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FARMACOPEA ARGENTINA OCTAVA EDICIÓN

Primer Volumen

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FARMACOPEA ARGENTINAOCTAVA EDICIN

VOLUMEN I

FARMACOPEA ARGENTINAOCTAVA EDICIN

Ministerio de Salud de la Nacin Secretara de Polticas, Regulacin e Institutos ANMAT Administracin Nacional de Medicamentos, Alimentos y Tecnologa Mdica INAME Instituto Nacional de Medicamentos

FARMACOPEA ARGENTINAOCTAVA EDICIN

Presidente de la Nacin Dra. Cristina Fernndez de Kirchner Jefe de Gabinete de Ministros Dr. Anibal Fernndez Ministro de Salud de la Nacin Dr. Juan Lus Manzur Secretara de Polticas, Regulacin e Institutos Dr. Gabriel Eduardo Yedlin Administracin Nacional de Medicamentos, Alimentos y Tecnologa Mdica Dr. Carlos A. Chiale Instituto Nacional de Medicamentos

Lic. Marta Elsa Spinetto

FARMACOPEA ARGENTINA

OCTAVA EDICINVOLUMEN I

COMISIN PERMANENTE FARMACOPEA ARGENTINA Comisin Permanente de la Farmacopea ArgentinaPRESIDENTE: Dr. Carlos A. Chiale DIRECTOR EJECUTIVO: Bioq. y Farm. Hctor Giuliani SECRETARA TCNICA: Farm. Melina I. Assalone Farm. Melina A. Dal Mas Farm. Mara Celeste De Angelis VOCALES: Dr. Sem M. Albnico Dr. Arnaldo Luis Bandoni Dr. Pablo Bazerque Dr. Mario A. Copello Dr. Juan M. Dellacha Dr. Teodoro S. Kaufman Dr. Eloy Mandrile Dr. Rubn Manzo Dra. Mara Teresa Pizzorno Dr. Edgardo Poskus Dr. Modesto Rubio Dr. Norberto A. Terragno

Dra. Mara Guillermina Volont

FARMACOPEA ARGENTINA OCTAVA EDICIN

NDICE POR VOLMENES

Primer Volumen Prlogo Presentacin Objetivos Subcomisiones Tcnicas, composicin Consideraciones Generales Mtodos Generales de Anlisis Textos de Informacin General

Apartado de Medicamentos Oficinales Apartado de Productos Biolgicos Apartado de Productos Mdicos Apartado de Productos Radiofarmacuticos Apartado de Sueros y Vacunas

Cuarto Volumen Subcomisiones Tcnicas, composicin Reactivos y Soluciones

Segundo Volumen Subcomisiones Tcnicas, composicin Monografas de Materias Primas

Especificaciones de Reactivos Indicadores, papeles y papeles indicadores Soluciones Reguladoras Colorimtricas

Tercer Volumen Subcomisiones Tcnicas, composicin Monografas de Productos Terminados Apartado de Fitoterpicos Apartado de Hemoderivados Tablas

Indicadoras de Reactivos Lmites ndice alfabtico

PRLOGOLa Farmacopea Argentina o Codex Medicamentarius Argentino es el cdigo oficial donde se describen las drogas, medicamentos y productos mdicos necesarios o tiles para el ejercicio de la medicina y la farmacia, especificando lo concerniente al origen, preparacin , identificacin, pureza, valoracin y dems condiciones que aseguran la uniformidad y calidad de las propiedades de los mismos. La farmacopea no es esttica sino que mantiene un continuo estado de actualizacin convirtindose en un tratado que construye calidad de la mano con los adelantos tecnolgicos en constante revisin. Lejos quedaron los tiempos de los primeros intentos para la reglamentacin y control de drogas y medicamentos en nuestro pas; se remontan al 9 de abril de 1822. En esta fecha el Gobernador Martn Rodrguez y su Ministro de Gobierno, Bernardino Rivadavia, mediante un decreto, reglamentaron el ejercicio de la Medicina y la Farmacia, estableciendo que la elaboracin de las medicinas en las boticas ser en todo arreglada a la Farmacopea Espaola cuarta edicin . La influencia de la cultura francesa en la formacin mdico farmacutica de aquella poca, hizo que se adoptara posteriormente la Farmacopea Francesa. Desde su fundacin en 1856, la Asociacin Farmacutica Bonaerense, entidad origen de la actual Academia Nacional de Farmacia y Bioqumica, trabaj afanosamente para elaborar una Farmacopea Nacional, llegando a proponer a las autoridades dos proyectos, el de Miguel Puiggari en 1881 y el de Estanislao Zubieta, publicado en 1880 con el nombre: Formulario Original y Magistral o F armacopea Argentina. Aunque no l legaron a oficializarse en el ao, estos antecedentes sirvieron para apresurar la decisin del Poder Ejecutivo Nacional de satisfacer esa sentida necesidad. Muchos nombres de notables investigadores, cientficos y docentes, han quedado ligados a la elaboracin de las sucesivas ediciones demostrando que un calificado recurso humano sera el sostenedor a travs del tiempo del proyecto Farmacopea As comenz la historia que se convirti en una palpable realidad y hoy se traduce en una Comisin Permanente y 21 subcomisiones tcnicas integradas por aproximadamente 300 profesionales quienes son los artfices del actual proyecto que ubica a la Argentina entre los pases que concientemente saben y proclaman que la Farmacopea establece estndares de calidad para los medicamentos contribuyendo de esta manera a velar por la salud de la poblacin. Presidente Farmacopea Argentina

PRESENTACINEn el ao 2003 se public un primer volumen con el propsito de completar anual e ininterrumpidamente con otros tres volmenes la Sptima Edicin. Si bien se cumpli con el objetivo, debido al tiempo transcurrido, a la actualizacin de los equipos tcnicos de la Autoridad Sanitaria, habindose incorporado la Administracin Nacional de Medicamentos, Alimentos y Tecnologa Mdica al Sistema de Inspecciones PIC/S (Pharmaceutical Inspection Cooperation Scheme), siendo Autoridad Reguladora Nacional de Medicamentos de Referencia de la Organizacin Panamericana de la Salud y teniendo en cuenta los avances cientficos y tecnolgicos, hemos credo conveniente presentar a sta como una nueva Edicin. Esta Octava Edicin que, por lo tanto incluye las actualizaciones del volumen publicado de la Sptima Edicin y los volmenes: segundo, tercero y cuarto, son el resultado del trabajo de actualizacin y revisin constante realizado por los profesionales que componen la Comisin Permanente y las subcomisiones asesoras, convocados especficamente con la finalidad de dotar a nuestro pas de un material de referencia acorde con los ms modernos requisitos en la materia. Esta Edicin en su conjunto, es el fruto de una rigurosa evaluacin de las temticas presentes en distintas farmacopeas, monografas, mtodos analticos, disposiciones reglamentarias, trabajos cientficos y experiencias personales del grupo de expertos. Gracias a l a reflexin, el debate y el dilogo permanente con las subcomisiones tcnicas, la Comisin Permanente ha e stablecido los criterios y metodologas que aseguran la calidad de los medicamentos, entendiendo que el aseguramiento de su calidad es un pilar bsico y prioritario para mejorar la salud de la poblacin. En esta tarea se ha sentido acompaada por un sinnmero de interlocutores y ha di sfrutado del estmulo generado por los propios deseos de lograr un producto acorde con la responsabilidad que comparte. Es por ello que confiamos en que la continuidad del dilogo sea la base ms slida para lograr la excelencia de este emprendimiento que constituye uno de sus mayores compromisos con la sociedad. Director Ejecutivo Farmacopea Argentina

FARMACOPEA ARGENTINA OBJETIVOSLa finalidad principal de la Farmacopea Argentina es contribuir a pr omover la salud de la poblacin, estableciendo parmetros de calidad para los productos empleados en la elaboracin de medicamentos. Las normas y especificaciones contenidas en esta publicacin constituyen un elemento de consulta indispensable para la Autoridad Sanitaria, para los elaboradores, para los profesionales de la salud, investigadores y docentes, todos ellos involucrados en el aseguramiento de la calidad de los medicamentos para su empleo seguro por parte del paciente. Sin embargo, construir la calidad de los medicamentos ya sea determinando las especificaciones y los controles de calidad que deben cumplirse, as como los lmites de impurezas y los productos de degradacin, etc., es una e sforzada tarea que slo pueda llevarse adelante en virtud del trabajo mancomunado de distintos sectores nucleados por una perspectiva sanitaria compartida. Farmacuticos, Qumicos, Bioqumicos, Ingenieros y Mdicos, contribuyen con su idoneidad en forma permanente para asegurar esas premisas. Secretara Tcnica Farmacopea Argentina

COMPOSICIN DE LAS SUBCOMISIONES TCNICAS DE LA FARMACOPEA ARGENTINAAguas y Soluciones Parenterales Coordinador: Farm. Silvetti, Alfredo. Farm. Achilli, Estela; Ing. Bichman, Mario; Farm. Colombari, Daniel; Bioq. Chiesa, Carlos; Dr. Dal Bo, Hctor; Ing. D' Ambrosio, Cristina; Lic. Duda, Guillermo; Dr. Fiore, Esteban; Farm. Goin, Jos Alberto; Ing. Gomez Copello; Farm. Menndez Viviana; Farm. Mochetto, Rodolfo; Farm. Neder, Jorge; Dra. Nista, Liliana; Lic. Petracca, Antonia; Farm. Ploder, Peter; Farm. Puebla, Ignacio; Farm. Stampone, Patricia; Farm. Szyszkowsky, Juiz Rubn; Lic. Vedoya, Gabriela Silvia. Biodisponibilidad, Bioequivalencia y Equivalencia Farmacutica Coordinador: Dr. Pesce, Guido. Dra. Bignone, Ins; Dr. Bolaos, Ricardo; Dr. Bramuglia, Guillermo; Dr. De Leone, Hctor; Farm. Giarcovich, Silvia; Dra. Niselman, Ada Viviana; Farm. Rey, Andrea; Dr. Seoane, Martn; Farm. Steeman, Gabriela; Bioq. y Farm. Vias, Mara Alicia. Biotecnologa Coordinador: Dra. Dabsys, Susana. Dr. Cascone; Dr. Corley, Esteban; Dr. Criscuolo, Marcelo; Lic. Garca Franco, Susana; Dra. Giampaolo, Beatriz; Farm. Goyogana, Francisco; Dr. Iglesias, Sergio; Lic. Mammarella, Carlos; Lic. Ostroswski, Hctor; Bioq. Pardo, Vernica; Farm. Pesce, Graciela; Lic. Praturlon, Mara L.;Dr. Seigelchifer, Mauricio. Colorantes, Excipientes y Aditivos Coordinador: Lic. Ciura, Juan M. Emilio. Dra. Brunet, Noem; Bioq. Bustos, Mnica; Dr. Corseti, Hctor; Dra. Dabbene, Viviana; Dr. Dobrecky, Jos; Dr. Ferrari, Jorge; Dr. Jacobi, Carlos; Dra. Rivas, Viviana; Dr. Rubio Garca, Rodolfo; Lic. Taschetti, Mabel; Farm. Trokn, Francisco; Lic. Vallese, Mara Cristina. Controles Toxicolgicos Coordinador: Dr. Roses, Otmaro E. Dr. Araldi, Hctor; Bioq. Bindstein, Edith; Dra. Bulgach, Delia; Dra. Fulginiti, Ana Susana; Dra. Grueiro, Elena; Dra. Lpez, Clara; Dra. Pazos, Liliana; Dr. Pico, Jos Carlos; Dra. Salseduc, Marta. Ensayos Farmacotcnicos I Coordinador: Dr. Meneghini, Alejandro; Farm. Suarez, Marcelo. Lic. Bava, Adriana; Dra. Calandri, Daniela; Farm. Castaa Eduardo; Dr. Chiaramonte, Eduardo; Dra. Simionato, Laura; Dra. Vidal, Noelia. Ensayos Farmacotcnicos II Coordinador: Dr. Allemandi, Daniel; Dra. Olivera, M. Eugenia. Dr. Ciccioli, Enrique; Farm. Fasanella, Marta; Farm. Giornelli, Gabriela; Dra. Lavaselli, Susana; Farm. Lloret, M. Antonia; Bioq. Luna, Julio; Lic. Martinez, Juan L.; Dr. Nacucchio, Marcelo; Dr. Porta, Ral. Ensayos Farmacotcnicos III Coordinador: Farm. Montes de Oca, Federico; Farm. Zubata, Patricia. Dra. Bruno, Claudia; Farm. Roberto, Mnica; Farm. Sakson, Mario; Dra. Sanpedro, Pura; Dra. Sedeo, Cristina; Dra. Szeliga, Mara; Lic. Vega, Julio Csar. Estabilidad y Envases Coordinador: Lic. Spinetto, Marta. Ing. Ariosti, Alejandro; Dra. Blanco, Mirta; Dra. Brion, Margarita; Lic. Gorisknik, Adriana; Farm. Gruc, Olga Alejandra; Farm. Mandrile, Alejandra; Dra. Nudelman, Norma; Dra. Ortiz, Cristina; Farm. Pilatti, Carina; Ing. Riera, Mnica; Lic. Snchez, Eduardo; Farm. Tamasi, Diego. Farmacia Hospitalaria Coordinador: Dra. Elas, Mnica; Farm y Bioq. Fernandez, Mara Cristina. Bioq. Bernal Castro, Federico; Dra. Bernavei, Alicia; Farm. Buontempo, Fabian; Bioq. Drunday, Fabian; Lic. Fernndez, Farm. Fillinger, Ester, Mara Laura; Farm. Garca, Anglica; Farm. Hermida, Miguel; Farm. Iglesias, Fabiana; Dr. Lagomarsino, Eduardo; Farm. y Bioq. Mato, Gabriel; Lic. Melero, Marcia; Farm. Menndez, Ana Mara; Dr. Montemerlo, Hugo; Dra. Pita Martin de Portela, Mara Luz; Farm. Raviolo,

