Proyecto de Geranio

[ ] FARMACIA Y BIOQUIMICA

PROYECTO DE INVESTIGACION

I. GENERALIDADES:

1. TÍTULO:

Determinación del efecto de aceite esencial de las hojas de

Pelargonium graveolenssobre la bacteria propionibacterium acnés

2. PERSONAL DE INVESTIGACIÓN:

2.1 AUTORES:

Calderon Cerna, Ana

Estudiante del III ciclo de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad

Nacional de Trujillo

N° de matrícula:1021100712

Correo electrónico:[email protected]

Chavez Ordoñez ,Wuendi

Estudiante del III ciclo de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la

Universidad Nacional de Trujillo



Chavez Saavedra, Kelinda

Estudiante del III ciclo de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la




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Cordova Rodriguez,Araceli

Estudiante del III ciclo de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad

Nacional de Trujillo



2.2 ASESOR:

Mg. Soto Vásquez, Marilú Roxana

Docente de la Cátedra de Farmacognosia del Departamento de

Farmacotecnia de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad

Nacional de Trujillo.

Código: 5727

correo:[email protected]

3. TIPO DE INVESTIGACIÓN:

3.1 De acuerdo a la orientación:

Aplicada

3.2 De acuerdo al diseño de investigación:

Experimental

4. AREA DE INVESTIGACION:

Ciencias Naturales

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5. RÉGIMEN DE INVESTIGACIÓN:

Libre

6. DEPARTAMENTOS AL QUE PERTENECE EL PROYECTO

Departamento Académico de Farmacología

Facultad de Farmacia y Bioquímica


7. LOCALIDAD E INSTITUCIÓN:

6.1. Localidad:

Trujillo-La Libertad

6.2. Institución:


Facultad de Farmacia y Bioquímica

Escuela de Farmacia y Bioquímica

8. DURACIÓN DEL PROYECTO:

El tiempo de duración será de 3 meses.

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9. FECHAS DE INICIO Y TÉRMINO

Inicio: Supeditado a la aprobación del proyecto

Término: Supeditado a la aprobación del proyecto

10. CRONOGRAMA DE EJECUCIÓN:

ETAPAS DURACION (meses) DEDICACIÓN SEMANAL (horas)

Recolección de datos 01 08

Análisis de datos 01 06

Elaboración de informe 01 07

11. HORAS SEMANALES DEDICADAS AL PROYECTO:

Autor: 10 horas semanales

Asesor: 2 horas semanales

11.1 Personal investigador

Calderon Cerna, Ana

Chavez Ordoñez,Wuendi

Chavez Saavedra,Kelinda

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CordovaRodriguez Araceli

Mg. Soto Vásquez, Marilú Roxana

11.2 Materiales y Equipos :

11.2.1.1 Material Biológico:

Material vegetal: Hojas Pelargoniumgraveolens

“Geraneo” que se recolectarán del distrito de La

Esperanza de la provincia de trujillo, región La

Libertad.

Material microbiológico:Las bacterias

(Propiunibacterium acnes, que serán proporcionadas

por el Hospital Belén de Trujillo.

11.2.1.2 Material de vidrio

Pipetas

Vaso de precipitación

Probetas

Placas petri

Matraces

Laminas y laminillas

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11.2.1.3 Equipos de laboratorio

Balanza analítica

Autoclave

Bomba al vacío

Cocina eléctrica

Equipo de flujo laminar

Estufa

Incubadora Microbiológica

equipo de destilación de arrastre de vapor de agua

Rotavapor

11.2.1.4 Material Quimico:

Alcohol etílico al 96%

11.2.1.5 Medicamentos:

Disco de sensibilidad de tetraciclina 10 µg

11.2.1.6 Medios de cultivo:

Agar

11.2.1.7 Otros:

Asa de platino

Caja de guantes estériles

Hisopos esteriles

Gradilla

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Mechero

Papel filtro

Placas de petri descartables

Puntas estériles

Rollos de algodón

.

11.3 Locales:

Laboratorio de farmacognosia y Farmacognosia, Facultad de Farmacia y

Bioquímica.Universidad Nacional de Trujillo.

12. RECURSOS NO DISPONIBLES Y PRESUPUESTO:

De acuerdo al Clasificador de gastos para el año fiscal 2013.

