con enfermedades subyacentes y personas mayores se infectan
frecuentemente y desarrollan neumonía. Además, puede deteriorar las enfermedades
subyacentes que pueden causar la muerte del paciente. Investigaciones recientes afirman que
el VSR produce los mismos síntomas que la influenza.
2. Virus de la influenza
El virus de la influenza (de la familia Orthomyxoviridae) presenta un genoma de ARN de
cadena sencilla de sentido negativo que está presente en 8 segmentos separados de
ribonucleoproteína. Esta segmentación del genoma es poco común entre los virus y muy
7 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
probablemente contribuye al rápido desarrollo de nuevas variedades de influenza, a través del
intercambio de segmentos génicos entre virus diferentes que infectan la misma célula. Existen
3 tipos de virus de influenza: A, B y C. Los virus A y B son los más comunes de los tres. Sobre
todo, el virus tipo A es conocido como el más común por infectar no solo seres humanos, sino
también aves y varios tipos de mamíferos. Entre los virus de influenza que invaden seres
humanos, el H1N1 y H3N2 se están convirtiendo en un problema por infectar niños y personas
mayores.
Los tipos B y C se limitan a afectar solamente a seres humanos. Los primeros síntomas por
influenza son descarga nasal, congestión nasal, dolor de garganta, tos, fiebre, nasofaringitis o
síntomas similares por rinitis aguda, escalofríos, y dolor muscular, los cuales son más graves
que el resfriado común. Específicamente, los síntomas de influenza causan alta fiebre y
desarrollan complicaciones debido a infecciones bacterianas.
3. Virus Sincitial Respiratorio (VSR)
El virus sincitial respiratorio (de la familia Paramyxoviridae) es un virus envuelto de un genoma
de ARN de cadena sencilla de sentido negativo. El VSR tiene una alta frecuencia de ocurrencia
entre otras enfermedades respiratorias. Está caracterizado como clínicamente significativo por
causar muertes en bebés con malformaciones cardíacas congénitas, infantes prematuros, y
bebés con cirugía de corazón abierto reciente. La bronquiolitis es el tipo más común de
infección de VSR en infantes, pero no aparece tan a menudo después de un año de edad. Por
otro lado, la neumonía es un problema para todos los infantes. El VSR es el responsable de
desarrollar el 45~75% de bronquiolitis, el 15~25% de neumonía en infantes, y 6~8% de
laringotraqueobronquitis. El VSR era originalmente conocido como patógenos que
desarrollaban enfermedades en bebés, pero estudios recientes demuestran que el VSR que se
presenta en adultos puede producir resultados tan graves como la influenza, tales como la
transferencia y muerte. Además, si los pacientes que tienen el sistema inmune decaído (que se
hayan sometido a trasplante de médula ósea o trasplante de órganos sólidos) son infectados
por el VSR que causa neumonía, la probabilidad de que se produzca la muerte es de un 50%.
4. Influenza Estacional
La influenza estacional es una infección viral aguda causada por un virus de influenza. Los
virus de influenza tipo A se dividen además en subtipos de acuerdo a las clases y
combinaciones de proteínas superficiales virales. Entre muchos subtipos de virus de influenza
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Panel Respiratorio AllplexTM 1
A, los subtipos H1N1 y H3N2 son los más recientes que están circulando entre los seres
humanos. Los virus de influenza circulan en todo el mundo. Los casos de virus de influenza
tipo C ocurren con mucha menor frecuencia que los de tipo A y B. Esa es la razón por la cual
solamente los virus de influencia A y B están incluidos en las vacunas de influenza estacional.
Las epidemias de influenza ocurren cada año en otoño y en invierno en las regiones
templadas. Las enfermedades causan hospitalizaciones y muertes, principalmente entre
grupos de alto riesgo (infantes, personas mayores o enfermos crónicos). En todo el mundo,
estas epidemias anuales causan cerca de tres a cinco millones de casos de enfermedades
graves, y aproximadamente de 250.000 a 500.000 muertes. La mayoría de muertes asociadas
a la influenza en países industrializados se presentan en las personas de 65 años o más.
5. Subtipo H1N1 del virus de Influenza A de origen porcino (H1pdm09)
El H1N1, un subtipo del virus de influenza A, es la causa más común de influenza (gripe) en los
seres humanos. Algunas cepas de H1N1 son endémicas y también son responsables de una
pequeña parte de todas las enfermedades similares a la influenza y de una gran parte de toda
la influenza estacional. Por ejemplo, en 2006, las cepas H1N1 causaron aproximadamente la
mitad de todas las infecciones humanas de gripe. Otras cepas de H1N1 son endémicas en
cerdos (influenza porcina) y en aves (influenza aviar). En junio de 2009, la Organización
Mundial de la Salud (OMS) declaró que una nueva cepa de origen porcino H1N1 era la
responsable de la pandemia de gripe de 2009 y elevó el nivel de alerta a la fase 6; esta era la
primera pandemia global desde la gripe de Hong Kong de 1968. Esta cepa es denominada
comúnmente como “gripe porcina” por los medios públicos de comunicación. Se descubrió que
el origen porcino H1pdm09 aislado de los pacientes en Estados Unidos estaba compuesto de
elementos genéticos de cuatro virus de gripe distintos - influenza en Norteamérica y México,
influenza aviar de Norteamérica, influenza humana y el virus de la influenza porcina encontrado
por lo general en Asia y en Europa: “una mezcla inusualmente mestiza de secuencias
genéticas”. Esta nueva cepa parece ser el resultado de un intercambio de virus de influenza
humana y porcina, en todas las cuatro diferentes cepas del subtipo H1N1.
