ProBioBalance CLR™ NPLactokine.pdfProBioBalance CLR™ NP объединяет преимущества питательных ингредиентов молока с защитными

ProBioBalance CLR™ NP

confidential information © CLR - Chemisches Laboratorium Dr. Kurt Richter GmbH

Здоровое питание кожи

Питательная косметика, растущий рынок

0

100

200

300

400

500

600

700

800

2000 2006 20130

20

40

60

80

100

120

2000 2006 2013

Продукты, выпущенные на протяжении года с заявленными

питательными свойствами(всего >13000)

Продукты по уходу за кожей, выпущенные в течение года название которых связано с

питанием (всего >1200)

(Source: Mintel GNPD, March 2014)


Питание на клеточном уровне

• Каждая жизнеспособная клетка имеет внутриклеточную катаболическую систему, с помощью которой питательные компоненты и нефункциональны материалы (клеточный отходы) перерабатываются для:

• Продуцирования энергии• Создания новых полимеров (Напр. белки)Несколько существенных свойств: • Поддержание и улучшение клеточной функции и

укрепление иммунной системы• Утилизация отходов и повторное использование


Здоровое питание для кожи

Здоровое питание обеспечивает клетки кожи• Питательными веществами поддерживающими оптимальный

клеточный баланс;• Способностью наиболее полно перерабатывать отходы

жизнедеятельности клетки.• Эффективным производством энергии и строительных элементов

для создания полимеров и укрепления иммунитета.

Два основных направления:• Переваривание питательных веществ лизосомами• Индуцирование внутриклеточной переработки отходов при помощи

аутофагии и увеличения митохондриальной активности


Здоровое питание клетки

Эндоцитозпитательного вещества

Лизосома

Гидролаза

Переваривание в лизосоме

Продукты жизнедеятельности

Развитие аутофагосомы(LC3B)

Переваривание продуктов жизнедеятельности

Выделение переваренного материала для производства энергии и полимеров

Клеточная стенка

Питательное вещество


Здоровое питание кожи

ProBioBalance CLR™ NP: • Биоактивный продукт на молочной основе, содержащий

гомогенизированную культуру пробиотическихбифидобактерий

• Революционный подход к кожному питанию: обеспечивает кожные клетки необходимыми питательными веществами и активирует системы переработки клеточных отходов (аутофагию), повышает митохондриальную активность

• Улучшает иммунную функцию кожи

• Защищает кожу от влияния внешней среды и стресса



Эффект питания ProBioBalance CLR™ NP

Результаты тестов in vitro

Снабжение питательными элементами

Лизосомы

• Являются центрами переработки веществ и присутствуют в каждой клетке тела

• Содержат большое количество ферментов для разрушения молекул на составные части для повторного использования в клетке

Питательные вещества

поступающие из молока

Лизосомы


Активность лизосом при недостаточном питании

Активность лизосом, %(Окрашивание нейтральным красным)

Кератиноциты были выращены в среде, обеспечивающей оптимальное питание с добавлением и без ProBioBalanceCLR™ NP. Через 72ч концентрацию питательных веществ снизили чтобы вызвать гипотрофию клеток.

Клетки, обработанные ProBioBalance CLR™ NP показали большее количество лизосом.

Таким образом ProBioBalanceCLR™ NP противодействует признакам развития гипотрофии.

Контрольные клетки без обработки взяты за 0%

0

5

10

15

20

25

30

35

40

0.4% ProBioBalance CLR™ NP




Индукция аутофагии

0

20

40

60

80

100

120

140

8 mg/ml ProBioBalance CLR™ NP



Влияние на LC3B (%)

HaCaT 2*104 клеток/ лунку; выращивались 24 часа вприсутствии 2µM хлорохиндифосфата.

За 48 ч до проведения измеренийбыл добавлен исследуемый агент.

LC3B (D11) XP® mAb (New Engla nd Bio la bs; 3868)



Увеличение митохондриальной активности

Влияние на митохондриальнуюактивность (%)

HaCaT 2*104 клеток/лунку; выращивались 24 часа в присутствии 2µM хлорохиндифосфата.

За 48 ч до проведения измерений был добавлен исследуемый агент.