Rodolfo; Farm. Rodrguez, Luis A.; Dra. Slobodianik de Gurevich, Hayde; Dra. Soifer, Graciela. Farmacia Oficinal Coordinadores: Farm. Ruggieri, Jos; Farm. Mendez, Raquel. Farm. Alvrez, Jorgelina; Farm. Andiach, Guido; Farm. Callegari, Fernando; Farm. Ferrero, Horacio; Farm. Fitanovich, Nora; Farm. Fridman, Gerardo; Farm. Garcia, Roberto; Farm. Gatica, Karina; Farm. Gomez, Juan; Farm. Gonzalez, Ana Mara; Farm. Julin, Silvia; Farm. Kleinlein, Patricia; Farm. Lpez de Souza, Mara del Carmen; Farm. Lopez, Guillermo; Farm. Maino, Hctor; Farm. Mollardo, Mara Teresa; Farm. Moreno, Patricia; Farm. Nadal, Ana Mara; Farm. Paura, Andrea; Farm. Perez Gonzlez, Rocio; Farm. Policelli, Gabriela; Farm. Quijano, Rubn Daro; Farm. Quiroga, Eduardo; Farm. Rencoret, Mara Mercedes; Farm. Salas, Vivian; Farm. Tokumoto, Fernanda; Farm. Torres, Hugo; Farm. Uema, Sonia; Farm. Valverde, Javier. Gases Medicinales Coordinador: Dr. Marceca, Ernesto. Farm. Arcos, Marcelo; Farm. Bernaus, Carlos; Farm. Fischer, Alfredo; Farm. Tourville, Antonio; Dra. Zavala, Estela. Medicamentos Fitoterpicos Coordinador: Dra. Ferraro, Graciela. Dra. Agnese, Alicia; Dr. Amat, Anbal; Dr. Cabrera, Jos Luis; Dra. Debenedetti, Silvia; Dra. Flores, Mara Lujn; Dra. Gattuso, Martha; Dra. Gattuso, Susana; Dr. Gurni, Alberto; Dra. Lopez, Paula; Dra. Nadinic, Elena; Farm. Padula, Laura Z.; Dra. Rizzo, Ins; Dr. Rondina, Rubn; Lic. Schvarzberg, Nora; Dr. Skliar, Mario; Dra. Spegazzini, Etile; Dr. Wagner, Marcelo; Lic. Zeichen, Rita. Microbiologa Coordinador: Lic. Horacio Frade; Dr. DAquino, Miguel. Dra. Albesa de Eraso, Ins; Farm. Arakaki, Regina; Farm. Balanian, Silvia Gladys; Dra. Belixn, Norma; Farm. Calvete, Javier; Lic. Cerra, Hector; Dra. Franco, Mirta; Dr. Gutkin, Gabriel; Lic. Lagomarsino, Monica; Dra. Torno, Graciela; Farm. Raffo Palma, Martha; Farm. Salazar, Germn; Dr. Sordelli, Daniel; Bioq. Teves, Sergio; Farm. Vivas, Ariel. Productos Biolgicos Coordinador: Bioq. Albertengo, Mara Elisa. Bioq. Esnaola, Mara Margarita; Bioq. Fraga, Griselda; Farm. Francinelli, Luisa; Dra.

Gorzalczany, Susana; Bioq. Mondelo, Nlida; Farm. Nisenbaum, Isaac. rea de Sangre y hemoderivados. Coordinador: Bioq. Rossi, Marina. Dra. Barravecchia de Deh, Martha; Dra. Caminos, Andrea; Bioq. y Farm. Drucaroff, Mara Alejandra; Lic. Oliva, Liliana; Dra. Sobrero, Cecilia; Dr. Zarzur, Jorge. rea de Sueros y vacunas. Coordinador: Dra. Perez, Analia. Dra. Brero, Mara Luisa; Bioq. y Farm. Copello, Cecilia; Dr. Dokmetjian, Jos; Dr. Garca, Salvador; Dra. Manghi, Marcela; Farm. Pombo, Mara Luz; Dra. Rodrguez, Mara Eugenia, Dr. Yantorno, Osvaldo. Productos Mdicos Coordinadores: Dra. Sager de Agostini, Helga. Farm. Carbone, Nora; Farm. y Bioq. Benitez, Sergio; Farm. Costanzo, Ricardo; Farm. Gonzalez, Mara Celeste; Farm. Graa, Nora; Farm. Iervasi, Liliana; Farm. Metz, Rita; Farm. Mosconi, Andrea; Farm. y Bioq. Olivera de O Connell, Luca; Farm. Peralta, Laura; Ing. Saba, Fernando; Dra. Staravijosky, Alejandra. Qumica Analtica de Medicamentos 1 Coordinador: Lic. Larrinaga, Alicia. Lic. Abelaira, Sara; Lic. Avancini Noceti, Constanza; Lic. Chiarelli, Silvia; Lic. Diez, Mara Ester; Dra. Dominguez, Silvia; Farm. Gonzlez, Soledad; Farm. Lynch, Josefina; Lic. Ponce, Claudia; Lic. Pozzo, Mara del Carmen; Dr. Rivas, Ral; Dra. Safierowicz, Rosa; Farm. Varela Lpez, Ramn; Farm. Vessuri, Mara. Qumica Analtica de Medicamentos 2 Coordinador: Dra. Carducci, Clyde. Dra. Castellano, Patricia; Lic. Centrone, Claudio; Farm. Faroppa, Mara; Farm. Fernndez Otero, Germn; Dra. Hoyos de Rossi, Mara; Dra. Longhi, Marcela; Dra. Lucangioli, Silvia; Dra. Palacios de Ortiz, Sara; Bioq. Robles, Juan. Qumica Analtica de Medicamentos 3 Coordinador: Lic. Ercolano, Irma. Dra. Alassia de Torres, Liliana; Dr. Blanc, Jos; Farm. Cereijo, Mara Ins; Farm. y Bioq. Ceresole, Rita; Dra. Circn de Vidal, Noem; Farm. Faria, Mirta; Farm. Gabor, Juliana; Dr. Laba, Raul; Farm. Menndez, Viviana; Dra. Segall, Adriana; Dra. Serrao, Rosa; Lic. Zinni, Elvira. Qumica Analtica de Medicamentos 4 Coordinador: Dra. Pinet, Ana Mara.

Dra. Barros, Carmen; Lic. Luque, Graciela; Dr. Marinaro, Bautista; Farm. Palacios, Marcelo Luis; Dra. Pieyro, Luisa; Dr. Quatrocchi, Oscar; Farm. Rosasco, Mara Ana; Farm. Rodrguez, Eduardo; Dr. Sprandeo, Norma; Dr. Sproviero, Jorge; Dra. Stagnaro, Stella Maris. Radiofrmacos Coordinador: Dr. Caro, Ricardo y Bioq. Aprea, Patricia. Farm. Aletti, Sabrina; Dra. Bergoc, Rosa; Dr. Boccio, Jos; Dr. Caelas, Carlos; Bioq. Samson, Jos Cembal; Dr. Duran, Adrin; Dra. Fraga de Suarez, Amanda; Lic. Furnari, Juan Carlos; Farm. Nicolini, Jorge; Dra. Rutty, Gisela; Farm. Zubillaga, Marcela. Secretara Tcnica Farm. Assalone, Melina Isabel; Farm. Dal Mas, Melina Andrea; Farm. De Angelis, Mara Celeste.

Revisores Tcnicos Farm. Compagnucci, Mara Eugenia; Gear, Jorgelina; Bioq. Martinez, Andrea Vernica; Martinez, Valeria Soledad. Agradecimientos Dra. Silvia Boni, Farm. Patricia Zubata, Dra. Silvia Lavaselli, Farm. Soledad Risso Patrn y Sra. Giovanna Sibay Nughes por su colaboracin en el captulo 1050. Formas Farmacuticas. Farm. Mnica Cordera y Farm. Isabel E. Rivadulla por su colaboracin en el captulo 1015. Buenas prcticas de almacenamiento, distribucin y transporte. Lic. Ana Mara Chan y Mara Jos Arrechea por su colaboracin en el captulo 345. Ensayo de Salmonella/fraccin microsomal (Test de Ames) para deteccin de mutagenicidad. A los Laboratorios que colaboraron en la presente Edicin.

