Click here to load reader

PITESTI -ROMANIA - madr.gov.ro · PDF fileTestare căpşun pe F. vescaUC –04 Altoire de foliolăR. o.”Munger”-zmeur Altoire cu ramură detaşată-zmeur

  • View
    233

  • Download
    8

Embed Size (px)

Text of PITESTI -ROMANIA - madr.gov.ro · PDF fileTestare căpşun pe F. vescaUC –04 Altoire de...

  • PITESTI - ROMANIA

  • PLAN SECTORIAL ADER 2020Contractor:INSTITUTUL DE CERCETARE DEZVOLTARE PENTRU POMICULTUR PITETI-MRCINENI

    Obiectivul general: 2 STCPM

    Numrul /codul proiectului 31/ADER 2.2.7.

    Contract: 227/27. 10. 2011

    Anul nceperii: 01.11. 2011Anul finalizrii: 10.12. 2014Durata: 37,5 luni

    Denumirea proiectului:ADER 2.2.7- Tehnici de producere i meninere a materialului sditor

    pomicol din categoriile biologice candidat, prebaz i baz

    Persoana de contact:Dr. ing. ISAC VALENTINA

    Date contact:Tel: 0040-248-278066; Fax: 0040-248-278477; [email protected]

  • 31/ADER 2.2.7.Obiectivul general 2 STCPM:Perfecionarea sistemelor i tehnologiilor de cultura a

    plantelor n vederea asigurrii sustenabilitii fermelorcomerciale n contextul creterii performanelor demediu

    Obiectivul specific 2.2 ADERVerigi tehnologice/ tehnologii inovative de cultur a

    plantelor care s asigure garantarea veniturilor fermelorcomerciale n condiiile respectrii criteriilor de mediu ieco - condiionalitate

  • Proiectul 31/ADER 227 - finalObiectivele Proiectului1. Elaborare model experimental

    2. Crearea condiiilor impuse de reglementrile n vigoare pentru meninereaplantelor candidat (spaii insect proof). Experimentarea i introducereatehnicilor moderne privind diagnosticarea i testarea viral

    3. Evaluarea i implementarea metodelor rapide (ELISA, PCR) pentrudeterminarea strii de sntate viral a regeneranilor dup terapie.

    4. Dezvoltarea procedeelor de termo- i chimioterapie, cultur de meristemepentru eliminarea virusurilor la speciile pomicole i meninerea materialuluibiologic candidat.

    5. Managementul producerii materialului sditor pomicol conform schemelor decertificare din legislaia actual prin folosirea unor elemente biotehnologice nnmulirea plantelor sntoase.

    6. Realizarea unor verigi tehnologice privind obinerea materialului biologic dincategorii biologice superioare

  • Proiectul 31/ADER 227 - finalRezultate scontate a se obine

    Metode noi, rapide, fiabile, economice i cu o mare putere discriminatorie ndetectarea i identificarea patogenilor virali.Tehnologii/verigi tehnologice eficiente privind testarea viral, eliberarea devirusuri i meninerea materialului biologic pomicol necesar producerii unorplante care s ndeplineasc toate standardele impuse de certificare;Selecionarea celor mai bune clone din punct de vedere al autenticitii,calitilor pomologice i al productivitii;Metode optimizate pentru devirozarea materialului infectat, obinereaplantelor candidat;Tehnologii/secvene tehnologice de meninerea i nmulire a materialuluisditor pomicol prin metode clasice i neconvenionale (culturi de esuturi);Ghiduri de bune practici pentru producerea, meninerea i multiplicareamaterialului sditor pomicol;Metode i proceduri care s conduc la mbuntirea schemelor actuale decertificare a materialului sditor;Spaii protejate pentru meninerea plantelor candidat, prebaz i baz nconformitate cu normele n vigoare;Obinerea materialului prebaz i conservarea n biodepozitar;Completarea bazei materiale necesare testrilor i stabilirii tehnicilor itehnologiilor de lucru; Producerea materialului sditor baz.