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Panel Respiratorio AllplexTM 1
REACTIVOS
Los reactivos contenidos en un kit son suficientes para 50 reacciones.
Información de pedido ( RP9801Y)
Panel Respiratorio AllplexTM 1
Símbolo Contenido Volumen Descripción
5X RP1 MOM 500 μL
Mezcla de Oligos MuDT (MOM):
- Reactivo para la amplificación y detección
Enzima para tiempo real en un
solo paso 200 μL
Mezcla de enzimas para la RT-PCR en un solo paso.
Buffer 5X para tiempo real en un
solo paso 500 μL
Buffer para RT-PCR en un paso – Buffer que contiene dNTPs.
RP1 PC 80 μL Control Positivo (PC):
- Mezcla de patógenos y clones de IC
RP-V IC 1000 μL Control Interno Exógeno (IC) para el Panel Respiratorio Allplex 1, 2, y 3
Agua libre de RNasas
1.000 μL
Control Negativo (NC) grado PCR de
calidad ultrapura:
- Agua esterilizada como control negativo
Manual de usuario
AllplexTM es una marca registrada de Seegene Inc.
MANEJO Y ALMACENAMIENTO
Todos los componentes del Panel Respiratorio 1 AllplexTM deben almacenarse a -20° C.
Todos los componentes son estables hasta la fecha de caducidad marcada en la etiqueta. El
congelamiento y descongelamiento repetido debe evitarse ya que podría disminuir la
10 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
sensibilidad. Si los reactivos serán usados de manera intermitente, deberán almacenarse en
alícuotas.
MATERIAL REQUERIDO NO INCLUIDO
Guantes desechables libres de polvo (látex o nitrilo).
Pipetas (ajustables) y puntas estériles.
Microcentrífuga para tubos de 1.5 ml.
Kit para aislamiento de ácidos nucleicos.
Máquina de hielo.
Centrífuga de mesa.
Agitador vórtex.
Equipo para PCR en tiempo real CFX-96TM (Bio-Rad).
Tiras de 8 tubos de bajo perfil de 0.2 ml sin tapas (color blanco, No. Cat. TLS0851, Bio-Rad)
Tiras de 8 tapas planas de grado óptico (No. Cat. TCS0803, Bio-Rad)
Plato de 96 pozos, pozo blanco. (cat. No. HSP-9655, Bio-Rad)
11 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
PROTOCOLO
1. Toma de muestra, almacenamiento y transporte
Nota: Todas las muestras tienen que ser tratadas como materiales potencialmente infecciosos.
Sólo las muestras que sean recogidas, transportadas y almacenadas y atiendan estrictamente
las siguientes normas e instrucciones, serán permitidas:
Nota: Para garantizar una alta calidad de las muestras, se deben transportarse lo más
rápidamente posible. Las muestras tienen que ser transportadas en las condiciones de
temperatura indicadas.
A. Toma de muestra
Aspirado nasofaríngeo, hisopado nasofaríngeo, lavado broncoalveolar
Las muestras de aspirado nasofaríngeo, hisopado nasofaríngeo, y el lavado broncoalveolar
son examinadas rutinariamente para patógenos respiratorios comunes.
La obtención de las muestras puede ser difícil en algunos pacientes. En tales casos, el
hisopado nasofaríngeo puede recolectarse simple y eficientemente con el hisopo de nylon
(COPAN, Italia) y en el medio universal de transporte (UTM).
Manufacturer Specimen collection device Cat. No.
COPAN ESwab 482CE
COPAN ENAT PM 2ML PERNASAL APPLICATOR 606CS01P
COPAN UTM con hisopos flocados 360C / 305C
DIAGNOSTIC HYBRIDS UTM con hisopo flocado de minipunta flexible
403C / 406C
Nota: Recomendaciones del kit de ácidos nucleicos para el MICROLAB NIMBUS IVD o MICROLAB STARlet. SE RECOMIENDA ESPECIALMENTE SEGUIR LAS SIGUIENTES INSTRUCCIONES DEL FABRICANTE. 1. Utilice el kit STARMag 96 para tejidos o para virus para muestras clínicas tomadas en UTM. 2. Utilice el kit STARMag 96 para tejidos para muestras clínicas tomadas en ESwab. 3. Utilice el kit STARMag 96 para virus para muestras clínicas tomadas con ENAT.
B. Almacenamiento y transporte de muestras
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Panel Respiratorio AllplexTM 1
Muestra
Almacenamiento y Transporte
Nota Temperatura Duración*
Aspirado Nasofaríngeo
2~8°C. 3 días.
- El desempeño podrá afectarse
por el almacenamiento
prolongado de las muestras.
- Las muestras deben ceñirse a
las instrucciones locales y
nacionales para el transporte de
material patogénico.
Hisopado Nasofaríngeo
Lavado broncoalveolar
* Duración: Muestras tomadas de la prueba antes del periodo.