FARMACOPEA ARGENTINA OCTAVA EDICIN PRIMER VOLUMEN NDICE GENERALConsideraciones Generales Mtodos Generales de Anlisis - Anlisis estadstico de resultados de ensayos biolgicos - Anlisis trmico - Capacidad neutralizante de cido - Carbono orgnico total - Colorantes de uso farmacutico - Combustin en erlenmeyer con oxgeno - Conductividad - Conductividad en agua calidad farmacutica - Conservantes - Control higinico de productos no obligatoriamente estriles - Cromatografa - Determinacin de aflatoxinas - Determinacin de agua - Determinacin de alcohol - Determinacin de aluminio - Determinacin de cinc - Determinacin de la densidad relativa - Determinacin de la rotacin ptica - Determinacin de la temperatura de solidificacin - Determinacin de la viscosidad - Determinacin de nitrgeno - Determinacin del contenido extrable del envase - Determinacin del contenido neto del envase - Determinacin del ndice de perxidos - Determinacin del ndice de refraccin - Determinacin del intervalo de destilacin - Determinacin del pH - Determinacin del punto de fusin - Determinacin del residuo de ignicin - Disolucin completa - Distribucin del tamao de partcula en polvos - Electroforesis - Ensayo de disgregacin - Ensayo de disolucin - Ensayo de endotoxinas bacterianas - Ensayo de micobacterias - Ensayo de micoplasmas - Ensayo de neurovirulencia para vacunas a virus vivo - Ensayo de piretgenos - Ensayo de Salmonella/fraccin microsomal (Test de Ames) para deteccin de mutagenicidad - Ensayo de sustancias fcilmente carbonizables - Ensayo de toxicidad anormal - Ensayos de esterilidad - Ensayos de reactividad biolgica - Ensayos de suturas - Ensayos en hemoderivados - Ensayos farmacotcnicos para aerosoles - Ensayos farmacotcnicos para supositorios - Ensayos generales de identificacin

- Ensayo para agentes extraos en vacunas virales - Envases primarios de plstico - Envases de vidrio - Envases para productos mdicos estriles - Espectrofotometra de absorcin y emisin atmica - Espectrofotometra de fluorescencia - Espectrofotometra infrarroja - Espectrofotometra ultravioleta y visible - Esterilizacin - Grasas y aceites fijos - Identificacin de bases orgnicas nitrogenadas - Identificacin de tetraciclinas - Impurezas comunes - Impurezas orgnicas voltiles - Liberacin de principios activos - Lmite de arsnico - Lmite de calcio, potasio y sodio - Lmite de cloruro y sulfato - Lmite de dimetilanilina - Lmite de hierro - Lmite de metales pesados - Lmite de plomo - Lmite de selenio - Materiales volumtricos - Mtodos de anlisis para Gases Medicinales - Mtodos de farmacognosia - Mtodos inmunoqumicos - Osmolalidad y Osmolaridad - Partculas en inyectables - Partculas metlicas en ungentos oftlmicos - Prdida por calcinacin - Prdida por secado - Pesas y balanzas

- Polarografa - Sales de bases orgnicas nitrogenadas - Termmetros - Titulacin con nitrito - Uniformidad de unidades de dosificacin - Vacunas de uso humano - Valoracin de esteroides - Valoracin iodomtrica de antibiticos beta-lactmicos - Valoracin microbiolgica de antibiticos - Volumetra Textos de Informacin General - Agua Calidad Farmacutica - Buenas prcticas de dispensacin en la farmacia oficinal comunitaria y hospitalaria - Buenas prcticas de almacenamiento, distribucin y transporte - Buenas prcticas de fabricacin para elaboradores, importadores/ exportadores de medicamentos - Buenas prcticas para la manipulacin de medicamentos citostticos endovenosos en centros asistenciales - Buenas prcticas de preparacin de medicamentos magistrales - Criaderos de pollos libres de patgenos especificados para la produccin y control de calidad de las vacunas - Equivalencia entre medicamentos - Estudios de estabilidad - Formas farmacuticas - Formulaciones farmacuticas para cuidados paleativos - Friabilidad y dureza de comprimidos - Impurezas en productos oficiales - Limpieza de materiales de vidrio - Polimorfismo - Preparaciones radiofarmacuticas

- Productos biotecnolgicos - Sustratos celulares para la produccin de vacunas de uso humano

- Validacin de mtodos analtico

CONSIDERACIONES GENERALES

CONSIDERACIONES GENERALESLa Farmacopea es el texto oficial que codifica los principios activos, excipientes y productos farmacuticos y contiene las especificaciones que stos deben cumplir para demostrar su calidad y resguardar la salud de la poblacin. Generalidades La Farmacopea Argentina en su Octava Edicin, a diferencia de las anteriores, est compuesta por cuatro volmenes. El ttulo de la obra puede abreviarse como FA 8 y reemplaza a las ediciones anteriores. C uando se emplea la sigla FA, sin ningn otro agregado, la misma se refiere a la FA 8 durante el tiempo que esta Farmacopea permanezca en vigencia. Estas consideraciones generales se aplicarn a l as monografas, captulos generales u otros textos incluidos en esta Farmacopea. La expresin Oficial significa de la Farmacopea Argentina y se refiere a cu alquier ttulo, sustancia, preparacin o ensayo incluido en las monografas y captulos. Las iniciales FA, acompaando al nombre oficial en el rtulo de un producto, indica que el mismo cumple con las especificaciones de la Farmacopea Argentina, aunque esto no constituye una certificacin por parte de la misma. El uso del ttulo de una monografa supone que la sustancia, preparacin o p roducto as designado se ajusta a l as especificaciones de la monografa correspondiente. Tales referencias en los textos de la Farmacopea se indican mediante el ttulo de la monografa en letra cursiva. Tanto las monografas como los captulos generales pueden contener excepciones a es tas Consideraciones Generales, las mismas sern sealadas explcitamente, al igual que el procedimiento a seguir en cada caso. Para destacar la existencia de excepciones, se agregar la expresin: A menos que se especifique de otro modo. A simismo, en caso de ausencia de una excepcin explcita, las expresiones debern interpretarse como se indica en este documento. Los ensayos y valoraciones descriptos son los mtodos oficiales sobre los cuales se fundamentan las especificaciones de la Farmacopea. Para evitar repetir instrucciones comunes a un ensayo determinado, en las monografas, se establecen los requisitos en forma abreviada, indicando el nombre del captulo correspondiente con un nmero de orden asignado entre los smbolos , como por ej. . Cromatografa, que luego es apropiadamente desarrollado en la seccin Mtodos Generales de Anlisis. Todas las declaraciones contenidas en las monografas, con las excepciones dadas ms adelante, constituyen normas para las sustancias oficiales. U na sustancia es de calidad Farmacopea Argentina cuando cumple con todos los requisitos establecidos en la monografa respectiva. Los ensayos elegidos se han ideado para detectar o determinar las impurezas ms significativas y para fijar el contenido lmite de aquellas. Manteniendo el criterio sustentado por la Comisin Permanente de la Farmacopea Argentina, se reconocern vigentes, a los efectos legales, monografas, captulos generales, reactivos, etc., suprimidos en la presente edicin e i nscriptos en ediciones anteriores, siempre que no hayan sido modificados e incluidos en esta edicin. En el caso de textos incluidos en alguna edicin anterior de la Farmacopea, pero no en la presente, que tuvieran errores tipogrficos o de otra caracterstica o pasibles de correccin o modificacin por su importancia, la Comisin Permanente de la Farmacopea Argentina, est autorizada a h acer las enmiendas necesarias, toda vez que sean advertidos o requeridos. Definiciones Medicamento: toda preparacin o pr oducto farmacutico empleado para la prevencin, diagnstico y/o tratamiento de una enfermedad o estado patolgico, o para modificar sistemas fisiolgicos en beneficio de la persona a quien se le administra. Principio activo o droga farmacutica: toda sustancia qumica o mezcla de sustancias relacionadas, de origen natural o sinttico, que poseyendo un efecto farmacolgico especfico, se emplea en medicina humana. Especialidad medicinal o farmacutica: todo medicamento, designado por un nombre convencional, sea o no una marca de fbrica o comercial, o por el nombre genrico que corresponda a su composicin y contenido, preparado y envasado uniformemente para su distribucin y expendio, de composicin cuantitativa definida declarada y verificable, de forma farmacutica estable y accin teraputica comprobable.

Nombre genrico: denominacin de un principio activo o droga farmacutica o, cuando corresponda, de una asociacin o combinacin de principios activos a dosis fijas, adoptada por la Autoridad Sanitaria Nacional o, en su defecto, la denominacin comn internacional de un p rincipio activo recomendada por la Organizacin Mundial de la Salud. Excipiente: es toda sustancia de origen natural o sinttica presente en una preparacin farmacutica incorporada sin propsito teraputico. Producto farmacutico: es un preparado que contiene uno o varios principios activos y excipientes, formulados bajo una determinada forma farmacutica. Suele emplearse preparacin farmacutica como sinnimo de producto farmacutico, para referirse tanto al producto a granel como al producto terminado. Forma Farmacutica: Es el producto proveniente de la transformacin de un principio activo o de una asociacin de los mismos mediante procedimientos frmacotcnicos, a fin de conferirles caractersticas fsicas y morfolgicas particulares para su adecuada dosificacin y conservacin, y que faciliten su administracin y accin farmacolgica. Interpretacin de los requisitos Las normas farmacopeicas definen las caractersticas de un producto y establecen los ensayos que permiten demostrar que el mismo satisface los requisitos elementales de calidad, exigidos por la Autoridad Sanitaria. Estas normas se aplican en cualquier momento de la vida til del producto, desde la elaboracin hasta su fecha de vencimiento. No debe entenderse que el cumplimiento de las especificaciones establecidas en la monografa a muestras de un lote de produccin asegure el cumplimiento de las normas farmacopeicas de todos los componentes del lote. Los datos obtenidos a partir de estudios de validacin del proceso de fabricacin y de controles efectuados durante el proceso pueden dar mayores garantas del cumplimiento de los requisitos de una monografa en particular, que la informacin obtenida a partir del examen de un nmero determinado de unidades de ese lote. Las tolerancias y lmites expresados en las definiciones de las monografas son para compensar las variaciones inevitables durante la preparacin del producto y el deterioro normal que se produce durante la vida til del mismo. Cuando se expresan lmites en forma numrica, los lmites superior e inferior de un intervalo incluyen esos dos valores y todos los valores

intermedios. Los lmites expresados en las definiciones de las monografas y en las especificaciones de los ensayos, independientemente de que stos estn expresados en porcentajes o valores absolutos, son valores significativos hasta el ltimo dgito. En los procedimientos volumtricos, se establece el peso de la sustancia analizada que equivale a cad a mililitro del valorante estandarizado. E n estos casos, se entiende que el nmero de cifras significativas en la concentracin del valorante corresponde al nmero de cifras significativas en el peso de la sustancia analizada. Se debern hacer las correcciones con respecto al blanco para todas las valoraciones volumtricas segn corresponda (ver 780. Volumetra). Cuando el resultado deba calcularse con referencia a l a sustancia seca, se har uso de las condiciones de secado que se indiquen en el ensayo Prdida por secado en la monografa. Cuando el resultado se calcule con referencia a la sustancia anhidra, el contenido de agua ser determinado por el mtodo descripto en la monografa bajo el subttulo Agua. Actualizaciones Se considera una actualizacin total cuando todo el texto reemplaza al de la edicin anterior; por ej., . Lmite de metales pesados, identificndose con un asterisco en el ndice alfabtico (*) y, en el ttulo del texto actualizado, se encontrar la leyenda Actualizacin total. Se considera una actualizacin parcial cuando slo una parte del texto ha sido modificada, identificndose con un asterisco en el ndice alfabtico (*) y, en el ttulo del texto actualizado, se encontrar la leyenda Actualizacin parcial. E n este ltimo caso se encontrar subrayado el fragmento del texto que ha sido actualizado. Armonizaciones El PWG (Pharmacopoeial Working Group) es uno de los Grupos de Trabajo de la Red Panamericana de Armonizacin de Reglamentacin Farmacutica, conformado por la Farmacopea Argentina -FA -, Farmacopea Brasilea FB-, Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos -FEUM- y Farmacopea de los Estados Unidos -USP-. El plan de trabajo del PWG fortalece el intercambio cientfico tecnolgico entre las farmacopeas, facilita el intercambio de informacin, de expertos y fomenta las actividades conjuntas que contribuyan a mejorar la calidad de los productos farmacuticos en la regin de las Amricas. E l objetivo de la armonizacin es lograr la obtencin

