Pop Francesca

  • View
    44

  • Download
    4

Embed Size (px)

DESCRIPTION

rezumat teza coctorat

Text of Pop Francesca

UNIVERSITATEA DE TIINE AGRICOLE I MEDICIN VETERINAR CLUJ-NAPOCA COALA DOCTORAL FACULTATEA DE HORTICULTUR Ing. Pop Iulia Francesca

Utilizarea tehnicilor de analiz molecular la genurile Prunus, Corylus, Juglans i Castanea n vederea conservrii n bnci de gene(REZUMAT AL TEZEI DE DOCTORAT)

Conductor tiinific: Prof. univ. dr. Doru Pamfil

Cluj-Napoca 2009

CUPRINSteza rezumat

INTRODUCERE ....................................................................................................1 CAPITOLUL I ........................................................................................................5 1.1. IMPORTANA CONSERVRII RESURSELOR GENETICE PENTRU MENINEREA BIODIVERSITII .................................................5 1.1.1. Definiia biodiversitii ..........................................................................5 1.1.2. Tipuri de biodiversitate ..........................................................................8 1.1.3. Conceptul de biodiversitate....................................................................9 1.1.4. Protecia i obiectul conservrii biodiversitii ....................................11 1.1.5. Strategia conservrii biodiversitii......................................................12 1.1.6. Istoricul conservrii biodiversitii ......................................................13 1.2. BNCILE DE GENE .................................................................................15 1.2.1. Generaliti despre bncile de gene.......................................................15 1.2.2. Categorii de bnci de gene ....................................................................18 1.2.3. Modaliti de conservare n bncile de gene .........................................18 1.3. CADRUL LEGISLATIV AL PROTECIEI NOILOR SOIURI DE PLANTE ............................................................................................................22 1.3.1. Legislaia romneasc n domeniul proteciei noilor soiuri de plante...22 1.3.2. Uniunea European ...............................................................................23 1.3.3. Statele Unite ale Americii .....................................................................23 1.3.4. UPOV ....................................................................................................24 1.3.5. Tratatul Internaional asupra Resurselor Genetice Vegetale (ITPGRFA)......................................................................................................26 1.3.6. Alte tratate internaionale ......................................................................26 1.3.7. Patentarea genetic ................................................................................27 1.4. IMPORTANA CONSERVRII RESURSELOR GENETICE ALE GENURILOR PRUNUS, CORYLUS, JUGLANS I CASTANEA ................28 1.4.1. Importana culturii genului Prunus .......................................................28 1.4.2. Importana culturii genului Corylus ......................................................37 1.4.3. Importana culturii genului Juglans ......................................................40 1.4.4. Importana culturii genului Castanea ....................................................54 I.5. METODE DE AMPRENTARE GENETIC .............................................56 1.5.1. Generaliti privind markerii moleculari...............................................56 1.5.2. Clasificarea markerilor moleculari........................................................57 1.5.3. Alegerea tehnicilor moleculare folosite n experiment .........................65 1.5.4. Compararea diferitelor tehnici de marcare molecular .........................66 1.5.5. Metode utilizate pentru interpretarea statistico-matematic a rezultatelor amprentrii genetice la genurile Prunus, Corylus, Juglans i Castanea ..........................................................................................................69 1.5.6. Software pc utilizate pentru interpretarea datelor rezultate n urma analizelor moleculare ......................................................................................73 CAPITOLUL II. OBIECTIVELE CERCETRII, MATERIALUL I METODA78 2.1. SCOPUL CERCETRILOR ......................................................................78 2.1.1. Obiectivele urmrite n cercetrile aferente tezei de doctorat...............79 2.2. MATERIALUL BIOLOGIC.......................................................................79