Метод измерения: тест MTT


0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50






Стабилизация иммунной системы и защита от влияния окружающей

средыin vitro Test Results

Стабилизация иммунной системы

Отрицательное влияние УФ света на иммунную систему

Защитный щит ProBioBalance CLR™

NP

Интерлейкин 10 (IL-10)

Лучи УФ A/ УФ B

Несбалансированная защита

Сбалансированная защита

Кожа

Иммунносупрессия Иммунная защита


Стабилизация иммунной системы

80

85

90

95

100

Контроль 0.5% ProBioBalance

CLR™ NP

1.0% ProBioBalance

CLR™ NP

1.5% ProBioBalance

CLR™ NP

IL-10 (%) в кератиноцитах после УФ-облучения

Поглощение:490 / 630 нм2 Дж/см2 УФА + 0.2 Дж/см2 УФВ

УФ-индуцированная иммунносупрессиянесбалансированной иммунной защиты кожи.Кератиноциты и иммунно-компетентные клетки выделяют Интерлейкин-10 (IL-10), медиатор, ответственный за иммуносупрессию.

Кератиноциты, предварительно обработанные ProBioBalance CLR™ показали снижение выделения IL-10 после УФ-облучения. Таким образом происходит компенсация несбалансированности иммунной системы.

Контроль взят за 100%


Защита внеклеточного матрикса(англ. extracellular matrix,ECM)

Катепсин B является протеазой, которая

• В норме обнаруживается в лизосомах

• Участвует в круговороте белков

• Выполняет разнообразные функции в поддержании нормального метаболизма клетки

• служит маркером повреждения клетки после УФ-облучения

Катепсин B

Лизосома Лизосома

Катепсин B

Клетка

Каскадактивации

Увеличение эластазной активностиРазрушение белков ECM

Защитный щит ProBioBalance CLR™ NP


Защита внеклеточного матрикса

Выделение Катепсина B (%) Кератиноцитами после УФ-облучения2 Дж/см2 УФА + 0.2 Дж/см2 УФВ

Катепсины – это внутриклеточные протеолитические ферменты, участвующие в конечном катаболизме предварительно обработанных белков (например, матриксными металлопротеиназами, MMP). Катепсин В также служит маркером поражения клетки УФ-облучением.

Облученные УФ кератиноциты, которые предварительно были обработаны ProBioBalance CLR™ NP, показали снижение активности катепсина В.

ProBioBalance CLR™ NP предотвращает УФ-разрушение коллагена и эластина, тем самым поддерживая гомеостаз внеклеточного матрикса.

Контроль взят за 100%

70

75

80

85

90

95

100

Контроль 0.5% ProBioBalance

CLR™ NP

1.0% ProBioBalance

CLR™ NP

1.5% ProBioBalance

CLR™ NP



Результаты тестов in vivo

Снижение кожного раздражения и защита кожи от повреждений

100

110

120

130

140

150

160

170

180

190

SDS 3 день 5 день 7 день 9 день (SDS)

10 день

без обработки Плацебо 5% ProBioBalance CLR™ NP

Покраснение кожи(%)

ProBioBalance CLR™ NP приводит к более сбалансированному состоянию кожи, что было продемонстрированоin vivo на 20 добровольцах (возраст: 20 - 61): Выделенные участки кожи были обработаны SDS, что вызвало покраснение (раздражение).

На тех участках кожи, которые дважды в день обрабатывали 5% ProBioBalance CLR™ NP было отмечено уменьшение покраснения в сравнении с контролем и плацебо.

На 9 день была проведена повторная обработка SDS, которая привела к повторному покраснению.

При этом участки, получившие 5% ProBioBalance CLR™ NP, показали снижение визуальных признаков раздражения кожи, что говорит о укрепляющем защитном эффекте в сравнении с контролем и плацебо.


Выводы

Номенклатура INCI : Вода, лактоза, молочный белок, ферментативный лизат бифидобактерийДозировка: 2.0 – 5.0 %Диапазон pH: 5.8 – 7.0Консерванты: Не содержит консервантов согласно Регламенту (EC) No 1223/2009, Annex V,

стабилизирован фенетиловым спиртом

ProBioBalance CLR™ NP объединяет преимущества питательных ингредиентов молока с защитными компонентами клеточных стенок бифидобактерий, что позволяет получить здоровую пробиотическую основу для питания кожи. • Даёт клеткам кожи необходимые питательные элементы и

стимулирует выведение отходов жизнедеятельности (аутофагию)

• Стабилизирует иммунную систему• Защищает кожу от негативного влияния окружающей среды• Обеспечивает кожу питательными элементами


Lactokine™ Fluid PF

The vitalizing Skin Balancer

confidential information © CLR - Chemisches Laboratorium Dr. Kurt Richter GmbH


Development of Inflammatory Reactions

Irritant

Alteration of Tissue

Cellular Response

Release of Mediators

Inflammation

in vitro Results



Protection against Release of PGE2

PGE2 content after damage (%)Concentration of PGE2 after cell damage related to untreated cells (= 100%).

