Upload
others
View
2
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
Protočna citometrija u MDS- u ndash korak naprijed
Zoran Šiftar
Klinički zavod za medicinsku biokemiju i laboratorijsku medicinu
KB Merkur Zagreb
Tečaj HKMB 01062019
KLASIFIKACIJA
MINIMALNI MORFOLOŠKI KRITERIJI ZA DIJAGNOZU
MIJELODISPLASTIČNOG SINDROMA (MDS)
MINIMALNO 10 STANICA NAJMANJE JEDNE OD STANIČNIH
LINIJA
KOŠTANE SRŽI
MORA POKAZIVATI NEDVOSMISLENU DISPLAZIJU
Jaffe ES Harris NL Stein H Vardiman JW i sur World Health Organization Classification of Tumours WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues Fourth Edition Lyon France IARC Press 2008
DISPLAZIJA U JEDNOJ OD
LOZA ERITROCITNE
GRANULOCITNE
TROMBOCITNE
KOŠTANE SRŽI
CITOGENETSKE PROMJENE
KLINIČKE ZNAČAJKE
KLASIFIKACIJA
WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues Swerdlow SH Campo E Harris NL i sur World HealthOrganization Classification of Tumours 2017 Revised Edition WHOClassification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues Lyon France IARC Press 2017
Gredelj Šimec Nj Kaić G Škrtić A i sur Smjernice za dijagnozu i liječenje bolesnika s mijelodisplastičnim sindromom Radna skupina za mijelodisplastični sindrom Hrvatske kooperativne grupe za hematološke bolesti (KROHEM)Referalni centar Ministarstva zdravlja Republike Hrvatske za dijagnostiku i liječenje mijelodisplastičnog sindroma Hrvatsko hematološko društvo Hrvatskoga liječničkog zboraLiječ Vjesn 20171391ndash11
Malcovati L Hellstrom-Lindberg E Bowen D i sur Diagnosis and treatment of primary myelodysplastic syndromes in adults recommendations from the European LeukemiaNet Blood 2013122(17) 2943ndash2964
+ IMUNOFENOTIPIZACIJA
STANDARDIZACIJA
van de Loosdrecht AA Alhan C Beacuteneacute MC i sur Standardization of flow cytometry in myelodysplasticsyndromes reportfrom the first European LeukemiaNet working conference on flow
cytometric in myelodysplastic syndromes Haematologica 2009941124-1134
Westers TM Ireland R Kern W i sur Standardization of flow cytometry in myelodysplastic syndromes a report from an international consortium and the European LeukemiaNet Working Group Leukemia 2012 26(7) 1730 ndash 1741
Porwit A van de Loosdrecht AA Bettelheim P i sur Revisiting guidelines for integration of flow cytometry results in the WHO classification of myelodysplastic syndromesmdashproposal from the InternationalEuropean LeukemiaNet Working Group for Flow Cytometry in MDS Leukemia 201428(9)1793-1798
European LeukemiaNet Working Group
STANDARDIZACIJAEuroFlow Consortium
T Kalina T Flores-Montero J van der Velden VHJ i sur EuroFlow Consortium (EU-FP6 LSHB-CT-2006-018708)
EuroFlow standardization of flow cytometer instrument
settings and immunophenotyping protocols Leukemia 2012
26(9) 1986ndash2010
van Dongen JJM Lhermitte L Boumlttcher S i sur EuroFlow antibody
panels for standardized n-dimensional flow cytometric
immunophenotyping of normal reactive and malignant
leukocytesldquo Leukemia 201226(9)1908-75
8 bojna analiza ndash uvjet strogo definirana vrsta
citometra vrsta protutijela na stanične biljege vrsta
fluorokroma i njihova međusobna kombinacija i
proizvođači
Tablica 1 Preporuke za obradu uzoraka koštane srži za analizu protočnom
citometrijom na displaziju prema European LeukemiaNet (ELN)
Antikoagulans u uzorcima koštane
srži
heparin (alternativa EDTA)
temperatura pohrane sobna temperatura
vrijeme za obradu lt 24 sata
pre-tretman prije obilježavanja
(opcionalno)
liziranje eritrocita cjelog ili dijela uzorka
amonij klorid (bez fiksativa) lizatorom
pufer za pranje stanica (opcionalno) PBS sa 05 goveđeg ili humanog
albumina
prezervacija stabilnih antigena paraformaldehid fiksativ (05)
ograda nezrelih mijeloidnih stanica bolji naziv bdquoprogenitorildquo od bdquoblastildquo
slijepljene stanice (bdquodubletsldquo) moraju se isključiti iz analize na
histogramu FCSheightFCSarea
degranulirani granulociti procjenjuju se usporedbom njihova SSC
(lin ili log skala) prema SSC limfocita
glikozil-fosfatidil-inozitol- vezani
antigeni (npr CD14 CD16 CD24)
njihov izražaj može biti promijenjen u PNH
ali to ne isključuje MDS dijagnozu
Populacija stanica
Koštane sržiBitni CD biljezi
Preporučena analiza Nađena aberacija
Nezreli
mijeloidni i monocitni
progenitori
SSC
CD45
CD34
CD117
CD38
HLA DR
CD13
CD33
CD15 CD11b
CD5 CD7 CD19
CD56
Postotak stanica u frakciji nukleariranih stanica
Uvećan postotak
Izražaj CD45
Expression of CD45
Gubitak ili sniženuvećan
Izražaj CD34 Gubitak ili sniženuvećan
Izražaj CD117 Homogen nizak ili prekomjeran izražaj
Izražaj CD13 i CD33 Gubitak ili sniženuvećan
Izražaj HLA DDR Gubitak ili sniženuvećan
Asinhron izražaj CD11b CD15 Pozitivnost biljega zrelih stanica
Izražaj biljega CD5 CD7 CD19 CD56
Pozitivnost biljega limfocitne loze
Neutrofili
SSC
CD45
CD15 CD11b CD16 CD10
CD13 CD33
CD36 CD64
CD34 CD117
HLA DR
CD5 CD7
CD56 CD19
Postotak stanica kao omjer prema limfocitima
Smanjen
SSC kao omjer prema SSC limfocita
Smanjen
Odnos CD13 i CD11b Promijenjen izgled
Odnos CD13 i CD16 Promijenjen izgled
Odnos CD15 i CD10 Promijenjen izgled
Tablica 2 Preporuke za obradu uzoraka koštane srži za analizu protočnom
citometrijom na displaziju prema European LeukemiaNet (ELN)
Tablica 1 Preporuke za obradu uzoraka koštane srži za analizu protočnom
citometrijom na displaziju prema European LeukemiaNet (ELN)
Populacija stanica
Koštane sržiBitni CD biljezi
Preporučena analiza Nađena aberacija
Monociti
SSC
CD45
CD14 CD11b
CD13 CD33
CD64 CD16
CD36 CD34
HLA DR
CD5 CD7
CD56
(CD300e)
Postotak stanica Sniženuvećan
Distribucija stadija zrelosti Pomak ka nezrelim
Odnos HLA DDR i CD11b Promijenjen izgled
Odnos CD36 i CD14 Promijenjen izgled
Izražaj CD13 i CD33 (Homogeno) nizak ili prekomjeran izražaj
Izražaj CD56 Pozitivnost biljega limfocitne loze
Progenitori
B limfocita
CD45
CD19
CD34
CD10
Broj kao frakcija ukupnog broja
CD34+ stanica u ogradi
CD45CD34SSC u kombinaciji sa CD10 ili CD19
Smanjen ili odsutan
Eritrocitni odjeljak CD117
CD235a
CD36 CD71
(CD105)
Postotak nukleiranih eritriodnih stanica
Uvećan
Odnos CD71 i CD235a Promijenjen izgled
Izražaj CD71 Snižen
Izražaj CD36 Snižen
Postotak CD117 pozitivnih prekursora
Uvećan
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
FIZIKALNE KARAKTERISTIKE STANICA OKOMITO RASPRŠENJE (FS)BOČNO RASPRŠENJE (SS)NEDOVOLJNO INFORMATIVNO ZA IDENTIFIKACIJU VRSTE STANICA
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
CD45SSOGRAĐIVANJE
limfociti
monociti
Neutrofilni granulociti
mijeloblasti
B progenitori
hematogoni
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
MDS Kronična mijelomonocitna leukemija CMML
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
Uvećanje broja mijeloidnih progenitora
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
OMJER CD45 limfocitiCD45mijeloblasta Normalno 45-74
Snižen CD45Snižen omjer 553597= 93
CD45 limfociti CD45 mijeloblasti
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
NORMALAN MDSCD34 vs CD117
uvećanje intenziteta izražaja CD117
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
Snižen SS neutrofilaSnižen omjer 605107 = 565Snižena granuliranost
OMJER SS limfocitiSS neutrofiliNormalno gt60
GRANULIRANOST
SS limfociti SS neutrofili
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
CD10 gubitak
CD117 pozitivitet
CD66abcevs
CD10
CD15vs
CD117
Analiza monocitnog odjeljka
CD13 gubitak
CD56 pozivitet
HLA DDRvs
CD13
CD33vs
CD56
Analiza progenitorskih B limfocita
Nema populacije CD19+CD10+
CD19 vs CD10
Analiza eritroidnog odjeljka
CILJ
A) Identifikacija fenotipskih aberantnosti
najčešće zamijećena aberacija je
uvećanje broja eritrocitni progenitora
povezana sa većim udjelom nezrelih
eritroidnih stanica (CD117+)
asinhron izražaj biljega CD71 vs
CD235a
snižen izražaj CD36
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS engl FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
Prema nađenim anomalijama klasificira se u 3 grupe bdquonormalanldquo sa 0 ili 1 abnormalnosti bdquoumjerenldquo sa 2 do 4 abnormalnosti nađenih u 1 od loza i bdquoozbiljanldquo sa 2 ili 3 abnormalnosti nađene u 2 ili više loza
1 Wells DA Benesch M Loken MR i sur Myeloid and monocytic dyspoiesis as determined by flow cytometric scoring in myelodysplastic syndrome correlates with the IPSS and with outcome after hematopoietic stem cell transplantation Blood 2003 102 394ndash403
2 van de Loosdrecht AA Westers TM1 Westra AH i sur Identification of distinct prognostic subgroups in low- and intermediate-1ndashrisk myelodysplastic syndromes by flow cytometry Blood 20081111067-1077
analiza stanica mijelomonocitne loze (mijeloblasta neutrofila i monocita)
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
određivanje broja i anomalija mijeloblasta
(izražaj i intenzitet biljega CD45CD11b CD16 CD56)
B progenitorskihstanica
i izmjerenom omjeru SSC granulocitaSSC limfocita
Ogata K Kishikawa Y Satoh C Tamura H Dan K Hayashi A Diagnostic application of flow cytometric characteristics of CD34+ cells in
low-grade myelodysplastic syndromes Blood 2006 108 1037ndash1044
bdquoOgata indeksldquo
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
fenotipski zasebno dokazana displazija na odjeljcima
a) progenitorskim mijeloidnim stanicama
b) zrelim stanicama granulocitne i monocitne loze
c) nezrelim stanicama eritrocitne loze
van de Loosdrecht AA Westers TM Cutting Edge Flow Cytometry in Myelodysplastic Syndromes J Natl Compr Canc Netw 201311892-902
Alhan C Westers TM Cremers EM i sur The myelodysplastic syndromes flow cytometric score a three- parameter prognostic flow cytometric scoring system Leukemia 2016 30(3)658ndash665
bdquo Intregirani FC indeks (iFCS) ili tzv ABC score ldquo
bull DOBRA KORELACIJAFCCS vs Internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl International Prognostic Scoring System IPSS 1997) FCCS vs Revidirani internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl Revised International Prognostic Scoring System IPSS-R 2012)
bull LOŠIJA PROGNOZA- Broj mijeloidnih progenitora s fenotipskim anomalijama što veći broj -viši FCM indeks - nepovoljna prognoza (progresija u AML relaps nakon alogene transplantacije)- Veći broj aberacija u pacijenata IPSS niskog i IPSS int-1rizika - povezan sa progresijom bolesti- Snižen SSC- Povišen izražaj CD117 u mijeloidnim progenitorima
bull DOBRA PROGNOZA-Snižen izražajem CD13 u zrelim monocitima - Niži FCCS (u pacijenata sa MDS sa displazijom jedne loze (MDS-SLD) MDS neklasificiranim (MDS-U) MDS sa prstenastim sideroblastima (MDS-RS)
PROGNOSTIČKA VRIJEDNOST ANALIZE
IMUNOFENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
ZAKLJUČCIIMUNOFENOTIPIZACIJA PROTOČNOM CITOMETRIJOM U
DIJAGNOSTICI MDS_a
FCI nalaz bi trebao biti integriran u cjelokupno dijagnostičko izvješće zajedno s citomorfološkim nalazom venske krvi i koštane srži histopatološkim citogenetskih i ili molekularnih nalazima
- glavni nedostatak nedovoljno visoka pozitivna prediktivna vrijednost ndash NE MOŽE SE KORISTITI KAO ZASEBAN DIJAGNOSTIČKI POSTUPKA
- može pružiti dodatne važne informacije koje nisu dobivene morfološkim nalazom citogenetikom ili testovima molekularne dijagnostike
KLASIFIKACIJA
MINIMALNI MORFOLOŠKI KRITERIJI ZA DIJAGNOZU
MIJELODISPLASTIČNOG SINDROMA (MDS)
MINIMALNO 10 STANICA NAJMANJE JEDNE OD STANIČNIH
LINIJA
KOŠTANE SRŽI
MORA POKAZIVATI NEDVOSMISLENU DISPLAZIJU
Jaffe ES Harris NL Stein H Vardiman JW i sur World Health Organization Classification of Tumours WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues Fourth Edition Lyon France IARC Press 2008
DISPLAZIJA U JEDNOJ OD
LOZA ERITROCITNE
GRANULOCITNE
TROMBOCITNE
KOŠTANE SRŽI
CITOGENETSKE PROMJENE
KLINIČKE ZNAČAJKE
KLASIFIKACIJA
WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues Swerdlow SH Campo E Harris NL i sur World HealthOrganization Classification of Tumours 2017 Revised Edition WHOClassification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues Lyon France IARC Press 2017
Gredelj Šimec Nj Kaić G Škrtić A i sur Smjernice za dijagnozu i liječenje bolesnika s mijelodisplastičnim sindromom Radna skupina za mijelodisplastični sindrom Hrvatske kooperativne grupe za hematološke bolesti (KROHEM)Referalni centar Ministarstva zdravlja Republike Hrvatske za dijagnostiku i liječenje mijelodisplastičnog sindroma Hrvatsko hematološko društvo Hrvatskoga liječničkog zboraLiječ Vjesn 20171391ndash11
Malcovati L Hellstrom-Lindberg E Bowen D i sur Diagnosis and treatment of primary myelodysplastic syndromes in adults recommendations from the European LeukemiaNet Blood 2013122(17) 2943ndash2964
+ IMUNOFENOTIPIZACIJA
STANDARDIZACIJA
van de Loosdrecht AA Alhan C Beacuteneacute MC i sur Standardization of flow cytometry in myelodysplasticsyndromes reportfrom the first European LeukemiaNet working conference on flow
cytometric in myelodysplastic syndromes Haematologica 2009941124-1134
Westers TM Ireland R Kern W i sur Standardization of flow cytometry in myelodysplastic syndromes a report from an international consortium and the European LeukemiaNet Working Group Leukemia 2012 26(7) 1730 ndash 1741
Porwit A van de Loosdrecht AA Bettelheim P i sur Revisiting guidelines for integration of flow cytometry results in the WHO classification of myelodysplastic syndromesmdashproposal from the InternationalEuropean LeukemiaNet Working Group for Flow Cytometry in MDS Leukemia 201428(9)1793-1798
European LeukemiaNet Working Group
STANDARDIZACIJAEuroFlow Consortium
T Kalina T Flores-Montero J van der Velden VHJ i sur EuroFlow Consortium (EU-FP6 LSHB-CT-2006-018708)
EuroFlow standardization of flow cytometer instrument
settings and immunophenotyping protocols Leukemia 2012
26(9) 1986ndash2010
van Dongen JJM Lhermitte L Boumlttcher S i sur EuroFlow antibody
panels for standardized n-dimensional flow cytometric
immunophenotyping of normal reactive and malignant
leukocytesldquo Leukemia 201226(9)1908-75
8 bojna analiza ndash uvjet strogo definirana vrsta
citometra vrsta protutijela na stanične biljege vrsta
fluorokroma i njihova međusobna kombinacija i
proizvođači
Tablica 1 Preporuke za obradu uzoraka koštane srži za analizu protočnom
citometrijom na displaziju prema European LeukemiaNet (ELN)
Antikoagulans u uzorcima koštane
srži
heparin (alternativa EDTA)
temperatura pohrane sobna temperatura
vrijeme za obradu lt 24 sata
pre-tretman prije obilježavanja
(opcionalno)
liziranje eritrocita cjelog ili dijela uzorka
amonij klorid (bez fiksativa) lizatorom
pufer za pranje stanica (opcionalno) PBS sa 05 goveđeg ili humanog
albumina
prezervacija stabilnih antigena paraformaldehid fiksativ (05)
ograda nezrelih mijeloidnih stanica bolji naziv bdquoprogenitorildquo od bdquoblastildquo
slijepljene stanice (bdquodubletsldquo) moraju se isključiti iz analize na
histogramu FCSheightFCSarea
degranulirani granulociti procjenjuju se usporedbom njihova SSC
(lin ili log skala) prema SSC limfocita
glikozil-fosfatidil-inozitol- vezani
antigeni (npr CD14 CD16 CD24)
njihov izražaj može biti promijenjen u PNH
ali to ne isključuje MDS dijagnozu
Populacija stanica
Koštane sržiBitni CD biljezi
Preporučena analiza Nađena aberacija
Nezreli
mijeloidni i monocitni
progenitori
SSC
CD45
CD34
CD117
CD38
HLA DR
CD13
CD33
CD15 CD11b
CD5 CD7 CD19
CD56
Postotak stanica u frakciji nukleariranih stanica
Uvećan postotak
Izražaj CD45
Expression of CD45
Gubitak ili sniženuvećan
Izražaj CD34 Gubitak ili sniženuvećan
Izražaj CD117 Homogen nizak ili prekomjeran izražaj
Izražaj CD13 i CD33 Gubitak ili sniženuvećan
Izražaj HLA DDR Gubitak ili sniženuvećan
Asinhron izražaj CD11b CD15 Pozitivnost biljega zrelih stanica
Izražaj biljega CD5 CD7 CD19 CD56
Pozitivnost biljega limfocitne loze
Neutrofili
SSC
CD45
CD15 CD11b CD16 CD10
CD13 CD33
CD36 CD64
CD34 CD117
HLA DR
CD5 CD7
CD56 CD19
Postotak stanica kao omjer prema limfocitima
Smanjen
SSC kao omjer prema SSC limfocita
Smanjen
Odnos CD13 i CD11b Promijenjen izgled
Odnos CD13 i CD16 Promijenjen izgled
Odnos CD15 i CD10 Promijenjen izgled
Tablica 2 Preporuke za obradu uzoraka koštane srži za analizu protočnom