2. Aislamiento de ácidos nucleicos
Diversos fabricantes ofrecen kits para aislamiento de ácidos nucleicos. Use el protocolo
correcto de acuerdo al protocolo del fabricante. Los siguientes kits han sido validados para uso
con este kit.
A. Control Interno
Nota: IC está incluido en el kit para permitir a los usuarios confirmar no solamente el
procedimiento de extracción de ácidos nucleicos sino también identificar cualquier inhibición de la
RT-PCR.
Se deben añadir 10 μL de RP-V IC a cada muestra antes del aislamiento de ácidos nucleicos.
Cuando use este producto con el kit del Panel Respiratorio AllplexTM 4, debe agregar 10 μL
de RP-V IC y 10 μL de RP-B IC a cada muestra antes del aislamiento de ácidos nucleicos.
B. Sistema automatizado para el aislamiento de ácidos nucleicos
B-1. MICROLAB NIMBUS IVD
Nota: Por favor use las muestras y los volúmenes de elución como se indica abajo. Para todos
los demás, refiérase al protocolo del fabricante.
13 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
Sistema automatizado para el aislamiento
Fabricante Cat. No. Vol. recomendado
MICROLAB NIMBUS IVD Hamilton 65415-02* -
STARMag96 Virus Seegene 744800.4.205875 Muestra: 600 µL
Elución: 100 µL
Cartucho para virus STARMag 48 X 8
Seegene 744800.4.VC384 Muestra: 600 µL
Elución: 100 µL
STARMag 96 Tejido Seegene 744300.4.205875 Muestra: 450 µL
Elución: 100 µL
Cartucho para tejidos STARMag 48 X 8
Seegene 744300.4.TC384 Muestra: 450 µL
Elución: 100 µL
* Si desea comprar este producto a Seegene Inc., por favor utilice este número de Cat.
B-1. MICROLAB STARlet
Nota: Por favor use las muestras y volúmenes de elución recomendados como se indica abajo.
Para todos los demás refiérase al protocolo del fabricante.
Sistema de aislamiento automatizado
Fabricante Cat No. Vol. recomendado
MICROLAB STARlet Hamilton 173000-075* -
STARMag 96 Virus Seegene 744800.4.205875 Muestra: 600 µL
Elución: 100 µL
STARMag 96 Tejido Seegene 744300.4.205875 Muestra: 450 µL
Elución: 100 µL
* Si desea comprar este producto a Seegene Inc., por favor utilice este número de Cat.
14 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
3. Preparación de la RT-PCR en tiempo real en un solo paso.
Nota: Se deben usar los tubos y tapas correctas (véase MATERIAL REQUERIDO NO
INCLUIDO).
Nota: Se deben usar puntas con filtro resistente a aerosoles y guantes ajustados durante la
preparación de las reacciones RT-PCR de un solo paso. Preste cuidado especial para prevenir la
contaminación cruzada.
Nota: Descongele completamente los reactivos sobre hielo.
Nota: Prepare todas las reacciones sobre hielo para minimizar el riesgo de degradación del ARN.
Nota: Centrifugue brevemente los tubos de reactivos para remover gotas del interior de la tapa.
Nota: Los pasos A – D se procesan se procesan automáticamente en el MICROLAB
NIMBUS IVD y MICROLAB STARlet. Remítase a cada manual de operación.
A. Prepare la Mastermix de la RT-PCR en un solo paso
5 µL 5X RP1 MOM
5 µL Agua libre de RNasa
5 µL Buffer 5X para tiempo real en un solo paso
2 µL Enzima para tiempo real en un solo paso
17 µL Volumen total de Mastermix de RT-PCR en un solo paso
Nota: Calcule la cantidad necesaria de cada reactivo requerida según el número de reacciones
(muestras + controles).
B. Mezcle por inversión el tubo 5 veces o haga un vórtex rápido, y centrifugue brevemente.
C. Alicuote 17μL de Mastermix de RT-PCR en un solo paso en los tubos de PCR.
D. Adicione 8μL de cada ácido nucleico en el tubo que contiene la alícuota de Mastermix de RT-
PCR en un solo paso.
17 μL Mastermix de RT-PCR en un solo paso
8 μL Ácido nucleico de la muestra.
25 μL Volumen total de la reacción.
E. Cierre la tapa y centrifugue brevemente los tubos de PCR.
15 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
F. Verifique que el líquido que contiene todos los componentes de la PCR este en el fondo de
cada tubo de PCR. Si no es así, centrifugue nuevamente a un rpm más alto por un mayor
tiempo.
Nota: Los tubos de PCR deben ser centrifugados antes de iniciar la reacción de PCR. Esto
fuerza a que el líquido vaya al fondo y a eliminar burbujas de aire.
Correcto Incorrecto
Nota: Use una punta nueva estéril para cada muestra.
Nota: Para el Control Negativo (NC), use 8µL de agua libre de RNasa en lugar de ácido
nucleico de muestra.
Nota: Para el Control Positivo (PC), use 8μL de RP1 PC.
Nota: Por favor ser cuidadoso de no contaminar la Mastermix de RT-PCR en un solo paso ni las
muestras con el Control Positivo.