All fibroblast cells were grown in the presence Calc ium Ionophore (A 23187).Method: ELISA

Назва діаграми

0

20

40

60

80

100

Control 4 µM Aspirin 1 mg/ml 2 mg/ml 4 mg/ml



Protection against Decrease in Cell Viability

Cell Viability (%)Cell viability before and after damage with Ca Ionophore (A23187).

Method: MTT-assay (absorption: 570 nm)

0

20

40

60

80

100

120

140

Control 4 µM Aspirin 8 mg/ml Lactokine™ Fluid PF

before damage after damage


Increase in Cell Viability

100

130

160

190

220

250

4 mg/ml 8 mg/ml 16 mg/ml

Cell Viability (%)Method: MTT-assay (absorption: 570 nm)



ATP (%)Values are related to ATP levels in control cells (= 100%).

Method: luciferase/luceferin assay

Increase of ATP Levels


100120140160180200220240

0.4% 0.8% 1.6% 0.4% 0.8% 1.6%


Keratinocytes Fibroblasts


Stimulation of Collagen Synthesis

Collagen Synthesis (%) Values are related to the number of cells and to collagen amounts produced by control fibroblasts (= 100%).Method: ELISA (absorption: 490 nm)


100

110

120

130

140

150

0.4% 0.8% 1.6%


ex vivo Results



The Isolated Perfused Bovine Udder

from: Kietzmann et al. 1993. J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 30: 75-84

An alternative method for efficacy tests of cosmetic actives, highly predictive with respect to human skin

Water bath

Peristalticpump

Tyrode solution (reservoir)

Fraction collector


Protection against α-Hydroxy Acid induced Inflammations

80

100

120

140

160

180

200

220

% a-hydroxy acid0 5 15 30

AHA AHA + 5% Lactokine™ Fluid PF

Prostaglandin E2 (%) after 1 hConcentration of Prostaglandin E2 (ng/µg DNA) related to placebo treated skin (=100%).


Protection against α-Hydroxy Acid induced Decrease in Cell Viability

Cell viability (%)Concentration of formazan (µg/µg DNA) related to placebo treated skin (=100%).

Method: MTT-assay

60

70

80

90

100

110

hours0 1 3 5

5% AHA5% AHA + 5% Lactokine™ Fluid PF

60

70

80

90

100

110

hours

0 1 3 5


60

70

80

90

100

110

hours0 1 3 5



Protection against UV-induced Decrease in Cell Viability

60

70

80

90

100

15 30 60 180 240

Untreated controlPlaceboFormulation containing 5% Lactokine™ Fluid PF

time (min)

Cell viability (%)Concentration of formazan (µg/µg DNA) related to non-irradiated skin (=100%)

Irradiation time: 5 minMethod: MTT-assay

in vivo Results



Anti-Inflammatory Activity

-5

21,25

47,5

73,75

100

1 2 3 4 5

untreated Placebo5% Lactokine™ Fluid PF

days

Skin Redness (%)The MED (Minimal Erythemal Dose) of 5 volunteers, aged 21-49, was determined at the beginning of the study.On day 0 skin inflammation was induced by UV irradiation (1.5 MED). During the following days, a formulation containing 5% Lactokine™ Fluid PF and the placebo formulation were applied by the volunteers twice daily on the inner forearm.The skin color was measured 4 h after the last daily application via chromameter.


Increase in Skin Smoothness

Skin Smoothness (%)Formulations were appliedby 20 volunteers (age range: (age range: 29 - 52 years)twice daily.

After 2 and 4 weeks, skin roughness was determined.Values are related to initial conditions.

0

5

10

15

20

25

week 2 week 4

untreated Placebo 2% Lactokine™ Fluid PF 5% Lactokine™ Fluid PF


Summary

• Strong anti-inflammatory effect• Increase in cell vitality• Stimulation of Collagen synthesis• Increase in skin smoothness

INCI Name: Milk Protein Dosage: 2.0 - 5.0%pH-range: 5.8 – 7.0

Preservation:preserved with phenoxyethanol and dehydracetic acid (Na salt)

Documents

ProBioBalance CLR™ NPLactokine.pdfProBioBalance CLR™ NP объединяет преимущества питательных ингредиентов молока с защитными