citometrijom na displaziju prema European LeukemiaNet (ELN)
Tablica 1 Preporuke za obradu uzoraka koštane srži za analizu protočnom
citometrijom na displaziju prema European LeukemiaNet (ELN)
Populacija stanica
Koštane sržiBitni CD biljezi
Preporučena analiza Nađena aberacija
Monociti
SSC
CD45
CD14 CD11b
CD13 CD33
CD64 CD16
CD36 CD34
HLA DR
CD5 CD7
CD56
(CD300e)
Postotak stanica Sniženuvećan
Distribucija stadija zrelosti Pomak ka nezrelim
Odnos HLA DDR i CD11b Promijenjen izgled
Odnos CD36 i CD14 Promijenjen izgled
Izražaj CD13 i CD33 (Homogeno) nizak ili prekomjeran izražaj
Izražaj CD56 Pozitivnost biljega limfocitne loze
Progenitori
B limfocita
CD45
CD19
CD34
CD10
Broj kao frakcija ukupnog broja
CD34+ stanica u ogradi
CD45CD34SSC u kombinaciji sa CD10 ili CD19
Smanjen ili odsutan
Eritrocitni odjeljak CD117
CD235a
CD36 CD71
(CD105)
Postotak nukleiranih eritriodnih stanica
Uvećan
Odnos CD71 i CD235a Promijenjen izgled
Izražaj CD71 Snižen
Izražaj CD36 Snižen
Postotak CD117 pozitivnih prekursora
Uvećan
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
FIZIKALNE KARAKTERISTIKE STANICA OKOMITO RASPRŠENJE (FS)BOČNO RASPRŠENJE (SS)NEDOVOLJNO INFORMATIVNO ZA IDENTIFIKACIJU VRSTE STANICA
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
CD45SSOGRAĐIVANJE
limfociti
monociti
Neutrofilni granulociti
mijeloblasti
B progenitori
hematogoni
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
MDS Kronična mijelomonocitna leukemija CMML
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
Uvećanje broja mijeloidnih progenitora
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
OMJER CD45 limfocitiCD45mijeloblasta Normalno 45-74
Snižen CD45Snižen omjer 553597= 93
CD45 limfociti CD45 mijeloblasti
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
NORMALAN MDSCD34 vs CD117
uvećanje intenziteta izražaja CD117
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
Snižen SS neutrofilaSnižen omjer 605107 = 565Snižena granuliranost
OMJER SS limfocitiSS neutrofiliNormalno gt60
GRANULIRANOST
SS limfociti SS neutrofili
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
CD10 gubitak
CD117 pozitivitet
CD66abcevs
CD10
CD15vs
CD117
Analiza monocitnog odjeljka
CD13 gubitak
CD56 pozivitet
HLA DDRvs
CD13
CD33vs
CD56
Analiza progenitorskih B limfocita
Nema populacije CD19+CD10+
CD19 vs CD10
Analiza eritroidnog odjeljka
CILJ
A) Identifikacija fenotipskih aberantnosti
najčešće zamijećena aberacija je
uvećanje broja eritrocitni progenitora
povezana sa većim udjelom nezrelih
eritroidnih stanica (CD117+)
asinhron izražaj biljega CD71 vs
CD235a
snižen izražaj CD36
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS engl FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
Prema nađenim anomalijama klasificira se u 3 grupe bdquonormalanldquo sa 0 ili 1 abnormalnosti bdquoumjerenldquo sa 2 do 4 abnormalnosti nađenih u 1 od loza i bdquoozbiljanldquo sa 2 ili 3 abnormalnosti nađene u 2 ili više loza
1 Wells DA Benesch M Loken MR i sur Myeloid and monocytic dyspoiesis as determined by flow cytometric scoring in myelodysplastic syndrome correlates with the IPSS and with outcome after hematopoietic stem cell transplantation Blood 2003 102 394ndash403
2 van de Loosdrecht AA Westers TM1 Westra AH i sur Identification of distinct prognostic subgroups in low- and intermediate-1ndashrisk myelodysplastic syndromes by flow cytometry Blood 20081111067-1077
analiza stanica mijelomonocitne loze (mijeloblasta neutrofila i monocita)
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
određivanje broja i anomalija mijeloblasta
(izražaj i intenzitet biljega CD45CD11b CD16 CD56)
B progenitorskihstanica
i izmjerenom omjeru SSC granulocitaSSC limfocita
Ogata K Kishikawa Y Satoh C Tamura H Dan K Hayashi A Diagnostic application of flow cytometric characteristics of CD34+ cells in
low-grade myelodysplastic syndromes Blood 2006 108 1037ndash1044
bdquoOgata indeksldquo
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
fenotipski zasebno dokazana displazija na odjeljcima
a) progenitorskim mijeloidnim stanicama
b) zrelim stanicama granulocitne i monocitne loze
c) nezrelim stanicama eritrocitne loze
van de Loosdrecht AA Westers TM Cutting Edge Flow Cytometry in Myelodysplastic Syndromes J Natl Compr Canc Netw 201311892-902
Alhan C Westers TM Cremers EM i sur The myelodysplastic syndromes flow cytometric score a three- parameter prognostic flow cytometric scoring system Leukemia 2016 30(3)658ndash665
bdquo Intregirani FC indeks (iFCS) ili tzv ABC score ldquo
bull DOBRA KORELACIJAFCCS vs Internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl International Prognostic Scoring System IPSS 1997) FCCS vs Revidirani internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl Revised International Prognostic Scoring System IPSS-R 2012)
bull LOŠIJA PROGNOZA- Broj mijeloidnih progenitora s fenotipskim anomalijama što veći broj -viši FCM indeks - nepovoljna prognoza (progresija u AML relaps nakon alogene transplantacije)- Veći broj aberacija u pacijenata IPSS niskog i IPSS int-1rizika - povezan sa progresijom bolesti- Snižen SSC- Povišen izražaj CD117 u mijeloidnim progenitorima
bull DOBRA PROGNOZA-Snižen izražajem CD13 u zrelim monocitima - Niži FCCS (u pacijenata sa MDS sa displazijom jedne loze (MDS-SLD) MDS neklasificiranim (MDS-U) MDS sa prstenastim sideroblastima (MDS-RS)
PROGNOSTIČKA VRIJEDNOST ANALIZE
IMUNOFENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
ZAKLJUČCIIMUNOFENOTIPIZACIJA PROTOČNOM CITOMETRIJOM U
DIJAGNOSTICI MDS_a
FCI nalaz bi trebao biti integriran u cjelokupno dijagnostičko izvješće zajedno s citomorfološkim nalazom venske krvi i koštane srži histopatološkim citogenetskih i ili molekularnih nalazima
- glavni nedostatak nedovoljno visoka pozitivna prediktivna vrijednost ndash NE MOŽE SE KORISTITI KAO ZASEBAN DIJAGNOSTIČKI POSTUPKA
- može pružiti dodatne važne informacije koje nisu dobivene morfološkim nalazom citogenetikom ili testovima molekularne dijagnostike
KLASIFIKACIJA
WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues Swerdlow SH Campo E Harris NL i sur World HealthOrganization Classification of Tumours 2017 Revised Edition WHOClassification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues Lyon France IARC Press 2017
Gredelj Šimec Nj Kaić G Škrtić A i sur Smjernice za dijagnozu i liječenje bolesnika s mijelodisplastičnim sindromom Radna skupina za mijelodisplastični sindrom Hrvatske kooperativne grupe za hematološke bolesti (KROHEM)Referalni centar Ministarstva zdravlja Republike Hrvatske za dijagnostiku i liječenje mijelodisplastičnog sindroma Hrvatsko hematološko društvo Hrvatskoga liječničkog zboraLiječ Vjesn 20171391ndash11
Malcovati L Hellstrom-Lindberg E Bowen D i sur Diagnosis and treatment of primary myelodysplastic syndromes in adults recommendations from the European LeukemiaNet Blood 2013122(17) 2943ndash2964
+ IMUNOFENOTIPIZACIJA
STANDARDIZACIJA
van de Loosdrecht AA Alhan C Beacuteneacute MC i sur Standardization of flow cytometry in myelodysplasticsyndromes reportfrom the first European LeukemiaNet working conference on flow
cytometric in myelodysplastic syndromes Haematologica 2009941124-1134
Westers TM Ireland R Kern W i sur Standardization of flow cytometry in myelodysplastic syndromes a report from an international consortium and the European LeukemiaNet Working Group Leukemia 2012 26(7) 1730 ndash 1741
Porwit A van de Loosdrecht AA Bettelheim P i sur Revisiting guidelines for integration of flow cytometry results in the WHO classification of myelodysplastic syndromesmdashproposal from the InternationalEuropean LeukemiaNet Working Group for Flow Cytometry in MDS Leukemia 201428(9)1793-1798
European LeukemiaNet Working Group
STANDARDIZACIJAEuroFlow Consortium
T Kalina T Flores-Montero J van der Velden VHJ i sur EuroFlow Consortium (EU-FP6 LSHB-CT-2006-018708)
EuroFlow standardization of flow cytometer instrument
settings and immunophenotyping protocols Leukemia 2012
26(9) 1986ndash2010
van Dongen JJM Lhermitte L Boumlttcher S i sur EuroFlow antibody
panels for standardized n-dimensional flow cytometric
immunophenotyping of normal reactive and malignant
leukocytesldquo Leukemia 201226(9)1908-75
8 bojna analiza ndash uvjet strogo definirana vrsta
citometra vrsta protutijela na stanične biljege vrsta
fluorokroma i njihova međusobna kombinacija i
proizvođači
Tablica 1 Preporuke za obradu uzoraka koštane srži za analizu protočnom
citometrijom na displaziju prema European LeukemiaNet (ELN)
Antikoagulans u uzorcima koštane
srži
heparin (alternativa EDTA)
temperatura pohrane sobna temperatura
vrijeme za obradu lt 24 sata
pre-tretman prije obilježavanja
(opcionalno)
liziranje eritrocita cjelog ili dijela uzorka
amonij klorid (bez fiksativa) lizatorom
pufer za pranje stanica (opcionalno) PBS sa 05 goveđeg ili humanog
albumina
prezervacija stabilnih antigena paraformaldehid fiksativ (05)
ograda nezrelih mijeloidnih stanica bolji naziv bdquoprogenitorildquo od bdquoblastildquo
slijepljene stanice (bdquodubletsldquo) moraju se isključiti iz analize na
histogramu FCSheightFCSarea
degranulirani granulociti procjenjuju se usporedbom njihova SSC
(lin ili log skala) prema SSC limfocita
glikozil-fosfatidil-inozitol- vezani
antigeni (npr CD14 CD16 CD24)
njihov izražaj može biti promijenjen u PNH
ali to ne isključuje MDS dijagnozu
Populacija stanica
Koštane sržiBitni CD biljezi
Preporučena analiza Nađena aberacija
Nezreli
mijeloidni i monocitni
progenitori
SSC
CD45
CD34
CD117
CD38
HLA DR
CD13
CD33
CD15 CD11b
CD5 CD7 CD19
CD56
Postotak stanica u frakciji nukleariranih stanica
Uvećan postotak
Izražaj CD45
Expression of CD45
Gubitak ili sniženuvećan
Izražaj CD34 Gubitak ili sniženuvećan
Izražaj CD117 Homogen nizak ili prekomjeran izražaj
Izražaj CD13 i CD33 Gubitak ili sniženuvećan
Izražaj HLA DDR Gubitak ili sniženuvećan
Asinhron izražaj CD11b CD15 Pozitivnost biljega zrelih stanica
Izražaj biljega CD5 CD7 CD19 CD56
Pozitivnost biljega limfocitne loze
Neutrofili
SSC
CD45
CD15 CD11b CD16 CD10
CD13 CD33
CD36 CD64
CD34 CD117
HLA DR
CD5 CD7
CD56 CD19
Postotak stanica kao omjer prema limfocitima
Smanjen
SSC kao omjer prema SSC limfocita
Smanjen
Odnos CD13 i CD11b Promijenjen izgled
Odnos CD13 i CD16 Promijenjen izgled
Odnos CD15 i CD10 Promijenjen izgled
Tablica 2 Preporuke za obradu uzoraka koštane srži za analizu protočnom
citometrijom na displaziju prema European LeukemiaNet (ELN)
Tablica 1 Preporuke za obradu uzoraka koštane srži za analizu protočnom
citometrijom na displaziju prema European LeukemiaNet (ELN)
Populacija stanica
Koštane sržiBitni CD biljezi
Preporučena analiza Nađena aberacija
Monociti
SSC
CD45
CD14 CD11b
CD13 CD33
CD64 CD16
CD36 CD34
HLA DR
CD5 CD7
CD56
(CD300e)
Postotak stanica Sniženuvećan
Distribucija stadija zrelosti Pomak ka nezrelim
Odnos HLA DDR i CD11b Promijenjen izgled
Odnos CD36 i CD14 Promijenjen izgled
Izražaj CD13 i CD33 (Homogeno) nizak ili prekomjeran izražaj
Izražaj CD56 Pozitivnost biljega limfocitne loze
Progenitori
B limfocita
CD45
CD19
CD34
CD10
Broj kao frakcija ukupnog broja
CD34+ stanica u ogradi
CD45CD34SSC u kombinaciji sa CD10 ili CD19
Smanjen ili odsutan
Eritrocitni odjeljak CD117
CD235a
CD36 CD71
(CD105)
Postotak nukleiranih eritriodnih stanica
Uvećan
Odnos CD71 i CD235a Promijenjen izgled
Izražaj CD71 Snižen
Izražaj CD36 Snižen
Postotak CD117 pozitivnih prekursora
Uvećan
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
FIZIKALNE KARAKTERISTIKE STANICA OKOMITO RASPRŠENJE (FS)BOČNO RASPRŠENJE (SS)NEDOVOLJNO INFORMATIVNO ZA IDENTIFIKACIJU VRSTE STANICA
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
CD45SSOGRAĐIVANJE
limfociti
monociti
Neutrofilni granulociti
mijeloblasti
B progenitori
hematogoni
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
MDS Kronična mijelomonocitna leukemija CMML
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
Uvećanje broja mijeloidnih progenitora
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
OMJER CD45 limfocitiCD45mijeloblasta Normalno 45-74
Snižen CD45Snižen omjer 553597= 93
CD45 limfociti CD45 mijeloblasti
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
NORMALAN MDSCD34 vs CD117
uvećanje intenziteta izražaja CD117
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
Snižen SS neutrofilaSnižen omjer 605107 = 565Snižena granuliranost
OMJER SS limfocitiSS neutrofiliNormalno gt60
GRANULIRANOST
SS limfociti SS neutrofili
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
CD10 gubitak
CD117 pozitivitet
CD66abcevs
CD10
CD15vs
CD117
Analiza monocitnog odjeljka
CD13 gubitak
CD56 pozivitet
HLA DDRvs
CD13
CD33vs
CD56
Analiza progenitorskih B limfocita
Nema populacije CD19+CD10+
CD19 vs CD10
Analiza eritroidnog odjeljka
CILJ
A) Identifikacija fenotipskih aberantnosti
najčešće zamijećena aberacija je
uvećanje broja eritrocitni progenitora
povezana sa većim udjelom nezrelih
eritroidnih stanica (CD117+)
asinhron izražaj biljega CD71 vs
CD235a
snižen izražaj CD36
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS engl FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
Prema nađenim anomalijama klasificira se u 3 grupe bdquonormalanldquo sa 0 ili 1 abnormalnosti bdquoumjerenldquo sa 2 do 4 abnormalnosti nađenih u 1 od loza i bdquoozbiljanldquo sa 2 ili 3 abnormalnosti nađene u 2 ili više loza
1 Wells DA Benesch M Loken MR i sur Myeloid and monocytic dyspoiesis as determined by flow cytometric scoring in myelodysplastic syndrome correlates with the IPSS and with outcome after hematopoietic stem cell transplantation Blood 2003 102 394ndash403
2 van de Loosdrecht AA Westers TM1 Westra AH i sur Identification of distinct prognostic subgroups in low- and intermediate-1ndashrisk myelodysplastic syndromes by flow cytometry Blood 20081111067-1077
analiza stanica mijelomonocitne loze (mijeloblasta neutrofila i monocita)
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
određivanje broja i anomalija mijeloblasta
(izražaj i intenzitet biljega CD45CD11b CD16 CD56)
B progenitorskihstanica
i izmjerenom omjeru SSC granulocitaSSC limfocita
Ogata K Kishikawa Y Satoh C Tamura H Dan K Hayashi A Diagnostic application of flow cytometric characteristics of CD34+ cells in
low-grade myelodysplastic syndromes Blood 2006 108 1037ndash1044
bdquoOgata indeksldquo
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
fenotipski zasebno dokazana displazija na odjeljcima
a) progenitorskim mijeloidnim stanicama
b) zrelim stanicama granulocitne i monocitne loze
c) nezrelim stanicama eritrocitne loze
van de Loosdrecht AA Westers TM Cutting Edge Flow Cytometry in Myelodysplastic Syndromes J Natl Compr Canc Netw 201311892-902
Alhan C Westers TM Cremers EM i sur The myelodysplastic syndromes flow cytometric score a three- parameter prognostic flow cytometric scoring system Leukemia 2016 30(3)658ndash665
bdquo Intregirani FC indeks (iFCS) ili tzv ABC score ldquo
bull DOBRA KORELACIJAFCCS vs Internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl International Prognostic Scoring System IPSS 1997) FCCS vs Revidirani internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl Revised International Prognostic Scoring System IPSS-R 2012)
bull LOŠIJA PROGNOZA- Broj mijeloidnih progenitora s fenotipskim anomalijama što veći broj -viši FCM indeks - nepovoljna prognoza (progresija u AML relaps nakon alogene transplantacije)- Veći broj aberacija u pacijenata IPSS niskog i IPSS int-1rizika - povezan sa progresijom bolesti- Snižen SSC- Povišen izražaj CD117 u mijeloidnim progenitorima
bull DOBRA PROGNOZA-Snižen izražajem CD13 u zrelim monocitima - Niži FCCS (u pacijenata sa MDS sa displazijom jedne loze (MDS-SLD) MDS neklasificiranim (MDS-U) MDS sa prstenastim sideroblastima (MDS-RS)
PROGNOSTIČKA VRIJEDNOST ANALIZE
IMUNOFENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
ZAKLJUČCIIMUNOFENOTIPIZACIJA PROTOČNOM CITOMETRIJOM U
DIJAGNOSTICI MDS_a
FCI nalaz bi trebao biti integriran u cjelokupno dijagnostičko izvješće zajedno s citomorfološkim nalazom venske krvi i koštane srži histopatološkim citogenetskih i ili molekularnih nalazima
