Phuong Phap Khoi Pho

  • View
    105

  • Download
    0

Embed Size (px)

Text of Phuong Phap Khoi Pho

PH

NG PHP KH I PH

NHM 7 _ DH07SH

N I DUNG CHNH

T NG QUAN V KH I PHKH I PH L G? l ph ng php nghin c u cc ch t, b ng cch o chnh xc kh i l ng phn t ch t , d a trn i n tch c a ion; dng thi t b chuyn d ng l kh i ph k . K thu t ny c nhi u ng d ng, th ng c k t h p v i m t s sinh h c phn t khc nh : Kh i ph k t h p v i s c k kh. Kh i ph k t h p v i s c k l ng. Kh i ph k t h p i n di

HNH THNH V NGUYN T C HO T NG S ion ho nghin c u cc ch t b ng ph ng php kh i ph , cc phn t ch t nghin c u ph i d ng kh ho c h i, ph i c ion ho b ng cc ph ng php thch h p(va ch m i n t ,b ng tr ng i n t ,ion ho h c,chi u x b ng cc photon.)

S

Ph

ng php ion ho b ng va ch m i n t

Trong bu ng ion ho, cc i n t pht ra t cathode lm b ng vonfram ho c reni, bay v anode v i v n t c l n. Cc phn t ch t nghin c u tr ng thi h i s va ch m v i i n t trong bu ng ion ho, c th nh n n ng l ng i n t v b ion ho.

Ion ho b ng tr

ng i n t

T i bu ng ion ho t cc m i nh n l b ph n pht t tr ng d i d ng dy d n m nh (2.5 m) hay cc l i m nh t i n p vo cc m i nh n. cho m t tr ng i n t c gradien 107-1010 V/cm cc i n t s b b t kh i phn t ch t nghin c u do hi u ng ng h m nn khng gy s kch thch,v n gi nguyn tr ng thi c b n, do cc v ch ph s r t m nh.

My kh i ph l m t thi t b dng cho ph ng php ph kh i, cho ra ph kh i l ng c a m t m u, tm ra thnh ph n c a n. C th ion ha m u v tch cc ion c a n v i cc kh i l ng khc nhau v l u l i thng tin d a vo vi c o c c ng dng ion

. M t kh i ph k thng th ph n ngu n ion ph n phn tch kh i l ph n o c.

ng g m 3 ph n:

ng

C u t o: My g m m t m t ng trn detector. B t k my kh ch c n ng sau

a ng m u, my b n laser, o chi u i n c c lin t c v i ph no c ng c b n kh i y:

H th ng n p m u Bu ng ion ho B phn tch B ghi tn hi u

D a vo b ph n phn tch m ng lo i my kh i ph nh sau:

i ta chia cc

B B B B

ph ph ph ph

n tch t . n tch t c c. n tch theo th i gian n tch c ng h ng ion cyclotron.

Theo tnh n ng b ghi, ng i ta chia cc my kh i ph thnh hai lo i: My kh i ph k ghi b ng knh nh. Tn hi u ph c ghi b ng knh nh d ng v ch c en khc nhau. My kh i ph k : cc tn hi u c a chm ion c ghi d i d ng xung i n b ng cc dao ng k i n t nhi u knh, ho c a vo my tnh i n t ,tn hi u s c a ra d i d ng b ng s ho c th thch h p. Ngy nay trong phn tch kh i ph ng i ta dng cc my kh i ph k .

nguyn l ho t ng c a my kh i ph M u ch t c n phn tch s c chuy n thnh tr ng thi h i, sau m i b t u qu trnh o kh i ph o c c tnh c a cc phn t c th , my kh i ph s chuy n chng thnh cc ion,ki m sot chuy n ng c a chng b i cc i n t tr ng bn ngoi qu trnh c th c hi n trong mi tr ng chn khng

Trong khi p su t kh quy n vo kho ng 760 mmHg, p su t mi tr ng x l ion th ng t 10-5 n 10-8 mmHg (th p h n m t ph n t c a p su t kh quy n). Ion sau khi c t o thnh s c phn tch b ng cch gia t c v t p trung chng thnh m t dng tia m sau s b u n cong b i m t t tr ng ngoi. Cc ion sau s c thu nh n b ng u d i n t v thng tin t o ra s c phn tch v l u tr trong m t my vi tnh.