Nota: Los tubos de PCR deben mezclarse y centrifugarse antes de iniciar la reacción de PCR.
Asegúrese que el líquido que contiene todos los componentes de la reacción de la PCR este en
el fondo de cada tubo de PCR.
Nota: No marque la tapa de los tubos de reacción dado que la fluorescencia es detectada a
través de la tapa del tubo.
Burbuja
16 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
CONFIGURACIÓN DEL EQUIPO PARA PCR EN TIEMPO REAL Y ANÁLISIS DE
RESULTADOS
1. Sistema para PCR en tiempo real CFX96TM (Bio-Rad)
1.1. Configuración del Equipo para PCR en tiempo real
Nota: La configuración del experimento en el Sistema para PCR en tiempo real CFX96TM (Bio-
Rad) puede dividirse en tres pasos: Configuración del Protocolo, Configuración de la Placa, Inicio
del Ensayo.
A. Configuración del Protocolo
1) En menú principal, seleccione File New Protocol para abrir la ventana de Protocol
Editor.
Fig. 1. Configuración del Protocolo. Cree un Nuevo protocolo o cargue un protocolo existente
para el experimento
2) En Protocol Editor, defina el perfil térmico como se menciona a continuación:
Nota*: Lectura de placa en el segmento 4 y 5. Fluorescencia detectada a 60°C y 72°C.
17 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
Fig. 2. Editor del Protocolo
3) Haga clic sobre Sample Volume para modificar directamente el valor a 25 μL.
4) Haga clic en OK y guarde el protocolo para abrir la ventana de Experiment Setup.
Fig. 3. Configuración del Experimento: Protocolo
B. Configuración de la Placa
1) En la pestaña Plate en Experiment Setup, haga clic en Create New para abrir la ventana de
Plate Editor para crear una nueva placa.
18 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
Fig. 4. Editor de Placa. Cree una nueva placa
2) Haga clic en Select Fluorophores para indicar los fluoróforos (FAM, HEX, Cal Red 610, y
Quasar 670) que serán utilizados en el experimento y haga clic en OK.
Fig. 5. Seleccionar Fluróforos (FAM, HEX, Cal Red 610 y Quasar 670)
3) Seleccione los pozos deseados y luego su tipo de muestra del menú desplegable Sample
Type.
- Unknown: Muestras clínicas
- Control Negativo
- Control Positivo
19 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
4) Haga clic en las casillas de verificación apropiadas (FAM, HEX, Cal Red 610 y Quasar 670)
para especificar los fluoróforos que se detectarán en los pozos seleccionados.
5) Digite el nombre de la muestra en Sample Name y presione la tecla enter.
6) En Settings del menú principal del Plate Editor, elija el tamaño de la placa en Plate Size (96
wells) y el tipo de placa en Plate Type (BR White).
Fig. 6. Plate Setup
7) Haga clic en OK para guardar la nueva placa.
8) Se devolverá a la ventana de Experiment Setup.
Fig. 7. Configuración del Experimento: Placa
20 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
C. Inicio del ensayo
1) De la pestaña Start Run en Experiment Setup, haga clic en Close Lid para cerrar la tapa del
equipo.
Fig. 8. Cierre de Tapa
2) Haga clic en Start Run.
3) Guarde el archivo del ensayo en Mis Documentos o en la carpeta que usted designe. Ingrese
el nombre del archivo, haga clic en SAVE, y el ensayo iniciará.
1.2. Análisis de datos
A. Cree carpetas para la exportación de datos
1) Cree una carpeta para guardar los resultados de la curva de amplificación.
2) El nombre de la carpeta podrá ser designado por el usuario (Para la función ‘Seegene
Export’, las Carpetas “QuantStep4” y “QuantStep5” se crean automáticamente para guardar
los datos de cada curva de amplificación en la carpeta creada por el usuario).
21 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
B. Pre-ajustes para el Análisis de Datos en el CFX96TM
1) Después de la prueba, haga clic en la pestaña de Cuantificación para confirmar los resultados
de curva de amplificación.
Fig. 9. Resultados de la curva de amplificación
2) Seleccione No Baseline Subtraction del Modo de Análisis del menú Settings.
Fig. 10. Sin sustracción de línea de referencia
22 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
3) Seleccione Seegene Export del menú Tools.
Fig. 11. Exportación Seegene
4) Elija una ubicación para guardar los datos y haga clic en OK.
Fig. 12. Exportación Seegene a la carpeta designada
23 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
C. Ajustes para el análisis de datos en el Seegene Viewer
1) Abra el programa Seegene Viewer, y haga clic en Open para encontrar el archivo guardado en
la carpeta “QuantStep4”.
Fig. 13. Seegene Viewer
2) Después de abrir la carpeta de resultados, seleccione el kit de prueba del menú PRODUCT.
Fig. 14. Ajustes para el análisis de datos en Seegene Viewer
Nota: Por favor verifique el tipo de tubo al seleccionar el kit de prueba (banda de 8 o
placa de 96).
24 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
3) Verifique el resultado de cada pozo.
Fig. 15. Resultados de la prueba en el CFX96TM mediante el Seegene Viewer
4) Abreviaciones en el informe.