de normas idnticas para todas las caractersticas de un producto y su meta a largo plazo es elaborar una Farmacopea de las Amricas. Los textos armonizados por este grupo de trabajo se sealarn con el smbolo como subndice; por ej., Determinacin del residuo de ignicin . El PDG (Pharmacopeial Discussion Group) es el Grupo de Discusin de las Farmacopeas constituido por la Farmacopea Europea -EP-, la Farmacopea de los Estados Unidos -USP- y la Farmacopea Japonesa -JP-. P ersigue el mismo objetivo que el PWG y trabaja en coordinacin con las actividades de la Conferencia Internacional sobre Armonizacin, de sus siglas en ingls ICH. La Farmacopea Argentina adhiere a l as armonizaciones de este grupo de trabajo tomando como oficial los textos que de estas deriven pudiendo incluir atributos que le son propios a la regin. Los textos armonizados a este grupo de trabajo se sealarn con el smbolo como subndice; por ej., Almidn de Maz . Expresin de concentraciones Los porcentajes de concentracin se expresan de la siguiente manera: Porcentaje peso en peso (% p/p): expresa el nmero de gramos de un s oluto en 100 g de solucin o mezcla. Porcentaje peso en volumen (% p/v): expresa el nmero de gramos de un soluto en 100 ml de solucin, y se utiliza prescindiendo de que el diluyente en cuestin sea agua u otro lquido. Porcentaje volumen en volumen (% v/v): expresa el nmero de mililitros de un soluto en 100 ml de solucin. La expresin porcentaje empleada sin otro calificativo significa: porcentaje peso en peso para mezclas de slidos y semislidos, porcentaje peso en volumen para soluciones o s uspensiones de slidos en lquidos, porcentaje volumen en volumen para soluciones de lquidos en lquidos y porcentaje peso en volumen para soluciones de gases en lquidos. Sustancias de Referencia Sustancia de Referencia Farmacopea Argentina [SR-FA] - Material de uniformidad comprobada, cuya monografa ha sido incluida en la Farmacopea Argentina, desarrollado a travs de ensayos colaborativos avalados por esta Farmacopea y A.N.M.A.T I.NA.ME, cuyo empleo se reserva a ensayos qumicos y fsicos especficos en los que se comparan sus propiedades con las de un producto

problema y que posee un grado de pureza adecuado para el uso al que se destina. Cuando una Sustancia de Referencia Farmacopea Argentina no est disponible, deber emplearse aqulla equivalente reconocida por esta Farmacopea. Sustancias auxiliares Se denomina Sustancia auxiliar a cualquier sustancia incorporada a las preparaciones oficiales, tales como colorantes, conservantes saborizantes. La misma deber ser inocua o agregada en una proporcin que garantice la inocuidad, no tener influencia adversa sobre la seguridad y eficacia teraputica de los principios activos y no interferir en los ensayos y valoraciones. Sustancia oficial es aquella que no contiene sustancias auxiliares agregadas salvo que se permita especficamente en la monografa correspondiente. En este caso, el rtulo deber indicar los nombres y las cantidades de las sustancias auxiliares agregadas. Colorantes: son sustancias auxiliares incorporadas a l as preparaciones oficiales exclusivamente para dar color. Debern satisfacer las especificaciones establecidas (ver 50. Colorantes de uso farmacutico). Conservantes: son sustancias auxiliares que se agregan a las preparaciones oficiales para protegerlas de la contaminacin microbiana. L a expresin conservante antimicrobiano apropiado implica que puede agregarse al preparado una sustancia auxiliar, siempre que cumplan con las especificaciones establecidas (ver 80. Conservantes). Reactivos La realizacin correcta de ensayos y valoraciones de esta Farmacopea, as como la obtencin de resultados reproducibles y confiables, depende de la calidad de los reactivos empleados. Todos los reactivos requeridos para los ensayos y valoraciones se definen en Reactivos y Soluciones. Abreviaturas La sigla SR-FA corresponde a Sustancia de referencia de la FA. Las siglas (SC) y (SR) corresponden a Solucin Colorimtrica y Solucin de Reactivo, respectivamente indicadas en Reactivos y Soluciones. La sigla (SV) corresponde a Solucin Volumtrica e indica que tal solucin est estandarizada de acuerdo con las instrucciones

dadas en la monografa respectiva o bajo el ttulo Soluciones volumtricas en Reactivos y Soluciones. La sigla (SL) corresponde a Solucin Lmite e indica que dicha solucin es empleada para ensayos lmite. Agua La expresin agua, empleada sin otra calificacin significa Agua purificada y agua libre de dixido de carbono, es Agua purificada que ha sido calentada a eb ullicin durante al menos 5 minutos y enfriada en forma tal de evitar la absorcin de dixido de carbono atmosfrico. Agua purificada estril - Es el Agua purificada esterilizada. Se emplea en la preparacin de formas farmacuticas lquidas no parenterales en las que se requiera una forma estril de Agua purificada. Agua para inyectables - La fuente de agua es agua potable, previamente purificada y sometida a destilacin u smosis reversa de doble paso. Debe cumplir con todos los requisitos de Agua purificada y adems con los requisitos del ensayo de endotoxinas bacterianas (ver 330. Ensayo de endotoxinas bacterianas). Agua estril para inyectables - Es Agua para inyectables esterilizada. Se emplea principalmente como solvente de productos parenterales. Agua bacteriosttica para inyectables - Es Agua estril para inyectables a la cual se le ha agregado uno o varios conservantes apropiados. Se utiliza como solvente de preparados parenterales. Puede envasarse en envases monodosis o multidosis de un tamao no mayor a 30 ml. Agua estril para irrigacin - Es Agua para inyectables esterilizada en envases monodosis de ms de 1 litro destinados a una rpida descarga del contenido. No necesita cumplir con el ensayo 650. Partculas en inyectables. Agua estril para inhalacin - Es Agua para inyectables envasada en envases monodosis no mayores a 20 ml y esterilizada. Se emplea en nebulizadores y en la preparacin de soluciones para nebulizar. Solucin fisiolgica Cuando en las monografas o captulos generales se indique Solucin fisiolgica emplear una solucin de cloruro de sodio al 0,9 % en agua purificada. Solucin fisiolgica estril - Es una solucin de cloruro de sodio al 0,9 % en agua para inyectables Trmino descriptivo Muy soluble

que cumple con los requisitos de 370. Ensayo de Esterilidad. Solucin fisiolgica para nebulizar - Es una solucin de cloruro de sodio al 0,90 % en agua purificada preparada sin el agregado de conservantes, conservada en envases monodosis de hasta 20 ml, con ausencia de grmenes revivificables en un mililitro y en cuyo rtulo se indica: Solucin fisiolgica para nebulizar. No inyectable. MONOGRAFAS Frmula Qumica Cuando se conoce la composicin qumica de una sustancia oficial, se especifica a ttulo informativo la frmula molecular y desarrollada, el peso molecular y el nmero CAS (Chemical Abstracts Service). Esta informacin se refiere a la sustancia qumicamente pura y no se considera un indicador de la pureza del material oficial. Cuando se especifica la configuracin estereoqumica absoluta, se emplean los sistemas de designacin propuestos por la Unin Internacional de Qumica Pura y Aplicada (IUPAC) R/S y E/Z. Caracteres Generales Las afirmaciones comprendidas bajo el subttulo Caracteres generales referidas a t rminos como inodoro, prcticamente inodoro, con un dbil olor caracterstico o expresiones semejantes, se aplican al examen despus de la exposicin al aire durante 15 minutos de un envase recientemente abierto del producto (envases que contengan no ms de 25 g) o de una porcin de aproximadamente 25 g del producto (en caso de envases ms grandes) que haya sido trasladada de su envase a un cristalizador, con una capacidad de aproximadamente 100 ml. Solubilidad El trmino parcialmente soluble se emplea en el caso de una mezcla en la que slo una parte de sus componentes se disuelve. El trmino miscible se emplea para describir un lquido que es miscible en todas las proporciones con el solvente indicado. Las indicaciones de solubilidad que figuran bajo el epgrafe Caracteres generales se expresan en trminos cuyo significado, referido a u na temperatura entre 15 y 30 C, es el siguiente:

Volmenes aproximados de solvente en mililitros por gramo de sustancia Inferior a 1

Fcilmente soluble Soluble Moderadamente soluble Poco soluble Muy poco soluble Prcticamente insoluble

De 1 a 10 De 10 a 30 De 30 a 100 De 100 a 1.000 De 1.000 a 10.000 Ms de 10.000 La utilizacin de las siguientes expresiones, empleadas en ensayos descriptos en la FA se refieren a: Blanco: cuando se indique que se deben hacer las correcciones necesarias por medio de una determinacin con un control, tal determinacin se har empleando las mismas cantidades de los reactivos tratados de igual manera que la solucin o mezcla que contiene la sustancia bajo valoracin o ensayo, pero omitiendo dicha sustancia. Bao de agua: cuando se indique el empleo de bao de agua, se emplear un bao de agua a ebullicin salvo que se indique una temperatura distinta. Bao de vapor: cuando se indique el empleo de bao de vapor, podr emplearse la exposicin al vapor vivo fluente u otra forma de calor regulado, a una temperatura equivalente a la del vapor fluente. Cepas microbianas: cuando se cita una cepa microbiana y se la identifica por el nmero de catlogo ATCC (American Type Culture Collection) o de otra coleccin similar, la cepa especfica se emplear directamente o, si se subcultiva, se emplearn no ms de cinco pasajes a partir de la cepa original. Comparacin de color: cuando se indique una comparacin visual de color o de turbidez, debern emplearse tubos de comparacin de fondo plano (tubos de Nessler) cuyas medidas internas se correspondan lo ms estrechamente posible. Para la comparacin del color, los tubos en posicin vertical debern ser observados longitudinalmente a lo largo del tubo con una fuente de luz difusa sobre un fondo blanco, mientras que para la comparacin de turbidez debern ser observados transversalmente, colocados sobre un fondo oscuro, con ayuda de una fuente luminosa que los ilumine lateralmente. Cuantitativamente y en etapas: cuando se indique que una solucin debe ser diluida cuantitativamente y en etapas, una porcin medida con exactitud ser disuelta en agua u otro solvente en la proporcin indicada en uno o ms pasos. La eleccin del material volumtrico a e mplearse deber tener en cuenta los errores relativamente grandes que generalmente se asocian a materiales volumtricos de volumen pequeo (ver 620. Materiales volumtricos).

Identificacin Los ensayos de la Farmacopea que figuran despus del subttulo Identificacin no estn destinados a proporcionar una confirmacin completa de la estructura qumica o composicin del producto; su objeto es confirmar que el producto se ajusta a l a descripcin dada en el rtulo del envase. C uando un producto no satisface los requisitos de un ensayo de identificacin descripto, indica que el mismo no cumple con las especificaciones. Otros ensayos o especificaciones en la monografa a menudo contribuyen a establecer o confirmar la identidad del producto ensayado. Ensayos y valoraciones Los ensayos y las valoraciones descriptas en esta Farmacopea constituyen los mtodos oficiales de anlisis. El analista podr emplear ensayos alternativos, previamente validados, si demuestran otorgar ventajas desde el punto de vista de la exactitud, precisin, sensibilidad, selectividad o simplifican el procedimiento sin modificar los atributos anteriores. S in embargo, en caso de indecisin o litigio, los ensayos descriptos en esta Farmacopea sern los definitivos. La concentracin de impurezas establecida en ciertos ensayos se expresa entre parntesis como porcentaje o partes por milln (ppm). E n el caso que corresponda, el cumplimiento de este ensayo ser necesario para establecer la conformidad de un producto. Los materiales volumtricos, pesas y balanzas debern ajustarse a las especificaciones establecidas en los captulos . Materiales volumtricos y . Pesas y balanzas. Cuando en un ensayo o v aloracin se indique que se debe examinar una cierta cantidad de sustancia o un nmero exacto de unidades de dosificacin, la cantidad especificada representa un nmero mnimo que se elige nicamente para facilitar la manipulacin analtica. Esto de ninguna manera limita la cantidad total de material a emplear. Procedimientos En todos los ensayos descriptos en esta Farmacopea, se deber cumplir estrictamente con las Buenas Prcticas de Laboratorio (BPL).