ng d ng c a my kh i ph trong phn tch protein protein c tinh ch r i c t b ng enzyme pepsin . Enzyme pepsin c t polypeptide t i nh ng i m nh t nh trn chu i (gi ng enzyme gi i h n acid nucleic). Ta c th d on c cc m nh (fragments) polypeptide sau khi b c t

a m u x l pepsin vo a v cho my ch y. Laser ion ho cc fragments lm cho chng tch i n d ng v b t ra bay vo ng. ng ny c chi u di nh t lo i i n c c (+) v (-) nh, 4 pha g n 2

ng c th xoay trn, do cc c c i n i chi u lin t c lm cho cc m nh polypeptide khng bm c vo thnh m bay theo chi u xo n c

V n t c bay c a 1fragment ph thu c 2 y u t i n tch (z) kh i l ng (m)

My kh i ph o c th i gian, bi t tr c qung ng => tnh c v n t c => xc nh c ch s m/z c a fragment. Cc tn hi u c pht hi n b i detector v khu ch i, cu i cng bi u di n trn th d ng cc nh (peak). M i nh t ng ng 1 fragment.

V i my MS/MS (tandem MS) th y m i l l n MS th nh t, cho php hi n th cc fragment c a m t polypeptide b c t b ng pepsin. L n MS th 2 cho php kh ng nh ch c ch n 1 fragment nh t nh nh h th ng l c.

Figure : Schematic of a MALDI-TOF Mass Spectrometer

Phn tch k t qu : V protein bao g m 20 amino acid c kh i l ng khc nhau do kh i l ng c a m t trnh t nh c ng ni ln c trnh t c a n. (Gi s Valin c kh i l ng l 3, methionin l 5 th m t fragment c kh i l ng l 8 s c trnh t Valin Methionin ho c Methionin Valin).

S k t h p cc ph ng php sinh h c phn t khc_ ng d ngKh i ph k t h p v i s c k kh(Gas Chromatography Mass Spectometry) Ph ng php S c k kh k t h p v i Kh i ph (vi t t t l GC-MS ho c GCMS) l m t ph ng php m nh m v i nh y cao c s d ng trong cc nghin c u v thnh ph n cc ch t trong khng kh.

B n ch t GC-MS l s k t h p c a S c k kh (Gas Chromatography) v Kh i ph (Mass Spectometry). Ng ng pht hi n c a ph ng php ny l 1 picogram (0.000000000001 gram).

C u t o c a GC-MS S c k kh (GC): phn tch h n h p ha ch t thnh m t m ch theo t ng ch t tinh khi t Kh i ph (MS): ) xc nh nh tnh v nh l ng

A. C a tim m u (injection port): 1 microliter dung mi ch a h n h p cc ch t s c tim vo h th ng t i c a ny. M u sau cd n qua h th ng b i kh tr , th ng l helium. Nhi t c a tim m u c nng ln 3000C m u tr thnh d ng kh.

B. V ngoi (oven): Ph n v c a h th ng GC chnh l m t l nung c bi t. Nhi t c a l ny dao ng t 400C cho t i 3200C. C. C t (column): Bn trong h th ng GC l m t cu n ng nh hnh tr c chi u di 30 mt v i m t trong c trng b ng m t lo i polymer c bi t. Cc ch t trong h n h p c phn tch b ng cch ch y d c theo c t ny.

Sau khi i qua c t s c k kh, cc ha ch t ti p t c i vo pha kh i ph . y chng b ion ha.Sau khi kh i ph ,chng s t i b ph n l c d a trn kh i l ng ,b l c l a ch n ch cho php cc h t c kh i l ng n m trong m t gi i h n nh t nh i qua.

Thi t b c m bi n c nhi m v m s l ng cc h t c cng kh i l ng. Thng tin ny sau c chuy n n my tnhv xu t ra k t qu g i l kh i ph Kh i ph l m t bi u cc ion v i cc kh i l qua b l c. ph n nh s l ng ng khc nhau i

My tnh: B ph n ch u trch nhi m tnh ton cc tn hi n do b c m bi n cung c p v a ra k t qu kh i ph .

Cng d ng Phn tch: GC-MS c th phn tch cc h n h p ha ch t ph c t p trong khng kh hay trong n c. y, t c c quy t nh b i tnh bay h i. Ch t no c tnh bay h i cao s di chuy n nhanh h n ch t c tnh bay h i th p. nh l ng: GC-MS c th nh l ng m t ch t b ng cch so snh v i m u chu n, l ch t bi t tr c v c nh l ng chu n b ng GC-MS.