  • Proiectul 31/ADER 227 - finalRezultate obinute

    Cuantificarea gradului de infectare cu virusuri a speciilor i soiurilor;Baz material format din 10 spaii izolate care s asigure condiii pentru evitarea reinfectrii;1-2 protocoale de lucru optimizate pentru testare i diagnosticare viral;35 - 45 clone selecionate conforme privind caracteristicile de autenticitate i stare fitosanitar i testate de virusuri;Verigi tehnologice privind eliberarea de virusuri la 1 - 3 specii pomicole; Biotehnologii de nmulire pentru obinerea materialului prebaz la 1-2 specii pomicole;Plante prebaz i baz din soiurile a 10 - 12 specii pomicole.

  • Proiectul 31/ADER 227 - finalRezultate obinute

    Selecionarea celor mai bune clone din punct de vedere al autenticitii, calitilor pomologice i al productivitii - 76 soiuri:10 soiuri de mr: Jonathan, Idared, Florina, Goldspur, Golden Delicious, Prima, Generos, Romus, Starkrimson, Mutsu i portaltoii M 106 i M9;9 soiuri de pr: Williams, Cure, Tudor, Monica, Argessis, Carpica, Williams rou, Euras,

    Conference i portaltoiul Gutui A;9 soiuri de prun: Agent, Ialomia, Gras ameliorat, Centenar, Silvia, Minerva, Diana, Andreea, Delia i portaltoiul Mirobolan BN 4Kr;6 soiuri de cire: Ponoare, Daria, Tentant, Superb, Stella, Germrsdorf i portaltoiul IPC 5.6 soiuri de viin: Mocneti 16, arina, Rival, Stelar, Ilva, Schattenmorelle;7 soiuri de cais: Tudor, Goldrich, Traian, Sulmona, Sirena, Harcot, NJA 42;8 soiuri de piersic: Catherine sel. 1, Cora, Creola, Liana, Delta, Florin, Cardinal, Redhaven;6 soiuri de cpun: Premial, Real, Red Gauntlet, Coral, Magic, Benton;3 soiuri de zmeur: Cayuga, Opal, Ruvi;4 soiuri de mur: Darrow, Thornfree, Dar 8, Dar 24;6 soiuri de coacz: Abanos, Deea, Tsema; Jonkheer van Teets, Red Lake, Houghton Castle; 2 soiuri de agri: Virens, Verda;

    Studiu documentar referitor la sursele de material vegetal i caracterizarea genotipurilor luate n studiu (18 pagini).

    Fi experimental privind producerea materialului de nmulire i plantare fructifer certificat din punct de vedere virotic 10 pagini

  • Crearea condiiilor impuse de reglementrile n vigoare pentru meninereaplantelor CANDIDAT i PREBAZ (spaii insect proof)Crearea condiiilor impuse de reglementrile n vigoare pentru meninereaplantelor CANDIDAT i PREBAZ (spaii insect proof)

    ICDP PITETI(toate speciile)ICDP PITETI(toate speciile)

    Izolator de 180 mp, cu plante crescute n containere i cu fertirigare

    SCDP BISTRIA(specia prun)

    SCDP BISTRIA(specia prun)

    Izolator de 52 mp, cu plante crescute n containere.Izolator (300 mp), cu plante crescute n ghivece mari de 50 l, cte 6 ghivece pentru fiecare soi i portaltoi de prun.

    Reabilitarea a 10 izolatoare (2.200 mp), pentru meninerea plantelor Iniiale i Prebaz n

    conformitate cu normele n vigoare i asigurarea condiiilor necesare evitrii reinfectrii cu virusuri.

  • TESTAREA VIROTIC A MATERIALULUI SELECTAT, RETESTAREA MATERIALULUI PREBAZ I BAZIndexarea prin metode biologice, teste serologice i moleculare (ELISA, PCR) pentru 68 boli virale, a artat

    c:Plantele candidat selecionate sunt sntoase (-) i pot fi utilizate pentru obinerea materialului PREBAZ

    i ulterior BAZ.Rezultatele testelor ELISA au artat c soiurile de cire Ponoare, Daria i Superb sunt infectate cu virusuri(ArMV, CLRV, PNRSV) iar soiul de viin Mocneti cu PPV.Retestarea DASELISA la PREBAZA de prun Bistria, efectuat pentru PPV, PDV, PNRSV, ACLSV, ApMV

