Inspiration RainAdieba
Studi Regenerasi dan Produksi Protoplas Mesofil Daun Beberapa Klon
Tanaman Kentang (Solanum tuberosum L.)
Powerpoint Templates
Fusi protoplasma
Penggabungan protoplas dari dua macam tanaman yang berbeda sehingga
terbentuk suatu tanaman baru dengan sifat baru yang stabil
Dua sel soma yang saling berdekatan dapat berfusi
Sel memiliki sifat totipotensi
Prinsip dasar
Menghilangkan dinding sel dari kedua sel kemudian menggabungkan
kedua isi sel tersebut dalam suatu medan listrik.
Dinding sel menghambat hibridisasi
Pada sel hewan atau manusia bermanfaat untuk menghasilkann
hibridoma(sel hibrid)
Powerpoint Templates
menggabungkan seluruh genom dari
Powerpoint Templates
Metode yang menginduksi munculnya variasi dari dalam tanaman itu
sendiri, dengan memacu terekspresinya sifat-sifat genetik yang
biasanya tertutupi/ tidak muncul pada fenotipenya
Powerpoint Templates
Untuk mengintroduksi gen-gen tertentu daru suatu tanaman ke tanaman
lainnya dapat dilakukan Metode Fusi Protoplas
Fusi protoplas memiliki kemampuan tinggi untuk merakit
kultivar-kultivar baru karena dapat mengatasi ketidakmampuan dari
hibrididasi seksual maupun transformasi genetik tanaman (Purwito,
1999)
Powerpoint Templates
Powerpoint Templates
Powerpoint Templates
Sumber protoplas : mesofil daun tanaman in vitro
Kondisi fisiologis daun tanaman dari kultur in vitro lebih konstan
dibanding daun tanaman dari rumah kaca
keseragaman daun in vitro lebih tinggi dan dapat tersedia setiap
saat, tidak perlu melakukan sterilisasi
Kelemahan daun in vitro : ukuran yang kecil, menyulitkan proses
isolasi, produksi protoplas rendah, bahkan sering tidak ada
(Purwito, 1999)
Powerpoint Templates
Regenerasi merupakan salah satu komponen dalam manipulasi genetik
secara in vitro
Tahap Media (pada kentang) :
1. Tahap induksi kalus menggunakan auksin dan zeatin / zeatin
ribosida
II. Regenerasi Tunas menggunakan sitokinin selain zeatin
(Deb Block, 1998, Yadaf dan Sticklen, 1995)
Powerpoint Templates
Page *
I. Percoban melakukan maipulasi media tumbuh untuk memperbaiki
pertumbuhan tanaman in vitro beberapa klon kentang terutama dalam
hal ukuran daun. Mengambil model species liarSolanum
chacoense
II. Meregenerasikan mesofil daun yang akan digunakan sebagai
material sumber protoplas pada beberapa media regenerasi
Powerpoint Templates
Menggunakan 3 jenis sitokinin
Zeatin, 2ip (isopentenyl), BAP (Benzyl Amino Purine) dikombinasi
dengan auksin IAA (Indol Acetid Acid), dan NAA (Naphthalene Acetid
Acid) serta Giberelin dan GA3
Powerpoint Templates
Page *
III. Perhitungan produksi protoplas dari klon-klon yang diisolasi
dalam larutan enzim 0.5 % sellulase RS dan 0.05% pektoliase Y-23
yang dilengkapi dengan M manitol, 0.005 % buffer MES pada ph
5.5
Powerpoint Templates
Powerpoint Templates
Bahan dan Metode Penelitian
Sumber Tanaman adalah 7 klon kentang koleksi Prof. Dr. G. A
Wattimena (lab. BioMol dan seluler tanaman Puslut Bioteknologi
IPB)
Laboratorie Morphogense Vegetable Experimentale, Univ. Paris Sud
XI, Perancis dan bank plasma nutfah kentang, Madison, USA
yang berasal dari:
Media
M4
M5
M7
M8
M9
0,1 IAA + 0,5 ZEATIN + 0,5 GA
Media dasar = MS + Vitamin Morel + 20 g/l glukosa + 200 mg/l kasein
hydrolisat + 8 g/l bacto agar
pH = 5,6-5,8
Kultur dilakukan 3-4 minggu sekali
Peubah yang diamati adalah persentase eksplan : (a) berkalus (b)
bertunas (c) berakar
Apabila dianalisis ragam berbeda nyata maka dilanjutkaan uji
duncan
Powerpoint Templates
Powerpoint Templates
Page *
Pengaruh Komposisi Media terhadap Pertumbuhan Tanaman in vitro
Kentang Umur 4 Minggu
Media Tumbuh In Vitro Kentang
Powerpoint Templates
Page *
Pengaruh Komposisi Media terhadap Pertumbuhan Tanaman in vitro
Kentang Umur 4 Minggu
Powerpoint Templates
Mengapa Sukrosa Lebih berpengaruh terhadap pertumbuhan diameter
daun dan jumlah daun?