- glavni nedostatak nedovoljno visoka pozitivna prediktivna vrijednost ndash NE MOŽE SE KORISTITI KAO ZASEBAN DIJAGNOSTIČKI POSTUPKA
- može pružiti dodatne važne informacije koje nisu dobivene morfološkim nalazom citogenetikom ili testovima molekularne dijagnostike
STANDARDIZACIJA
van de Loosdrecht AA Alhan C Beacuteneacute MC i sur Standardization of flow cytometry in myelodysplasticsyndromes reportfrom the first European LeukemiaNet working conference on flow
cytometric in myelodysplastic syndromes Haematologica 2009941124-1134
Westers TM Ireland R Kern W i sur Standardization of flow cytometry in myelodysplastic syndromes a report from an international consortium and the European LeukemiaNet Working Group Leukemia 2012 26(7) 1730 ndash 1741
Porwit A van de Loosdrecht AA Bettelheim P i sur Revisiting guidelines for integration of flow cytometry results in the WHO classification of myelodysplastic syndromesmdashproposal from the InternationalEuropean LeukemiaNet Working Group for Flow Cytometry in MDS Leukemia 201428(9)1793-1798
European LeukemiaNet Working Group
STANDARDIZACIJAEuroFlow Consortium
T Kalina T Flores-Montero J van der Velden VHJ i sur EuroFlow Consortium (EU-FP6 LSHB-CT-2006-018708)
EuroFlow standardization of flow cytometer instrument
settings and immunophenotyping protocols Leukemia 2012
26(9) 1986ndash2010
van Dongen JJM Lhermitte L Boumlttcher S i sur EuroFlow antibody
panels for standardized n-dimensional flow cytometric
immunophenotyping of normal reactive and malignant
leukocytesldquo Leukemia 201226(9)1908-75
8 bojna analiza ndash uvjet strogo definirana vrsta
citometra vrsta protutijela na stanične biljege vrsta
fluorokroma i njihova međusobna kombinacija i
proizvođači
Tablica 1 Preporuke za obradu uzoraka koštane srži za analizu protočnom
citometrijom na displaziju prema European LeukemiaNet (ELN)
Antikoagulans u uzorcima koštane
srži
heparin (alternativa EDTA)
temperatura pohrane sobna temperatura
vrijeme za obradu lt 24 sata
pre-tretman prije obilježavanja
(opcionalno)
liziranje eritrocita cjelog ili dijela uzorka
amonij klorid (bez fiksativa) lizatorom
pufer za pranje stanica (opcionalno) PBS sa 05 goveđeg ili humanog
albumina
prezervacija stabilnih antigena paraformaldehid fiksativ (05)
ograda nezrelih mijeloidnih stanica bolji naziv bdquoprogenitorildquo od bdquoblastildquo
slijepljene stanice (bdquodubletsldquo) moraju se isključiti iz analize na
histogramu FCSheightFCSarea
degranulirani granulociti procjenjuju se usporedbom njihova SSC
(lin ili log skala) prema SSC limfocita
glikozil-fosfatidil-inozitol- vezani
antigeni (npr CD14 CD16 CD24)
njihov izražaj može biti promijenjen u PNH
ali to ne isključuje MDS dijagnozu
Populacija stanica
Koštane sržiBitni CD biljezi
Preporučena analiza Nađena aberacija
Nezreli
mijeloidni i monocitni
progenitori
SSC
CD45
CD34
CD117
CD38
HLA DR
CD13
CD33
CD15 CD11b
CD5 CD7 CD19
CD56
Postotak stanica u frakciji nukleariranih stanica
Uvećan postotak
Izražaj CD45
Expression of CD45
Gubitak ili sniženuvećan
Izražaj CD34 Gubitak ili sniženuvećan
Izražaj CD117 Homogen nizak ili prekomjeran izražaj
Izražaj CD13 i CD33 Gubitak ili sniženuvećan
Izražaj HLA DDR Gubitak ili sniženuvećan
Asinhron izražaj CD11b CD15 Pozitivnost biljega zrelih stanica
Izražaj biljega CD5 CD7 CD19 CD56
Pozitivnost biljega limfocitne loze
Neutrofili
SSC
CD45
CD15 CD11b CD16 CD10
CD13 CD33
CD36 CD64
CD34 CD117
HLA DR
CD5 CD7
CD56 CD19
Postotak stanica kao omjer prema limfocitima
Smanjen
SSC kao omjer prema SSC limfocita
Smanjen
Odnos CD13 i CD11b Promijenjen izgled
Odnos CD13 i CD16 Promijenjen izgled
Odnos CD15 i CD10 Promijenjen izgled
Tablica 2 Preporuke za obradu uzoraka koštane srži za analizu protočnom
citometrijom na displaziju prema European LeukemiaNet (ELN)
Tablica 1 Preporuke za obradu uzoraka koštane srži za analizu protočnom
citometrijom na displaziju prema European LeukemiaNet (ELN)
Populacija stanica
Koštane sržiBitni CD biljezi
Preporučena analiza Nađena aberacija
Monociti
SSC
CD45
CD14 CD11b
CD13 CD33
CD64 CD16
CD36 CD34
HLA DR
CD5 CD7
CD56
(CD300e)
Postotak stanica Sniženuvećan
Distribucija stadija zrelosti Pomak ka nezrelim
Odnos HLA DDR i CD11b Promijenjen izgled
Odnos CD36 i CD14 Promijenjen izgled
Izražaj CD13 i CD33 (Homogeno) nizak ili prekomjeran izražaj
Izražaj CD56 Pozitivnost biljega limfocitne loze
Progenitori
B limfocita
CD45
CD19
CD34
CD10
Broj kao frakcija ukupnog broja
CD34+ stanica u ogradi
CD45CD34SSC u kombinaciji sa CD10 ili CD19
Smanjen ili odsutan
Eritrocitni odjeljak CD117
CD235a
CD36 CD71
(CD105)
Postotak nukleiranih eritriodnih stanica
Uvećan
Odnos CD71 i CD235a Promijenjen izgled
Izražaj CD71 Snižen
Izražaj CD36 Snižen
Postotak CD117 pozitivnih prekursora
Uvećan
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
FIZIKALNE KARAKTERISTIKE STANICA OKOMITO RASPRŠENJE (FS)BOČNO RASPRŠENJE (SS)NEDOVOLJNO INFORMATIVNO ZA IDENTIFIKACIJU VRSTE STANICA
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
CD45SSOGRAĐIVANJE
limfociti
monociti
Neutrofilni granulociti
mijeloblasti
B progenitori
hematogoni
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
MDS Kronična mijelomonocitna leukemija CMML
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
Uvećanje broja mijeloidnih progenitora
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
OMJER CD45 limfocitiCD45mijeloblasta Normalno 45-74
Snižen CD45Snižen omjer 553597= 93
CD45 limfociti CD45 mijeloblasti
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
NORMALAN MDSCD34 vs CD117
uvećanje intenziteta izražaja CD117
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
Snižen SS neutrofilaSnižen omjer 605107 = 565Snižena granuliranost
OMJER SS limfocitiSS neutrofiliNormalno gt60
GRANULIRANOST
SS limfociti SS neutrofili
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
CD10 gubitak
CD117 pozitivitet
CD66abcevs
CD10
CD15vs
CD117
Analiza monocitnog odjeljka
CD13 gubitak
CD56 pozivitet
HLA DDRvs
CD13
CD33vs
CD56
Analiza progenitorskih B limfocita
Nema populacije CD19+CD10+
CD19 vs CD10
Analiza eritroidnog odjeljka
CILJ
A) Identifikacija fenotipskih aberantnosti
najčešće zamijećena aberacija je
uvećanje broja eritrocitni progenitora
povezana sa većim udjelom nezrelih
eritroidnih stanica (CD117+)
asinhron izražaj biljega CD71 vs
CD235a
snižen izražaj CD36
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS engl FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
Prema nađenim anomalijama klasificira se u 3 grupe bdquonormalanldquo sa 0 ili 1 abnormalnosti bdquoumjerenldquo sa 2 do 4 abnormalnosti nađenih u 1 od loza i bdquoozbiljanldquo sa 2 ili 3 abnormalnosti nađene u 2 ili više loza
1 Wells DA Benesch M Loken MR i sur Myeloid and monocytic dyspoiesis as determined by flow cytometric scoring in myelodysplastic syndrome correlates with the IPSS and with outcome after hematopoietic stem cell transplantation Blood 2003 102 394ndash403
2 van de Loosdrecht AA Westers TM1 Westra AH i sur Identification of distinct prognostic subgroups in low- and intermediate-1ndashrisk myelodysplastic syndromes by flow cytometry Blood 20081111067-1077
analiza stanica mijelomonocitne loze (mijeloblasta neutrofila i monocita)
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
određivanje broja i anomalija mijeloblasta
(izražaj i intenzitet biljega CD45CD11b CD16 CD56)
B progenitorskihstanica
i izmjerenom omjeru SSC granulocitaSSC limfocita
Ogata K Kishikawa Y Satoh C Tamura H Dan K Hayashi A Diagnostic application of flow cytometric characteristics of CD34+ cells in
low-grade myelodysplastic syndromes Blood 2006 108 1037ndash1044
bdquoOgata indeksldquo
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
fenotipski zasebno dokazana displazija na odjeljcima
a) progenitorskim mijeloidnim stanicama
b) zrelim stanicama granulocitne i monocitne loze
c) nezrelim stanicama eritrocitne loze
van de Loosdrecht AA Westers TM Cutting Edge Flow Cytometry in Myelodysplastic Syndromes J Natl Compr Canc Netw 201311892-902
Alhan C Westers TM Cremers EM i sur The myelodysplastic syndromes flow cytometric score a three- parameter prognostic flow cytometric scoring system Leukemia 2016 30(3)658ndash665
bdquo Intregirani FC indeks (iFCS) ili tzv ABC score ldquo
bull DOBRA KORELACIJAFCCS vs Internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl International Prognostic Scoring System IPSS 1997) FCCS vs Revidirani internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl Revised International Prognostic Scoring System IPSS-R 2012)
bull LOŠIJA PROGNOZA- Broj mijeloidnih progenitora s fenotipskim anomalijama što veći broj -viši FCM indeks - nepovoljna prognoza (progresija u AML relaps nakon alogene transplantacije)- Veći broj aberacija u pacijenata IPSS niskog i IPSS int-1rizika - povezan sa progresijom bolesti- Snižen SSC- Povišen izražaj CD117 u mijeloidnim progenitorima
bull DOBRA PROGNOZA-Snižen izražajem CD13 u zrelim monocitima - Niži FCCS (u pacijenata sa MDS sa displazijom jedne loze (MDS-SLD) MDS neklasificiranim (MDS-U) MDS sa prstenastim sideroblastima (MDS-RS)
PROGNOSTIČKA VRIJEDNOST ANALIZE
IMUNOFENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
ZAKLJUČCIIMUNOFENOTIPIZACIJA PROTOČNOM CITOMETRIJOM U
DIJAGNOSTICI MDS_a
FCI nalaz bi trebao biti integriran u cjelokupno dijagnostičko izvješće zajedno s citomorfološkim nalazom venske krvi i koštane srži histopatološkim citogenetskih i ili molekularnih nalazima
- glavni nedostatak nedovoljno visoka pozitivna prediktivna vrijednost ndash NE MOŽE SE KORISTITI KAO ZASEBAN DIJAGNOSTIČKI POSTUPKA
- može pružiti dodatne važne informacije koje nisu dobivene morfološkim nalazom citogenetikom ili testovima molekularne dijagnostike
STANDARDIZACIJAEuroFlow Consortium
T Kalina T Flores-Montero J van der Velden VHJ i sur EuroFlow Consortium (EU-FP6 LSHB-CT-2006-018708)
EuroFlow standardization of flow cytometer instrument
settings and immunophenotyping protocols Leukemia 2012
26(9) 1986ndash2010
van Dongen JJM Lhermitte L Boumlttcher S i sur EuroFlow antibody
panels for standardized n-dimensional flow cytometric
immunophenotyping of normal reactive and malignant
leukocytesldquo Leukemia 201226(9)1908-75
8 bojna analiza ndash uvjet strogo definirana vrsta
citometra vrsta protutijela na stanične biljege vrsta
fluorokroma i njihova međusobna kombinacija i
proizvođači
Tablica 1 Preporuke za obradu uzoraka koštane srži za analizu protočnom
citometrijom na displaziju prema European LeukemiaNet (ELN)
Antikoagulans u uzorcima koštane
srži
heparin (alternativa EDTA)
temperatura pohrane sobna temperatura
vrijeme za obradu lt 24 sata
pre-tretman prije obilježavanja
(opcionalno)
liziranje eritrocita cjelog ili dijela uzorka
amonij klorid (bez fiksativa) lizatorom
pufer za pranje stanica (opcionalno) PBS sa 05 goveđeg ili humanog
albumina
prezervacija stabilnih antigena paraformaldehid fiksativ (05)
ograda nezrelih mijeloidnih stanica bolji naziv bdquoprogenitorildquo od bdquoblastildquo
slijepljene stanice (bdquodubletsldquo) moraju se isključiti iz analize na
histogramu FCSheightFCSarea
degranulirani granulociti procjenjuju se usporedbom njihova SSC
(lin ili log skala) prema SSC limfocita
glikozil-fosfatidil-inozitol- vezani
antigeni (npr CD14 CD16 CD24)
njihov izražaj može biti promijenjen u PNH
ali to ne isključuje MDS dijagnozu
Populacija stanica
Koštane sržiBitni CD biljezi
Preporučena analiza Nađena aberacija
Nezreli
mijeloidni i monocitni
progenitori
SSC
CD45
CD34
CD117
CD38
HLA DR
CD13
CD33
CD15 CD11b
CD5 CD7 CD19
CD56
Postotak stanica u frakciji nukleariranih stanica
Uvećan postotak
Izražaj CD45
Expression of CD45
Gubitak ili sniženuvećan
Izražaj CD34 Gubitak ili sniženuvećan
Izražaj CD117 Homogen nizak ili prekomjeran izražaj
Izražaj CD13 i CD33 Gubitak ili sniženuvećan
Izražaj HLA DDR Gubitak ili sniženuvećan
Asinhron izražaj CD11b CD15 Pozitivnost biljega zrelih stanica
Izražaj biljega CD5 CD7 CD19 CD56
Pozitivnost biljega limfocitne loze
Neutrofili
SSC
CD45
CD15 CD11b CD16 CD10
CD13 CD33
CD36 CD64
CD34 CD117
HLA DR
CD5 CD7
CD56 CD19
Postotak stanica kao omjer prema limfocitima
Smanjen
SSC kao omjer prema SSC limfocita
Smanjen
Odnos CD13 i CD11b Promijenjen izgled
Odnos CD13 i CD16 Promijenjen izgled
Odnos CD15 i CD10 Promijenjen izgled
Tablica 2 Preporuke za obradu uzoraka koštane srži za analizu protočnom
citometrijom na displaziju prema European LeukemiaNet (ELN)
Tablica 1 Preporuke za obradu uzoraka koštane srži za analizu protočnom
citometrijom na displaziju prema European LeukemiaNet (ELN)
Populacija stanica
Koštane sržiBitni CD biljezi
Preporučena analiza Nađena aberacija
Monociti
SSC
CD45
CD14 CD11b
CD13 CD33
CD64 CD16
CD36 CD34
HLA DR
CD5 CD7
CD56
(CD300e)
Postotak stanica Sniženuvećan
Distribucija stadija zrelosti Pomak ka nezrelim
Odnos HLA DDR i CD11b Promijenjen izgled
Odnos CD36 i CD14 Promijenjen izgled
Izražaj CD13 i CD33 (Homogeno) nizak ili prekomjeran izražaj
Izražaj CD56 Pozitivnost biljega limfocitne loze
Progenitori
B limfocita
CD45
CD19
CD34
CD10
Broj kao frakcija ukupnog broja
CD34+ stanica u ogradi
CD45CD34SSC u kombinaciji sa CD10 ili CD19
Smanjen ili odsutan
Eritrocitni odjeljak CD117
CD235a
CD36 CD71
(CD105)
Postotak nukleiranih eritriodnih stanica
Uvećan
Odnos CD71 i CD235a Promijenjen izgled
Izražaj CD71 Snižen
Izražaj CD36 Snižen
Postotak CD117 pozitivnih prekursora
Uvećan
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
FIZIKALNE KARAKTERISTIKE STANICA OKOMITO RASPRŠENJE (FS)BOČNO RASPRŠENJE (SS)NEDOVOLJNO INFORMATIVNO ZA IDENTIFIKACIJU VRSTE STANICA
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
CD45SSOGRAĐIVANJE
limfociti
monociti
Neutrofilni granulociti
mijeloblasti
B progenitori
hematogoni
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
MDS Kronična mijelomonocitna leukemija CMML
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
Uvećanje broja mijeloidnih progenitora
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
OMJER CD45 limfocitiCD45mijeloblasta Normalno 45-74
Snižen CD45Snižen omjer 553597= 93
CD45 limfociti CD45 mijeloblasti
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
NORMALAN MDSCD34 vs CD117
uvećanje intenziteta izražaja CD117
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
Snižen SS neutrofilaSnižen omjer 605107 = 565Snižena granuliranost
OMJER SS limfocitiSS neutrofiliNormalno gt60
GRANULIRANOST
SS limfociti SS neutrofili
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
CD10 gubitak
CD117 pozitivitet
CD66abcevs
CD10
CD15vs
CD117
Analiza monocitnog odjeljka
CD13 gubitak
CD56 pozivitet
HLA DDRvs
CD13
CD33vs
CD56
Analiza progenitorskih B limfocita
Nema populacije CD19+CD10+
CD19 vs CD10
Analiza eritroidnog odjeljka
CILJ
A) Identifikacija fenotipskih aberantnosti
najčešće zamijećena aberacija je
uvećanje broja eritrocitni progenitora
povezana sa većim udjelom nezrelih
eritroidnih stanica (CD117+)
asinhron izražaj biljega CD71 vs
CD235a
snižen izražaj CD36
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS engl FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
Prema nađenim anomalijama klasificira se u 3 grupe bdquonormalanldquo sa 0 ili 1 abnormalnosti bdquoumjerenldquo sa 2 do 4 abnormalnosti nađenih u 1 od loza i bdquoozbiljanldquo sa 2 ili 3 abnormalnosti nađene u 2 ili više loza
1 Wells DA Benesch M Loken MR i sur Myeloid and monocytic dyspoiesis as determined by flow cytometric scoring in myelodysplastic syndrome correlates with the IPSS and with outcome after hematopoietic stem cell transplantation Blood 2003 102 394ndash403
2 van de Loosdrecht AA Westers TM1 Westra AH i sur Identification of distinct prognostic subgroups in low- and intermediate-1ndashrisk myelodysplastic syndromes by flow cytometry Blood 20081111067-1077
analiza stanica mijelomonocitne loze (mijeloblasta neutrofila i monocita)
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
određivanje broja i anomalija mijeloblasta
(izražaj i intenzitet biljega CD45CD11b CD16 CD56)
