PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARNmero: VA-PL02-P001

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TITULO: PROTOCOLO DE VALIDACIN DEL MTODO ANALTICO PARA LA VALORACIN DEL SULFATO DE GENTAMICINA EN COLIRIODepartamento: Garanta de Calidad

Vigente desde: 25/09/2013Versin N: 1

PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARNmero: VA-PL02-P001

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TITULO: PROTOCOLO DE VALIDACIN DEL MTODO ANALTICO PARA LA VALORACIN DEL SULFATO DE GENTAMICINA EN COLIRIODepartamento: Garanta de Calidad

Vigente desde: 25/09/2013Versin N: 1

CONTENIDO1. OBJETIVO2. ALCANCE3. RESPONSABLES4. DEFINICIONES5. MUESTRAS6. DESCRIPCIN6.1. MTODO ANALTICO A VALIDAR6.2. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS6.3. DESARROLLO EXPERIMENTAL6.3.1. SELECTIVIDAD6.3.2. LINEALIDAD6.3.3. EXACTITUD6.3.4. PRECISIN7. REFERENCIAS

1. OBJETIVODefinir los criterios mnimos para llevar a cabo actividades de validacin del mtodo para la cuantificacin del sulfato de gentamicina por el mtodo espectrofotomtrico.2. ALCANCEEs de aplicacin al mtodo espectrofotomtrico empleado en la cuantificacin del sulfato de gentamicina en colirio3. RESPONSABLESAnalista de ValidacinCoordinador de ValidacinControl de CalidadDirector Tcnico4. DEFINICIONESANALITO.- Componente especfico de una muestra a medir en un anlisis.CRITERIOS DE ACEPTACIN.- Parmetros bajo los cuales el resultado de una prueba es considerado aceptable.SELECTIVIDAD.- Es la capacidad de un mtodo analtico para medir solamente lo que se pretende que se mida.SESGO.- Es la diferencia entre el valor promedio obtenido de los resultados de prueba con respecto a un valor de referencia aceptado.CURVA DE CALIBRACIN.- Es la representacin grfica de la seal medida como una funcin de la cantidad del analito.INTERVALO DE TRABAJO.- Intrvalo comprendido entre las concentraciones superior e inferior para las que se ha demostrado que el analito es cuantificado con un nivel satisfactorio de repetibilidad, recuperacin y linealidad.REPETIBILIDAD.- Grado de concordancia entre resultados analticos individuales, cuando el procedimiento se aplica repetidamente a diferentes porciones de una muestra homognea por un solo analista, usando los mismos instrumentos y mtodo en intrvalos cortos de tiempo.PRECISIN INTERMEDIA.- Grado de concordancia entre resultados analticos individuales cuando el procedimiento se aplica repetidamente a diferentes porciones de una muestra homognea por distintos analistas usando el mismo mtodo en diferentes das.LMITE DE CUANTIFICACIN.- Es la concentracin mas baja a la cual el analito puede cuantificarse con una precisin y veracidad aceptables bajo las condiciones experimentales establecidas.LMITE DE DETECCIN.- Es la concentracin ms baja a la cual puede detectarse el analito pero no necesariamente cuantificarse bajo las condiciones experimentales establecidas.RESPUESTA ANALTICA.- Lectura obtenida al aplicar un mtodo analtico.5. MUESTRASLas muestras fueron preparadas a escala laboratorio en concentraciones del 80, 90, 100, 110 y 120% de la concentracin de prueba para todos los anlisis segn la formulacin siguiente para el 100%:Sulfato de Gentamicina al 60%0.5 g