Nh n d ng: N u trong m u c m t ch t l xu t hi n, kh i ph c th nh n d ng c u trc ha h c c nh t c a n. C u trc c a ch t ny sau c so snh v i m t th vi n c u trc c a cc ch t bi t. N u khng tm c ch t t ng ng trong th vi n ,ta thu c m t d li u m i v ng gp vo th vi n c u trc sau khi ti n hnh thm cc bi n php xc nh c chnh xc lo i h p ch t m i ny.

M t s lo i GC-MS khc 1.3.1 My s c k kh k t h p kh i ph v i phn gi i cao(HRGC-HRMS) chuyn phn tch DIOXIN. My c th phn tch c hm l ng siu v t Dioxin ph h p v i tiu chu n EPA 1613 c aM phn gi i 10.000, gi i h n pht hi n m c 0,5ppt.

My c th t n phn gi i 80.000, nh l ng c ng th i 17 ng phn PCDDs / PCDFs trong m u v t m c gi i h n pht hi n 0,01ppt My cn c ch c n ng t ng ki m tra phn gi i sau m i 12 gi v t ng d ng phn tch n u pht hi n phn gi i gi m th p h n gi i h n cho php.

ng d ng phn tch Dioxin v Furan trn nhi u l nh v c v mi tr ng : t, bn tr m tch, n c sng ngi, n c ng m v th y h i s n : tm, c, m c v nng s n th c ph m : g o, u, c ph, s a c bi t l quy trnh phn tch nh l ng Dioxin trong m u b nh ph m : m m , huy t thanh, gan

My s c k kh k t h p v i kh i ph nhi u l n(GC/MSn)

Ch c n ng Nh n danh, xc h i nh l ng vi l ng v a l ng. nh c u trc cc h p ch t ng i d bay

h u c t ng h p v t nhin t

Kh n ng phn tch D l l ng ha ch t c n ng ppb tr ln

ct ,d l

ng thu c tr su, di t c , d

ng khng sinh ng li u, d u

Ph gia cng nghi p, h

it

ng m u

Thu c tr su, thu c di t c ; Th c ph m, nng s n th c ph m; D c ph m, h ng li u, tinh d u;

H p ch t t nhin khc; S n ph m cng nghi p.

S c l l ng k t h p kh i ph (LS/MS/MS) Ph ng php s c k l ng ghp kh i ph l ph ng php c hi u l m u c phn tch v tinh s ch qua s c k, sau m u c a qua my kh i ph ti p t c xc nh kh i l ng nguyn t c a n. K t thc qu trnh ta thu c l ng m u nh t nh v c u trc phn t .

ng d ng xc nh protein ki m tra ch t l ng nng s n, th c ph n ch bi n, th c n gia sc v th y h i s n: c t n m m c, vitamin, thnh ph n aa, ph gia th c ph m, ch t ho t ng b m t, d l ng khng sinh (chloramphenicol, nitrofuran, fluoroquinolone, h tetracycline, sulfamide), d l ng hormone kch thch t ng tr ng b c m, vi sinh v t c h i, m u b c m trong th c ph m (cc lo i Soudan), d l ng thu c tr su.

i n di k t h p kh i ph Th ng c dng xc nh protein. Ph ng php ny cho php ta quan st v nh n d ng s hi n di n t t c cc protein cc tr ng thi t bo

Kh i ph l ph ng php mang l i n ng su t v chnh xc cao trong qu trnh nh n bi t nh ng protein phn tch b ng i n di 2 chi u. Protein c phn tch trn gel polyacrylamide sau c a vo my kh i ph phn tch.Cc my mc ngy nay c th t th c hi n cc b c phn tch v cho php chng ta quan st c nh ng protein c m c l n.

MALDI TOF Mass map

Gel-separated protein Sequence database

Tandem

or

mass spectrometry Tandem mass spectrum

Hnh: xc nh protein thu c trong cc m u sinh h c.Protein t m u c th c phn tch b ng i n di m t ho c hai chi u v protein c nh n d ng b ng cch s d ng MALDI-TOF v nh d u kh i peptide.Peptide thu c t i nh ng v tr c bi t c a protein c phn tch trn gel polyacrylamide c th c phn tch b ng cch s d ng kh i ph tandem.D li u t kh i ph tandem c th c dng t o nn 1 c s d li u