Densidad relativa: cuando no se indique lo contrario, la densidad relativa se calcular como la relacin entre el peso de un volumen determinado de una sustancia en el aire a 25 C y el peso de un volumen igual de agua a esa misma temperatura. Desecador: la expresin en un de secador especifica el empleo de un recipiente perfectamente cerrado, de tamao y forma apropiados, que mantenga una atmsfera de bajo contenido de humedad mediante gel de slice u otro desecante apropiado. Filtrar: cuando se indique filtrar, sin otra calificacin, se entender que el lquido debe ser filtrado a travs de papel de filtro apropiado o con un medio equivalente de modo que el filtrado sea claro. Ignicin hasta peso constante: significa que deber continuarse la ignicin a 8 00 25 C a menos que se indique de otro modo, hasta que dos pesadas consecutivas no difieran en ms de 0,50 mg por gramo de sustancia ensayada, haciendo la segunda pesada despus de un perodo de 15 minutos de ignicin adicional. Indicador: cuando una solucin de reactivo se utilice como indicador, se agregarn aproximadamente 0,2 ml o 3 gotas de la solucin, generalmente cerca del punto final, a menos que se indique de otro modo. Medidas de presin: el trmino mm Hg empleado en referencia a mediciones de presin se refiere al uso de un manmetro apropiado o un barmetro calibrado en trminos de la presin ejercida por una columna de mercurio de la altura indicada. Pesar y medir exactamente: las expresiones pesar exactamente alrededor de o medir exactamente alrededor de indican que se debe tomar una cantidad dentro de 100 10 % del peso o volumen especificado. S in embargo, el peso o volumen que se tome deber ser determinado con exactitud y el resultado calculado sobre la base de la cantidad que se haya tomado. Se pueden tomar cantidades proporcionalmente mayores o m enores que los pesos y volmenes especificados, tanto para la Sustancia de referencia como para la sustancia en ensayo, siempre que la medida se tome con exactitud y que se ajusten a los pasos siguientes, para proporcionar concentraciones equivalentes a las descriptas. E xpresiones tales como 25,0 ml y 25,0 mg se emplean en relacin a medidas de volumen o de peso e indican que la cantidad debe ser medida o pesada exactamente dentro de los lmites establecidos en los captulos . Materiales volumtricos o . Pesas y balanzas.

Pipetas: cuando se indique el uso de una pipeta para medir un volumen, aqulla deber cumplir con los requisitos establecidos en el captulo . Materiales volumtricos y deber emplearse de manera que el error no exceda el lmite establecido para una pipeta del tamao especificado. C uando se especifica el empleo de una pipeta, sta puede sustituirse por una bureta apropiada que cumpla con los requisitos especificados en . Materiales volumtricos. Secado hasta peso constante: significa que deber continuarse el secado a menos que se indique de otro modo, hasta que dos pesadas consecutivas no difieran en ms de 0,50 mg por gramo de sustancia ensayada, haciendo la segunda pesada despus de una hora adicional de secado; segn la metodologa establecida en la monografa correspondiente. Soluciones: la expresin 1 en 10 significa que 1 parte en volumen de un lquido debe diluirse con, o 1 parte en peso de un slido debe disolverse en suficiente solvente para que el volumen de la solucin final sea de 10 partes en volumen. La expresin 10:6:1 significa que los nmeros respectivos de partes, en volumen, de los lquidos sealados debern mezclarse, a m enos que se indique de otro modo. La expresin partes por milln (ppm) sin otra precisin, se refiere a peso con respecto a un milln de partes en peso. Solventes: cuando no se menciona explcitamente el solvente, se entiende que la muestra es disuelta en agua. Temperaturas: todas las temperaturas en esta Farmacopea se expresan en grados centgrados (Celsius) y todas las mediciones se hacen a 25 C, a menos que se especifique de otro modo. Tiempo lmite: al efectuar ensayos y valoraciones se aguardar 5 minutos para que se produzca la reaccin, a menos que se especifique de otro modo. Vaco: el trmino al vaco especifica la exposicin a una presin menor de 20 mm Hg, a menos que se indique de otro modo. Cuando se especifique en la monografa correspondiente la desecacin al vaco sobre un desecante, se deber emplear un desecador al vaco, una pistola para desecar al vaco u otro instrumento apropiado para este fin. MTODOS GENERALES DE ANLISIS Cada captulo general es designado por un nmero de orden seguido del nombre del mismo entre parntesis, como por ej. (ver 100.

Cromatografa). E stos captulos que incluyen los requerimientos generales para ensayos y valoraciones son numerados de 1 a 990 y los captulos que forman los textos de informacin general son numerados a partir de 1000. ATRIBUTOS ADICIONALES Adems de cumplir los requisitos de los ensayos de Sustancias relacionadas, Pureza cromatogrfica y Lmite de impurezas, descriptos en las monografas correspondientes, el anlisis de las materias primas deber complementarse mediante la bsqueda de impurezas de sntesis y sustancias relacionadas segn el origen de las mismas. UNIDADES DE POTENCIA BIOLGICA Para las sustancias que no puedan ser caracterizadas completamente por medios qumicos o fsicos, podr ser necesario expresar la actividad en unidades de potencia biolgica. Las unidades de potencia biolgica definidas por la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) a travs de Estndares Biolgicos Internacionales y Preparaciones Biolgicas de Referencia Internacionales son denominadas Unidades Internacionales (UI). Las unidades definidas en la FA son Unidades Internacionales y las monografas correspondientes se refieren a stas. Para los antibiticos cuya potencia se expresa en unidades, stas son definidas por las correspondientes Sustancias de referencia SR-FA. Cada unidad es en general establecida, basada en la definicin de la Unidad Internacional de la OMS. Sin embargo, para la mayora de los antibiticos no son necesarias las unidades biolgicas de potencia y su actividad se expresa en unidades mtricas (microgramos o miligramos) en funcin de sustancias qumicamente definidas descriptas en las monografas correspondientes. ELABORACIN DE PRODUCTOS FARMACUTICOS La elaboracin de productos farmacuticos deber realizarse observando los principios de . Buenas prcticas de fabricacin para elaboradores, importadores/exportadores de medicamentos y el producto resultante deber cumplir con los requisitos tcnicos establecidos en esta Farmacopea. ENVASES

Los requisitos farmacopeicos para el empleo de envases se especifican en las monografas correspondientes. El empleo de las siguientes expresiones descriptas en esta Farmacopea se refieren a: Envase con cierre inviolable: es aqul provisto de un dispositivo especial que revela inequvocamente si ha sido abierto. Envase inactnico: es aqul que protege el contenido de los efectos de la luz, gracias a l as propiedades especficas de los materiales con que est compuesto. Envase bien cerrado: es el que evita el ingreso de slidos extraos y la prdida del contenido bajo las condiciones usuales de manejo, almacenamiento, distribucin y transporte. Envase de cierre perfecto: es aqul que protege el contenido de la contaminacin con sustancias extraas y evita la entrada de humedad, impidiendo la efervescencia, delicuescencia o evaporacin bajo las condiciones usuales de manejo, almacenamiento, transporte, manteniendo su condicin de cierre perfecto despus de su manipulacin. Envase hermtico: es aquel que no permite la entrada de slidos, lquidos o gases en las condiciones usuales de manejo, almacenamiento, distribucin y transporte. Envase seguro para nios: es aquel que posee un mecanismo tal que dificulta su apertura directa. Dichos envases slo pueden ser abiertos luego de recibir las instrucciones pertinentes. Envase monodosis: es aquel que est diseado para contener una cantidad de sustancia destinada a administrarse en una nica dosis, inmediatamente despus de abierto. Envase multidosis: es aquel que permite la extraccin de porciones sucesivas del contenido sin cambios en la potencia, calidad o pureza de la porcin remanente. CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO El almacenamiento de productos debe ser realizado en condiciones adecuadas de temperatura, humedad e i luminacin de acuerdo con las instrucciones del fabricante, de manera de no afectar adversamente de forma directa o indirecta, la calidad de los mismos. Este concepto debe extenderse a la distribucin y transporte. Las sustancias y las preparaciones descriptas en la FA debern almacenarse a temperatura ambiente, a menos que se especifique de otro modo. El empleo de las siguientes expresiones descriptas en esta Farmacopea se refieren a:

Almacenar en un freezer: corresponde al almacenamiento del producto a u na temperatura establecida entre - 25 y 10 C. Almacenar en un sitio fro: corresponde al almacenamiento del producto a una temperatura que no exceda los 8 C. Una heladera/refrigerador es un sitio fro con una temperatura que se mantiene termostticamente entre 2 y 8 C. Almacenar en un sitio fresco: corresponde al almacenamiento del producto a temperatura entre 8 y 15 C. Las cmaras fras permiten obtener estas condiciones. Almacenar at emperatura ambiente: corresponde al almacenamiento a temperatura entre 15 y 30 C. E ste concepto esta relacionado al almacenamiento en depsitos de laboratorios de especialidades medicinales y distribuidoras. Almacenar a temperatura ambiente controlada: corresponde al almacenamiento de un producto a temperatura termostticamente controlada entre 20 y 25 C. En algunas monografas pueden indicarse las siguientes expresiones: Evitar almacenar en ambientes clidos definiendo clido a temperatura entre 30 y 40 C. Evitar el calor excesivo, definiendo calor excesivo a temperatura superior a 40 C. Evitar el congelamiento en los casos en que el mismo ocasionara la prdida de potencia o cambio en las caractersticas fisicoqumicas de un producto. Indicaciones generales: No deben retirarse los medicamentos de sus envases primario y secundario. No deben exponerse los productos al sol ni a las temperaturas extremas. Se debe evitar almacenar los medicamentos en ambientes hmedos. No deben almacenarse medicamentos en heladera excepto que dicha condicin se encuentre indicada en el rtulo, prospecto y/o envase. ROTULADO El rtulo de cada producto deber establecer el contenido del o de los principios activos expresados en las monografas.Cantidad Nombre Longitud Masa Tiempo Smbolo l m t Unidad Nombre Smbolo metro kilogramo segundo M Kg S

Cantidad de principio activo por unidad de dosificacin: la potencia de un producto se expresa en el rtulo del envase como microgramos, miligramos, gramos, porcentaje del ingrediente, o unidad internacional teraputicamente activa presente en la preparacin. Las formas farmacuticas como cpsulas, comprimidos u otras formas de dosificacin establecidas en esta Farmacopea debern rotularse de modo que expresen la cantidad de cada principio activo contenido en cada unidad de dosificacin. En el caso de lquidos de administracin oral o slidos para reconstituir, debern rotularse en trminos, como por ej., cada 5 mililitros del lquido o del preparado resultante. Rotulado de electrolitos: la concentracin y dosificacin de electrolitos para terapias de reposicin deber especificarse en miliequivalentesgramo (mEq). Rotulado del contenido alcohlico: el contenido de alcohol en una preparacin lquida deber especificarse como % v/v de etanol. Fecha de vencimiento: la fecha de vencimiento identifica el fin del perodo de vida til del producto, durante el cual el mismo deber cumplir con los requisitos de esta Farmacopea, siempre que se conserve en las condiciones de almacenamiento establecidas. Todos los productos debern exhibir la fecha de vencimiento en el rtulo y en su envase primario, la cual es asignada a travs de estudios de estabilidad realizados para esa formulacin en un envase predefinido y autorizado por la Autoridad Sanitaria. UNIDADES DEL SISTEMA INTERNACIONAL (SI) Y EQUIVALENCIA CON OTRAS UNIDADES DE MEDIDA Los nombres y smbolos empleados en la Farmacopea Argentina para las unidades de medicin son los del Sistema Internacional de Unidades (SI), establecido por la Conferencia General de Pesas y Medidas. Comprende tres clases de unidades: unidades bsicas, unidades derivadas y unidades complementarias.

Definicin El metro es la longitud del camino recorrido por la luz en el vaco durante un intervalo de tiempo igual a 1/299.792.458 de segundo. El kilogramo es igual a la masa del patrn internacional del kilogramo. El segundo es la duracin de 9.192.631.770 de la

Corriente elctrica Temperatura termodinmica Cantidad de sustancia

I

amperio

A

T n

kelvin mol

K Mol

Intensidad luminosa

Iv

candela

Cd

radiacin correspondiente a l a transicin de los dos niveles hiperfinos del estado fundamental del tomo de cesio-133. El amperio es la corriente constante que, mantenida en dos conductores paralelos de longitud infinita, de seccin circular despreciable, en el vaco y separados por una distancia de un metro, producira entre ellos una fuerza igual a 2 107 newton por metro de longitud. El kelvin es la fraccin 1/273,16 de la temperatura termodinmica del punto triple del agua. El mol es la cantidad de sustancia de un sistema que contiene tantas unidades elementales como el nmero de tomos contenidos en 0,012 kilogramos de carbono-12. La candela es la intensidad luminosa en una direccin determinada de una fuente emisora de radiacin monocromtica con una frecuencia de 540 1012 hertz y cuya intesidad de energa en dicha direccin es de 1/683 watt por estereorradian.