Fosfato monosdico0.4 g

Fosfato disdico0.6 g

Cloruro de sodio0.30 g

Cloruro de benzalconio0.025 g

Agua destilada100 ml

Tcnica de Preparacin: En un vaso de precipitados, calentar 40 mL de agua a 30 C y disolver uno por uno fosfato monosdico, fosfato disdico, y el cloruro de sodio (solucin 1).En 30 ml de agua a temperatura ambiente disolver el sulfato de gentamicina y agregar a la solucin 1 y enrasar a 100 ml.Agregar el cloruro de benzalconio a la solucin 1 y medir el pH.Nota: Para la preparacin de concentracin 80% la cantidad de sulfato de gentamicina es de 0.4 g y para las preparaciones de 90, 110 y 120% son de 0.45, 0.55 y 0.6 g. Las cantidades de excipientes y la tcnica de preparacin para todas concentraciones, son las mismas a las descritas en la parte superior.6. DESCRIPCION6.1 MTODO DE ENSAYO A VALIDAREl mtodo del ensayo se basa en la espectrofotometra UV-visible del complejo del sulfato de gentamicina con el p-dimetilaminobenzaldehdo a una longitud de onda de 407 nm6.1.1. Procedimiento a validar6.1.1.2. Preparacin del estndar.- Pesar 10 mg de piracetam en 100 ml de metanol. Diluir 1 ml de la solucin y llevar a 10 ml con metanol5.1.1.3. Preparacin de la muestra.- Extraer 1 ml de noopiram inyectable, disolver en 100 ml de metanol y agitar, de esta solucin madre tomar 1 ml, vaciar a un matraz de 100 ml y aforar con metanol. Diluir 5 ml de la solucin y llevar a 10 ml6.2 EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS6.2.1 EQUIPOS6.2.1.1 EspectrofotmetroMarcaJasco

ModeloV-630

Modo de lecturaAbsorbancia

Ancho de banda1.5 nm

Longitud de onda214 nm

Espesor de celda10 mm

Foco de luzTungsteno D2/WI

6.2.1.2. Balanza analtica MarcaAND

ModeloHR-200

CdigoS01MQ0133

Sensibilidad0.0001 gr

6.2.1.2. pH-metroMarcaMeter Toledo

ModeloHR-200

CdigoS 01 MQ C1 40

Sensibilidad0.01

Todos los instrumentos fueron previamente calibrados y se extiende el certificado de calibracin para cada equipo 5.2.2. MATERIALES5 Matraces aforados de 100 ml.3 Pipetas Volumtricas de 1 ml4 Pipetas Volumtricas de 5 mlSe adjunta los certificados de calibracin desarrollados por metodologa interna en los anexos para los materiales de vidrio.5.2.3 REACTIVOSp-dimetilaminobenzaldehdoHidrxido de Sodio 3MBuffer de pH 4.1 cido actico/acetatoPatrn de trabajo de Sulfato de Gentamicina5.3 DESARROLLO EXPERIMENTAL5.3.1. SELECTIVIDADSe realizar el anlisis de 6 muestras de Producto terminado con respecto al patrn de trabajo y se evaluar el porcentaje de discrepancia.Criterio de aceptacinPorcentaje de discrepancia entre el producto terminado y el estndar de referencia debe ser menor a 2%5.3.2. LINEALIDADRealizar la lectura de absorbancia a cinco niveles distintos de concentracin, cada nivel ser evaluado por triplicado cubriendo un intervalo de 80 a 120% de la concentracin de prueba; los niveles de concentracin evaluados sern: 24, 27, 30, 33 y 36 mcg/ml de sulfato de gentamicina y se realizar una curva de calibracin Concentracin vs Absorbancia, cada nivel evaluado ser realizado mediante el anlisis de muestras al 80, 90, 100, 110 y 120% de la cantidad declarada para evitar error de posteriores dilucionesCriterios de AceptacinCoeficiente de correlacin r>0.99 (APIC 2000)Si , entonces el modelo de regresin es estadsticamente significativo5.3.3. EXACTITUDRealizar el anlisis de muestras enriquecidas al 80, 100 y 120% de la concentracin declarada (240, 300 y 360 mg/ml de sulfato de gentamicina) mediante preparacin de muestras independientes siendo estos recomendados por los documentos (ICH Q2R1)Criterios de aceptacin Si , entonces el mtodo es exactoPRECISINDos analistas realizarn la determinacin del contenido de piracetam al 100% de la concentracin de prueba de la muestra en das distintos y con distinto material para cada da a partir de la cual se determinar la repetibilidad del mtodo, y precisin intermedia. (USP36)Criterio de aceptacinCV repetibilidad< 6% (AOAC 2002)CV precisin intermedia< 8% (AOAC 2002)Como factor de seguridad nosotros tomaremos