Analito Seegene Viewer
Flu A-H1pdm09 pdm09
Flu A-H1 H1
Flu A-H3 H3
25 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
RESULTADOS
1. Interpretación de Resultados
Fluoróforo
Analito
Gráfica 1 Gráfica 2
FAM VSR A Flu A
HEX VSR B Flu B
Cal Red 610 Flu A-H1pdm09 Flu A-H1
Quasar 670 IC Flu A-H3
Valor Ct Resultado
≤ 42 Detectado (+)
> 42 or N/A No detectado (-)
Resultado Objetivo* Resultado
IC Interpretación
Gráfica 1 Gráfica 2
+ -
+
Ácido nucleico objetivo, Detectado
- +
+ +
+ -
-
Ácido nucleico objetivo, Detectado **
- Virus respiratorios adicionales que no fueron detectados pueden estar presentes.
- +
+ +
- - + Ácido nucleico objetivo, No detectado
26 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
- - -
Inválido***
- Señal débil o negativa del control interno es
indicativa de una toma de muestra inadecuada, o
errores en el procedimiento o presencia de
inhibidores.
- Repita la prueba de aislamiento de ácido nucleico
utilizando otra alícuota de la muestra original.
- Si el mismo resultado se muestra en el ácido
nucleico re-aislado, por favor diluya la muestra
(1/3~1/10) en solución salina y repita el aislamiento
(después de añadir RP-V IC) y RTPCR.
* Si se detecta solamente el virus de Influenza A, pero no el subtipo de virus de Influenza A, es
debido a que el subtipo no puede ser identificado por este producto o a que la carga viral de la
muestra es muy bajo. El subtipo del virus de Influenza A podrá ser identificado por medio de la
secuenciación. Si solo se detecta el subtipo de virus de Influenza A, la muestra contiene una
carga viral muy baja, por ende se deberá concluir que el resultado ha detectado el subtipo de
virus de Influenza A.
** La detección del Control Interno en el canal de detección del Quasar 670 no es requerida para
resultados positivos de patógenos objetivo. Una carga elevada de otro analito puede conducir a
una reducción o ausencia de la señal del Control Interno.
*** Si no se observa ninguna de las señales incluyendo el Control Interno, véase Solución de
Problemas TROUBLESHOOTING.
27 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
2. Aplicación a Muestras Clínicas
Muestra 1
Muestra 2
Muestra 3
Muestra
FAM (Ct) HEX (Ct) Cal Red 610 (Ct) Quasar 670 (Ct) Auto
interpretación VSR A Flu A VSR B Flu B Flu A-
H1pdm09
Flu A-
H1
Flu A-
H3 IC
1 N/A 33.82 N/A N/A N/A 33.65 N/A 31.21 Flu A, Flu A-H1
2 N/A N/A N/A 21.42 N/A N/A N/A 33.89 Flu B
3 N/A 28.90 N/A N/A N/A N/A 26.23 36.91 Flu A, Flu A-H3
28 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
SOLUCIÓN DE PROBLEMAS
Panel Respiratorio AllplexTM 1
OBSERVACIONES CAUSAS PROBABLES SOLUCIÓN
No se observa señal Los fluoróforos para análisis
de datos no cumplen con el
protocolo.
Seleccione los fluoróforos correctos para el
análisis de datos y exporte los datos de nuevo. No
hay necesidad de repetir la prueba en este caso.
Ajustes incorrectos del
termociclador en tiempo real
Verifique las condiciones del ciclo térmico y repita
la prueba bajo los ajustes correctos.
Almacenamiento incorrecto o
posterior a la fecha de
vencimiento del kit de la
prueba.
Verifique las condiciones de almacenamiento
(Véase página 10) y la fecha de vencimiento
(remítase a la etiqueta) del kit de la prueba y
utilice un nuevo kit, si es necesario.
Fallo en el aislamiento de
ácidos nucleicos
Una ausencia de señal de IC puede indicar la
pérdida de ácidos nucleicos durante su
aislamiento. Asegúrese de utilizar el método de
aislamiento recomendado.
Si es debido a los inhibidores, re-aísle la muestra
original o diluya la muestra (1/3~1/10) en solución
salina y repita la prueba desde el paso de
aislamiento.
No se observa señal
de Control Interno
Alta carga del ácido nucleico
del patógeno
Si se observa la señal del patógeno objetivo pero
no la del IC, entonces la amplificación del IC
podrá haberse inhibido por la alta carga del
patógeno objetivo. Con el fin de confirmar la señal
de IC, diluya la muestra (1/3~1/10) en solución
salina y repita la prueba desde el paso de
aislamiento.
Presencia de inhibidores de
RT-PCR
Diluya la muestra (1/3~1/10) en solución salina y
repita la prueba desde el paso de aislamiento.
Se observan señales
objetivo o falsos
positivos putativos
en el Control
Negativo
Contaminación Descontamine todas las superficies y los equipos
con hipoclorito de sodio y etanol. Utilice
solamente puntas con filtro durante el
procedimiento y cambie las puntas entre cada
tubo. Repita todo el procedimiento del aislamiento
de ácidos nucleicos con un nuevo set de
29 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
Panel Respiratorio AllplexTM 1
OBSERVACIONES CAUSAS PROBABLES SOLUCIÓN
reactivos.