CODIGO CONCEPTO CANTIDAD UNIDAD COSTO2.3.1.1.1.1 ALIMENTOS Y BEBIDAS

alimentos y bebidas para consumo humano (4)

36 porciones s/.5.00 s/.180.00

2.3.1.5 MATERIALES Y ÚTILES2.3.1.5.1.2 papelería en general, útiles ya materiales de oficina

papel bond a4 1 millar s/.0.018 s/.18.00Lapiceros 4 unid s/.2.00 s/.8.00Tijera 1 unid s/.1.50 s/.1.50folder manila 4 unid s/. 0.50 s/.2.00Marcador 1 unid s/.3.00 s/.3.00

2.3.2.1.2.1 PASAJES Y GASTOS DE TRANSPORTE

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pasajes locales(4)

S/.250 S/1.00 S/.250.00

2.3.2.2.2 SERVICIOS DE TELEFONÍA E INTERNETServicios de telefonía móvil(4)

4 recargas virtuales

s/.5.00 s/.20.00

Servicio de internet(4)

40 horas s/ 1.00 s/.40.00

2.3.2.2.4.4 SERVICIOS DE IMPRESIONES Y EMPASTADOImpresiones(4) 80 unid s/0.10 s/.8.00Fotocopias(4) 80 unid s/0.10 s/.10.00Empastado(4) 1 unid s/20.00 s/.20.00

2.3.18.1 PRODUCTOS FARMACÉUTICOS

2.3.18.12 Tetraciclina 80 mg 1 10.00 10.00

2.3.1 8.2 1 MATERIAL, INSUMOS, INSTRUMENTAL Y ACCESORIOS MÉDICOS, QUIRÚRGICOS, ODONTOLÓGICOS Y DE LA LABORATORIO

Agar Miuller Hinton ¼ KG 95.00 95.00

Guantes quirúrgicos de látex 50 5.00 5.00

Algodón 1 Kg 4.00 4.00

Papel filtro Whatman N° 1 ½ caja 40.00 40.00

Papel Kraft 3 pliegos 1.00 3.00

2.3.1 99.1 2 PRODUCTOS QUÍMICOS

Alcohol de 80° 1 L. 10.00 10.00

2.3.1 99.1 99 OTROS BIENES

Agua destilada 10 L. 1.00 10.00

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13. RESUMEN DEL PROYECTO

CÓDIGO CLASIFICADOR DE SERVICIOS PRECIO

2.3.1 10.12 Material biológico 2.00

2.3.1 1.1 1 Alimentos y bebidas para consumo humano 36.00

2.3.1 5.1 Material y útiles de oficina 69.00

2.3.1 5.3 Aseo, limpieza y tocador 32.50

2.3.18.1 Productos farmacéuticos 10.00

2.3.1 8.2 1Material, insumos, instrumental y accesorios médicos, quirúrgicos, odontológicos y de la laboratorio

393.00

2.3.1 99.1 2 Productos químicos 10.00

2.3.1 99.1 2 Otros bienes 10.00

2.3.2 1.2 1 Pasajes y gastos de transporte 50.00

2.3.2 1.2 99 OTROS GASTOS

2.3.2 2.2 Servicios de telefonía e internet 60.00

2.3.2 2.4Servicio de publicidad, impresiones, difusión e imagen institucional

80.00

2.3.2 4.1 99 De otros bienes y activos 40.00

2.3.2 7.4 3 Soporte técnico 40.00

TOTAL S/.790.50

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14. FINANCIAMIENTO

Los recursos no disponibles serán financiados por la investigadora y los

disponibles por la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional

de Trujillo

II. PLAN DE INVESTIGACION

II.1 REALIDAD PROBLEMÁTICA:

El acné es una enfermedad que por su alta incidencia, es bien conocida en la actualidad;

generalmente suele observarse desde la pubertad, incrementándose su prevalencia en la

adolescencia y persistiendo como un problema en algunos adultos, ya que no sólo

reviste implicaciones estéticas sino también se ha convertido en una causa de baja

autoestima, aislamiento, estrés y depresión, factores que a su vez van creando un círculo

vicioso favoreciendo la persistencia de las lesiones en la piel.1

El acné puede ser definido como el proceso dermatológico producto de una reacción

obstructiva de los conductos excretores de las glándulas sebáceas; éste se ve afectado

por diversos factores como la edad, el sexo, factores endocrinos entre los que se

incluyen el síndrome de ovario poliquísitico y patologías de la glándula suprarenal,

donde además puede estar asociado a obesidad e hirsutismo (presencia de vello grueso

y oscuro en áreas no habituales en la mujer), además pueden intervenir factores

genéticos, variaciones en la dieta, entre otros", aclara la especialista, quien explica que

el acné adulto es diferente al acne juvenil. Debido a esto muchas veces no responde a

los tratamientos comunes que podemos adquirir en las tiendas o incluso a muchos de

los tratamientos clínicos realizados por los dermatólogos. 1

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Clínicamente el acné se puede manifestar en forma de comedones (puntos blancos y puntos

negros), pápulas (lesiones elevadas), pústulas (cuando contienen pus), nódulos quistes

(lesiones de mayor tamaño y profundidad) y manchas y cicatrices residuales; estas lesiones

permiten clasificar al acné en vulgar y conglobata.1

El acné vulgar o vulgaris es la dermatosis más frecuente, en un 60% a 80% en los varones y en un