1 2 2

2

2

3

4

5 5

2.2.1. Materialul biologic utilizat n experienele de difereniere a accesiunilor cu ajutorul markerilor moleculari ...............................................79 2.2.1.1. Descrierea accesiunilor din genul Prunus luate n studiu ........... 80 2.2.1.2. Descrierea accesiunilor din genul Corylus luate n studiu ..........93 2.2.1.3. Descrierea accesiunilor din genul Juglans luate n studiu ..........97 2.2.1.4. Descrierea accesiunilor din genul Castanea luate n studiu......108 2.2.1.6. Amorsele SSR utilizate n amplificarea ADN-ului......................113 2.3. METODE DE LUCRU .............................................................................119 2.3.1. Extracia i cuantificarea ADN-ului n vederea executrii analizelor RAPD i SSR.................................................................................................119 2.3.1.1.Protocolul extraciei de ADN ......................................................119 2.3.1.2. Cuantificarea ADN-ului.............................................................. 121 2.3.2. Metode de lucru aplicate n experienele de amplificare cu amorsele RAPD ............................................................................................................122 2.3.2.1. Protocolul de amplificare RAPD................................................124 2.3.2.2. Electroforeza n gel de agaroz ..................................................127 2.3.2.2.1. Prepararea gelurilor de agaroz .......................................128 2.3.2.2.2. Migrarea elecroforetic i pregtirea probelor de ADN...129 2.3.2.3. Preluarea imaginilor .................................................................. 130 2.3.2.4. Analizarea imaginilor................................................................. 130 2.3.3. Metode de lucru aplicate n experienele de amplificare cu amorsele SSR ... ............................................................................................................131 2.3.3.1. Protocol de amplificare SSR.......................................................132 2.3.3.2. Electroforeza capilar ................................................................133 2.3.3.3. Analiza datelor............................................................................136 2.3.4. Metode statistice de calcul si interpretare a rezultatelor amplificrilor cu amorsele RAPD i SSR .....................................................136 CAPITOLUL III. REZULTATE I DISCUII .................................................141 3.1. REZULTATE PRIVIND EXTRACIA PROBELOR DE ADN .......141 3.1.1. Rezultate privind extracia probelor de ADN la genul Prunus ...........142 3.1.2. Rezultate privind extracia probelor de ADN la genul Corylus ..........144 3.1.3. Rezultate privind extracia probelor de ADN la genul Juglans ..........145 3.1.4. Rezultate privind extracia probelor de ADN la genul Castanea .......147 3.2. REZULTATE PRIVIND AMPLIFICAREA I ELECTROFOREZA PRODUILOR DE REACIE RAPD ....................148 3.2.1. Rezultate privind amplificarea i electroforeza produilor de reacie RAPD la genul Prunus ..................................................................................153 3.2.2. Rezultate privind amplificarea i electroforeza produilor de reacie RAPD la genul Corylus .................................................................................156 3.2.3. Rezultate privind amplificarea i electroforeza produilor de reacie RAPD la genul Juglans .................................................................................157 3.2.4. Rezultate privind amplificarea i electroforeza produilor de reacie RAPD la genul Castanea ..............................................................................159 3.3. REZULTATE PRIVIND ANALIZA IMAGINILOR I INTERPRETAREA DATELOR OBINUTE CU AMORSELE RAPD........161 3.3.1. Analiza imaginilor i interpretarea datelor obinute cu amorsele

6

6

7 7

7 7 8 8 8 8

III

RAPD la genul Prunus ..................................................................................161 3.3.2. Analiza imaginilor i interpretarea datelor obinute cu amorsele RAPD la genul Corylus .................................................................................164 3.3.3. Analiza imaginilor i interpretarea datelor obinute cu amorsele RAPD la genul Juglans .................................................................................167 3.3.4. Analiza imaginilor i interpretarea datelor obinute cu amorsele RAPD la genul Castanea ..............................................................................170 3.4. REZULTATE PRIVIND ANALIZA I INTERPRETAREA DATELOR OBINUTE CU AMORSELE SSR.............................................174 3.4.1. Analiza i interpretarea datelor obinute cu amorsele SSR la genul Prunus .........................................................................................................174 3.4.2. Analiza i interpretarea datelor obinute cu amorsele SSR la genul Corylus........................................................................................................179 3.4.3. Analiza i interpretarea datelor obinute cu amorsele SSR la genul Juglans ........................................................................................................188 3.4.4. Analiza i interpretarea datelor obinute cu amorsele SSR la genul Castanea ...............................................................................