CONDITIILE DE TRANSPORTARE A INFECTIILOR SIST.RESPIRATORPrelevate: Exsudatul nazofaringean (tampon): tusa convulsiva, pneumonia, Singe Sputa Exsudatul nazal Picaturile Flugge prelevate pe placa tusita.Metode transport: Tusa convulsiva: Mediul Kuznetov (sol tampon fosfat, ph 7, 0.5% agar-agar, 0.2%carbune activat) Virusurile care sunt izolati pe culturi de celule sal embrioni de gaina se transporta in medii de penicilina, streptomicina, nistatina. Mediul de glicerina 30 % Solutie tampon fosfat Sol NaCl 3 % Bact anaerobi, Neiserii - Mediul Stuart (NaCl, agar-agar, tioglicita de Na, albastru de metileno)CERINTELE MEDIILOR DE CULTURA Sa asigure necesitatile nutritive si energetice ale bacteriilor Sa contine substantele principale care participa la crestere: O, N, C, vitamine, saruri) Umiditate optimala Temperatura optimala, ph contastant Sa fie izotonice, Sterile, Potential de oxido-reduce normal Vizcozitate normala Clasificarea:1. 2. Dupa provinientaa. Naturalab. Sinteticec. Semisintetice3. Dupa consistentaa. Lichideb. Solidec. Semisolide determinarea mobilitatii4. 5. Dupa compozitia chimicaa. Mesii uzuale pt bacterii nepretentioase. Sterilizarea autoclave 120, 20 min Apa peptonata Bulion peptonat Geloza gelatinab. complexei. medii elective (cresterea unor bacterii, sunt pretentioase) bulion-ser bulion-glucozat geloza-singe streptococi ser coagulat corinebacteriumii. medii selective (stimuleaza cresterea unor mi/o si inhiba cresterea altor) geloza-salina-srafilococi geloza-alcalina-vibrioni ploskirev-salmonela, shigelaiii. medii de imbogatire (selectiva), imbogatirea culturii patogene. Muller - escherihea Kaufman - salmonela Bulion selenit salmonela, shigella, Kitt-Tarozi anaerobi Apa peptonata alcalina vibrini holeraiv. Medii difrential-diagnostice (studiez o anumita proprietate) Endo : geloza+lactoza+fucsina+hiposulfit de Na Levin: geloza+lactoza+eozina+albastru de metilen Ploskirev:geloza+lactoza+rosu neturu+saruri de acizi biliari+verde de briliant Olkenitski v. Medii speciale pt anumite bacterii: Finn, Popescu, Lowenstein-Jensen tuberculozaINSAMINTARE:1. Geloza-singe a. Geloza lichifiata si racita pina la 45C repartizata in flacoaneb. Se aplica 5 % de singe defibrinat.c. Geloza se amesteza2. Geloze salina cu ou3. Mediul Hiss consta in geloza, glucid si indicator Andrade 4. Mediul Kligler: geloza+lactoza+glucoza+indicator+sulfat de Fe (detectarea H2S)5. Bulion peptonat: a. extras de carne se dizolvab. se aplica 10 g peptona si NaCl.c. Se fierbe, se raceste, se filtreaza si se toarna in eprubete.6. Geloza in panta7. Geloza semilichidaDETERMINAREA CMI (concentratia mnima de inhibitie)1. Intr-un sir de tuburi se face dilutia Antibioticului (256UA, 128UA, 64,321)2. Se asauga in fiecare tub mi/o cu exceptia celui martor. 