Kerena adanya perbedaan tingkat kemurnian antara gula pasir biasa
dengan sukrosa dari Pb, SO4, So2 dan zat-zat lainnya tidak lebih
dari 0,0001%.
Powerpoint Templates
Penelitian Gautheret (1959) dalam George dan Sherrington (1984)
membandingkan berbagai jenis gula pada kultur jaringan wortel,
menemukan bahwa sukrosa merupakan karbohidrat yang paling baik
kemudian glukosa, maltosa cdan rafinosa. Fruktosa dan galaktosa
kurang efektif, sedangkan manosa dan laktosa merupakan karbohidrat
yang paling efektif.
Powerpoint Templates
Page *
Persentase Tunas yang Terbentuk dari Mesofil daun Kentang pada 12
MST
Powerpoint Templates
Diindikasikan bahwa
Hanya media M10 (0,1 mg/l IAA + 0,5 mg/l zeatin + 0,5 mg/l GA3)
yang mampu meregenerasikan tunas yang vigor pada semua klon yang
digunakan. Media M10 rata-rata mampu meregenerasikan 5,6 tunas per
eksplan, sedangkan media M3 (0.5 mg/l IAA + 3 mg/l BAP + 1 mg/l
GA3)juga mampu meregenerasikan tunas pada semua klon (4,8 tunas),
namun tunas yang dihasilkan kurang vigor pada sebagian klon
Powerpoint Templates
Produksi Protoplas
Powerpoint Templates
Atlantic merupakan klon yang pertumbuhannya vigor, berwarna hijau
tua dan daunnya relatif tebal.
Klon ini banyak fenolik mengandung, sehingga produksi protoplasnya
relatif sedikit.
Cardinal daunnya berwarna hijau muda
Klon ini cukup banyak mengandung fenolik sehingga produksi
protoplasnya relatif sedikit.
Powerpoint Templates
Page *
kondisi – kondisi yang terkait dengan tanaman asal sumber
protoplass inilah yng diduga menyebabkan bervariasinya produksi
protoplas yang dihasilkan.
Powerpoint Templates
Page *
Purwito(1999)) mengatakan bahwa tanaman yang daya tumbuh cepat dan
diameter daun lebar pada media perbanyakan akan menghasilkan
protoplas yang lebih banyak dibandingkan tanaman yang daya tumbuh
lemah.
Powerpoint Templates
Page *
Kesimpulan
Media MS dengan dua kali konsentrasi unsur makro yang
dikombinasikan dengan sukrosa menghasilkan tanaman in vitro yang
vigor dan diameter daun terlebar (1,44 cm)
Kemampuan eksplan mesofil daun dalam menginisiasi tunas tergantung
dari interaksi anatara jenis dan konsentrasi ZPT yang digunakan.
Namun secara umum M10 (0,1 mg/l IAA + 0,5 mg/l zeatin + 0,5 mg/l
GA3) menunjukkan hasil yang paling bagus.
Larutan enzim dengan konsentrasi 0,5% selulase onozuka RS dan 0,05%
pektoliase, 0,05% MES, 9,1% Manitol, pada pH 5,5-5,6 dapat
mengisolasi dengan jumlah banyak dan bervariasi antar klon yang
tertinggi 46,58 x 105 protoplas/g daun BF15 dan paling sedikit
10,50 x 105 protoplas/g daun Atlantic.
Powerpoint Templates
Page *
Fusi protoplas merupakan teknik penggabungan inti dan atau
sitoplasma antara dua genotipe yang berbeda secara in vitro untuk
mendapatkan hibrida dengan sifat sifat yang diinginkan.
Faktor faktor penting yang berpengaruh dalam hibridisasi somatik
adalah sumber protoplas yang dipergunakan, metode isolasi
protoplas, jenis dan konsentrasi enzim yang dipergunakan, parameter
listrik pada saat fusi, dan media yang dipergunakan pada awal
kultur protoplas pasca fusi serta media regenerasi protoplas
(Purwito, 1999).
Menurut hasil penelitian Purwito (1999) ternyata bahwa pada isolasi
protoplas tanaman kentang, jenis dan konsentrasi enzim sangat
menentukan banyaknya protoplas yang dihasilkan, bahkan pada
komposisi enzim yang sama menghasilkan protoplas dalam jumlah yang
berbeda akibat perbedaan genotipe tanaman. Umumnya tanaman yang
tumbuh vigor menghasilkan protoplas lebih banyak dibandingkan
tanaman yang tumbuh kurus (Purwito,1999).
Powerpoint Templates
2. Devi A
optimalisasi?