No se observan
señales o falsos
negativos putativos
en el Control
Positivo
Error en la toma de muestras Verifique el método de toma de muestras y tome
de nuevo la muestra.
Almacenamiento incorrecto
de la muestra
Tome de nuevo la muestra y repita todo el
procedimiento. Asegúrese de que la muestra sea
almacenada, según las recomendaciones.
Error en el aislamiento de
ácido nucleico
Verifique el procedimiento de aislamiento de
ácidos nucleicos así como la concentración de
ácidos nucleicos, y re-aísle el ácido nucleico.
Error en la adición de ácido
nucleico a los tubos de PCR
correspondientes
Verifique los números de muestra de los tubos
que contienen ácido nucleico y asegúrese de
adicionar ácido nucleico en el tubo correcto de
PCR y repita cuidadosamente la prueba, si es
necesario.
Presencia de inhibidores Diluya la muestra (1/3~1/10) en solución salina y
repita la prueba desde el paso de aislamiento.
Mezclado de la PCR
incorrecto
Confirme que todos los componentes sean
adicionados al mezclado de la RTPCR (La
sensibilidad está comprometida con el pre-mix
compuesto). Todos los reactivos deben ser
homogeneizados y girados hacia abajo antes de
ser utilizados.
Solo se detecta
el subtipo del
virus de
Influenza A pero
no el virus de
Influenza A
Carga baja del ácido
nucleico del patógeno
Los resultados se deberían interpretar de acuerdo
con la tabla de interpretación proporcionada, pero
se puede realizar una nueva prueba con un
volumen disminuido de agua libre de RNasa y un
mayor volumen de ácido nucleico.
Picos en los ciclos
de la curva de
amplificación
Burbuja en el tubo de PCR Centrifugue el tubo de PCR antes de iniciar.
30 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
RENDIMIENTO
1. Especificidad
La alta especificidad del Panel Respiratorio AllplexTM 1 está asegurada por los oligos
diseñados específicamente para los blancos de interés bajo las condiciones definidas de
reacción. Se evaluó reactividad cruzada del Panel respiratorio AllplexTM 1 con 84 patógenos
diferentes, y en la amplificación RT-PCR y detección se identificaron únicamente los blancos
específicos.
No. Organismo Número de Cepa
Resultado
1 Virus de la influenza humana A (H3N2) ATCC VR-544 Flu A, Flu A-H3 Detectado
2 Virus de la influenza humana A (H3N2) ATCC VR-547 Flu A, Flu A-H3 Detectado
3 Virus de la influenza humana A (H3N2) ATCC VR-822 Flu A, Flu A-H3 Detectado
4 Virus de la influenza humana A (H3N2) ATCC VR-810 Flu A, Flu A-H3 Detectado
5 Virus de la influenza humana A (H1N1) ATCC VR-546 Flu A, Flu A-H1 Detectado
6 Virus de la influenza humana A (H1N1) ATCC VR-95 Flu A, Flu A-H1 Detectado
7 Virus de la influenza humana A (H1N1) ATCC VR-97 Flu A, Flu A-H1 Detectado
8 Virus de la influenza humana A (H1N1) ATCC VR-219 Flu A, Flu A-H1 Detectado
9 Virus de la influenza humana A (H1N1) ATCC VR-98 Flu A, Flu A-H1 Detectado
10 Virus de la influenza humana A (H1N1) ATCC VR-825 Flu A, Flu A-H1 Detectado
11 Virus de la influenza humana A (H1pdm09)
ATCC VR-1736 Flu A, Flu A-H1pdm09 Detectado
12 Virus de la influenza humana B ATCC VR-101 Flu B Detectado
13 Virus de la influenza humana B ATCC VR-102 Flu B Detectado
14 Virus de la influenza humana B ATCC VR-103 Flu B Detectado
15 Virus de la influenza humana B ATCC VR-295 Flu B Detectado
16 Virus de la influenza humana B ATCC VR-296 Flu B Detectado
17 Virus de la influenza humana B ATCC VR-823 Flu B Detectado
18 Virus de la influenza humana B ATCC VR-523 Flu B Detectado
19 Virus de la influenza humana B ATCC VR-786 Flu B Detectado
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Panel Respiratorio AllplexTM 1
No. Organismo Número de Cepa
Resultado
20 Virus sincitial respiratorio humano A ATCC VR-26 VSR A Detectado
21 Virus sincitial respiratorio humano B ATCC VR-955 VSR B Detectado
22 Metapneumovirus humano Korean isolate No Detectado
23 Adenovirus humano C tipo 1 ATCC VR-1 No Detectado
24 Adenovirus humano C tipo 2 KBPV VR-58 No Detectado
25 Adenovirus humano B tipo 3 ATCC VR-3 No Detectado