B progenitorskihstanica
i izmjerenom omjeru SSC granulocitaSSC limfocita
Ogata K Kishikawa Y Satoh C Tamura H Dan K Hayashi A Diagnostic application of flow cytometric characteristics of CD34+ cells in
low-grade myelodysplastic syndromes Blood 2006 108 1037ndash1044
bdquoOgata indeksldquo
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
fenotipski zasebno dokazana displazija na odjeljcima
a) progenitorskim mijeloidnim stanicama
b) zrelim stanicama granulocitne i monocitne loze
c) nezrelim stanicama eritrocitne loze
van de Loosdrecht AA Westers TM Cutting Edge Flow Cytometry in Myelodysplastic Syndromes J Natl Compr Canc Netw 201311892-902
Alhan C Westers TM Cremers EM i sur The myelodysplastic syndromes flow cytometric score a three- parameter prognostic flow cytometric scoring system Leukemia 2016 30(3)658ndash665
bdquo Intregirani FC indeks (iFCS) ili tzv ABC score ldquo
bull DOBRA KORELACIJAFCCS vs Internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl International Prognostic Scoring System IPSS 1997) FCCS vs Revidirani internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl Revised International Prognostic Scoring System IPSS-R 2012)
bull LOŠIJA PROGNOZA- Broj mijeloidnih progenitora s fenotipskim anomalijama što veći broj -viši FCM indeks - nepovoljna prognoza (progresija u AML relaps nakon alogene transplantacije)- Veći broj aberacija u pacijenata IPSS niskog i IPSS int-1rizika - povezan sa progresijom bolesti- Snižen SSC- Povišen izražaj CD117 u mijeloidnim progenitorima
bull DOBRA PROGNOZA-Snižen izražajem CD13 u zrelim monocitima - Niži FCCS (u pacijenata sa MDS sa displazijom jedne loze (MDS-SLD) MDS neklasificiranim (MDS-U) MDS sa prstenastim sideroblastima (MDS-RS)
PROGNOSTIČKA VRIJEDNOST ANALIZE
IMUNOFENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
ZAKLJUČCIIMUNOFENOTIPIZACIJA PROTOČNOM CITOMETRIJOM U
DIJAGNOSTICI MDS_a
FCI nalaz bi trebao biti integriran u cjelokupno dijagnostičko izvješće zajedno s citomorfološkim nalazom venske krvi i koštane srži histopatološkim citogenetskih i ili molekularnih nalazima
- glavni nedostatak nedovoljno visoka pozitivna prediktivna vrijednost ndash NE MOŽE SE KORISTITI KAO ZASEBAN DIJAGNOSTIČKI POSTUPKA
- može pružiti dodatne važne informacije koje nisu dobivene morfološkim nalazom citogenetikom ili testovima molekularne dijagnostike
Tablica 1 Preporuke za obradu uzoraka koštane srži za analizu protočnom
citometrijom na displaziju prema European LeukemiaNet (ELN)
Antikoagulans u uzorcima koštane
srži
heparin (alternativa EDTA)
temperatura pohrane sobna temperatura
vrijeme za obradu lt 24 sata
pre-tretman prije obilježavanja
(opcionalno)
liziranje eritrocita cjelog ili dijela uzorka
amonij klorid (bez fiksativa) lizatorom
pufer za pranje stanica (opcionalno) PBS sa 05 goveđeg ili humanog
albumina
prezervacija stabilnih antigena paraformaldehid fiksativ (05)
ograda nezrelih mijeloidnih stanica bolji naziv bdquoprogenitorildquo od bdquoblastildquo
slijepljene stanice (bdquodubletsldquo) moraju se isključiti iz analize na
histogramu FCSheightFCSarea
degranulirani granulociti procjenjuju se usporedbom njihova SSC
(lin ili log skala) prema SSC limfocita
glikozil-fosfatidil-inozitol- vezani
antigeni (npr CD14 CD16 CD24)
njihov izražaj može biti promijenjen u PNH
ali to ne isključuje MDS dijagnozu
Populacija stanica
Koštane sržiBitni CD biljezi
Preporučena analiza Nađena aberacija
Nezreli
mijeloidni i monocitni
progenitori
SSC
CD45
CD34
CD117
CD38
HLA DR
CD13
CD33
CD15 CD11b
CD5 CD7 CD19
CD56
Postotak stanica u frakciji nukleariranih stanica
Uvećan postotak
Izražaj CD45
Expression of CD45
Gubitak ili sniženuvećan
Izražaj CD34 Gubitak ili sniženuvećan
Izražaj CD117 Homogen nizak ili prekomjeran izražaj
Izražaj CD13 i CD33 Gubitak ili sniženuvećan
Izražaj HLA DDR Gubitak ili sniženuvećan
Asinhron izražaj CD11b CD15 Pozitivnost biljega zrelih stanica
Izražaj biljega CD5 CD7 CD19 CD56
Pozitivnost biljega limfocitne loze
Neutrofili
SSC
CD45
CD15 CD11b CD16 CD10
CD13 CD33
CD36 CD64
CD34 CD117
HLA DR
CD5 CD7
CD56 CD19
Postotak stanica kao omjer prema limfocitima
Smanjen
SSC kao omjer prema SSC limfocita
Smanjen
Odnos CD13 i CD11b Promijenjen izgled
Odnos CD13 i CD16 Promijenjen izgled
Odnos CD15 i CD10 Promijenjen izgled
Tablica 2 Preporuke za obradu uzoraka koštane srži za analizu protočnom
citometrijom na displaziju prema European LeukemiaNet (ELN)
Tablica 1 Preporuke za obradu uzoraka koštane srži za analizu protočnom
citometrijom na displaziju prema European LeukemiaNet (ELN)
Populacija stanica
Koštane sržiBitni CD biljezi
Preporučena analiza Nađena aberacija
Monociti
SSC
CD45
CD14 CD11b
CD13 CD33
CD64 CD16
CD36 CD34
HLA DR
CD5 CD7
CD56
(CD300e)
Postotak stanica Sniženuvećan
Distribucija stadija zrelosti Pomak ka nezrelim
Odnos HLA DDR i CD11b Promijenjen izgled
Odnos CD36 i CD14 Promijenjen izgled
Izražaj CD13 i CD33 (Homogeno) nizak ili prekomjeran izražaj
Izražaj CD56 Pozitivnost biljega limfocitne loze
Progenitori
B limfocita
CD45
CD19
CD34
CD10
Broj kao frakcija ukupnog broja
CD34+ stanica u ogradi
CD45CD34SSC u kombinaciji sa CD10 ili CD19
Smanjen ili odsutan
Eritrocitni odjeljak CD117
CD235a
CD36 CD71
(CD105)
Postotak nukleiranih eritriodnih stanica
Uvećan
Odnos CD71 i CD235a Promijenjen izgled
Izražaj CD71 Snižen
Izražaj CD36 Snižen
Postotak CD117 pozitivnih prekursora
Uvećan
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
FIZIKALNE KARAKTERISTIKE STANICA OKOMITO RASPRŠENJE (FS)BOČNO RASPRŠENJE (SS)NEDOVOLJNO INFORMATIVNO ZA IDENTIFIKACIJU VRSTE STANICA
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
CD45SSOGRAĐIVANJE
limfociti
monociti
Neutrofilni granulociti
mijeloblasti
B progenitori
hematogoni
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
MDS Kronična mijelomonocitna leukemija CMML
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
Uvećanje broja mijeloidnih progenitora
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
OMJER CD45 limfocitiCD45mijeloblasta Normalno 45-74
Snižen CD45Snižen omjer 553597= 93
CD45 limfociti CD45 mijeloblasti
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
NORMALAN MDSCD34 vs CD117
uvećanje intenziteta izražaja CD117
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
Snižen SS neutrofilaSnižen omjer 605107 = 565Snižena granuliranost
OMJER SS limfocitiSS neutrofiliNormalno gt60
GRANULIRANOST
SS limfociti SS neutrofili
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
CD10 gubitak
CD117 pozitivitet
CD66abcevs
CD10
CD15vs
CD117
Analiza monocitnog odjeljka
CD13 gubitak
CD56 pozivitet
HLA DDRvs
CD13
CD33vs
CD56
Analiza progenitorskih B limfocita
Nema populacije CD19+CD10+
CD19 vs CD10
Analiza eritroidnog odjeljka
CILJ
A) Identifikacija fenotipskih aberantnosti
najčešće zamijećena aberacija je
uvećanje broja eritrocitni progenitora
povezana sa većim udjelom nezrelih
eritroidnih stanica (CD117+)
asinhron izražaj biljega CD71 vs
CD235a
snižen izražaj CD36
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS engl FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
Prema nađenim anomalijama klasificira se u 3 grupe bdquonormalanldquo sa 0 ili 1 abnormalnosti bdquoumjerenldquo sa 2 do 4 abnormalnosti nađenih u 1 od loza i bdquoozbiljanldquo sa 2 ili 3 abnormalnosti nađene u 2 ili više loza
1 Wells DA Benesch M Loken MR i sur Myeloid and monocytic dyspoiesis as determined by flow cytometric scoring in myelodysplastic syndrome correlates with the IPSS and with outcome after hematopoietic stem cell transplantation Blood 2003 102 394ndash403
2 van de Loosdrecht AA Westers TM1 Westra AH i sur Identification of distinct prognostic subgroups in low- and intermediate-1ndashrisk myelodysplastic syndromes by flow cytometry Blood 20081111067-1077
analiza stanica mijelomonocitne loze (mijeloblasta neutrofila i monocita)
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
određivanje broja i anomalija mijeloblasta
(izražaj i intenzitet biljega CD45CD11b CD16 CD56)
B progenitorskihstanica
i izmjerenom omjeru SSC granulocitaSSC limfocita
Ogata K Kishikawa Y Satoh C Tamura H Dan K Hayashi A Diagnostic application of flow cytometric characteristics of CD34+ cells in
low-grade myelodysplastic syndromes Blood 2006 108 1037ndash1044
bdquoOgata indeksldquo
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
fenotipski zasebno dokazana displazija na odjeljcima
a) progenitorskim mijeloidnim stanicama
b) zrelim stanicama granulocitne i monocitne loze
c) nezrelim stanicama eritrocitne loze
van de Loosdrecht AA Westers TM Cutting Edge Flow Cytometry in Myelodysplastic Syndromes J Natl Compr Canc Netw 201311892-902
Alhan C Westers TM Cremers EM i sur The myelodysplastic syndromes flow cytometric score a three- parameter prognostic flow cytometric scoring system Leukemia 2016 30(3)658ndash665
bdquo Intregirani FC indeks (iFCS) ili tzv ABC score ldquo
bull DOBRA KORELACIJAFCCS vs Internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl International Prognostic Scoring System IPSS 1997) FCCS vs Revidirani internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl Revised International Prognostic Scoring System IPSS-R 2012)
bull LOŠIJA PROGNOZA- Broj mijeloidnih progenitora s fenotipskim anomalijama što veći broj -viši FCM indeks - nepovoljna prognoza (progresija u AML relaps nakon alogene transplantacije)- Veći broj aberacija u pacijenata IPSS niskog i IPSS int-1rizika - povezan sa progresijom bolesti- Snižen SSC- Povišen izražaj CD117 u mijeloidnim progenitorima
bull DOBRA PROGNOZA-Snižen izražajem CD13 u zrelim monocitima - Niži FCCS (u pacijenata sa MDS sa displazijom jedne loze (MDS-SLD) MDS neklasificiranim (MDS-U) MDS sa prstenastim sideroblastima (MDS-RS)
PROGNOSTIČKA VRIJEDNOST ANALIZE
IMUNOFENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
ZAKLJUČCIIMUNOFENOTIPIZACIJA PROTOČNOM CITOMETRIJOM U
DIJAGNOSTICI MDS_a
FCI nalaz bi trebao biti integriran u cjelokupno dijagnostičko izvješće zajedno s citomorfološkim nalazom venske krvi i koštane srži histopatološkim citogenetskih i ili molekularnih nalazima
- glavni nedostatak nedovoljno visoka pozitivna prediktivna vrijednost ndash NE MOŽE SE KORISTITI KAO ZASEBAN DIJAGNOSTIČKI POSTUPKA
- može pružiti dodatne važne informacije koje nisu dobivene morfološkim nalazom citogenetikom ili testovima molekularne dijagnostike
Populacija stanica
Koštane sržiBitni CD biljezi
Preporučena analiza Nađena aberacija
Nezreli
mijeloidni i monocitni
progenitori
SSC
CD45
CD34
CD117
CD38
HLA DR
CD13
CD33
CD15 CD11b
CD5 CD7 CD19
CD56
Postotak stanica u frakciji nukleariranih stanica
Uvećan postotak
Izražaj CD45
Expression of CD45
Gubitak ili sniženuvećan
Izražaj CD34 Gubitak ili sniženuvećan
Izražaj CD117 Homogen nizak ili prekomjeran izražaj
Izražaj CD13 i CD33 Gubitak ili sniženuvećan
Izražaj HLA DDR Gubitak ili sniženuvećan
Asinhron izražaj CD11b CD15 Pozitivnost biljega zrelih stanica
Izražaj biljega CD5 CD7 CD19 CD56
Pozitivnost biljega limfocitne loze
Neutrofili
SSC
CD45
CD15 CD11b CD16 CD10
CD13 CD33
CD36 CD64
CD34 CD117
HLA DR
CD5 CD7
CD56 CD19
Postotak stanica kao omjer prema limfocitima
Smanjen
SSC kao omjer prema SSC limfocita
Smanjen
Odnos CD13 i CD11b Promijenjen izgled
Odnos CD13 i CD16 Promijenjen izgled
Odnos CD15 i CD10 Promijenjen izgled
Tablica 2 Preporuke za obradu uzoraka koštane srži za analizu protočnom
citometrijom na displaziju prema European LeukemiaNet (ELN)
Tablica 1 Preporuke za obradu uzoraka koštane srži za analizu protočnom
citometrijom na displaziju prema European LeukemiaNet (ELN)
Populacija stanica
Koštane sržiBitni CD biljezi
Preporučena analiza Nađena aberacija
Monociti
SSC
CD45
CD14 CD11b
CD13 CD33
CD64 CD16
CD36 CD34
HLA DR
CD5 CD7
CD56
(CD300e)
Postotak stanica Sniženuvećan
Distribucija stadija zrelosti Pomak ka nezrelim
Odnos HLA DDR i CD11b Promijenjen izgled
Odnos CD36 i CD14 Promijenjen izgled
Izražaj CD13 i CD33 (Homogeno) nizak ili prekomjeran izražaj
Izražaj CD56 Pozitivnost biljega limfocitne loze
Progenitori
B limfocita
CD45
CD19
CD34
CD10
Broj kao frakcija ukupnog broja
CD34+ stanica u ogradi
CD45CD34SSC u kombinaciji sa CD10 ili CD19
Smanjen ili odsutan
Eritrocitni odjeljak CD117
CD235a
CD36 CD71
(CD105)
Postotak nukleiranih eritriodnih stanica
Uvećan
Odnos CD71 i CD235a Promijenjen izgled
Izražaj CD71 Snižen
Izražaj CD36 Snižen
Postotak CD117 pozitivnih prekursora
Uvećan
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
FIZIKALNE KARAKTERISTIKE STANICA OKOMITO RASPRŠENJE (FS)BOČNO RASPRŠENJE (SS)NEDOVOLJNO INFORMATIVNO ZA IDENTIFIKACIJU VRSTE STANICA
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
CD45SSOGRAĐIVANJE
limfociti
monociti
Neutrofilni granulociti
mijeloblasti
B progenitori
hematogoni
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
MDS Kronična mijelomonocitna leukemija CMML
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
Uvećanje broja mijeloidnih progenitora
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
OMJER CD45 limfocitiCD45mijeloblasta Normalno 45-74
Snižen CD45Snižen omjer 553597= 93
CD45 limfociti CD45 mijeloblasti
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
NORMALAN MDSCD34 vs CD117
uvećanje intenziteta izražaja CD117
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
Snižen SS neutrofilaSnižen omjer 605107 = 565Snižena granuliranost
OMJER SS limfocitiSS neutrofiliNormalno gt60
GRANULIRANOST
SS limfociti SS neutrofili
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
CD10 gubitak
CD117 pozitivitet
CD66abcevs
CD10
CD15vs
CD117
Analiza monocitnog odjeljka
CD13 gubitak
CD56 pozivitet
HLA DDRvs
CD13
CD33vs
CD56
Analiza progenitorskih B limfocita
Nema populacije CD19+CD10+
CD19 vs CD10
Analiza eritroidnog odjeljka
CILJ
A) Identifikacija fenotipskih aberantnosti
najčešće zamijećena aberacija je
uvećanje broja eritrocitni progenitora
povezana sa većim udjelom nezrelih
eritroidnih stanica (CD117+)
asinhron izražaj biljega CD71 vs
CD235a
snižen izražaj CD36
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS engl FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
Prema nađenim anomalijama klasificira se u 3 grupe bdquonormalanldquo sa 0 ili 1 abnormalnosti bdquoumjerenldquo sa 2 do 4 abnormalnosti nađenih u 1 od loza i bdquoozbiljanldquo sa 2 ili 3 abnormalnosti nađene u 2 ili više loza
1 Wells DA Benesch M Loken MR i sur Myeloid and monocytic dyspoiesis as determined by flow cytometric scoring in myelodysplastic syndrome correlates with the IPSS and with outcome after hematopoietic stem cell transplantation Blood 2003 102 394ndash403
2 van de Loosdrecht AA Westers TM1 Westra AH i sur Identification of distinct prognostic subgroups in low- and intermediate-1ndashrisk myelodysplastic syndromes by flow cytometry Blood 20081111067-1077
analiza stanica mijelomonocitne loze (mijeloblasta neutrofila i monocita)
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
određivanje broja i anomalija mijeloblasta
(izražaj i intenzitet biljega CD45CD11b CD16 CD56)
B progenitorskihstanica
i izmjerenom omjeru SSC granulocitaSSC limfocita
Ogata K Kishikawa Y Satoh C Tamura H Dan K Hayashi A Diagnostic application of flow cytometric characteristics of CD34+ cells in
low-grade myelodysplastic syndromes Blood 2006 108 1037ndash1044
bdquoOgata indeksldquo
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
fenotipski zasebno dokazana displazija na odjeljcima
a) progenitorskim mijeloidnim stanicama
b) zrelim stanicama granulocitne i monocitne loze
c) nezrelim stanicama eritrocitne loze
van de Loosdrecht AA Westers TM Cutting Edge Flow Cytometry in Myelodysplastic Syndromes J Natl Compr Canc Netw 201311892-902
Alhan C Westers TM Cremers EM i sur The myelodysplastic syndromes flow cytometric score a three- parameter prognostic flow cytometric scoring system Leukemia 2016 30(3)658ndash665
bdquo Intregirani FC indeks (iFCS) ili tzv ABC score ldquo
