Produced by Huh Jae-won

이전 연구

Materials and Methods

• Genomic DNA preparation

(Phenol 법과 proteinase K 이용 )

• HpaⅡor HhaⅠ 를 이용한 Enzyme cut

• PCR 을 통한 enzyme 반응 확인

• EthoH precipitation

• Adaptor ligation

• Purification (Qiaquick)

• 3’end 를 채움 (Klenow fragment of DNA polymerase Ⅰ)

• Purification (Qiaquick)

[Klenow fragment of DNA polymerase Ⅰ]

1. E coli 의 DNA polymerase Ⅰ 에서 기원

Klenow fragment 의 활용

1. Synthesis of double-stranded DNA from single-stranded templates

2. Filling in recessed 3' ends of DNA fragments

3. Digesting away protruding 3' overhangs

4. Preparation of radioactive DNA probes 일반 nucleotides 대신에 radioactive 된걸 사용하면 된다 .

Hypermethylation

Hypomethylation

Cerebellum (A, B) and lymph node (C, D)

: negative control

Duplicated

1-3:LTR28, 4-6:LTR30, 7-9:LTR14 : control

PCR

Bisulfied sequencing

Cis acting element 로 부터 메틸레이션이 확장되어 감

계속확장되어 감 (Open chromatine이나타날때 까지 )

발혀되는 프로모터에 의해 바운드리가 정해짐

발현되는 프로모터와 그에 관련된 다양한 complex 에 의해 바운드리는 이동가능함

Silencing 기작 : Methylation 의 변화기작

Conclusions

1. 다양한 방법으로 메틸레이션 상태를 확인해본 결과 거의 같은 결론을 보여줌으로써 ‘ methylation spread’ 의 가설을 실험적으로 확인함

2. 그러므로 Enzyme 을 이용한 본 연구 기법 (methylation tag) 을 통한 large scale 의 방법도 또한 매우 효과적이라고 할 수 있음