    i MLRSV a fost negativ. De asemenea, rezultatele IC-RT-PCR au confirmat absena PPV.Testrile serologice DASELISA efectuate la soiurile de cpun i arbutii fructiferi, la soiurile de mr i pr(pentru virusurile: ACLSV, ApMV, ASGV, ASPV, AP) au artat c plantele testate sunt sntoase.La prun s-au dovedit a fi infectate cu virusul Plum pox trei soiuri: Diana, Silvia si Ialomia, dei pomii erauasimptomatici. Detecia virusului Plum pox a fost realizata i molecular, prin IC-RT-PCR, iar rezultateleobinute au confirmat rezultatele serologice, aceste soiuri fiind eliminate de la nmulire.

    Testare cpun pe F. vesca UC 04 Altoire de foliol R. o.Munger - zmeur Altoire cu ramur detaat - zmeur

  • PROTOCOALE DE LUCRU OPTIMIZATE PENTRU TESTARE I DIAGNOSTICARE

    DIAGNOSTICUL MOLECULAR AL VIRUSULUIPLUM POX

    IC-RT-PCR foloseste kitul Qiagen One Step RT-PCRi perechea de amorse polivalente P1/P2 careamplific un fragment de 243 bp corespunztorregiunii C-terminus a proteinei capsidale (Wetzeli colab., 1991). Pentru imunocaptur seutilizeaza antiser produs de BIOREBA.

    Ciclul termic utilizat pentru RT-PCR cuprinde:Reverstranscriere - 30 min la 50C,denaturare/inactivarea reverstranscriptazei timpde 2 min la 94 C urmat de 35 de cicluri:denaturare ADNc - 30 s la 94 C, hibridarea cuamorsele - 45 s la 61 C, elongaia ADNc - 60 sla 72 C.

    Dup ultimul ciclu urmeaza elongaia final la 72 Cpe durata a 10 min.

    Produii de amplificare se separa prin electroforez,n gel de agaroz (Sigma) 1,5%.

    Vizualizarea produilor de amplificare s-a realizat nlumin UV, imaginea gelurilor fiind achiziionatcu o camer video DocPrint.

    DIAGNOSTICUL MOLECULAR AL FITOPLASMEIEUROPEAN STONE FRUIT YELLOW (ESFY)

    Nested-PCR, se realizeaz n dou etape deamplificare

    Pentru amplificare se utilizeaza ADN-ul total dinfloem i nervurile frunzelor de prun, extras cuajutorul kit-ului de extracie Dneasy Plant MiniKit (Qiagen).

    Pentru prima amplificare se recomanda primeriiP1/P7 (Schneider si colab., 1995), iar pentrucea de-a doua amplificare setul de primeriR16(X)F1/R16(X)R1 (Lee si colab., 1995).

    Ciclul termic utilizat pentru Nested-PCR n ambeleetape de amplificare este urmtorul:denaturare - 5 min la 94C, urmat de 35 decicluri: denaturare ADNc - 20 s la 92C,hibridarea cu amorsele - 20 s la 55 C,elongaia ADNc - 40 s la 72 C.

    Dup ultimul ciclu urmeaza elongaia final la 72 Cpe durata a 10 min.

    Migrarea si vizualizarea produilor PCR se faceidentic cu procedura pentru IC-RT-PCR

    Au fost experimentate i pot fi implementate protocoale ELISA - kit + protocol Bioreba i kit + protocol Sediag pentru detectarea a 17 virusuri i phytoplasme.Tehnicile moleculare de diagnostic au un potenial foarte ridicat de detecie viral i sunt foarte utile n procedura de certificare a materialului sditor.

  • nmulirea materialului selecionat - devirozareA fost nmulit fondul biologic plante Candidat (iniiale) la speciile pomicolelemnoase i la cpun i arbutii fructiferi.n urma lucrrilor de altoire efectuate la ICDP au fost nmulite 13 soiuri la specia mr(78 plante), cte 10 soiuri pr i prun (50 de plante din fiecare specie), 3 soiuri lacire (15 plante), iar la viin s-au obinut 25 de pla