bull DOBRA KORELACIJAFCCS vs Internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl International Prognostic Scoring System IPSS 1997) FCCS vs Revidirani internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl Revised International Prognostic Scoring System IPSS-R 2012)
bull LOŠIJA PROGNOZA- Broj mijeloidnih progenitora s fenotipskim anomalijama što veći broj -viši FCM indeks - nepovoljna prognoza (progresija u AML relaps nakon alogene transplantacije)- Veći broj aberacija u pacijenata IPSS niskog i IPSS int-1rizika - povezan sa progresijom bolesti- Snižen SSC- Povišen izražaj CD117 u mijeloidnim progenitorima
bull DOBRA PROGNOZA-Snižen izražajem CD13 u zrelim monocitima - Niži FCCS (u pacijenata sa MDS sa displazijom jedne loze (MDS-SLD) MDS neklasificiranim (MDS-U) MDS sa prstenastim sideroblastima (MDS-RS)
PROGNOSTIČKA VRIJEDNOST ANALIZE
IMUNOFENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
ZAKLJUČCIIMUNOFENOTIPIZACIJA PROTOČNOM CITOMETRIJOM U
DIJAGNOSTICI MDS_a
FCI nalaz bi trebao biti integriran u cjelokupno dijagnostičko izvješće zajedno s citomorfološkim nalazom venske krvi i koštane srži histopatološkim citogenetskih i ili molekularnih nalazima
- glavni nedostatak nedovoljno visoka pozitivna prediktivna vrijednost ndash NE MOŽE SE KORISTITI KAO ZASEBAN DIJAGNOSTIČKI POSTUPKA
- može pružiti dodatne važne informacije koje nisu dobivene morfološkim nalazom citogenetikom ili testovima molekularne dijagnostike
Tablica 1 Preporuke za obradu uzoraka koštane srži za analizu protočnom
citometrijom na displaziju prema European LeukemiaNet (ELN)
Populacija stanica
Koštane sržiBitni CD biljezi
Preporučena analiza Nađena aberacija
Monociti
SSC
CD45
CD14 CD11b
CD13 CD33
CD64 CD16
CD36 CD34
HLA DR
CD5 CD7
CD56
(CD300e)
Postotak stanica Sniženuvećan
Distribucija stadija zrelosti Pomak ka nezrelim
Odnos HLA DDR i CD11b Promijenjen izgled
Odnos CD36 i CD14 Promijenjen izgled
Izražaj CD13 i CD33 (Homogeno) nizak ili prekomjeran izražaj
Izražaj CD56 Pozitivnost biljega limfocitne loze
Progenitori
B limfocita
CD45
CD19
CD34
CD10
Broj kao frakcija ukupnog broja
CD34+ stanica u ogradi
CD45CD34SSC u kombinaciji sa CD10 ili CD19
Smanjen ili odsutan
Eritrocitni odjeljak CD117
CD235a
CD36 CD71
(CD105)
Postotak nukleiranih eritriodnih stanica
Uvećan
Odnos CD71 i CD235a Promijenjen izgled
Izražaj CD71 Snižen
Izražaj CD36 Snižen
Postotak CD117 pozitivnih prekursora
Uvećan
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
FIZIKALNE KARAKTERISTIKE STANICA OKOMITO RASPRŠENJE (FS)BOČNO RASPRŠENJE (SS)NEDOVOLJNO INFORMATIVNO ZA IDENTIFIKACIJU VRSTE STANICA
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
CD45SSOGRAĐIVANJE
limfociti
monociti
Neutrofilni granulociti
mijeloblasti
B progenitori
hematogoni
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
MDS Kronična mijelomonocitna leukemija CMML
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
Uvećanje broja mijeloidnih progenitora
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
OMJER CD45 limfocitiCD45mijeloblasta Normalno 45-74
Snižen CD45Snižen omjer 553597= 93
CD45 limfociti CD45 mijeloblasti
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
NORMALAN MDSCD34 vs CD117
uvećanje intenziteta izražaja CD117
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
Snižen SS neutrofilaSnižen omjer 605107 = 565Snižena granuliranost
OMJER SS limfocitiSS neutrofiliNormalno gt60
GRANULIRANOST
SS limfociti SS neutrofili
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
CD10 gubitak
CD117 pozitivitet
CD66abcevs
CD10
CD15vs
CD117
Analiza monocitnog odjeljka
CD13 gubitak
CD56 pozivitet
HLA DDRvs
CD13
CD33vs
CD56
Analiza progenitorskih B limfocita
Nema populacije CD19+CD10+
CD19 vs CD10
Analiza eritroidnog odjeljka
CILJ
A) Identifikacija fenotipskih aberantnosti
najčešće zamijećena aberacija je
uvećanje broja eritrocitni progenitora
povezana sa većim udjelom nezrelih
eritroidnih stanica (CD117+)
asinhron izražaj biljega CD71 vs
CD235a
snižen izražaj CD36
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS engl FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
Prema nađenim anomalijama klasificira se u 3 grupe bdquonormalanldquo sa 0 ili 1 abnormalnosti bdquoumjerenldquo sa 2 do 4 abnormalnosti nađenih u 1 od loza i bdquoozbiljanldquo sa 2 ili 3 abnormalnosti nađene u 2 ili više loza
1 Wells DA Benesch M Loken MR i sur Myeloid and monocytic dyspoiesis as determined by flow cytometric scoring in myelodysplastic syndrome correlates with the IPSS and with outcome after hematopoietic stem cell transplantation Blood 2003 102 394ndash403
2 van de Loosdrecht AA Westers TM1 Westra AH i sur Identification of distinct prognostic subgroups in low- and intermediate-1ndashrisk myelodysplastic syndromes by flow cytometry Blood 20081111067-1077
analiza stanica mijelomonocitne loze (mijeloblasta neutrofila i monocita)
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
određivanje broja i anomalija mijeloblasta
(izražaj i intenzitet biljega CD45CD11b CD16 CD56)
B progenitorskihstanica
i izmjerenom omjeru SSC granulocitaSSC limfocita
Ogata K Kishikawa Y Satoh C Tamura H Dan K Hayashi A Diagnostic application of flow cytometric characteristics of CD34+ cells in
low-grade myelodysplastic syndromes Blood 2006 108 1037ndash1044
bdquoOgata indeksldquo
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
fenotipski zasebno dokazana displazija na odjeljcima
a) progenitorskim mijeloidnim stanicama
b) zrelim stanicama granulocitne i monocitne loze
c) nezrelim stanicama eritrocitne loze
van de Loosdrecht AA Westers TM Cutting Edge Flow Cytometry in Myelodysplastic Syndromes J Natl Compr Canc Netw 201311892-902
Alhan C Westers TM Cremers EM i sur The myelodysplastic syndromes flow cytometric score a three- parameter prognostic flow cytometric scoring system Leukemia 2016 30(3)658ndash665
bdquo Intregirani FC indeks (iFCS) ili tzv ABC score ldquo
bull DOBRA KORELACIJAFCCS vs Internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl International Prognostic Scoring System IPSS 1997) FCCS vs Revidirani internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl Revised International Prognostic Scoring System IPSS-R 2012)
bull LOŠIJA PROGNOZA- Broj mijeloidnih progenitora s fenotipskim anomalijama što veći broj -viši FCM indeks - nepovoljna prognoza (progresija u AML relaps nakon alogene transplantacije)- Veći broj aberacija u pacijenata IPSS niskog i IPSS int-1rizika - povezan sa progresijom bolesti- Snižen SSC- Povišen izražaj CD117 u mijeloidnim progenitorima
bull DOBRA PROGNOZA-Snižen izražajem CD13 u zrelim monocitima - Niži FCCS (u pacijenata sa MDS sa displazijom jedne loze (MDS-SLD) MDS neklasificiranim (MDS-U) MDS sa prstenastim sideroblastima (MDS-RS)
PROGNOSTIČKA VRIJEDNOST ANALIZE
IMUNOFENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
ZAKLJUČCIIMUNOFENOTIPIZACIJA PROTOČNOM CITOMETRIJOM U
DIJAGNOSTICI MDS_a
FCI nalaz bi trebao biti integriran u cjelokupno dijagnostičko izvješće zajedno s citomorfološkim nalazom venske krvi i koštane srži histopatološkim citogenetskih i ili molekularnih nalazima
- glavni nedostatak nedovoljno visoka pozitivna prediktivna vrijednost ndash NE MOŽE SE KORISTITI KAO ZASEBAN DIJAGNOSTIČKI POSTUPKA
- može pružiti dodatne važne informacije koje nisu dobivene morfološkim nalazom citogenetikom ili testovima molekularne dijagnostike
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
FIZIKALNE KARAKTERISTIKE STANICA OKOMITO RASPRŠENJE (FS)BOČNO RASPRŠENJE (SS)NEDOVOLJNO INFORMATIVNO ZA IDENTIFIKACIJU VRSTE STANICA
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
CD45SSOGRAĐIVANJE
limfociti
monociti
Neutrofilni granulociti
mijeloblasti
B progenitori
hematogoni
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
MDS Kronična mijelomonocitna leukemija CMML
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
Uvećanje broja mijeloidnih progenitora
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
OMJER CD45 limfocitiCD45mijeloblasta Normalno 45-74
Snižen CD45Snižen omjer 553597= 93
CD45 limfociti CD45 mijeloblasti
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
NORMALAN MDSCD34 vs CD117
uvećanje intenziteta izražaja CD117
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
Snižen SS neutrofilaSnižen omjer 605107 = 565Snižena granuliranost
OMJER SS limfocitiSS neutrofiliNormalno gt60
GRANULIRANOST
SS limfociti SS neutrofili
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
CD10 gubitak
CD117 pozitivitet
CD66abcevs
CD10
CD15vs
CD117
Analiza monocitnog odjeljka
CD13 gubitak
CD56 pozivitet
HLA DDRvs
CD13
CD33vs
CD56
Analiza progenitorskih B limfocita
Nema populacije CD19+CD10+
CD19 vs CD10
Analiza eritroidnog odjeljka
CILJ
A) Identifikacija fenotipskih aberantnosti
najčešće zamijećena aberacija je
uvećanje broja eritrocitni progenitora
povezana sa većim udjelom nezrelih
eritroidnih stanica (CD117+)
asinhron izražaj biljega CD71 vs
CD235a
snižen izražaj CD36
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS engl FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
Prema nađenim anomalijama klasificira se u 3 grupe bdquonormalanldquo sa 0 ili 1 abnormalnosti bdquoumjerenldquo sa 2 do 4 abnormalnosti nađenih u 1 od loza i bdquoozbiljanldquo sa 2 ili 3 abnormalnosti nađene u 2 ili više loza
1 Wells DA Benesch M Loken MR i sur Myeloid and monocytic dyspoiesis as determined by flow cytometric scoring in myelodysplastic syndrome correlates with the IPSS and with outcome after hematopoietic stem cell transplantation Blood 2003 102 394ndash403
2 van de Loosdrecht AA Westers TM1 Westra AH i sur Identification of distinct prognostic subgroups in low- and intermediate-1ndashrisk myelodysplastic syndromes by flow cytometry Blood 20081111067-1077
analiza stanica mijelomonocitne loze (mijeloblasta neutrofila i monocita)
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
određivanje broja i anomalija mijeloblasta
(izražaj i intenzitet biljega CD45CD11b CD16 CD56)
B progenitorskihstanica
i izmjerenom omjeru SSC granulocitaSSC limfocita
Ogata K Kishikawa Y Satoh C Tamura H Dan K Hayashi A Diagnostic application of flow cytometric characteristics of CD34+ cells in
low-grade myelodysplastic syndromes Blood 2006 108 1037ndash1044
bdquoOgata indeksldquo
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
fenotipski zasebno dokazana displazija na odjeljcima
a) progenitorskim mijeloidnim stanicama
b) zrelim stanicama granulocitne i monocitne loze
c) nezrelim stanicama eritrocitne loze
van de Loosdrecht AA Westers TM Cutting Edge Flow Cytometry in Myelodysplastic Syndromes J Natl Compr Canc Netw 201311892-902
Alhan C Westers TM Cremers EM i sur The myelodysplastic syndromes flow cytometric score a three- parameter prognostic flow cytometric scoring system Leukemia 2016 30(3)658ndash665
bdquo Intregirani FC indeks (iFCS) ili tzv ABC score ldquo
bull DOBRA KORELACIJAFCCS vs Internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl International Prognostic Scoring System IPSS 1997) FCCS vs Revidirani internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl Revised International Prognostic Scoring System IPSS-R 2012)
bull LOŠIJA PROGNOZA- Broj mijeloidnih progenitora s fenotipskim anomalijama što veći broj -viši FCM indeks - nepovoljna prognoza (progresija u AML relaps nakon alogene transplantacije)- Veći broj aberacija u pacijenata IPSS niskog i IPSS int-1rizika - povezan sa progresijom bolesti- Snižen SSC- Povišen izražaj CD117 u mijeloidnim progenitorima
bull DOBRA PROGNOZA-Snižen izražajem CD13 u zrelim monocitima - Niži FCCS (u pacijenata sa MDS sa displazijom jedne loze (MDS-SLD) MDS neklasificiranim (MDS-U) MDS sa prstenastim sideroblastima (MDS-RS)
PROGNOSTIČKA VRIJEDNOST ANALIZE
IMUNOFENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
ZAKLJUČCIIMUNOFENOTIPIZACIJA PROTOČNOM CITOMETRIJOM U
DIJAGNOSTICI MDS_a
FCI nalaz bi trebao biti integriran u cjelokupno dijagnostičko izvješće zajedno s citomorfološkim nalazom venske krvi i koštane srži histopatološkim citogenetskih i ili molekularnih nalazima
- glavni nedostatak nedovoljno visoka pozitivna prediktivna vrijednost ndash NE MOŽE SE KORISTITI KAO ZASEBAN DIJAGNOSTIČKI POSTUPKA
- može pružiti dodatne važne informacije koje nisu dobivene morfološkim nalazom citogenetikom ili testovima molekularne dijagnostike
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
CD45SSOGRAĐIVANJE
limfociti
monociti
Neutrofilni granulociti
mijeloblasti
B progenitori
hematogoni
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
MDS Kronična mijelomonocitna leukemija CMML
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
Uvećanje broja mijeloidnih progenitora
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
OMJER CD45 limfocitiCD45mijeloblasta Normalno 45-74
Snižen CD45Snižen omjer 553597= 93
CD45 limfociti CD45 mijeloblasti
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
NORMALAN MDSCD34 vs CD117
uvećanje intenziteta izražaja CD117
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
Snižen SS neutrofilaSnižen omjer 605107 = 565Snižena granuliranost
OMJER SS limfocitiSS neutrofiliNormalno gt60
GRANULIRANOST
SS limfociti SS neutrofili
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
CD10 gubitak
CD117 pozitivitet
CD66abcevs
CD10
CD15vs
CD117
Analiza monocitnog odjeljka
CD13 gubitak
CD56 pozivitet
HLA DDRvs
CD13
CD33vs
CD56
Analiza progenitorskih B limfocita
Nema populacije CD19+CD10+
CD19 vs CD10
Analiza eritroidnog odjeljka
CILJ
A) Identifikacija fenotipskih aberantnosti
najčešće zamijećena aberacija je
uvećanje broja eritrocitni progenitora
povezana sa većim udjelom nezrelih
eritroidnih stanica (CD117+)
asinhron izražaj biljega CD71 vs
CD235a
snižen izražaj CD36
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS engl FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
Prema nađenim anomalijama klasificira se u 3 grupe bdquonormalanldquo sa 0 ili 1 abnormalnosti bdquoumjerenldquo sa 2 do 4 abnormalnosti nađenih u 1 od loza i bdquoozbiljanldquo sa 2 ili 3 abnormalnosti nađene u 2 ili više loza
1 Wells DA Benesch M Loken MR i sur Myeloid and monocytic dyspoiesis as determined by flow cytometric scoring in myelodysplastic syndrome correlates with the IPSS and with outcome after hematopoietic stem cell transplantation Blood 2003 102 394ndash403
2 van de Loosdrecht AA Westers TM1 Westra AH i sur Identification of distinct prognostic subgroups in low- and intermediate-1ndashrisk myelodysplastic syndromes by flow cytometry Blood 20081111067-1077
analiza stanica mijelomonocitne loze (mijeloblasta neutrofila i monocita)
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
određivanje broja i anomalija mijeloblasta
(izražaj i intenzitet biljega CD45CD11b CD16 CD56)
B progenitorskihstanica
i izmjerenom omjeru SSC granulocitaSSC limfocita
Ogata K Kishikawa Y Satoh C Tamura H Dan K Hayashi A Diagnostic application of flow cytometric characteristics of CD34+ cells in
low-grade myelodysplastic syndromes Blood 2006 108 1037ndash1044
bdquoOgata indeksldquo
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
fenotipski zasebno dokazana displazija na odjeljcima
a) progenitorskim mijeloidnim stanicama
b) zrelim stanicama granulocitne i monocitne loze
c) nezrelim stanicama eritrocitne loze
van de Loosdrecht AA Westers TM Cutting Edge Flow Cytometry in Myelodysplastic Syndromes J Natl Compr Canc Netw 201311892-902
Alhan C Westers TM Cremers EM i sur The myelodysplastic syndromes flow cytometric score a three- parameter prognostic flow cytometric scoring system Leukemia 2016 30(3)658ndash665
bdquo Intregirani FC indeks (iFCS) ili tzv ABC score ldquo
bull DOBRA KORELACIJAFCCS vs Internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl International Prognostic Scoring System IPSS 1997) FCCS vs Revidirani internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl Revised International Prognostic Scoring System IPSS-R 2012)
bull LOŠIJA PROGNOZA- Broj mijeloidnih progenitora s fenotipskim anomalijama što veći broj -viši FCM indeks - nepovoljna prognoza (progresija u AML relaps nakon alogene transplantacije)- Veći broj aberacija u pacijenata IPSS niskog i IPSS int-1rizika - povezan sa progresijom bolesti- Snižen SSC- Povišen izražaj CD117 u mijeloidnim progenitorima