Unidades utilizadas con el SICantidad Nombre Minuto Tiempo ngulo plano Volumen Masa Frecuencia de giro Hora Da Grado Litro Tonelada revolucin por minuto Unidad Smbolo min h d l t rpm 1 min = 60 s 1 h = 60 min = 3.600 s 1d = 24 h = 86.400 s 1 = (/180) rad 1 l = 1 dm3 = 10-3 m3 1 t = 103 kg 1 rpm = (1/60) s-1 Valor en unidades SI

Mltiplos y submltiplos decimales de las unidadesFactor 1018 10 1015 12 9 6 3 2 1

Prefijo exa peta tera giga mega kilo hecto deca

Smbolo E P T G M k h da

Factor 10-1 10 10 10 10 10 10 10-2 -3 -6 -9

Prefijo deci centi mili micro nano pico femto atto

Smbolo d c m n p f a

10 10 10 10 10

-12 -15 -18

Unidades SI utilizadas en la Farmacopea Argentina y su equivalencia con otras unidadesCantidad Nombre Nmero de onda Longitud de onda Smbolo Nombre uno por metro micrmetro nanmetro Smbolo 1/m m Nm Unidad Expresin en unidades SI bsicas m-1 10-6m 10-9m Expresin en otras unidades SI Conversin de otras unidades en unidades SI

Frecuencia rea Volumen Densidad (concentracin de masa) Velocidad Fuerza

A, S V

hertz metro cuadrado metro cbico kilogramo por metro cbico metro por segundo newton

Hz m2 m3 kg/m3 m/s N

s-1 m2 m3 kg m-3 m s-1 m kg s2 1 dina=1g cm s-2=105N 1 kp = 9,80665 N 1 dina/cm2 =10-1Pa=10-1 N m-2 1atm = 101.325 Pa = 101,325 kPa 1 ml = 1 cm3 = 10-6m3 1g/ml=1g/cm3=103kg/m3

v F

Presin

P

pascal

Pa

m-1 kg s-2

N m-2

1 bar = 105 kPa = 0,1 Mpa 1 mmHg = 133,322387 Pa 1 Torr = 133,322368 Pa 1 psi = 6,894757 kPa 1 P = 10-1 Pa s = 10-1 N s m2 1 cP = 1 mPa s-1

Viscosidad absoluta Viscosidad cinemtica Energa Potencia (flujo de radiacin) Dosis absorbida (energa radiante) Potencial elctrico (fuerza electromotriz) Resistencia elctrica Cantidad de electricidad Actividad de un radionucedo Concentracin molar

W P D U R Q A M

pascal segundo metro cuadrado por segundo joule watio gray volt ohm coulomb becquerel molaridad

Pa s m2/s J W Gy V C Bq mol/dm3

m-1 kg s-1 m2 s-1 m2 km s-2 m2 km s-3 m2 s-2 m2 kg s-3 A-1 m2 kg s-3 A-2 As s-1 103 mol m-3

N s m-2 Pa s m kg3

N m s kg-1 Nm Nms Js-1 -1

1 St = 1 cm2 s-1 = 10-4 m2 s-1 1 erg = 1 cm3 g s-2 = 1 dina cm = 10-1 J 1 cal = 4,1868 J 1 erg/s = 1 dina cm s-1 = 10-7 W = 10-7 N m s-1 = 10-7 J s-1 1 rad = 10-2 Gy

J kg-1 W A-1 V A-1

1 Ci = 37109 Bq = 3710-9 s-1 1 mol/l = 1 M = 1 mol/dm3 = 103 mol m-3

MTODOS GENERALES DE ANLISIS

10. ANLISIS ESTADSTICO DE RESULTADOS DE ENSAYOS BIOLGICOSCONTENIDOS 1 INTRODUCCIN 1.1 Diseo general y precisin

2 3

ALEATORIZACIN E INDEPENDENCIA DE LOS TRATAMIENTOS INDIVIDUALES ENSAYOS QUE DEPENDEN DE RESPUESTAS CUANTITATIVAS 3.1 Modelos estadsticos 3.1.1 3.1.2 3.1.3 3.2.1 3.2.2 Principios generales Ensayos de rutina Clculos y restricciones Introduccin Diseo del ensayo

3.2 Modelo de lneas paralelas

3.2.2.1 Diseo completamente aleatorizado 3.2.2.2 Diseo en bloques aleatorizados 3.2.2.3 Diseo cuadrado latino 3.2.2.4 Diseo cruzado 3.2.3 3.2.4 3.2.5 3.2.6 3.3.1 3.3.2 3.3.3 Anlisis de varianza Criterios de validez Estimacin de la potencia y lmites de confianza Valores perdidos Introduccin Diseo del ensayo Anlisis de varianza.

3.3 Modelo de relacin de pendientes

3.3.3.1 Diseo (hd + 1) 3.3.3.2 Diseo (hd) 3.3.4 3.3.5 Criterios de validez Estimacin de la potencia y lmites de confianza

3.3.5.1 Diseo (hd + 1) 3.3.5.2 Diseo (hd)

4

ENSAYOS QUE DEPENDEN DE RESPUESTAS CUANTALES 4.1 Introduccin 4.2 Mtodo de probitos 4.2.1 4.2.2 Tabulacin de resultados Criterios de validez

4.2.3 4.2.4

Estimacin de la potencia y lmites de confianza Ensayos no vlidos

4.3 Mtodo de logitos 4.4 Otras formas de la curva 4.5 Dosis mediana efectiva

5

EJEMPLOS 5.1 Modelo de lneas paralelas 5.1.1 5.1.2 5.1.3 5.2.1 5.2.2 Ensayo mltiple de tres dosis con diseo completamente aleatorizado Ensayo mltiple de cinco dosis con diseo completamente aleatorizado Ensayo de dos dosis con diseo de cuadrado latino y sin replicacin Ensayo completamente aleatorizado con diseo (1,3,3) Ensayo completamente aleatorizado con diseo (0,4,4,4)

5.2 Modelo de relacin de pendientes

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COMBINACIN DE RESULTADOS DE ENSAYOS 6.1 Introduccin 6.2 Combinacin ponderada de resultados de ensayos 6.2.1 6.2.2 6.2.3 6.2.4 Clculo de los coeficientes de ponderacin Homogeneidad de las estimaciones de potencia Clculo de la media ponderada y lmites de confianza Media ponderada y lmites de confianza basados en la variacin intra e inter ensayo

6.3 Combinacin no ponderada de resultados de ensayos 6.4 Ejemplo de potencia media ponderada y lmites de confianza de ensayos de lneas paralelas 6.5 Ejemplo de potencia media ponderada y lmites de confianza de ensayos de relacin de pendientes con igual potencia supuesta

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TABLA 7.1 Distribucin F 7.2 Distribucin t 7.3 Distribucin 2 7.4 Distribucin

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GLOSARIO DE SIMBOLOS

1 INTRODUCCIN Este captulo proporciona una gua para el diseo de los ensayos biolgicos especificados en la Farmacopea Argentina (FA) y para el anlisis de sus resultados. Puede ser empleado por personas cuya especialidad no es la estadstica pero tienen la responsabilidad del anlisis e interpretacin de resultados de estos ensayos a menudo sin la ayuda y consejo de un estadstico. Los mtodos de clculo descriptos en el presente captulo no son obligatorios para analizar los ensayos biolgicos que constituyen en s mismos una parte obligatoria de la FA. Pueden usarse mtodos alternativos siempre que no sean menos confiables que los descriptos en este documento. Existe una gran variedad de programas de computacin disponibles y pueden ser tiles dependiendo de la disponibilidad y de la habilidad del analista. Se debera asegurar el asesoramiento de un experto en estadstica cuando: la investigacin o desarrollo de nuevos productos requiera un adecuado diseo y un anlisis estadstico especfico; cuando se requiera analizar amplias curvas dosis-respuesta no lineales, por ejemplo en inmunoensayos; o cuando no se puedan cumplimentar las restricciones impuestas al diseo en este captulo, por ejemplo igual nmero de dosis igualmente espaciadas. 1.1 Diseo general y precisin Se describen mtodos biolgicos para la valoracin de ciertas sustancias y preparaciones cuya potencia no puede determinarse adecuadamente mediante anlisis qumicos o fsicos. El principio aplicado, siempre que sea posible a lo largo de estos ensayos, es el de comparacin con una preparacin estndar de forma que se determina qu cantidad de la sustancia, que se va a examinar, produce el mismo efecto biolgico que una cantidad dada, la Unidad, de la preparacin estndar. Es una condicin esencial de dichos mtodos biolgicos, que los ensayos sobre la preparacin estndar y sobre la sustancia a examinar se realicen al mismo tiempo y bajo condiciones tan idnticas como sea posible. Para algunos ensayos (por ejemplo determinacin de ttulo de un virus) la potencia de la muestra no se expresa relativa a un estndar. Cualquier estimacin de potencia obtenida a partir de un ensayo biolgico est sometida a un error aleatorio debido a l a variabilidad inherente de las respuestas biolgicas y los clculos de errores deben realizarse, si es posible, a partir de los resultados de cada ensayo incluso cuando se usa el mtodo oficial. Por lo tanto a continuacin se describen mtodos para el diseo de ensayos y el clculo de sus errores. En cualquier caso antes de adoptar un mtodo estadstico deben realizarse ensayos preliminares, en cantidad suficiente, para descubrir la aplicabilidad de este mtodo. El intervalo de confianza para potencias dadas es una indicacin de la precisin con la cual la potencia ha sido estimada en el ensayo. Se calcula teniendo en cuenta el diseo experimental y el tamao de la muestra. En ensayos biolgicos normalmente se escogen lmites de confianza del 95 por ciento. Se usan mtodos matemticos para calcular estos lmites de forma que se justifique la expectativa de que hay una probabilidad (confianza) del 95 por ciento de que estos lmites incluyan la verdadera potencia. Los lmites de confianza de la potencia constituyen un indicador de la precisin con la que se ha calculado la potencia en el ensayo, que esta precisin sea aceptable para la FA depende de los requisitos establecidos en la monografa de la preparacin. Los trminos media y desviacin estndar se usan en este documento segn se definen en los libros de texto de estadstica actuales. Los trminos potencia declarada, potencia asignada, potencia asumida, relacin de potencias y potencia estimada se usan en esta seccin para indicar los siguientes conceptos: - potencia declarada: en el caso de un producto formulado es un valor nominal asignado a partir del conocimiento de la potencia de la materia prima; en el caso de una materia prima es la potencia estimada por el fabricante. - potencia asignada: es la potencia de una preparacin estndar. - potencia asumida: es la potencia de la preparacin que se va a examinar y que forma la base del clculo de las dosis que podran ser equipotentes con las dosis que se van a usar de la preparacin estndar. - relacin de potencias de una preparacin desconocida: es la relacin de dosis equipotentes de la preparacin estndar y de la preparacin desconocida bajo las condiciones del ensayo. - potencia estimada: es la potencia calculada a partir de los datos del ensayo. La Seccin 8. Glosario de smbolos es una tabla de los usos ms importantes de smbolos a lo largo de este captulo. Cuando el texto hace referencia a smbolos no mostrados en esta seccin o usa un smbolo para designar un concepto diferente, ste se define en esa parte del texto.