3. Termostat.4. Rezultatul: CMI se determina in comparatie cu martorul METODA DIFUZOMETRICAComponente: rondele/discuri, antibiotic 6 diferite, mi/o1. Cutia petri este inoculata cu suspensia bacteriana2. In termostat 24h 37C3. Se aplica rondelele cu antibiotic4. Incubare 24h5. Diametrul zonei de inhibitie este comparat cu diametrul standart pt fiecare antibiotic. Valorile sub acest dimetro tulpina R si invers.DETERMINAREA AB IN UMORILE ORGANISMULUI1. Prelevarea probelor (LCR, singe) dupa 1 de administrare de AB2. Incubare 24 ore pt excreti AB3. In fiecare tub se aplica serul4. Aplicam tulpini infectate5. Incubare 24 h 6. CMI se determina in comparatie cu martorulBACTERIOFAGUL.APPELMAN in mediu lichidTitrarea: determ nr de fagi virulenti intr-o cultura.1. In tuburi cu bulion peptonat se adauga suspensie de mi/o si fag2. Incubare3. Se filtreaza 4. Resultate: dilutia max a fagului care inca inca mai provoaca liza bacteriilor (mediul clar)Scopul: Tratamentul maladiilor Fago-identificare - FagotipajMETODA OTTO, FURT, FISHERMetoda OTTO:1. Pe geloza se aplica mi/o, fagi.2. Incubare3. Daca se aflau fagi omologi bacteriilor are loc liza.Metoda FURT:1. Geloza se aplica mi/o, fagi2. Cutia se imparte in 4 sectoare, pe fiecare sector se aplica culturi.3. Incubare4. Lipsa cresterii intr-un sector indica prezenta faguluiMetoda FISCHER:1. Geloza se aplica mi/o, fagi2. Cutia se imparte in 10 sectoare, pe fiecare sector se aplica culturi.3. Incubare4. Lipsa cresterii intr-un sector indica prezenta faguluiScopul: fago-indetificare, tratamentul maladiilor, fagotipajFAGOTIPAJ, FAGOIDENTIFICARE:Fago-indetificare: indetif fagilor prin OTTO, FURT, FISHERFagotipaj: diferentierea tulpinilor S si R la diferiti fagi pt aceeasi scpecie. Marker epidimiologic1. Geloza se aplica mi/o, fagi2. Cutia se imparte in sectoare, pe fiecare sector se aplica culturi si fagi.3. Incubare4. Diametrul lizei celulare si compari cu diametrul standart.

REACTIA DE AGLUTINARE DIRECTA (RA):1. pe lama (seroidentificare- identif Ag cu folosirea Ac cunoscuti) componentele: anticorpi, suspensie bacteriana (Ag), solutie fisiolgica (NaCl) tehnica: 1/10 citirea: peste 5-10 min, a. reactia positiva: apar flocoane/conglumerate mari sau micib. reactia negativa: lichid tulbure2. in tuburi (serodiagnostic identificarea Ac, cu folosirea Ag cunoscuti) componentele: ser (Ac 1/100,1/200,), bacterii (Ag), sol.fiziologica NaCl tehnica: in tuburi citirea: (++++)a. reactia positiva formeaza un sendiment sub forma de umbrela inversatab. reactia negativa la fundul tuburilor se formeaza un sendiment sub forma de de buton sau inel. REACTIA DE AGLUTINARE INDIRECTA/HEMAGLUTINARE INDIRECTA (RHAI) componentele: eritrocite formalinizate (cal, iepure, gaina, berbec, om), suspensie bacteriana (Ag), sol.tanina sau clorid de crom. Sol, fisiolgica NaCl Tehnica: eritrocite formalinizate se trateaza cu sol clorid de crom sau tanina (pt a mari adsorbtia) si apoi se adauga suspensia bacteriana. citirea:a. reactia positiva: se formeaza o umbrela inversata de culoare bruna la baza godeului de politer.b. reactia negativaREACTIA DE HEMAGLUTINARE INDIRECTA INVERSATA (RHAII) Componente: eritrocite formalinizate, suspensie bacteriana, sol.talina sau clorid de crom si gamaglobulina. Tehnica: 3 rinduri de godeuri (1 rind sol stabilizata, 2 rind