bull DOBRA PROGNOZA-Snižen izražajem CD13 u zrelim monocitima - Niži FCCS (u pacijenata sa MDS sa displazijom jedne loze (MDS-SLD) MDS neklasificiranim (MDS-U) MDS sa prstenastim sideroblastima (MDS-RS)
PROGNOSTIČKA VRIJEDNOST ANALIZE
IMUNOFENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
ZAKLJUČCIIMUNOFENOTIPIZACIJA PROTOČNOM CITOMETRIJOM U
DIJAGNOSTICI MDS_a
FCI nalaz bi trebao biti integriran u cjelokupno dijagnostičko izvješće zajedno s citomorfološkim nalazom venske krvi i koštane srži histopatološkim citogenetskih i ili molekularnih nalazima
- glavni nedostatak nedovoljno visoka pozitivna prediktivna vrijednost ndash NE MOŽE SE KORISTITI KAO ZASEBAN DIJAGNOSTIČKI POSTUPKA
- može pružiti dodatne važne informacije koje nisu dobivene morfološkim nalazom citogenetikom ili testovima molekularne dijagnostike
ANALIZA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
MDS Kronična mijelomonocitna leukemija CMML
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
Uvećanje broja mijeloidnih progenitora
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
OMJER CD45 limfocitiCD45mijeloblasta Normalno 45-74
Snižen CD45Snižen omjer 553597= 93
CD45 limfociti CD45 mijeloblasti
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
NORMALAN MDSCD34 vs CD117
uvećanje intenziteta izražaja CD117
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
Snižen SS neutrofilaSnižen omjer 605107 = 565Snižena granuliranost
OMJER SS limfocitiSS neutrofiliNormalno gt60
GRANULIRANOST
SS limfociti SS neutrofili
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
CD10 gubitak
CD117 pozitivitet
CD66abcevs
CD10
CD15vs
CD117
Analiza monocitnog odjeljka
CD13 gubitak
CD56 pozivitet
HLA DDRvs
CD13
CD33vs
CD56
Analiza progenitorskih B limfocita
Nema populacije CD19+CD10+
CD19 vs CD10
Analiza eritroidnog odjeljka
CILJ
A) Identifikacija fenotipskih aberantnosti
najčešće zamijećena aberacija je
uvećanje broja eritrocitni progenitora
povezana sa većim udjelom nezrelih
eritroidnih stanica (CD117+)
asinhron izražaj biljega CD71 vs
CD235a
snižen izražaj CD36
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS engl FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
Prema nađenim anomalijama klasificira se u 3 grupe bdquonormalanldquo sa 0 ili 1 abnormalnosti bdquoumjerenldquo sa 2 do 4 abnormalnosti nađenih u 1 od loza i bdquoozbiljanldquo sa 2 ili 3 abnormalnosti nađene u 2 ili više loza
1 Wells DA Benesch M Loken MR i sur Myeloid and monocytic dyspoiesis as determined by flow cytometric scoring in myelodysplastic syndrome correlates with the IPSS and with outcome after hematopoietic stem cell transplantation Blood 2003 102 394ndash403
2 van de Loosdrecht AA Westers TM1 Westra AH i sur Identification of distinct prognostic subgroups in low- and intermediate-1ndashrisk myelodysplastic syndromes by flow cytometry Blood 20081111067-1077
analiza stanica mijelomonocitne loze (mijeloblasta neutrofila i monocita)
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
određivanje broja i anomalija mijeloblasta
(izražaj i intenzitet biljega CD45CD11b CD16 CD56)
B progenitorskihstanica
i izmjerenom omjeru SSC granulocitaSSC limfocita
Ogata K Kishikawa Y Satoh C Tamura H Dan K Hayashi A Diagnostic application of flow cytometric characteristics of CD34+ cells in
low-grade myelodysplastic syndromes Blood 2006 108 1037ndash1044
bdquoOgata indeksldquo
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
fenotipski zasebno dokazana displazija na odjeljcima
a) progenitorskim mijeloidnim stanicama
b) zrelim stanicama granulocitne i monocitne loze
c) nezrelim stanicama eritrocitne loze
van de Loosdrecht AA Westers TM Cutting Edge Flow Cytometry in Myelodysplastic Syndromes J Natl Compr Canc Netw 201311892-902
Alhan C Westers TM Cremers EM i sur The myelodysplastic syndromes flow cytometric score a three- parameter prognostic flow cytometric scoring system Leukemia 2016 30(3)658ndash665
bdquo Intregirani FC indeks (iFCS) ili tzv ABC score ldquo
bull DOBRA KORELACIJAFCCS vs Internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl International Prognostic Scoring System IPSS 1997) FCCS vs Revidirani internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl Revised International Prognostic Scoring System IPSS-R 2012)
bull LOŠIJA PROGNOZA- Broj mijeloidnih progenitora s fenotipskim anomalijama što veći broj -viši FCM indeks - nepovoljna prognoza (progresija u AML relaps nakon alogene transplantacije)- Veći broj aberacija u pacijenata IPSS niskog i IPSS int-1rizika - povezan sa progresijom bolesti- Snižen SSC- Povišen izražaj CD117 u mijeloidnim progenitorima
bull DOBRA PROGNOZA-Snižen izražajem CD13 u zrelim monocitima - Niži FCCS (u pacijenata sa MDS sa displazijom jedne loze (MDS-SLD) MDS neklasificiranim (MDS-U) MDS sa prstenastim sideroblastima (MDS-RS)
PROGNOSTIČKA VRIJEDNOST ANALIZE
IMUNOFENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
ZAKLJUČCIIMUNOFENOTIPIZACIJA PROTOČNOM CITOMETRIJOM U
DIJAGNOSTICI MDS_a
FCI nalaz bi trebao biti integriran u cjelokupno dijagnostičko izvješće zajedno s citomorfološkim nalazom venske krvi i koštane srži histopatološkim citogenetskih i ili molekularnih nalazima
- glavni nedostatak nedovoljno visoka pozitivna prediktivna vrijednost ndash NE MOŽE SE KORISTITI KAO ZASEBAN DIJAGNOSTIČKI POSTUPKA
- može pružiti dodatne važne informacije koje nisu dobivene morfološkim nalazom citogenetikom ili testovima molekularne dijagnostike
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
Uvećanje broja mijeloidnih progenitora
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
OMJER CD45 limfocitiCD45mijeloblasta Normalno 45-74
Snižen CD45Snižen omjer 553597= 93
CD45 limfociti CD45 mijeloblasti
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
NORMALAN MDSCD34 vs CD117
uvećanje intenziteta izražaja CD117
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
Snižen SS neutrofilaSnižen omjer 605107 = 565Snižena granuliranost
OMJER SS limfocitiSS neutrofiliNormalno gt60
GRANULIRANOST
SS limfociti SS neutrofili
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
CD10 gubitak
CD117 pozitivitet
CD66abcevs
CD10
CD15vs
CD117
Analiza monocitnog odjeljka
CD13 gubitak
CD56 pozivitet
HLA DDRvs
CD13
CD33vs
CD56
Analiza progenitorskih B limfocita
Nema populacije CD19+CD10+
CD19 vs CD10
Analiza eritroidnog odjeljka
CILJ
A) Identifikacija fenotipskih aberantnosti
najčešće zamijećena aberacija je
uvećanje broja eritrocitni progenitora
povezana sa većim udjelom nezrelih
eritroidnih stanica (CD117+)
asinhron izražaj biljega CD71 vs
CD235a
snižen izražaj CD36
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS engl FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
Prema nađenim anomalijama klasificira se u 3 grupe bdquonormalanldquo sa 0 ili 1 abnormalnosti bdquoumjerenldquo sa 2 do 4 abnormalnosti nađenih u 1 od loza i bdquoozbiljanldquo sa 2 ili 3 abnormalnosti nađene u 2 ili više loza
1 Wells DA Benesch M Loken MR i sur Myeloid and monocytic dyspoiesis as determined by flow cytometric scoring in myelodysplastic syndrome correlates with the IPSS and with outcome after hematopoietic stem cell transplantation Blood 2003 102 394ndash403
2 van de Loosdrecht AA Westers TM1 Westra AH i sur Identification of distinct prognostic subgroups in low- and intermediate-1ndashrisk myelodysplastic syndromes by flow cytometry Blood 20081111067-1077
analiza stanica mijelomonocitne loze (mijeloblasta neutrofila i monocita)
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
određivanje broja i anomalija mijeloblasta
(izražaj i intenzitet biljega CD45CD11b CD16 CD56)
B progenitorskihstanica
i izmjerenom omjeru SSC granulocitaSSC limfocita
Ogata K Kishikawa Y Satoh C Tamura H Dan K Hayashi A Diagnostic application of flow cytometric characteristics of CD34+ cells in
low-grade myelodysplastic syndromes Blood 2006 108 1037ndash1044
bdquoOgata indeksldquo
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
fenotipski zasebno dokazana displazija na odjeljcima
a) progenitorskim mijeloidnim stanicama
b) zrelim stanicama granulocitne i monocitne loze
c) nezrelim stanicama eritrocitne loze
van de Loosdrecht AA Westers TM Cutting Edge Flow Cytometry in Myelodysplastic Syndromes J Natl Compr Canc Netw 201311892-902
Alhan C Westers TM Cremers EM i sur The myelodysplastic syndromes flow cytometric score a three- parameter prognostic flow cytometric scoring system Leukemia 2016 30(3)658ndash665
bdquo Intregirani FC indeks (iFCS) ili tzv ABC score ldquo
bull DOBRA KORELACIJAFCCS vs Internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl International Prognostic Scoring System IPSS 1997) FCCS vs Revidirani internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl Revised International Prognostic Scoring System IPSS-R 2012)
bull LOŠIJA PROGNOZA- Broj mijeloidnih progenitora s fenotipskim anomalijama što veći broj -viši FCM indeks - nepovoljna prognoza (progresija u AML relaps nakon alogene transplantacije)- Veći broj aberacija u pacijenata IPSS niskog i IPSS int-1rizika - povezan sa progresijom bolesti- Snižen SSC- Povišen izražaj CD117 u mijeloidnim progenitorima
bull DOBRA PROGNOZA-Snižen izražajem CD13 u zrelim monocitima - Niži FCCS (u pacijenata sa MDS sa displazijom jedne loze (MDS-SLD) MDS neklasificiranim (MDS-U) MDS sa prstenastim sideroblastima (MDS-RS)
PROGNOSTIČKA VRIJEDNOST ANALIZE
IMUNOFENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
ZAKLJUČCIIMUNOFENOTIPIZACIJA PROTOČNOM CITOMETRIJOM U
DIJAGNOSTICI MDS_a
FCI nalaz bi trebao biti integriran u cjelokupno dijagnostičko izvješće zajedno s citomorfološkim nalazom venske krvi i koštane srži histopatološkim citogenetskih i ili molekularnih nalazima
- glavni nedostatak nedovoljno visoka pozitivna prediktivna vrijednost ndash NE MOŽE SE KORISTITI KAO ZASEBAN DIJAGNOSTIČKI POSTUPKA
- može pružiti dodatne važne informacije koje nisu dobivene morfološkim nalazom citogenetikom ili testovima molekularne dijagnostike
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
OMJER CD45 limfocitiCD45mijeloblasta Normalno 45-74
Snižen CD45Snižen omjer 553597= 93
CD45 limfociti CD45 mijeloblasti
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
NORMALAN MDSCD34 vs CD117
uvećanje intenziteta izražaja CD117
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
Snižen SS neutrofilaSnižen omjer 605107 = 565Snižena granuliranost
OMJER SS limfocitiSS neutrofiliNormalno gt60
GRANULIRANOST
SS limfociti SS neutrofili
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
CD10 gubitak
CD117 pozitivitet
CD66abcevs
CD10
CD15vs
CD117
Analiza monocitnog odjeljka
CD13 gubitak
CD56 pozivitet
HLA DDRvs
CD13
CD33vs
CD56
Analiza progenitorskih B limfocita
Nema populacije CD19+CD10+
CD19 vs CD10
Analiza eritroidnog odjeljka
CILJ
A) Identifikacija fenotipskih aberantnosti
najčešće zamijećena aberacija je
uvećanje broja eritrocitni progenitora
povezana sa većim udjelom nezrelih
eritroidnih stanica (CD117+)
asinhron izražaj biljega CD71 vs
CD235a
snižen izražaj CD36
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS engl FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
Prema nađenim anomalijama klasificira se u 3 grupe bdquonormalanldquo sa 0 ili 1 abnormalnosti bdquoumjerenldquo sa 2 do 4 abnormalnosti nađenih u 1 od loza i bdquoozbiljanldquo sa 2 ili 3 abnormalnosti nađene u 2 ili više loza
1 Wells DA Benesch M Loken MR i sur Myeloid and monocytic dyspoiesis as determined by flow cytometric scoring in myelodysplastic syndrome correlates with the IPSS and with outcome after hematopoietic stem cell transplantation Blood 2003 102 394ndash403
2 van de Loosdrecht AA Westers TM1 Westra AH i sur Identification of distinct prognostic subgroups in low- and intermediate-1ndashrisk myelodysplastic syndromes by flow cytometry Blood 20081111067-1077
analiza stanica mijelomonocitne loze (mijeloblasta neutrofila i monocita)
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
određivanje broja i anomalija mijeloblasta
(izražaj i intenzitet biljega CD45CD11b CD16 CD56)
B progenitorskihstanica
i izmjerenom omjeru SSC granulocitaSSC limfocita
Ogata K Kishikawa Y Satoh C Tamura H Dan K Hayashi A Diagnostic application of flow cytometric characteristics of CD34+ cells in
low-grade myelodysplastic syndromes Blood 2006 108 1037ndash1044
bdquoOgata indeksldquo
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
fenotipski zasebno dokazana displazija na odjeljcima
a) progenitorskim mijeloidnim stanicama
b) zrelim stanicama granulocitne i monocitne loze
c) nezrelim stanicama eritrocitne loze
van de Loosdrecht AA Westers TM Cutting Edge Flow Cytometry in Myelodysplastic Syndromes J Natl Compr Canc Netw 201311892-902
Alhan C Westers TM Cremers EM i sur The myelodysplastic syndromes flow cytometric score a three- parameter prognostic flow cytometric scoring system Leukemia 2016 30(3)658ndash665
bdquo Intregirani FC indeks (iFCS) ili tzv ABC score ldquo
bull DOBRA KORELACIJAFCCS vs Internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl International Prognostic Scoring System IPSS 1997) FCCS vs Revidirani internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl Revised International Prognostic Scoring System IPSS-R 2012)
bull LOŠIJA PROGNOZA- Broj mijeloidnih progenitora s fenotipskim anomalijama što veći broj -viši FCM indeks - nepovoljna prognoza (progresija u AML relaps nakon alogene transplantacije)- Veći broj aberacija u pacijenata IPSS niskog i IPSS int-1rizika - povezan sa progresijom bolesti- Snižen SSC- Povišen izražaj CD117 u mijeloidnim progenitorima
bull DOBRA PROGNOZA-Snižen izražajem CD13 u zrelim monocitima - Niži FCCS (u pacijenata sa MDS sa displazijom jedne loze (MDS-SLD) MDS neklasificiranim (MDS-U) MDS sa prstenastim sideroblastima (MDS-RS)
PROGNOSTIČKA VRIJEDNOST ANALIZE
IMUNOFENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
ZAKLJUČCIIMUNOFENOTIPIZACIJA PROTOČNOM CITOMETRIJOM U
DIJAGNOSTICI MDS_a
FCI nalaz bi trebao biti integriran u cjelokupno dijagnostičko izvješće zajedno s citomorfološkim nalazom venske krvi i koštane srži histopatološkim citogenetskih i ili molekularnih nalazima
- glavni nedostatak nedovoljno visoka pozitivna prediktivna vrijednost ndash NE MOŽE SE KORISTITI KAO ZASEBAN DIJAGNOSTIČKI POSTUPKA
- može pružiti dodatne važne informacije koje nisu dobivene morfološkim nalazom citogenetikom ili testovima molekularne dijagnostike
Analiza mijelo-monocitnih progenitorskih stanica
NORMALAN MDSCD34 vs CD117
uvećanje intenziteta izražaja CD117
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
Snižen SS neutrofilaSnižen omjer 605107 = 565Snižena granuliranost
OMJER SS limfocitiSS neutrofiliNormalno gt60
GRANULIRANOST
SS limfociti SS neutrofili
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
CD10 gubitak
CD117 pozitivitet
CD66abcevs
CD10
CD15vs
CD117
Analiza monocitnog odjeljka
CD13 gubitak
CD56 pozivitet
HLA DDRvs
CD13
CD33vs
CD56
Analiza progenitorskih B limfocita
Nema populacije CD19+CD10+
CD19 vs CD10
Analiza eritroidnog odjeljka
CILJ
A) Identifikacija fenotipskih aberantnosti
najčešće zamijećena aberacija je
uvećanje broja eritrocitni progenitora
povezana sa većim udjelom nezrelih
eritroidnih stanica (CD117+)
asinhron izražaj biljega CD71 vs
CD235a
snižen izražaj CD36
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS engl FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
Prema nađenim anomalijama klasificira se u 3 grupe bdquonormalanldquo sa 0 ili 1 abnormalnosti bdquoumjerenldquo sa 2 do 4 abnormalnosti nađenih u 1 od loza i bdquoozbiljanldquo sa 2 ili 3 abnormalnosti nađene u 2 ili više loza
1 Wells DA Benesch M Loken MR i sur Myeloid and monocytic dyspoiesis as determined by flow cytometric scoring in myelodysplastic syndrome correlates with the IPSS and with outcome after hematopoietic stem cell transplantation Blood 2003 102 394ndash403