2 ALEATORIZACIN E INDEPENDENCIA DE LOS TRATAMIENTOS INDIVIDUALES La asignacin de los distintos tratamientos a diferentes unidades experimentales (animales, tubos, etc.) debe realizarse mediante algunos procesos estrictamente aleatorios. Cualquier otra eleccin de condiciones experimentales que no haya sido permitida deliberadamente en el diseo experimental tambin debe hacerse al azar. Son ejemplos la eleccin de las posiciones de las jaulas en un laboratorio y el orden en el que se administran los tratamientos. En particular, un grupo de animales que recibe la misma dosis de cualquier preparacin no debe tratarse conjuntamente (al mismo tiempo o en la misma posicin) a menos que haya una fuerte evidencia de que la fuente relevante de variacin (por ejemplo, entre tiempos o entre posiciones) es despreciable. Pueden realizarse asignaciones aleatorias a partir de tablas estndar de nmeros aleatorios de muestreo que normalmente van acompaados de instrucciones de uso. Cualquiera que sea el mtodo empleado, el analista debe tener cuidado de usar series diferentes de nmeros aleatorios para los diferentes ensayos. Las preparaciones asignadas a cada unidad experimental deberan ser tan independientes como sea posible. Dentro de cada grupo experimental, las diluciones realizadas para las dosis asignadas a cada tratamiento no deben ser simplemente divisiones de la misma dosis sino que deben prepararse individualmente. Sin esta precaucin indispensable, la variabilidad inherente a la preparacin no estar completamente representada en la varianza del error experimental. El resultado ser una subestimacin del error residual que conduce a: 1) un aumento no justificado en la rigurosidad de las pruebas para el anlisis de varianza (ver en la Seccin 3: Anlisis de varianza y Criterios de validez). 2) una subestimacin de los lmites de confianza verdaderos del ensayo, los cuales, como se muestra en la Seccin 3. Estimacin de la potencia y lmites de confianza, se calculan a partir de la estimacin de s2 del cuadrado medio del error residual. 3 ENSAYOS QUE DEPENDEN DE RESPUESTAS CUANTITATIVAS 3.1 Modelos Estadsticos 3.1.1 Principios generales Los ensayos biolgicos incluidos en la FA se han concebido como ensayos de dilucin, lo que significa que se supone que la preparacin desconocida a ensayar contiene el mismo principio activo que la preparacin estndar pero en una proporcin diferente de componentes activos e inertes. En tal caso la preparacin desconocida puede obtenerse, en teora, a partir de la preparacin estndar por dilucin con componentes inertes. Para comprobar si un ensayo en particular se comporta como un ensayo de dilucin es necesario comparar la relacin dosis-respuesta de estndar y desconocido. Si la relacin difiere significativamente el ensayo es no vlido. Diferencias significativas en la relacin dosis-respuesta de estndar y desconocido puede significar que una de las preparaciones contiene, adems del principio activo, otro componente no inerte que puede influenciar la respuesta. Para hacer evidente el efecto de dilucin, en el modelo terico, es til transformar la relacin dosisrespuesta en una funcin lineal en el rango ms amplio de dosis posible. Para los ensayos biolgicos descriptos, son de inters dos modelos estadsticos: el modelo de lneas paralelas y el modelo de relacin de pendientes. La aplicacin de uno u otro depende del cumplimiento de las siguientes condiciones: 1) los diferentes tratamientos se han asignado al azar a las unidades experimentales; 2) las respuestas a cada tratamiento se distribuyen normalmente; 3) la desviacin estndar de las respuestas dentro de cada grupo de tratamiento, para la preparacin estndar y desconocido, no difiere significativamente una de otra. Cuando un ensayo est en etapa de desarrollo el analista tiene que cerciorarse que los datos recolectados de muchos ensayos satisfacen estas condiciones tericas. - La condicin 1 puede cumplirse usando eficazmente la Seccin 2. - La condicin 2 es una condicin que casi siempre se cumple en la prctica. Desviaciones pequeas de esta suposicin no introducen diferencias serias en el anlisis siempre y cuando se incluyan varias rplicas por tratamientos. Cuando se sospechen desviaciones de la distribucin normal en una serie de muestras pequeas puede usarse la Prueba de Shapiro -Wilk para normalidad de distribucin. Wilk, M.B. y Shapiro, S.S. (1968). The joint assessment of normality of several independent samples, Technometrics 10,825-839. - La condicin 3 puede ser probada con un ensayo para homogeneidad de la varianza (prueba de Bartlett, prueba de Cochran) Bartlett, M.S(1937). Properties of sufficiency and statistical tests, Proc. Roy. Soc. London, Series A 160, 280-282. Cochran, W.G (1951). Testing a linear relation among variances, Biometrics 7, 17-32.

Cuando el analista sospecha que no se cumplen las condiciones 2 y/o 3, una transformacin de la respuesta y a ln y, o a y o a y2 puede conducir a un mejor cumplimiento de estas condiciones. Debern consultarse libros de texto de estadstica para otras transformaciones. La transformacin logartmica de y en ln y puede ser til cuando la homogeneidad de varianzas no es satisfactoria. Tambin puede mejorar la normalidad si la distribucin tiene asimetra a la derecha. La transformacin de y en y es til cuando las observaciones siguen una distribucin Poisson, es decir cuando se obtienen por conteo. La transformacin de y en y2 puede ser til si, por ejemplo, la dosis parece ser ms proporcional al rea de una zona de inhibicin que a la medida del dimetro de esa zona. El analista debe decidir sobre el tipo de transformacin adecuada para cada tipo de ensayo biolgico cuando ste se est poniendo a punto en su laboratorio. Cuando las condiciones 2 y/o 3 parecen no cumplirse durante un ensayo rutinario de este tipo, el analista no debe adoptar otra transformacin a menos que est convencido de que este incumplimiento de los requisitos no es casual, sino que es debido a un cambio sistemtico de las condiciones experimentales, en este caso debe repetirse el ensayo preliminar antes de adoptar una nueva transformacin para los ensayos rutinarios. Una categora distinta la forman los ensayos en los que no puede medirse la respuesta en cada una de las unidades experimentales, sino que solamente puede contarse la fraccin de unidades que responden a cada tratamiento. Esta categora se trata en la Seccin 4. 3.1.2 Ensayos de rutina Cuando los ensayos se hacen de forma rutinaria, es raro que se cumplan de forma sistemtica las condiciones 1 a 3 debido a que el nmero limitado de observaciones por ensayo probablemente tenga influencia en la sensibilidad del anlisis estadstico. Afortunadamente, los estadsticos han demostrado que, en ensayos balanceados simtricamente, las desviaciones pequeas en la homogeneidad de varianza y en la normalidad no afectan de forma grave los resultados del ensayo. La aplicacin de los modelos estadsticos slo necesita cuestionarse si una serie de ensayos muestran una validez dudosa, entonces puede ser necesario realizar nuevas series de investigaciones preliminares como se discute en la Seccin 3.1.1. Otras dos condiciones necesarias dependen del modelo estadstico a usar: A - Para modelo de lneas paralelas (ver Figura 3.2.1.-I) 4A - La relacin entre el logaritmo de la dosis y la respuesta puede representarse por una lnea recta en el intervalo de dosis usadas. 5A - Para cualquier preparacin desconocida en el ensayo, la lnea recta es paralela a la del estndar. B - Para modelo de relacin de pendientes (ver Figura 3.3.1.-I) 4B - La relacin entre la dosis y la respuesta puede representarse por una lnea recta, para cada preparacin, en el intervalo de dosis usadas. 5B - Para cualquier preparacin desconocida en el ensayo la lnea recta intersecta, al eje y, a la dosis cero en el mismo punto que la lnea recta de la preparacin estndar (es decir, la funcin respuesta, de todas las preparaciones analizadas en el ensayo, tienen que tener el mismo punto de interseccin, en el eje y, que la funcin respuesta del estndar). Las condiciones 4A y 4B slo se pueden verificar en los ensayos en los que se hayan analizado al menos tres diluciones de cada preparacin. El empleo de un ensayo con menos diluciones puede estar justificado cuando la experiencia haya demostrado que la linealidad y el paralelismo o igual interseccin se cumplen regularmente. Despus de recolectar los datos y antes de calcular la potencia relativa de cada preparacin se debe realizar un anlisis de varianza con la finalidad de comprobar el cumplimiento de las condiciones 4A y 5A o 4B y 5B. Para esto, el total de las sumas de cuadrados se subdivide en cierto nmero de sumas de cuadrados correspondientes a cada una de las condiciones que se deben cumplir. La suma de cuadrados remanente representa el error experimental residual con la cual la ausencia o existencia de fuente de variacin relevante se pueden comparar mediante una serie de valores de razones F. Cuando se ha establecido la validez, la potencia de cada preparacin desconocida con respecto al estndar puede calcularse y expresarse como una relacin de potencias o convertirse en alguna unidad relevante en la preparacin bajo ensayo, por ejemplo, una unidad internacional. Tambin pueden estimarse los lmites de confianza a partir de cada serie de datos del ensayo. Si no se cumple alguna de las cinco condiciones (1, 2, 3, 4A y 5A o 1, 2, 3, 4B y 5B) los mtodos de clculo descriptos aqu no son vlidos y debe realizarse un estudio especial del diseo del ensayo.

El analista no debera adoptar otra transformacin a menos que haya evidenciado que el no cumplimiento de los requisitos no es accidental sino debido a un cambio o variacin sistemtica de las condiciones experimentales. En este caso se debe repetir el ensayo descripto en la Seccin 3.3.1 antes de adoptar una nueva transformacin en los ensayos de rutina. En ensayos de rutina desarrollados para comparar preparaciones similares un nmero excesivo de ensayos no vlidos, debido a ausencia de paralelismo o de linealidad, denota probablemente diseos con replicaciones inadecuadas. Normalmente esta falta de adecuacin se debe a un reconocimiento incompleto de todas las fuentes de variabilidad que afectan al ensayo, lo cual puede producir una subestimacin del error residual que conducira a razones F grandes. No siempre es posible tener en cuenta la totalidad de las posibles fuentes de variacin dentro de un e nsayo simple (por ejemplo, variaciones da a da). En un caso as, los intervalos de confianza de ensayos repetidos sobre la misma muestra pueden no superponerse satisfactoriamente y se debe poner especial cuidado en la interpretacin de los intervalos de confianza individuales. Para obtener una estimacin ms confiable del intervalo de confianza puede ser necesario desarrollar varios ensayos independientes y combinar stos en una nica potencia estimada y un intervalo de confianza (ver Seccin 6). Con la finalidad de controlar la calidad de los ensayos de rutina es recomendable guardar copia de los valores estimados de la pendiente de regresin y del valor estimado del error residual en las cartas control. Un error residual excepcionalmente alto puede indicar algn problema de tipo tcnico. ste debera ser investigado, y si se puede evidenciar algn error analtico en el ensayo, debera ser repetido. Un error residual inusualmente alto puede indicar la presencia de un valor atpico ocasional o de una observacin aberrante. Se rechaza una respuesta que es cuestionable debido a una falla en el cumplimiento del procedimiento durante el desarrollo del ensayo. Si se descubre un valor aberrante despus de que las respuestas ya han sido registradas, que puede ser adjudicable a irregularidades del ensayo, su omisin puede estar justificada. La exclusin arbitraria o el mantenimiento de una respuesta aparentemente atpica puede ser una fuente grave de sesgo. En general el rechazo de observaciones solamente porque un ensayo para valores atpicos sea significativo, es desaconsejable. Un error residual excepcionalmente bajo puede ocurrir alguna vez y ser causa de que los valores de la razn F excedan los valores crticos. En tal caso puede estar justificado reemplazar el error residual estimado, a partir del ensayo individual, por un error residual medio obtenido de datos histricos registrados en las cartas control. 3.1.3 Clculos y restricciones Conforme a los principios generales de buen diseo, se imponen normalmente las tres siguientes restricciones en el diseo del ensayo. stas presentan ventajas tanto para facilitar el cmputo como para mejorar la precisin. a) cada preparacin en el ensayo debe ser contrastada con el mismo nmero de dosis. b) en el modelo de lneas paralelas, el cociente entre las dosis adyacentes debe ser constante para todos los tratamientos en el ensayo (progresin geomtrica); en el modelo de relacin de pendientes, el intervalo entre dosis adyacentes debe ser constante para todos los tratamientos en el ensayo (progresin aritmtica). c) debe haber un nmero igual de unidades experimentales para cada tratamiento. Si se utiliza un diseo que cumple estas restricciones los clculos son sencillos. Las frmulas se encuentran en las Secciones 3.2 y 3.3. Se recomienda el uso de aplicaciones informticas (software) que hayan sido desarrolladas para esta finalidad particular. Existen varios programas que pueden fcilmente manejar todos estos diseos de ensayo descriptos en las monografas correspondientes. No todos los programas emplean las mismas frmulas y algoritmos, pero deben llevarnos a los mismos resultados. Los diseos de ensayo que no cumplan las restricciones sealadas arriba pueden ser igualmente posibles y correctos, pero las frmulas que precisan son demasiado complicadas para ser descriptas en este texto. Las formulas para los diseos restringidos dadas en el texto pueden ser empleadas por ejemplo para crear programas ad hoc en una planilla de clculos. Se pueden emplear los ejemplos de la Seccin 5 para comprobar si tales programas dan resultados correctos. 3.2 Modelo de lneas paralelas 3.2.1 Introduccin En la Figura 3.2.1.-I se representa el modelo de lneas paralelas. El logaritmo de las dosis se representa en el eje de abscisas y las respuestas en el eje de ordenadas. Las respuestas individuales a cada tratamiento se sealan con puntos negros. Las dos lneas son las relaciones calculadas ln(dosis)-respuesta para el estndar y para la preparacin desconocida.