26 Adenovirus humano E tipo 4 ATCC VR-1572 No Detectado
27 Adenovirus humano C tipo 5 KBPV VR-61 No Detectado
28 Adenovirus humano D tipo 8 ATCC VR-1368 No Detectado
29 Adenovirus humano A tipo 18 ATCC VR-1095 No Detectado
30 Adenovirus humano D tipo 23 ATCC VR-1101 No Detectado
31 Coronavirus humano 229E ATCC VR-740 No Detectado
32 Coronavirus humano NL63 Korean isolate No Detectado
33 Coronavirus humano OC43 ATCC VR-1558 No Detectado
34 Rinovirus humano A8 ATCC VR-488 No Detectado
35 Rinovirus humano A16 ATCC VR-283 No Detectado
36 Rinovirus humano A90 ATCC VR-1291 No Detectado
37 Rinovirus humano B42 ATCC VR-338 No Detectado
38 Rinovirus humano B14 ATCC VR-284 No Detectado
39 Rinovirus humano C Korean isolate No Detectado
40 Bocavirus humano Korean isolate No Detectado
41 Virus Parainfluenza humana 1 ATCC VR-1380 No Detectado
42 Virus Parainfluenza humana 2 ATCC VR-92 No Detectado
43 Virus Parainfluenza humana 3 ATCC VR-93 No Detectado
44 Virus Parainfluenza humana 4A ATCC VR-1378 No Detectado
45 Virus Parainfluenza humana 4B ATCC VR-1377 No Detectado
46 Coxsackievirus humano A9 KBPV VR-11 No Detectado
47 Coxsackievirus humano B1 KBPV VR-13 No Detectado
32 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
No. Organismo Número de Cepa
Resultado
48 Coxsackievirus humano B2 KBPV VR-14 No Detectado
49 Coxsackievirus humano B3 KBPV VR-15 No Detectado
50 Coxsackievirus humano B4 KBPV VR-16 No Detectado
51 Coxsackievirus humano B5 KBPV VR-17 No Detectado
52 Coxsackievirus humano B6 KBPV VR-18 No Detectado
53 Echovirus humano 6 KBPV VR-19 No Detectado
54 Echovirus humano 7 KBPV VR-20 No Detectado
55 Echovirus humano 9 ATCC VR-39 No Detectado
56 Echovirus humano 11 KBPV VR-22 No Detectado
57 Echovirus humano 22 (Parechovirus) KBPV VR-23 No Detectado
58 Echovirus humano 25 KBPV VR-24 No Detectado
59 Echovirus humano 30 KBPV VR-25 No Detectado
60 Echovirus humano 34 (Cox A24 C) ATCC VR-583 No Detectado
61 Enterovirus humano 70 (D) ATCC VR-836 No Detectado
62 Enterovirus humano 71 (A) ATCC VR-784 No Detectado
63 Poliovirus KBPV VR-74 No Detectado
64 Legionella pneumophila ATCC 41782 No Detectado
65 Streptococcus pneumoniae ATCC BAA-255D No Detectado
66 Bordetella pertussis ATCC BAA-589D No Detectado
67 Haemophilus influenzae ATCC 51907D No Detectado
68 Mycoplasma pneumoniae ATCC 29342 No Detectado
69 Chlamydophila pneumoniae Korean isolate No Detectado
70 Klebsiella pneumoniae ATCC 700721D-5 No Detectado
71 Klebsiella oxytoca ATCC 700324D No Detectado
72 Serratia macrescens ATCC 27137D-5 No Detectado
73 Enterobacter cloacae KCTC 13047 No Detectado
74 Enterobacter aerogenes ATCC 15038D No Detectado
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Panel Respiratorio AllplexTM 1
No. Organismo Número de Cepa
Resultado
75 Proteus mirabilis ATCC 12453D No Detectado
76 Pseudomonas aeruginosa ATCC 47085D No Detectado
77 Pseudomonas fluorescens KCTC 49642 No Detectado
78 Candida albicans ATCC 14053 No Detectado
79 Staphylococcus aureus ATCC 700699D-5 No Detectado
80 Streptococcus mitis ATCC 3556 No Detectado
81 Streptococcus agalactiae ATCC BAA-611D No Detectado
82 Fusobacterium nucleatum ATCC 25586D-5 No Detectado
83 Herpesvirus humano 1 ATCC VR-260 No Detectado
84 Herpesvirus humano 2 ATCC VR-734 No Detectado
† Para evaluar la reproducibilidad de los resultados, el experimento se repitió tres veces.
2. Sensibilidad
Con el fin de determinar la sensibilidad del Panel Respiratorio AllplexTM 1, se realizó una
dilución seriada estándar de ADN blanco clonado desde 105 a 100 copias/reacción y se
analizó con el Panel Respiratorio AllplexTM 1. El límite de detección del Panel Respiratorio
AllplexTM 1 fue 100 copias/reacción.
3. Reproducibilidad
Se realizaron pruebas de reproducibilidad en 5 momentos diferentes en el transcurso de 5
días, por 3 experimentadores diferentes, y con 3 lotes de producto distintos. Se obtuvieron los
mismos resultados en todas las pruebas, confirmando la reproducibilidad del Panel
Respiratorio AllplexTM 1.