2 van de Loosdrecht AA Westers TM1 Westra AH i sur Identification of distinct prognostic subgroups in low- and intermediate-1ndashrisk myelodysplastic syndromes by flow cytometry Blood 20081111067-1077
analiza stanica mijelomonocitne loze (mijeloblasta neutrofila i monocita)
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
određivanje broja i anomalija mijeloblasta
(izražaj i intenzitet biljega CD45CD11b CD16 CD56)
B progenitorskihstanica
i izmjerenom omjeru SSC granulocitaSSC limfocita
Ogata K Kishikawa Y Satoh C Tamura H Dan K Hayashi A Diagnostic application of flow cytometric characteristics of CD34+ cells in
low-grade myelodysplastic syndromes Blood 2006 108 1037ndash1044
bdquoOgata indeksldquo
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
fenotipski zasebno dokazana displazija na odjeljcima
a) progenitorskim mijeloidnim stanicama
b) zrelim stanicama granulocitne i monocitne loze
c) nezrelim stanicama eritrocitne loze
van de Loosdrecht AA Westers TM Cutting Edge Flow Cytometry in Myelodysplastic Syndromes J Natl Compr Canc Netw 201311892-902
Alhan C Westers TM Cremers EM i sur The myelodysplastic syndromes flow cytometric score a three- parameter prognostic flow cytometric scoring system Leukemia 2016 30(3)658ndash665
bdquo Intregirani FC indeks (iFCS) ili tzv ABC score ldquo
bull DOBRA KORELACIJAFCCS vs Internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl International Prognostic Scoring System IPSS 1997) FCCS vs Revidirani internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl Revised International Prognostic Scoring System IPSS-R 2012)
bull LOŠIJA PROGNOZA- Broj mijeloidnih progenitora s fenotipskim anomalijama što veći broj -viši FCM indeks - nepovoljna prognoza (progresija u AML relaps nakon alogene transplantacije)- Veći broj aberacija u pacijenata IPSS niskog i IPSS int-1rizika - povezan sa progresijom bolesti- Snižen SSC- Povišen izražaj CD117 u mijeloidnim progenitorima
bull DOBRA PROGNOZA-Snižen izražajem CD13 u zrelim monocitima - Niži FCCS (u pacijenata sa MDS sa displazijom jedne loze (MDS-SLD) MDS neklasificiranim (MDS-U) MDS sa prstenastim sideroblastima (MDS-RS)
PROGNOSTIČKA VRIJEDNOST ANALIZE
IMUNOFENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
ZAKLJUČCIIMUNOFENOTIPIZACIJA PROTOČNOM CITOMETRIJOM U
DIJAGNOSTICI MDS_a
FCI nalaz bi trebao biti integriran u cjelokupno dijagnostičko izvješće zajedno s citomorfološkim nalazom venske krvi i koštane srži histopatološkim citogenetskih i ili molekularnih nalazima
- glavni nedostatak nedovoljno visoka pozitivna prediktivna vrijednost ndash NE MOŽE SE KORISTITI KAO ZASEBAN DIJAGNOSTIČKI POSTUPKA
- može pružiti dodatne važne informacije koje nisu dobivene morfološkim nalazom citogenetikom ili testovima molekularne dijagnostike
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
Snižen SS neutrofilaSnižen omjer 605107 = 565Snižena granuliranost
OMJER SS limfocitiSS neutrofiliNormalno gt60
GRANULIRANOST
SS limfociti SS neutrofili
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
CD10 gubitak
CD117 pozitivitet
CD66abcevs
CD10
CD15vs
CD117
Analiza monocitnog odjeljka
CD13 gubitak
CD56 pozivitet
HLA DDRvs
CD13
CD33vs
CD56
Analiza progenitorskih B limfocita
Nema populacije CD19+CD10+
CD19 vs CD10
Analiza eritroidnog odjeljka
CILJ
A) Identifikacija fenotipskih aberantnosti
najčešće zamijećena aberacija je
uvećanje broja eritrocitni progenitora
povezana sa većim udjelom nezrelih
eritroidnih stanica (CD117+)
asinhron izražaj biljega CD71 vs
CD235a
snižen izražaj CD36
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS engl FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
Prema nađenim anomalijama klasificira se u 3 grupe bdquonormalanldquo sa 0 ili 1 abnormalnosti bdquoumjerenldquo sa 2 do 4 abnormalnosti nađenih u 1 od loza i bdquoozbiljanldquo sa 2 ili 3 abnormalnosti nađene u 2 ili više loza
1 Wells DA Benesch M Loken MR i sur Myeloid and monocytic dyspoiesis as determined by flow cytometric scoring in myelodysplastic syndrome correlates with the IPSS and with outcome after hematopoietic stem cell transplantation Blood 2003 102 394ndash403
2 van de Loosdrecht AA Westers TM1 Westra AH i sur Identification of distinct prognostic subgroups in low- and intermediate-1ndashrisk myelodysplastic syndromes by flow cytometry Blood 20081111067-1077
analiza stanica mijelomonocitne loze (mijeloblasta neutrofila i monocita)
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
određivanje broja i anomalija mijeloblasta
(izražaj i intenzitet biljega CD45CD11b CD16 CD56)
B progenitorskihstanica
i izmjerenom omjeru SSC granulocitaSSC limfocita
Ogata K Kishikawa Y Satoh C Tamura H Dan K Hayashi A Diagnostic application of flow cytometric characteristics of CD34+ cells in
low-grade myelodysplastic syndromes Blood 2006 108 1037ndash1044
bdquoOgata indeksldquo
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
fenotipski zasebno dokazana displazija na odjeljcima
a) progenitorskim mijeloidnim stanicama
b) zrelim stanicama granulocitne i monocitne loze
c) nezrelim stanicama eritrocitne loze
van de Loosdrecht AA Westers TM Cutting Edge Flow Cytometry in Myelodysplastic Syndromes J Natl Compr Canc Netw 201311892-902
Alhan C Westers TM Cremers EM i sur The myelodysplastic syndromes flow cytometric score a three- parameter prognostic flow cytometric scoring system Leukemia 2016 30(3)658ndash665
bdquo Intregirani FC indeks (iFCS) ili tzv ABC score ldquo
bull DOBRA KORELACIJAFCCS vs Internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl International Prognostic Scoring System IPSS 1997) FCCS vs Revidirani internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl Revised International Prognostic Scoring System IPSS-R 2012)
bull LOŠIJA PROGNOZA- Broj mijeloidnih progenitora s fenotipskim anomalijama što veći broj -viši FCM indeks - nepovoljna prognoza (progresija u AML relaps nakon alogene transplantacije)- Veći broj aberacija u pacijenata IPSS niskog i IPSS int-1rizika - povezan sa progresijom bolesti- Snižen SSC- Povišen izražaj CD117 u mijeloidnim progenitorima
bull DOBRA PROGNOZA-Snižen izražajem CD13 u zrelim monocitima - Niži FCCS (u pacijenata sa MDS sa displazijom jedne loze (MDS-SLD) MDS neklasificiranim (MDS-U) MDS sa prstenastim sideroblastima (MDS-RS)
PROGNOSTIČKA VRIJEDNOST ANALIZE
IMUNOFENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
ZAKLJUČCIIMUNOFENOTIPIZACIJA PROTOČNOM CITOMETRIJOM U
DIJAGNOSTICI MDS_a
FCI nalaz bi trebao biti integriran u cjelokupno dijagnostičko izvješće zajedno s citomorfološkim nalazom venske krvi i koštane srži histopatološkim citogenetskih i ili molekularnih nalazima
- glavni nedostatak nedovoljno visoka pozitivna prediktivna vrijednost ndash NE MOŽE SE KORISTITI KAO ZASEBAN DIJAGNOSTIČKI POSTUPKA
- može pružiti dodatne važne informacije koje nisu dobivene morfološkim nalazom citogenetikom ili testovima molekularne dijagnostike
Analiza odjeljka zrelih neutrofila
CD10 gubitak
CD117 pozitivitet
CD66abcevs
CD10
CD15vs
CD117
Analiza monocitnog odjeljka
CD13 gubitak
CD56 pozivitet
HLA DDRvs
CD13
CD33vs
CD56
Analiza progenitorskih B limfocita
Nema populacije CD19+CD10+
CD19 vs CD10
Analiza eritroidnog odjeljka
CILJ
A) Identifikacija fenotipskih aberantnosti
najčešće zamijećena aberacija je
uvećanje broja eritrocitni progenitora
povezana sa većim udjelom nezrelih
eritroidnih stanica (CD117+)
asinhron izražaj biljega CD71 vs
CD235a
snižen izražaj CD36
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS engl FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
Prema nađenim anomalijama klasificira se u 3 grupe bdquonormalanldquo sa 0 ili 1 abnormalnosti bdquoumjerenldquo sa 2 do 4 abnormalnosti nađenih u 1 od loza i bdquoozbiljanldquo sa 2 ili 3 abnormalnosti nađene u 2 ili više loza
1 Wells DA Benesch M Loken MR i sur Myeloid and monocytic dyspoiesis as determined by flow cytometric scoring in myelodysplastic syndrome correlates with the IPSS and with outcome after hematopoietic stem cell transplantation Blood 2003 102 394ndash403
2 van de Loosdrecht AA Westers TM1 Westra AH i sur Identification of distinct prognostic subgroups in low- and intermediate-1ndashrisk myelodysplastic syndromes by flow cytometry Blood 20081111067-1077
analiza stanica mijelomonocitne loze (mijeloblasta neutrofila i monocita)
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
određivanje broja i anomalija mijeloblasta
(izražaj i intenzitet biljega CD45CD11b CD16 CD56)
B progenitorskihstanica
i izmjerenom omjeru SSC granulocitaSSC limfocita
Ogata K Kishikawa Y Satoh C Tamura H Dan K Hayashi A Diagnostic application of flow cytometric characteristics of CD34+ cells in
low-grade myelodysplastic syndromes Blood 2006 108 1037ndash1044
bdquoOgata indeksldquo
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
fenotipski zasebno dokazana displazija na odjeljcima
a) progenitorskim mijeloidnim stanicama
b) zrelim stanicama granulocitne i monocitne loze
c) nezrelim stanicama eritrocitne loze
van de Loosdrecht AA Westers TM Cutting Edge Flow Cytometry in Myelodysplastic Syndromes J Natl Compr Canc Netw 201311892-902
Alhan C Westers TM Cremers EM i sur The myelodysplastic syndromes flow cytometric score a three- parameter prognostic flow cytometric scoring system Leukemia 2016 30(3)658ndash665
bdquo Intregirani FC indeks (iFCS) ili tzv ABC score ldquo
bull DOBRA KORELACIJAFCCS vs Internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl International Prognostic Scoring System IPSS 1997) FCCS vs Revidirani internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl Revised International Prognostic Scoring System IPSS-R 2012)
bull LOŠIJA PROGNOZA- Broj mijeloidnih progenitora s fenotipskim anomalijama što veći broj -viši FCM indeks - nepovoljna prognoza (progresija u AML relaps nakon alogene transplantacije)- Veći broj aberacija u pacijenata IPSS niskog i IPSS int-1rizika - povezan sa progresijom bolesti- Snižen SSC- Povišen izražaj CD117 u mijeloidnim progenitorima
bull DOBRA PROGNOZA-Snižen izražajem CD13 u zrelim monocitima - Niži FCCS (u pacijenata sa MDS sa displazijom jedne loze (MDS-SLD) MDS neklasificiranim (MDS-U) MDS sa prstenastim sideroblastima (MDS-RS)
PROGNOSTIČKA VRIJEDNOST ANALIZE
IMUNOFENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
ZAKLJUČCIIMUNOFENOTIPIZACIJA PROTOČNOM CITOMETRIJOM U
DIJAGNOSTICI MDS_a
FCI nalaz bi trebao biti integriran u cjelokupno dijagnostičko izvješće zajedno s citomorfološkim nalazom venske krvi i koštane srži histopatološkim citogenetskih i ili molekularnih nalazima
- glavni nedostatak nedovoljno visoka pozitivna prediktivna vrijednost ndash NE MOŽE SE KORISTITI KAO ZASEBAN DIJAGNOSTIČKI POSTUPKA
- može pružiti dodatne važne informacije koje nisu dobivene morfološkim nalazom citogenetikom ili testovima molekularne dijagnostike
Analiza monocitnog odjeljka
CD13 gubitak
CD56 pozivitet
HLA DDRvs
CD13
CD33vs
CD56
Analiza progenitorskih B limfocita
Nema populacije CD19+CD10+
CD19 vs CD10
Analiza eritroidnog odjeljka
CILJ
A) Identifikacija fenotipskih aberantnosti
najčešće zamijećena aberacija je
uvećanje broja eritrocitni progenitora
povezana sa većim udjelom nezrelih
eritroidnih stanica (CD117+)
asinhron izražaj biljega CD71 vs
CD235a
snižen izražaj CD36
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS engl FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
Prema nađenim anomalijama klasificira se u 3 grupe bdquonormalanldquo sa 0 ili 1 abnormalnosti bdquoumjerenldquo sa 2 do 4 abnormalnosti nađenih u 1 od loza i bdquoozbiljanldquo sa 2 ili 3 abnormalnosti nađene u 2 ili više loza
1 Wells DA Benesch M Loken MR i sur Myeloid and monocytic dyspoiesis as determined by flow cytometric scoring in myelodysplastic syndrome correlates with the IPSS and with outcome after hematopoietic stem cell transplantation Blood 2003 102 394ndash403
2 van de Loosdrecht AA Westers TM1 Westra AH i sur Identification of distinct prognostic subgroups in low- and intermediate-1ndashrisk myelodysplastic syndromes by flow cytometry Blood 20081111067-1077
analiza stanica mijelomonocitne loze (mijeloblasta neutrofila i monocita)
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
određivanje broja i anomalija mijeloblasta
(izražaj i intenzitet biljega CD45CD11b CD16 CD56)
B progenitorskihstanica
i izmjerenom omjeru SSC granulocitaSSC limfocita
Ogata K Kishikawa Y Satoh C Tamura H Dan K Hayashi A Diagnostic application of flow cytometric characteristics of CD34+ cells in
low-grade myelodysplastic syndromes Blood 2006 108 1037ndash1044
bdquoOgata indeksldquo
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
fenotipski zasebno dokazana displazija na odjeljcima
a) progenitorskim mijeloidnim stanicama
b) zrelim stanicama granulocitne i monocitne loze
c) nezrelim stanicama eritrocitne loze
van de Loosdrecht AA Westers TM Cutting Edge Flow Cytometry in Myelodysplastic Syndromes J Natl Compr Canc Netw 201311892-902
Alhan C Westers TM Cremers EM i sur The myelodysplastic syndromes flow cytometric score a three- parameter prognostic flow cytometric scoring system Leukemia 2016 30(3)658ndash665
bdquo Intregirani FC indeks (iFCS) ili tzv ABC score ldquo
bull DOBRA KORELACIJAFCCS vs Internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl International Prognostic Scoring System IPSS 1997) FCCS vs Revidirani internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl Revised International Prognostic Scoring System IPSS-R 2012)
bull LOŠIJA PROGNOZA- Broj mijeloidnih progenitora s fenotipskim anomalijama što veći broj -viši FCM indeks - nepovoljna prognoza (progresija u AML relaps nakon alogene transplantacije)- Veći broj aberacija u pacijenata IPSS niskog i IPSS int-1rizika - povezan sa progresijom bolesti- Snižen SSC- Povišen izražaj CD117 u mijeloidnim progenitorima
bull DOBRA PROGNOZA-Snižen izražajem CD13 u zrelim monocitima - Niži FCCS (u pacijenata sa MDS sa displazijom jedne loze (MDS-SLD) MDS neklasificiranim (MDS-U) MDS sa prstenastim sideroblastima (MDS-RS)
PROGNOSTIČKA VRIJEDNOST ANALIZE
IMUNOFENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
ZAKLJUČCIIMUNOFENOTIPIZACIJA PROTOČNOM CITOMETRIJOM U
DIJAGNOSTICI MDS_a
FCI nalaz bi trebao biti integriran u cjelokupno dijagnostičko izvješće zajedno s citomorfološkim nalazom venske krvi i koštane srži histopatološkim citogenetskih i ili molekularnih nalazima
- glavni nedostatak nedovoljno visoka pozitivna prediktivna vrijednost ndash NE MOŽE SE KORISTITI KAO ZASEBAN DIJAGNOSTIČKI POSTUPKA
- može pružiti dodatne važne informacije koje nisu dobivene morfološkim nalazom citogenetikom ili testovima molekularne dijagnostike
Analiza progenitorskih B limfocita
Nema populacije CD19+CD10+
CD19 vs CD10
Analiza eritroidnog odjeljka
CILJ
A) Identifikacija fenotipskih aberantnosti
najčešće zamijećena aberacija je
uvećanje broja eritrocitni progenitora
povezana sa većim udjelom nezrelih
eritroidnih stanica (CD117+)
asinhron izražaj biljega CD71 vs
CD235a
snižen izražaj CD36
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS engl FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
Prema nađenim anomalijama klasificira se u 3 grupe bdquonormalanldquo sa 0 ili 1 abnormalnosti bdquoumjerenldquo sa 2 do 4 abnormalnosti nađenih u 1 od loza i bdquoozbiljanldquo sa 2 ili 3 abnormalnosti nađene u 2 ili više loza
1 Wells DA Benesch M Loken MR i sur Myeloid and monocytic dyspoiesis as determined by flow cytometric scoring in myelodysplastic syndrome correlates with the IPSS and with outcome after hematopoietic stem cell transplantation Blood 2003 102 394ndash403
2 van de Loosdrecht AA Westers TM1 Westra AH i sur Identification of distinct prognostic subgroups in low- and intermediate-1ndashrisk myelodysplastic syndromes by flow cytometry Blood 20081111067-1077
analiza stanica mijelomonocitne loze (mijeloblasta neutrofila i monocita)
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
određivanje broja i anomalija mijeloblasta
(izražaj i intenzitet biljega CD45CD11b CD16 CD56)