ser imun omolog, 3 rind ser imun heterolog), se aplica eritrocitele pregatite. Citirea: are loc 30-40 mina. Reactia positiva: formeaza flacoane si lichidul limpideb. Reactia negativa: lichidul tulbure, opaciere.REACTIA DE CO-AGLUTINARE Componente: IgG (Ac) prin portiunea Fc + Proteina A S.auereus (Ag) Tehnica: pe lama, serul cu IgG si suspensie stafilocica (protena A) Citirea:a. Reactia positiva: flacoane mari micib. Reactia negativa: tulbureREACTIA DE LATEX AGLUTINARE Componente: Ag fixate pe particule de latex, IgG (Ac) Tehnica: pe lama Citirea:a. Reactia positiva: prezenta factorului reumatoid are loc hemaglutinareb. Reactia negativaREACTIA ANTIGLOBULINICA COOMBS (depistarera Rh) Componente: singele la nou nascut (Ag), ser imun anti IgG (Ac) Tehnica: pe lama (singele la nou nascut + ser imun anti IgG) Citirea:a. Reactia positiva: provoaca aglutinarea eritrocitelor care contine Ac anti-Rhb. Reactia negativa: nu aglutineaza eritrocitele normale (adica care au Rh-)REACTIA DE INHIBARE A HEMADSORBTIEI (RIHAds) (virusuri) Componente: cultura celulare (infectate cu vrus), suspensie de eritrocite Tehnica: se aplica eritrocite 0.5% 0.2 ml + cultura celulara cu vrus. Incubarea 20 min la diferite temperaturi Citirea microscopa. Reactia positiva: vrus a intrat in alte eritrocite. b. Reactia negativa

REACTIA DE INHIBARE A HEMAGLUTINARII (RIHA) (virusuri) Componente: hemaglutinina (Ag) , suspensii de hematii(Ac) Tehnica: diferite dilutii (1/10,1/20,1/30,.,1/640) aplicam hemaglutininas si suspensii de hematii. Citireaa. Reactia positiva: formeaza un sendiment de hematii in forma de butonb. Reactia negativa: pelicula care tapeteaza fundul godeului.REACTIA DE PRECIPITARE IN GEL: Componente: agar-agar (geloza), Ac (ser imun)+ Ag (suspensie bacteriana) Tehnica: se face in geloza diferite godeuri se aplica Ac, si in mijlocu gelozei se face un godeu unde se aplica Ag. Citirea:a. Reactia positiva: unde se formeaza linii de precipitare b. Reactia negativaREACTIA DE PRECIPITARE IN LICHID Componenta: ser imun (Ac) + bacterii (Ag) Tehnica: intru-un tub se aplica ser imun, apoi se aplica Ag sa se prelinga pe peretii tubului si se amesteca. Citireaa. Reactia positiva: formarea unui inel alb- precipitareab. Reactia negativaREACTIA IMUNOFLUORESCENTA DIRECTA (seroidentificare) Componente: Ac (marcate cu fluorocromi) marcati specific pt fiecare Ag, Ag (material cultura pura, biopsie) Tehnica: se prepara frotiu, biopsia (Ag) apoi se aplica ser imun marcat cu fluorocromi (Ac). Peste 20 min de incubare observar la microscop luminiscent. Citirea:a. Reactia positiva: se observa luminescente locala.b. Reactia negativaREACTIA IMUNOFLUORESCENTA INDIRECTA (serioidentificare si serodiagnostic) Componente: Ag (biopsie, cultura), 2Ac (1 nemarcat cu fluorocrom, 2 anti IgG marcat cu fluorocrom) Tehnica: Pe frotiu (Ag) se aplica 1Ac nemarcat. Se asteapta 20 min si se spala. Apoi se aplica al 2 Ac anti IgG de la un animal. Se obsearva la microscop luminiscent. Citirea:c. Reactia positivad. Reactia negativaREACTIA DE FIXARE A COMPLEMENTULUI (RFC) Componente: sistemul Ag-Ac, Complementul (fixeaza IgG si IgM). 