PA/PSA
(Pemeriksaan Air dan Pemindahan bakteri Secara Aseptis)
PA
Tujuan Percobaan
Mampu menghitung jumlah koloni dalam air
Mampu menentukan growth rate dan doubling time pertumbuhan
koloni
Mampu membandingkan radius perkembangan mikroba dengan
desinfektan berbeda
Tinjauan Pustaka
Mikroorganisme Air
Persyaratan Standarisasi Kualitas Air (PP RI No. 20 thn
1990)
Persyaratan biologis
Persyaratan fisis
Persyaratan Kimia
Sifat Koloni
-Sifat Umum Koloni
-Sifat Khusus Koloni
Dalam medium padat
Dalam medium cair
Faktor yang Mempengaruhi Mikroorganisme
Temperatur
Medium
Potato Dextrose Agar (PDA)
Pengaruh sinar
Pengaruh mekanik
Faktor kimia
PH
Perhitungan Jumlah Koloni a. Perhitungan Dengan SPC
Standart Plate Count (SPC) digunakan untuk menemukan kepadatan
bakteri heterotrof dan fakultatif aerobe. Dalam percobaan ini
pengukuran secara empiris karena bakteri dapat membentuk koloni
rantai kelompok. Dasar SPC adalah membuat suatu seri pengenceran
bahan dengan kelipatan 10. Setelah inkubasi, dilihat jumlah koloni
tiap periode dapat digunakan coloni encounter yang dilengkapi
dengan register.Perhitungandan pencatatan koloni pada plate
dilakukan sesegera mungkin setelah periode inisampai selesai. Bila
perhitungan ditunda, plate harus disimpan pada suhu 5-10C dan tidak
boleh lebih dari 21 jam.
b. Perhitungan Manual
Perhitungan koloni secara manual dilakukan dengan menghitung
jumlah koloni terbanyak dan tersedikit. Sampel diencerkan hingga 2x
pengenceran, setelah waktu inkubasi, jumlah koloni dihitung secara
manual(dihitung biasa) jumlah koloni terbanyak dan tersedikit,
kemudian dicari rata-ratanya.
jumlah koloni dalam petridish = rata-rata jumlah koloni x luas
petridish x fp Keterangan: luas petridish = 63,585 cm2
fp = 102
Dengan rumus tersebut dapat diketahui jumlah koloni dalam
petridish.
Growth Rate dan Doubling Time
Cari referensi mengenai growth rate dan doubling time pada
mikroba
Desinfektan
Cari referensi dan jelaskan (sesuai dengan desinfektan yang
digunakan)
Sampel Air
Tempat, waktu, pengamatan, foto(bukti pengambilan sampel)
Metodologi Percobaan
Alat dan Bahan
Bahan:
- Sampel air
- Aquadest
- PDA
- Desinfektan
Alat:
- Beaker glass- Pipet
- Petri dish- Pengaduk
- Tabung reaksi- Kompor listrik
- Erlenmeyer- Koloni Counter
Cara Kerja
Langkah-langkah pendahuluan:
Menyiapkan petridish dan tabung reaksi yang sudah
disterilisasi.
Mengencerkan contoh (2x faktor pengenceran): mengambil 10 ml
contoh kemudian diencerkan 100 ml. Dan dari 100 ml itu diambil 10
ml lalu diencerkan lagi menjadi 100 ml.
3. Menyiapkan media: mengambil 3,9 gr PDA kemudian masukkan ke
dalam 80 ml aquadest kemudian dipanaskan hingga mendidih.
4. Membagi media ke dalam petridish dan tabung reaksi secara
merata.
Langkah-langkah percobaan PA:
Uji Koloni
Biarkan media dalam petridish sampai setengah padat kemudian
taburi dengan contoh yang sudah diencerkan secara merata ke
permukaan media menggunakan pipet tetes yang sudah
disterilisasi.
Simpan dalam ruang inkubasi dengan cara dibalik peletakannya,
amati dan hitung jumlah koloni setiap hari selama 3 hari.
Menghitung jumlah koloni terbanyak dan tersedikit (dihitung
biasa), kemudian dicari rata-rata jumlah koloni = ()
Jumlah koloni dalam petridish = rata-rata jumlah koloni x luas
petridish x fp Keterangan: luas petridish = 63,5825 cm2
fp = 102
Uji Desinfektan
Biarkan media dalam petridish memadat kemudian buat lubang kecil
pada tengah- tengah media tersebut. Kemudian teteskan contoh
desinfektan ke dalam lubang tersebut menggunakan pipet tetes.
Simpan dalam ruang inkubasi selama waktu yang ditentukan
(biasanya 2 hari). Mencatat radius pertumbuhan diukur dari lubang
yang dibuat (radius terjauh,terdekat, dan rata-rata). PSA
Tujuan Percobaan
Dapat menguasai teknik pemindahan bakteri dari suatu wadah ke
wadah lain
Memahami berbagai macam proses sterilisasi Tinjauan Pustaka
Sterilisasi Metode Sterilisasi
Autoclave
Oven
Cara Kimiawi
Sinar Ultraviolet
Pendidihan
Aspergillus Niger
Gambar mikroskopik
Kondisi tumbuh (temperatur, medium, faktor kimia, PH, aerob/
anaerob)
Ciri- ciri fisik
Aplikasi
Sampel Jamur
Gambar mikroskopik
Kondisi tumbuh (temperatur, medium, faktor kimia, PH, aerob/
anaerob)
Ciri- ciri fisik
Aplikasi
Metodologi Percobaan
Bahan dan Alat
Bahan :
Aspergillus niger
Sampel jamur Alat :
- Tabung reaksi- Gelas ukur
- Inokulum- Kompor listrik
- Beaker glass- Cawan petri
- Pipet tetes- Mikroskop
Cara Kerja
Langkah-langkah percobaan PSA:
1. Biarkan media dalam tabung reaksi memadat (untuk media
miring, sebelum memadatkedudukan tabung reaksi dibuat miring di
bawah 45, kemudian dibiarkan
sampai memadat).
Menyiapkan kawat osse, bunsen, dan HCl.
Mensterilkan kawat osse: panaskan kawat osse menggunakan bunsen
kemudian memasukkan ke larutan HCl kemudian panaskan kawat osse
lagi.
Memindahkan mikroorganisme dari biakan murni yang tersedia
menggunakan kawat osse yang sudah disterilisasi ke tabung
media.
Simpan di dalam ruang inkubasi selama waktu inkubasi yang
ditentukan.
Mengamati kenampakannya setelah waktu inkubasi.