Estndar

Respuesta (y)

Desconocido

ln dosis (x)

Figura 3.2.1.-I.-Modelo de lneas paralelas para un ensayo 3 + 3. [NOTA: a lo largo del texto se utilizar el logaritmo neperiano (ln). Donde aparezca el trmino antilogaritmo significa la ex. Sin embargo, los Briggs o logaritmos comunes (log o log10) pueden ser igualmente empleados. En este caso el antilogaritmo correspondiente es 10x ]. Para que un ensayo sea satisfactorio la potencia asumida de la preparacin desconocida debe estar prxima a la verdadera potencia. Sobre el supuesto de esta potencia asumida y la potencia asignada del estndar se preparan dosis equipotentes (si es posible), esto es, que las dosis correspondientes del estndar y del desconocido se espera que den la misma respuesta. Si no se dispone de informacin sobre la potencia asumida, se realizan ensayos preliminares sobre un amplio rango de dosis para determinar el intervalo en el que la curva es lineal. Cuanto ms prxima est la potencia estimada de una preparacin desconocida a la potencia asumida tanto ms prximas estarn las dos rectas, para lo cual debern dar igual respuesta a igual dosis. La distancia horizontal entre las lneas representa la exactitud de la potencia estimada con respecto a la potencia asumida. A mayor distancia entre las dos lneas habr menor exactitud en la asignacin de la potencia asumida. Si la lnea correspondiente a la preparacin desconocida est situada a la derecha de la lnea del estndar, la potencia asumida estar sobrestimada y los clculos indicarn una potencia estimada inferior a la potencia asumida. De la misma manera, si la lnea de la preparacin desconocida est situada a la izquierda de la lnea del estndar, la potencia asumida estar subestimada y los clculos indicarn una potencia estimada superior a la potencia asumida. 3.2.2 Diseo del ensayo Las siguientes consideraciones sern de utilidad para la optimizacin de la precisin del diseo del ensayo. 1) El cociente entre la pendiente y el error residual deber ser tan grande como sea posible. 2) El intervalo de dosis deber ser tan grande como sea posible. 3) Las lneas debern estar tan estrechamente prximas como sea posible, es decir la potencia asumida debe ser una buena estimacin de la verdadera potencia. La distribucin de las unidades experimentales (animales, tubos de ensayo, etc.) a los diferentes tratamientos puede hacerse de varias formas. 3.2.2.1 Diseo completamente aleatorizado Si la totalidad de las unidades experimentales (animales, tubos, etc.) parece ser razonablemente homognea sin indicacin alguna de que la variabilidad de la respuesta sea menor dentro de ciertos subgrupos reconocibles, la asignacin de las unidades a los diferentes tratamientos debe hacerse aleatoriamente, por ejemplo, mediante el uso de una tabla de permutaciones aleatorias. Si es probable que las unidades en subgrupos, tales como las posiciones fsicas o los das experimentales, sean ms homogneas que la totalidad de las unidades la precisin del ensayo puede aumentarse mediante la introduccin de una o ms restricciones en el diseo. Una cuidadosa distribucin de las unidades, a partir de las restricciones, permite eliminar fuentes irrelevantes de variacin.

3.2.2.2 Diseo en bloques aleatorizados En este diseo es posible segregar una fuente identificable de variacin tal como, la variacin de sensibilidad entre camadas de animales experimentales o la variacin entre placas de Petri en un ensayo microbiolgico por difusin. El diseo requiere que todos los tratamientos se apliquen el mismo nmero de veces en cada bloque (camada o placa de Petri) y es adecuado solamente cuando el bloque es lo suficientemente grande como para aplicar todos los tratamientos. Se proporcionan las frmulas para un diseo en bloques aleatorios en este captulo y en 770. Valoraciones microbiolgicas de antibiticos. 3.2.2.3 Diseo en cuadrado latino Este diseo es apropiado cuando la respuesta puede verse afectada por dos fuentes diferentes de variacin, cada una de las cuales puede asumir k niveles o posiciones diferentes. Por ejemplo, en una prueba en placa de un antibitico, los tratamientos pueden disponerse en una serie k k sobre una placa grande, realizndose cada tratamiento una vez en cada fila y en cada columna. El diseo es adecuado cuando el nmero de filas, el nmero de columnas y el nmero de tratamientos son iguales. Las respuestas se registran en un formato cuadrado conocido como cuadrado latino. Las variaciones debidas a las diferencias de las respuestas entre las k filas y las k columnas pueden separarse, reduciendo por tanto el error. Ejemplo 5-1-3. Cualquiera que sea el diseo usado, la asignacin de unidades experimentales a l os bloques debe hacerse aleatoriamente y las unidades deben mantenerse bajo condiciones uniformes tanto antes como durante el experimento. 3.2.2.4 Diseo cruzado Este diseo es til cuando el experimento puede subdividirse en bloques, pero es posible aplicar solamente dos tratamientos a cada bloque, por ejemplo, un bloque puede ser una sola unidad que puede probarse en dos ocasiones. El diseo pretende aumentar la precisin eliminando los efectos de las diferencias entre las unidades mientras que se equilibra el efecto de cualquier diferencia entre los niveles generales de respuesta en las dos etapas del ensayo. Si se prueban dos dosis de un estndar y de una preparacin desconocida esto se conoce como un diseo cruzado doble, mientras que un diseo que incorpora tres dosis de cada preparacin es un diseo cruzado triple. El experimento se divide en dos partes separadas por un intervalo de tiempo adecuado. Las unidades se dividen en cuatro (o seis) grupos y cada grupo recibe uno de los cuatro (o seis) tratamientos en la primera parte de la prueba. Las unidades que reciben una preparacin en la primera parte de la prueba reciben la otra preparacin en la segunda parte y las unidades que reciben dosis bajas en una parte de la prueba reciben dosis altas en la otra. La disposicin de las dosis se muestra en la Tabla 3.2.2.4.-I. Tabla 3.2.2.4. I - Disposicin de dosis en un diseo cruzadoCruzado doble Grupo de unidades 1 2 3 4 5 6 Tiempo I S1 S2 T1 T2 Tiempo II T2 T1 S2 S1 Cruzado triple Tiempo I S1 S2 S3 T1 T2 T3 Tiempo II T3 T2 T1 S3 S2 S1

Ver ejemplo en Statistical Methods in Biological Assay; B. J. Finney 2da ed. 1964, pag. 265 a 299.

3.2.3 Anlisis de varianza Esta seccin proporciona las frmulas necesarias para llevar a cabo el anlisis de varianza y sern comprendidas ms fcilmente haciendo referencia a los ejemplos realizados en la Seccin 5.1. Tambin debe hacerse referencia al glosario de smbolos (Seccin 8). Las frmulas son apropiadas para anlisis simtricos en los que una o ms preparaciones (T, U, etc.) que van a ser examinadas, se comparan con una preparacin estndar (S). Se enfatiza que las frmulas slo pueden emplearse si las dosis estn igualmente espaciadas, si se aplican igual nmero de tratamientos por preparacin y si

cada tratamiento es aplicado un nmero igual de veces. No debe procederse al empleo de las frmulas en cualquier otra situacin. Aparte de algunos ajustes del trmino debido al error el anlisis bsico de datos procedentes de un ensayo es el mismo para diseos completamente aleatorizados, en bloque aleatorizado y en cuadrado latino. Las frmulas para ensayos cruzados, no se ajustan enteramente a este esquema. Habiendo considerado los puntos discutidos en la Seccin 3.1 y habiendo transformado las respuestas, si fuera necesario, debe hacerse la media de los valores para cada tratamiento y cada preparacin como se muestra en la Tabla 3.2.3.-I. Tambin deben calcularse los contrastes lineales los cuales se relacionan con las pendientes de las lneas (ln dosis-respuesta). En la Tabla 3.2.3.-II se muestran tres frmulas adicionales que son necesarias para la realizacin del anlisis de varianza. Tabla 3.2.3.-I. Frmulas aplicables al modelo de lneas paralelas con d dosis de cada preparacinEstndar Respuesta media de la dosis menor Respuesta media de la segunda dosis ... Respuesta media de la dosis mayor Total de la preparacin Contraste lineal Preparacin 1 (T) Preparacin 2 (U, etc.)

S1 S2...

T1 T2...

U1 U2...

Sd PS = S1+S2++Sd LS = 1S1+2S2++dSd (d+1) Ps

Td PT = T1+T2++Td

Ud PU = U1+U2++Ud

LT = 1T1+2T2++dTd - LU = 1U1+2U2++dUd (d+1) PT (d+1) PU

Tabla 3.2.3.-II. Frmulas adicionales para la construccin del anlisis de la varianza.HP = n d HL = 12n d3 dK =2 n( PS + P T + ...) hd

Tabla 3.2.3.-III. Frmulas para el clculo de Suma de Cuadrados y Grados de libertad.Fuentes de Variacin Preparaciones Regresin lineal Grados de Libertad (gl) Suma de Cuadrados (SC)

h1 1 h1 h (d - 2) hd - 1

SCprep= HP (PS2+PT2+) KSC reg = 1 H L ( LS + LT + ...) 2 h

Desviacin del paralelismo Desviacin de la linealidad Tratamientos(*)

SCpar= HL (LS2+LT2+) - SCreg SClin= SCtrat - SCprep - SCreg - SCpar SCtrat= n (S12++Sd2+T12++Td2+) - K

No se calcula para ensayos con dos dosis.

Tabla 3.2.3.-IV. Estimacin del Error ResidualFuentes de Variacin Bloques (Filas) (*) Columnas (**) Completamente Aleatorizado Error Residual(***)

Grados de Libertad (gl)

Suma de Cuadrados (SC)

n1 n1 hd (n 1) (hd 1) (n 1) (hd 2) (n 1) nhd - 1Aleatorizado en bloques Cuadrado latino

SCbloques= hd (R12 ++Rn2 ) K SCcol= hd (C12 ++Cn2 ) K SCres= SCtotal - SCtrat SCres= SCtotal - SCtrat - SCbloques SCres= SCtotal - SCtrat - SCbloques - SCcol

Total

SCtotal = ( y y ) 2

No se calcula para el diseo completamente aleatorizado. Slo se calcula para el diseo Cuadrado Latino