34 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
REFERENCIAS
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pathogenesis.] Clinical Microbiology Reviews. (2004) 17: 390-412
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sensitivity issues with a real-time universal 16S rRNA PCR.] Journal of Clinical Microbiology. (2000) 38:
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3. D. H. Lee. [TOCE: Innovative Technology for High Multiplex Real-time PCR.] Seegene Bulletin. (2012) 1: 5-
10
4. H. K. Chang, J. H. Park, M. S. Song, T. K. Oh, S. Y. Kim, C. J. Kim, H. Kim, M. H. Sung, H. S. Han, Y. S.
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oligonucleotide system for the multiplex detection of respiratory viruses and SNP genotyping of CYP2C19
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Chaisingh, P. Chamnanpood, S. Chutinimitkul, A. Theamboonlers, and Y. Poovorawan. [Typing (A/B) and
subtyping (H1/H3/H5) of influenza A viruses by multiplex real-time RT-PCR assays.] Journal of Virological
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[Evaluation of a multiplex real-time reverse transcriptase PCR assay for detection and differentiation of
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A and B during the 2001-2002 influenza season in Israel.] Journal of Clinical Microbiology. (2005) 43:
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9. M. T. Coiras, J. C. Aguilar, M. L. Garcia, I. Casas, and P. Perez-Brena. [Simultaneous detection of fourteen
respiratory viruses in clinical specimens by two multiplex reverse transcription nested-PCR assays.] Journal
of Medical Virology. (2004) 72: 484-495
10. M. T. Coiras, P. Perez-Brena, M. L. Garcia, and I. Casas. [Simultaneous detection of influenza A, B, and C
viruses, respiratory syncytial virus, and adenoviruses in clinical samples by multiplex reverse transcription
nested-PCR assays.] Journal of Medical Virology. (2003) 69: 132-144
35 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
11. M. W. Syrmis, D. M. Whiley, M. Thomas, I. M. Mackay, J. Williamson, D. J. Siebert, M. D. Nissen, and T. P.
Sloots. [A sensitive, specific, and cost-effective multiplex reverse transcriptase-PCR assay for the detection
of seven common respiratory viruses in respiratory samples.] Journal of Diagnostics. (2004) 6: 125-131
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Chaisingh, P. Chamnanpood, S. Chutinimitkul, A. Theamboonlers, and Y. Poovorawan. [Detection of
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Ginevra, and F. Freymuth. [Development of three multiplex RT-PCR assays for the detection of 12
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20. http://www.answers.com/topic/common-cold
21. http://www.wikipedia.org
36 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
SIMBOLOGÍA
Explicación de los símbolos utilizados en el manual y en las etiquetas.
Símbolo Explicación
Dispositivo médico de diagnóstico In vitro
Uso exclusivo en investigación
Número de lote
Número de catálogo
Fecha de vencimiento
Límite de temperatura de almacenamiento
Mezcla de oligonucleotidos para amplificación y detección
Mezcla de enzimas
Buffer
Agua libre de RNasa
Control Positivo (PC)
Control Interno (IC)
Consulte instrucciones de uso
Fabricante
Fecha de fabricación
37 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
Representante autorizado en la Comunidad Europea
Precaución
38 10/2015 V1.03
Panel Respiratorio AllplexTM 1
INFORMACIÓN DE PEDIDO
Cat. No. Producto Tamaño
Serie AllplexTM
RP9801Y Panel Respiratorio AllplexTM 1 50 rxns
RP9801X Panel Respiratorio AllplexTM 1 100 rxns*
RP9802Y Panel Respiratorio AllplexTM 2 50 rxns
RP9802X Panel Respiratorio AllplexTM 2 100 rxns*
RP9601Y Panel Respiratorio AllplexTM 3 50 rxns
RP9601X Panel Respiratorio AllplexTM 3 100 rxns*
RP9803Y Panel Respiratorio AllplexTM 4 50 rxns
RP9803X Panel Respiratorio AllplexTM 4 100 rxns*
* Para su uso exclusivo con MICROLAB NIMBUS IVD y MICROLAB STARlet
Serie AnyplexTM
RV7G01Y Detección AnyplexTM II RV16 (V1.1) 50 rxns
RV7G01X Detección AnyplexTM II RV16 (V1.1) 100 rxns*
RB7500Y Detección AnyplexTM II RB5 50 rxns
RB7500X Detección AnyplexTM II RB5 100 rxns*
RV7310X Detección en tiempo real de digitación AnyplexTM FluA/B (V1.1)
100 rxns
* Para su uso exclusivo con MICROLAB NIMBUS IVD y MICROLAB STARlet
Serie Seeplex®
RV3210 Detección Seeplex® RV7 50 rxns
RV6C00Y Detección Seeplex® RV12 ACE 50 rxns
RV6F00Y Detección Seeplex® RV15 ACE 50 rxns
RV6F01Y Detección Seeplex® RV15 OneStep ACE (V1.1) 50 rxns
RV6520X Seeplex® Influenza A/B OneStep Typing (V2.1) 100 rxns
PB1610Y Detección Seeplex® PneumoBacter ACE (V3.0) 50 rxns
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Panel Respiratorio AllplexTM 1
Productos accesorios
SG1701 Ribo_spin vRD (Kit de aislamiento de ARN/AND Viral) 50 preps
Sistemas automáticos de aislamiento
65415-02 MICROLAB NIMBUS IVD EA
173000-075 MICROLAB STARlet EA
744800.4.205875 STARMag 96 Virus 384T / 1 caja
744800.4.VC384 STARMag 48 X 8 Virus Cartridge kit 384T / 1 caja
744300.4.205875 STARMag 96 Tissue 384T / 1 caja
744300.4.TC384 STARMag 48 X 8 Tissue Cartridge kit 384T / 1 caja