B progenitorskihstanica
i izmjerenom omjeru SSC granulocitaSSC limfocita
Ogata K Kishikawa Y Satoh C Tamura H Dan K Hayashi A Diagnostic application of flow cytometric characteristics of CD34+ cells in
low-grade myelodysplastic syndromes Blood 2006 108 1037ndash1044
bdquoOgata indeksldquo
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
fenotipski zasebno dokazana displazija na odjeljcima
a) progenitorskim mijeloidnim stanicama
b) zrelim stanicama granulocitne i monocitne loze
c) nezrelim stanicama eritrocitne loze
van de Loosdrecht AA Westers TM Cutting Edge Flow Cytometry in Myelodysplastic Syndromes J Natl Compr Canc Netw 201311892-902
Alhan C Westers TM Cremers EM i sur The myelodysplastic syndromes flow cytometric score a three- parameter prognostic flow cytometric scoring system Leukemia 2016 30(3)658ndash665
bdquo Intregirani FC indeks (iFCS) ili tzv ABC score ldquo
bull DOBRA KORELACIJAFCCS vs Internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl International Prognostic Scoring System IPSS 1997) FCCS vs Revidirani internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl Revised International Prognostic Scoring System IPSS-R 2012)
bull LOŠIJA PROGNOZA- Broj mijeloidnih progenitora s fenotipskim anomalijama što veći broj -viši FCM indeks - nepovoljna prognoza (progresija u AML relaps nakon alogene transplantacije)- Veći broj aberacija u pacijenata IPSS niskog i IPSS int-1rizika - povezan sa progresijom bolesti- Snižen SSC- Povišen izražaj CD117 u mijeloidnim progenitorima
bull DOBRA PROGNOZA-Snižen izražajem CD13 u zrelim monocitima - Niži FCCS (u pacijenata sa MDS sa displazijom jedne loze (MDS-SLD) MDS neklasificiranim (MDS-U) MDS sa prstenastim sideroblastima (MDS-RS)
PROGNOSTIČKA VRIJEDNOST ANALIZE
IMUNOFENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
ZAKLJUČCIIMUNOFENOTIPIZACIJA PROTOČNOM CITOMETRIJOM U
DIJAGNOSTICI MDS_a
FCI nalaz bi trebao biti integriran u cjelokupno dijagnostičko izvješće zajedno s citomorfološkim nalazom venske krvi i koštane srži histopatološkim citogenetskih i ili molekularnih nalazima
- glavni nedostatak nedovoljno visoka pozitivna prediktivna vrijednost ndash NE MOŽE SE KORISTITI KAO ZASEBAN DIJAGNOSTIČKI POSTUPKA
- može pružiti dodatne važne informacije koje nisu dobivene morfološkim nalazom citogenetikom ili testovima molekularne dijagnostike
Analiza eritroidnog odjeljka
CILJ
A) Identifikacija fenotipskih aberantnosti
najčešće zamijećena aberacija je
uvećanje broja eritrocitni progenitora
povezana sa većim udjelom nezrelih
eritroidnih stanica (CD117+)
asinhron izražaj biljega CD71 vs
CD235a
snižen izražaj CD36
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS engl FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
Prema nađenim anomalijama klasificira se u 3 grupe bdquonormalanldquo sa 0 ili 1 abnormalnosti bdquoumjerenldquo sa 2 do 4 abnormalnosti nađenih u 1 od loza i bdquoozbiljanldquo sa 2 ili 3 abnormalnosti nađene u 2 ili više loza
1 Wells DA Benesch M Loken MR i sur Myeloid and monocytic dyspoiesis as determined by flow cytometric scoring in myelodysplastic syndrome correlates with the IPSS and with outcome after hematopoietic stem cell transplantation Blood 2003 102 394ndash403
2 van de Loosdrecht AA Westers TM1 Westra AH i sur Identification of distinct prognostic subgroups in low- and intermediate-1ndashrisk myelodysplastic syndromes by flow cytometry Blood 20081111067-1077
analiza stanica mijelomonocitne loze (mijeloblasta neutrofila i monocita)
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
određivanje broja i anomalija mijeloblasta
(izražaj i intenzitet biljega CD45CD11b CD16 CD56)
B progenitorskihstanica
i izmjerenom omjeru SSC granulocitaSSC limfocita
Ogata K Kishikawa Y Satoh C Tamura H Dan K Hayashi A Diagnostic application of flow cytometric characteristics of CD34+ cells in
low-grade myelodysplastic syndromes Blood 2006 108 1037ndash1044
bdquoOgata indeksldquo
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
fenotipski zasebno dokazana displazija na odjeljcima
a) progenitorskim mijeloidnim stanicama
b) zrelim stanicama granulocitne i monocitne loze
c) nezrelim stanicama eritrocitne loze
van de Loosdrecht AA Westers TM Cutting Edge Flow Cytometry in Myelodysplastic Syndromes J Natl Compr Canc Netw 201311892-902
Alhan C Westers TM Cremers EM i sur The myelodysplastic syndromes flow cytometric score a three- parameter prognostic flow cytometric scoring system Leukemia 2016 30(3)658ndash665
bdquo Intregirani FC indeks (iFCS) ili tzv ABC score ldquo
bull DOBRA KORELACIJAFCCS vs Internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl International Prognostic Scoring System IPSS 1997) FCCS vs Revidirani internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl Revised International Prognostic Scoring System IPSS-R 2012)
bull LOŠIJA PROGNOZA- Broj mijeloidnih progenitora s fenotipskim anomalijama što veći broj -viši FCM indeks - nepovoljna prognoza (progresija u AML relaps nakon alogene transplantacije)- Veći broj aberacija u pacijenata IPSS niskog i IPSS int-1rizika - povezan sa progresijom bolesti- Snižen SSC- Povišen izražaj CD117 u mijeloidnim progenitorima
bull DOBRA PROGNOZA-Snižen izražajem CD13 u zrelim monocitima - Niži FCCS (u pacijenata sa MDS sa displazijom jedne loze (MDS-SLD) MDS neklasificiranim (MDS-U) MDS sa prstenastim sideroblastima (MDS-RS)
PROGNOSTIČKA VRIJEDNOST ANALIZE
IMUNOFENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
ZAKLJUČCIIMUNOFENOTIPIZACIJA PROTOČNOM CITOMETRIJOM U
DIJAGNOSTICI MDS_a
FCI nalaz bi trebao biti integriran u cjelokupno dijagnostičko izvješće zajedno s citomorfološkim nalazom venske krvi i koštane srži histopatološkim citogenetskih i ili molekularnih nalazima
- glavni nedostatak nedovoljno visoka pozitivna prediktivna vrijednost ndash NE MOŽE SE KORISTITI KAO ZASEBAN DIJAGNOSTIČKI POSTUPKA
- može pružiti dodatne važne informacije koje nisu dobivene morfološkim nalazom citogenetikom ili testovima molekularne dijagnostike
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS engl FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
Prema nađenim anomalijama klasificira se u 3 grupe bdquonormalanldquo sa 0 ili 1 abnormalnosti bdquoumjerenldquo sa 2 do 4 abnormalnosti nađenih u 1 od loza i bdquoozbiljanldquo sa 2 ili 3 abnormalnosti nađene u 2 ili više loza
1 Wells DA Benesch M Loken MR i sur Myeloid and monocytic dyspoiesis as determined by flow cytometric scoring in myelodysplastic syndrome correlates with the IPSS and with outcome after hematopoietic stem cell transplantation Blood 2003 102 394ndash403
2 van de Loosdrecht AA Westers TM1 Westra AH i sur Identification of distinct prognostic subgroups in low- and intermediate-1ndashrisk myelodysplastic syndromes by flow cytometry Blood 20081111067-1077
analiza stanica mijelomonocitne loze (mijeloblasta neutrofila i monocita)
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
određivanje broja i anomalija mijeloblasta
(izražaj i intenzitet biljega CD45CD11b CD16 CD56)
B progenitorskihstanica
i izmjerenom omjeru SSC granulocitaSSC limfocita
Ogata K Kishikawa Y Satoh C Tamura H Dan K Hayashi A Diagnostic application of flow cytometric characteristics of CD34+ cells in
low-grade myelodysplastic syndromes Blood 2006 108 1037ndash1044
bdquoOgata indeksldquo
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
fenotipski zasebno dokazana displazija na odjeljcima
a) progenitorskim mijeloidnim stanicama
b) zrelim stanicama granulocitne i monocitne loze
c) nezrelim stanicama eritrocitne loze
van de Loosdrecht AA Westers TM Cutting Edge Flow Cytometry in Myelodysplastic Syndromes J Natl Compr Canc Netw 201311892-902
Alhan C Westers TM Cremers EM i sur The myelodysplastic syndromes flow cytometric score a three- parameter prognostic flow cytometric scoring system Leukemia 2016 30(3)658ndash665
bdquo Intregirani FC indeks (iFCS) ili tzv ABC score ldquo
bull DOBRA KORELACIJAFCCS vs Internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl International Prognostic Scoring System IPSS 1997) FCCS vs Revidirani internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl Revised International Prognostic Scoring System IPSS-R 2012)
bull LOŠIJA PROGNOZA- Broj mijeloidnih progenitora s fenotipskim anomalijama što veći broj -viši FCM indeks - nepovoljna prognoza (progresija u AML relaps nakon alogene transplantacije)- Veći broj aberacija u pacijenata IPSS niskog i IPSS int-1rizika - povezan sa progresijom bolesti- Snižen SSC- Povišen izražaj CD117 u mijeloidnim progenitorima
bull DOBRA PROGNOZA-Snižen izražajem CD13 u zrelim monocitima - Niži FCCS (u pacijenata sa MDS sa displazijom jedne loze (MDS-SLD) MDS neklasificiranim (MDS-U) MDS sa prstenastim sideroblastima (MDS-RS)
PROGNOSTIČKA VRIJEDNOST ANALIZE
IMUNOFENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
ZAKLJUČCIIMUNOFENOTIPIZACIJA PROTOČNOM CITOMETRIJOM U
DIJAGNOSTICI MDS_a
FCI nalaz bi trebao biti integriran u cjelokupno dijagnostičko izvješće zajedno s citomorfološkim nalazom venske krvi i koštane srži histopatološkim citogenetskih i ili molekularnih nalazima
- glavni nedostatak nedovoljno visoka pozitivna prediktivna vrijednost ndash NE MOŽE SE KORISTITI KAO ZASEBAN DIJAGNOSTIČKI POSTUPKA
- može pružiti dodatne važne informacije koje nisu dobivene morfološkim nalazom citogenetikom ili testovima molekularne dijagnostike
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
određivanje broja i anomalija mijeloblasta
(izražaj i intenzitet biljega CD45CD11b CD16 CD56)
B progenitorskihstanica
i izmjerenom omjeru SSC granulocitaSSC limfocita
Ogata K Kishikawa Y Satoh C Tamura H Dan K Hayashi A Diagnostic application of flow cytometric characteristics of CD34+ cells in
low-grade myelodysplastic syndromes Blood 2006 108 1037ndash1044
bdquoOgata indeksldquo
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
fenotipski zasebno dokazana displazija na odjeljcima
a) progenitorskim mijeloidnim stanicama
b) zrelim stanicama granulocitne i monocitne loze
c) nezrelim stanicama eritrocitne loze
van de Loosdrecht AA Westers TM Cutting Edge Flow Cytometry in Myelodysplastic Syndromes J Natl Compr Canc Netw 201311892-902
Alhan C Westers TM Cremers EM i sur The myelodysplastic syndromes flow cytometric score a three- parameter prognostic flow cytometric scoring system Leukemia 2016 30(3)658ndash665
bdquo Intregirani FC indeks (iFCS) ili tzv ABC score ldquo
bull DOBRA KORELACIJAFCCS vs Internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl International Prognostic Scoring System IPSS 1997) FCCS vs Revidirani internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl Revised International Prognostic Scoring System IPSS-R 2012)
bull LOŠIJA PROGNOZA- Broj mijeloidnih progenitora s fenotipskim anomalijama što veći broj -viši FCM indeks - nepovoljna prognoza (progresija u AML relaps nakon alogene transplantacije)- Veći broj aberacija u pacijenata IPSS niskog i IPSS int-1rizika - povezan sa progresijom bolesti- Snižen SSC- Povišen izražaj CD117 u mijeloidnim progenitorima
bull DOBRA PROGNOZA-Snižen izražajem CD13 u zrelim monocitima - Niži FCCS (u pacijenata sa MDS sa displazijom jedne loze (MDS-SLD) MDS neklasificiranim (MDS-U) MDS sa prstenastim sideroblastima (MDS-RS)
PROGNOSTIČKA VRIJEDNOST ANALIZE
IMUNOFENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
ZAKLJUČCIIMUNOFENOTIPIZACIJA PROTOČNOM CITOMETRIJOM U
DIJAGNOSTICI MDS_a
FCI nalaz bi trebao biti integriran u cjelokupno dijagnostičko izvješće zajedno s citomorfološkim nalazom venske krvi i koštane srži histopatološkim citogenetskih i ili molekularnih nalazima
- glavni nedostatak nedovoljno visoka pozitivna prediktivna vrijednost ndash NE MOŽE SE KORISTITI KAO ZASEBAN DIJAGNOSTIČKI POSTUPKA
- može pružiti dodatne važne informacije koje nisu dobivene morfološkim nalazom citogenetikom ili testovima molekularne dijagnostike
BODOVNI SUSTAV ANALIZE FENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM (FC INDEKS ENGL FLOWCYTOMETRY
SCORING SYSTEM FCSS)
fenotipski zasebno dokazana displazija na odjeljcima
a) progenitorskim mijeloidnim stanicama
b) zrelim stanicama granulocitne i monocitne loze
c) nezrelim stanicama eritrocitne loze
van de Loosdrecht AA Westers TM Cutting Edge Flow Cytometry in Myelodysplastic Syndromes J Natl Compr Canc Netw 201311892-902
Alhan C Westers TM Cremers EM i sur The myelodysplastic syndromes flow cytometric score a three- parameter prognostic flow cytometric scoring system Leukemia 2016 30(3)658ndash665
bdquo Intregirani FC indeks (iFCS) ili tzv ABC score ldquo
bull DOBRA KORELACIJAFCCS vs Internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl International Prognostic Scoring System IPSS 1997) FCCS vs Revidirani internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl Revised International Prognostic Scoring System IPSS-R 2012)
bull LOŠIJA PROGNOZA- Broj mijeloidnih progenitora s fenotipskim anomalijama što veći broj -viši FCM indeks - nepovoljna prognoza (progresija u AML relaps nakon alogene transplantacije)- Veći broj aberacija u pacijenata IPSS niskog i IPSS int-1rizika - povezan sa progresijom bolesti- Snižen SSC- Povišen izražaj CD117 u mijeloidnim progenitorima
bull DOBRA PROGNOZA-Snižen izražajem CD13 u zrelim monocitima - Niži FCCS (u pacijenata sa MDS sa displazijom jedne loze (MDS-SLD) MDS neklasificiranim (MDS-U) MDS sa prstenastim sideroblastima (MDS-RS)
PROGNOSTIČKA VRIJEDNOST ANALIZE
IMUNOFENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
ZAKLJUČCIIMUNOFENOTIPIZACIJA PROTOČNOM CITOMETRIJOM U
DIJAGNOSTICI MDS_a
FCI nalaz bi trebao biti integriran u cjelokupno dijagnostičko izvješće zajedno s citomorfološkim nalazom venske krvi i koštane srži histopatološkim citogenetskih i ili molekularnih nalazima
- glavni nedostatak nedovoljno visoka pozitivna prediktivna vrijednost ndash NE MOŽE SE KORISTITI KAO ZASEBAN DIJAGNOSTIČKI POSTUPKA
- može pružiti dodatne važne informacije koje nisu dobivene morfološkim nalazom citogenetikom ili testovima molekularne dijagnostike
bull DOBRA KORELACIJAFCCS vs Internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl International Prognostic Scoring System IPSS 1997) FCCS vs Revidirani internacionalni prognostički sustav bodovanja (engl Revised International Prognostic Scoring System IPSS-R 2012)
bull LOŠIJA PROGNOZA- Broj mijeloidnih progenitora s fenotipskim anomalijama što veći broj -viši FCM indeks - nepovoljna prognoza (progresija u AML relaps nakon alogene transplantacije)- Veći broj aberacija u pacijenata IPSS niskog i IPSS int-1rizika - povezan sa progresijom bolesti- Snižen SSC- Povišen izražaj CD117 u mijeloidnim progenitorima
bull DOBRA PROGNOZA-Snižen izražajem CD13 u zrelim monocitima - Niži FCCS (u pacijenata sa MDS sa displazijom jedne loze (MDS-SLD) MDS neklasificiranim (MDS-U) MDS sa prstenastim sideroblastima (MDS-RS)
PROGNOSTIČKA VRIJEDNOST ANALIZE
IMUNOFENOTIPA PROTOČNOM CITOMETRIJOM
ZAKLJUČCIIMUNOFENOTIPIZACIJA PROTOČNOM CITOMETRIJOM U
DIJAGNOSTICI MDS_a
FCI nalaz bi trebao biti integriran u cjelokupno dijagnostičko izvješće zajedno s citomorfološkim nalazom venske krvi i koštane srži histopatološkim citogenetskih i ili molekularnih nalazima
- glavni nedostatak nedovoljno visoka pozitivna prediktivna vrijednost ndash NE MOŽE SE KORISTITI KAO ZASEBAN DIJAGNOSTIČKI POSTUPKA
- može pružiti dodatne važne informacije koje nisu dobivene morfološkim nalazom citogenetikom ili testovima molekularne dijagnostike
ZAKLJUČCIIMUNOFENOTIPIZACIJA PROTOČNOM CITOMETRIJOM U
DIJAGNOSTICI MDS_a
FCI nalaz bi trebao biti integriran u cjelokupno dijagnostičko izvješće zajedno s citomorfološkim nalazom venske krvi i koštane srži histopatološkim citogenetskih i ili molekularnih nalazima
- glavni nedostatak nedovoljno visoka pozitivna prediktivna vrijednost ndash NE MOŽE SE KORISTITI KAO ZASEBAN DIJAGNOSTIČKI POSTUPKA
- može pružiti dodatne važne informacije koje nisu dobivene morfološkim nalazom citogenetikom ili testovima molekularne dijagnostike