1. Etapa: Ac (serul imun), Ag (nu cunoastem)2. Etapa sistemul hemolitic: Ag (hematii de berbec), Ac(nu cunoastem) Tehnica: se amesteca Ag+Ac. Se incubeaza 1h 37C Citireaa. Reactia positiva: 1 Sistem: are loc fixare C cu Ag-Ac (daca se unesc)2 Sistem: nu are loc hemoliza b. Reactia negativa: formeaza hemoliza (sistem 2)REACTIA DE BACTERIOLIZA (leptospirozele, holera) Componente: Ag (celule bacteriene, hematii, vibrioni, leptospire), Ac (serul imul sau serul bolnavului), Complement Tehnica:IN VITRO: dilutia cu Ag + Ac+ C. Incubeaza 2h 37C. se reinsaminteaza in geloza cite 0,1 ml. Se incubeaza 2 h 37C. se mai face martor: Ag+ser fiziologic+CIN VIVO: Ag+Ac se pune intraperitoneal la cobaie. Peste fiecare 10 ml se extrage lichidul peritoneal si se examineaza microscopia pe fond negru Citirea:a. In vitro: se compara coloniile crescute cu martorul inseamna ca au fost lezate 50% de celule.b. In vivo: nr bacteriilor scade treptat pina la disparitia lor.REACTIA DE NEUTRALIZARE A EXOTOXINELOR IN VIVO Componente: Ac (ser imun) + Ag (exotoxina) Tehnica: Ac se amesteca cu Ag, apoi amestecu se incubeaza in termostat 2h 37C. apoi se introduce intraperitoneal. Citirea: daca animalele supravietuiesc exotoxina nu actioneaza asupra organismului.REACTIA DE IMOBILIZARE A BACTERIILOR Componente: Ac anti-bacterieni (serul imun) + Ag (suspensia bacteriana) + complemente. Tehnica: intre lama si lamele se incubeaza, apoi se observa la microscop cu fond intunecat. Citirea : 51-100% test pozitiv, 25-50% test slab pozitiv, 150 mi/oDETERMINAREA INDICELUI COLI (cantintea de E.coli in 1l de apa) PRIN MEMBRANA FILTRANTA1. Sterilizarea membranelor nitroceluloza2. Se filtreaza apa.3. Aceste membrane se incubeaza in termostat 24h.4. Daca cresc colonii de culoare rosii-inchis cu luciu metalic sal roz cu centrul rosu.5. Din colonii se ea si examineaza la microscop si se identifica specia.PRIN METODA TITRARII1. Apa se aplica bulion peptonat cu glucoza (mediul de imbogatire) cu indicator de pH si tuburi Durham pt identificarea gazului2. Pe mediul Endo se face replicarea 3. Identificarea pe culturi izolate. Determinarea oxidazei. Daca este oxidazonegativ si Gram negativ atunci sunt E.coli. si fermenteaza glucoza pina la acid si gaz. Normativele: Potabila: colonii intre 2-3, titrul de 300 Poluata daca este mai mult.TEHNICA RECOLTARII PROBEI DE AER Se recolteaza in 5 punte (4 periferii si unu centru situate la 1.6m), se face ziua. Se recolteaza prin sedimentare sau aspiratie.Metoda sedimentarii1. In puntele de recoltare se aplica: Stafilococi: cutii cu geloza hiperclorurata cu lapte sau cu lapte si ou Streptococi: cutii cu mediu Garro( geloza cu singe de iepure si violet gentiana) Metoda de aspirare (Krotov, Diakenov)1. Aspirator care contine membrane care aspira si particulele aspirate cad in cutii de cultura (250l) sau in lichid (0.2 ml) (bulion peptonat,sol.NaCl)2. Pt lichid se foloseste membrane nitrocelulozeNORMELE NTG1. Sala de operatii: