Presntasi Complete

5/28/2018 Presntasi Complete

1/25


2/25

1 Andy Octavian

2 Prasetyo Bayu Aji

3 Musdalifah Noor


3/25

APA ITU Preparat

Sebelum dilakukan pemeriksaanmikroba secara mikroskopis maka

mikroba tersebut harus dipersiapkanterlebih dahulu, agar pemeriksaannyadapat dilihat dengan jelas. Mikrobayang telah dipersiapkan in disebut

Preparat.

?????


4/25

SECARATIDAK

LANGSUNG

PEMBUATANPREPARAT

SECARALANGSUNG

METODEBASAH

METODEBALOK

GANTUNG

METODE

TETESANGANTUNG


5/25

Merupakan metode yang dilakukan untuk mikrobayang tidak tahan terhadap pengeringan (fiksasi) dan

pengecatan (pewarnaan).

Dengan catatan mikroba yang digunakan masih hidup

sehinngga dapat diamati kelakuan dari mikroba,

misalnya gerakannya, pembelahan sel


6/25

1. Metode basah Dengan cara mikroba disuspensikan dalam

cairan kemudian ditetesi di atas kaca obyek

dan ditutup dengan gelas penutup

2. Metode Tetesan Gantung

Awalnya suspensi bakteri ditemukan di atas

kaca penutup. Yang kemudian ditutup denagn

kaca yang telah dibuat khusus, selanjutnya dibalik dan siap diperiksa di mikroskop


7/25

mula-mula disiapkan agar-agaryang dituangkan dalam petridish

ditunggu sampai dingin,

3. Metode Balok Gantung

agar-agar tersebut dipotong-potong dengan ukuran 6mm2kemudian dipindahkandi atasgelas objek yang steril. agar-agar tersebut dipotong-potongdengan ukuran 6mm2 kemudiandipindahkandi atas gelas objekyang steril.

Mikroba yang diperiksa ditaburkan diatas gelas objek yang sudah adaagar-agarnya, kemudian ditutupdengan gelas penutp yang steril.

Diinkubasikan selama beberapamenit kemudian dipindahkan darigelas ke kaca berlubang.

Kemudian ditutup denganparafin dan siap diperiksa dibawah mikroskop.


8/25

Definisi

pembuatan preparat dengan teknik ini

sering disebut dengan pengecatan ataupewarnaan ayng digunakan untukpemeriksaan sifat morfologi mikroba.


9/25

Pembuatan lapisna film dan fiksasi1. dengan jarum steril, suspensi mikrobadioleskan di atas kaca obyek hinggamembentuk lapisan film. Kemudiandilakukan fiksasi dengan membakardengan spritus alapisan film tadi beberapakali. Atau dapat juga dilakukan dengan

menambahkan zat kimia seperti campuranasam cuka dan pikrat.


10/25

Cat Biologis

Cat dibagi menjadi 2 yakni :

1. Cat basis

Garam-garam cat yang ion-ion catnya adalah

kation, contoh : Methylene blue, safranin,netral reddan anionnya adalah Cl, SO, asetat dll

2. Cat Asam

cat yang ion catnya adalh anion-anion dan kation-

kationnya Na, K,Ca, dan NH contoh : eosinat,eosin, congo red, dll

3. Cat-cat lain, seperti : Cat yang bersifat netral danindiferan, misalnya Sudan III dan eosin


11/25

Film mikroba yang telah difiksasi kemudian

direndam dalam larutan zat warna dalam waktu

tertentu setelah itu dicuci dengan air mengalir yang

bersih dan dikeringkan.Lama perendaman dalam zattergantung dari jenis mikroba yang diwarnai.Cat

banyak digunakan adalah methylen blue,gentian

violet,basic fuchsin atausafranin.


12/25

Ada 2 macam pewarna diferensial yaitu :pewarnaan gram,dan pewarnaan asam secara cepat(acid fast).2.3.2 Pewarnaan Gram

Pengecatan gram meliputi 4 tingkatan yaitu;1.Pemberian cat utama (larutan cat kristal violet)2.Pengintesifan cat utama dengan menambahkanlarutan IKI(mordan)

3.Pencucian (dekolorisasi)denggan larutan alkohol4.Pemberian cat penutup (cat lawan )dalam hal inidigunakan safranin yang berwarna merah.


13/25

Pengecatan gram dibedakan menjadi Bakteri gram

positif dan negatif.

- Bakteri gram positif ialah bakteri yang mengikat

cat utama dengan kuat sehingga tidak dapat

dilunturkan oleh peluntur dan tidak dapat diwarnai

oleh cat lawan safranin yang berwarna ungu.- Bakteri gram negatif ialah bakteri yang daya

mengikat cat utama tidak kuat sehingga dapat di

lunturkan oleh peluntur dan dapat mengika cat lawan

berwarna merah.


14/25

Faktor-faktor yang mempengaruhi hasil pengecatan

1. FiksasiCara fiksasi yang paling banyak yang di gunakan

dalam pengecatan bakteri dengan membuat lapisan

suspensi bakteri diatas gelas benda kemudian

dikeringkan dengan cara dilewatkan beberapa kalidiatas nyala lampu spirtus,atau dengan menggunakan

reagensi kimia.


15/25

2. Substrat

Berdasarkan macam cat yang diserap oleh sel ,

ada tiga tipe sel yaitu :

1. Sel-sel yang Basofil , yaitu sel-sel yang dapet

mengikat cat biasa.2. Sel-sel Asidofil atau oksifil, yaitu sel yang dapat

mengikat cat asam .

3. Sel-sel yang Sudanofil, yaitu sel-sel yang dapat

mengikat cat yang dapat larut dalam minyak.


16/25

3. Peluntur cat (decolorizer)

Macam-macam peluntur cat , misalnya:1. Peluntur cat yang lemah yaitu alkohol,air, minyak

cengkeh ,aseton dan gliserin.

2. Peluntur cat asam yaitu HCl , H2SO4,HNO3,dan

campuran asam-asam dengan alkohol3. Peluntur cat basis yaitu KOH , NaOH, sabun dan

garam basa

4. Garam- gaaram logam berat yaitu AgNO3

, MgSO4

.


17/25

4. Intentifikasi Pengecatan

Mordan adalah suatu zat kimia yang dapatmenyebabkan sel bakteri dan dicat lebih intensif atau

menyebabkan cat terikat lebih kuat pada jaringan sel

bila dibandingkan dengan cara pengecatan tanpa

diberi mordan,Ada beberapa macam mordan :

1.Mordan basa yaitu mordan yang bereaksi dengan

anion asam yang berwarna,misalnya alum,FeSO,

kalium antimonium tartrat,asetol piridinium khlorida.2.Mordan Asam yaitu mordanyang bereaksi dengan

cat-cat basa,misalnya asam tanin,asam pikrat,JKJ.


18/25

5. Cat Penutup (cat lawan)

Sebagai cat penutup yang banyak digunakan ialah

methylene blue,safranin,erythrosin dan lain-lain

tergantung macam pengecatannya.


19/25

Beberapa Cara Pengecatan

1. Pengecatan NegatifPengecatan ini merupakan pengecatan tidak

langsung,karena yang dicat adalah latar belakangnya

,sedangkan bakteri tidak mengalami pengecatan. Cat yang

banyak digunakan dalam pengecatan negatif ialah

nigrosin dan tinta cina.

2. Pengecatan Sederhana

Pengecatan dilakukan menggunakan satu macam cat saja,

sebelum mengecat dilakukan fiksasi dahulu. Pengecatanini dipakai untuk melihat bentuk bakteri, cat yang sering

digunakan methylen blue, gentian fuchsin, basic fuchsin


20/25

3. Pengecatan Gram

pengecatan gram meliputi 4 tingkatan :

1. Pemberian cat utama (lar.kristal violet)

2. Pengintensifan cat utama dg menambahkan lar.

Mordan (JKJ)

3. Pencucian (gekolorisasi) dengan alkhohol

4. Pemberian cat penutup (cat lawan) larutan safranin yg

berwarna merah


21/25

Faktor-faktor yang dapat menyebabkan variasi

dalam pengecatan gram :1. Perubahan keasaman

pH turun :bakteri gram positifbakteri gram negatif

pH naik :bakteri gram negatif

bakteri gram positif

2. Penyimpangan cara pengecatan

pencucian yang terlalu lama menggunakanalkhohol dapat menyebabkan bakteri gram positifmemberikan hasil seperti gram positif


22/25

3. Faktor mediumbakteri gram positif yg lemah apabila terlalulama ditumbuhkan dalam medium yg mudah difermentasi dapat berubah menjadi gram negatif.

4. Umur bakteribakteri gram positif yang telah menjadi tua ataukurang nutrisi makanan dapat berubah menjadibakteri gram negatif


23/25

5. Perlakuan khusus

bakteri gram positif yg bagian selnya dihilangkandapat larut dalam air panas, eter, atau larutanribonuklease dpt menjadi bakteri gram negatif.

bakteri gram negatif yang dilarutkan dalam lar.Pekat DNA dpt berubah menjadi bakteri grampositif. Cont: E.Choli


24/25

4. Pengecatan Acid fast (pengecatan ziehl nelsen)

pengecatan acid fast termasuk pengecatandifferensial karena dapat membedakan bakteri yg acidfast (tahan terhadap pencucian asam) dan non acidfast (tidak tahan terhadap pencucian asam).

misalnya bakteri yg bergenus Mycobacterium(M.tubercolosis, M.leprae) dan beberapaaktinomisetes apabila bakteri ini dicat dengancarbolfuchsin sambil dipanaskan 90C diataspenangas air selama 4 menit maka lapisan lilinya

lunak dan cat menembus kedalam sel. Setelah dingincat akan terikat oleh sel. Sehingga tidak luntur dgpencucian alkohol maka bakteri tersebut bersifat acidfast.


25/25

Documents

Presntasi Complete