30% a 50% en las mujeres; es una afección crónica que Se caracteriza por presentar

comedones cerrados no in flamatorios (puntos blancos), comedones abiertos (puntos

negros) o lesiones inflamatorias (pápulas, pústulas, nódulo-quistes, cicatrices);que se

localizan en las áreas de la piel con mayor componente glandular sebáceo: cara, pecho

y región superior del tronco 2,Se presenta en la gran mayoría de los adolescentes y jóvenes

adultos en el mundo; probablemente sea la mayor causa de consulta médica, ya que genera un

gran impacto social y en la calidad de vida. Además, suele involucrar al grupo familiar tanto en su

esfera afectiva como en la económica. El pico de prevalencia se registra entre los 12 y los 24 años

de edad.3

La incidencia es igual en pacientes de todas las etnias; en blancos se observó que el acné

noduloquístico del dorso es más severo que en los negros.4La edad de comienzo varía de 12 a 13

años en las niñas a 13 a 14 años en los varones, lo que es probable que se deba a que el inicio de la

pubertad es más pre-.coz en las primeras. El pico de severidad se registra a los 17 a 18 años en

mujeres y a los 19 a 21 años en varones.5 A veces en algunos niños se observan lesiones

tempranas, del tipo de los comedones cerrados o abiertos, entre los 8 a 9 años.En la mayoría de

los afectados el proceso se resuelve durante la adolescencia; sin embargo, en el 12% de las

mujeres y en el 3% de los hombres puede persistir hasta después de los 44 años de edad.6

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El acné conglobata; Es una afección muy inflamatoria que presenta una mezcla de comedones,

pápulas, pústulas, nódulos, abscesos, cicatrices en la espalda, nalgas, pecho y en menor escala

sobre abdomen, hombros, cuello, cara miembros superiores y músculos.7

Esta enfermedad es causada por diferentes factores: Por la conformación de microorganismos

( Propionibacterium acnés , staphylococus albus y pityrorporum u orbicular)8, siendo estos los

que liberaran sus lipasas para hidrolizar a los triglicéridos del cebo formando lipoperoxidos de los

ácidos grasos , que van a favorecer a la inflamación por el aumento de producción de cebo e

hiperplasia de la glándula sebácea ,descamación anormal de los queratianocitos ,la actividad

hormonal (menstruación en la pubertad), estrés(descarga de las glándulas suprarrenales), los

cambios hormonales que ocurren durante el embarazo (comienzo y fin ) , consumo de píldoras

anticonceptivas , factores hereditarios, ciertos medicamentos y maquillaje grasoso.9

Entre todos los factores causantes del acné hemos decidido estudiar a uno de ellos ,en este caso

es la bacteria propionibacterium acnés que es un bacilo gran positivo de crecimiento

relativamente lento no espatulado ni anaeróbico estricto aunque se cree que posee

aerotolerancia; se halla en la brota normal de la piel y es catalogado como actor secundario en la

infección dérmica puede causar blefaritis crónica y es el principal causante de enoflalmitis post-

quirúrgica crónica .Su genoma ha sido secuenciado poniendo de manifiesto varios genes que

podrían generar las encimas degradantes de la piel y las proteínas inmunogenicas.10

La bacteria es en gran parte comensal y está presente en la piel de las personas alimentándose de

los ácidos grasos del sebo secretado por los poros desde las glándulas sebáceas , también puede

encontrarse en todo el aparato digestivo de los humanos y de muchos otros animales Su nombre

se deriva de la capacidad de la bacteria de generar el acido propanoico cuando un poro de la piel

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se bloquea ; esta bacteria anaeróbica segrega sustancias químicas que rompe la pared del poro

derramando bacterias como el Staphylococus aureus en la piel y originando en la piel una lesión

de acné (foliculitis).10

En la actualidad el tratamiento del acné depende de la extensión e intensidad de la enfermedad ,

de la producción de cicatrices, de factores del paciente con su edad ,estado hormonal y

características de la piel 11; como los Medicamentos tópicos; tratamiento generalmente para

pacientes con acné leve estos medicamentos nos dan una respuesta lenta, por lo cual deben tener

expectativas realistas y mantener la continuidad del tratamiento,se debe aplicar en toda la

extensión de las aéreas afectadas y no solo donde es visible la inflamación. Los principales

antibióticos típicos utilizados son: la clindamicina, eritromicina, peróxido de benzolio y

combinaciones de peróxido de benzolio12 , debido al avance de la ciencia se ha descrito otros

tratamientos como es el caso de láser, pulsadas (azul, verde, roja), terapia dinámica, peeling

químico y microdermoabrasión.13

La ausencia de respuesta, las contraindicaciones y los efectos adversos de los tratamientos ,

han llevado a la necesidad de investigar tratamientos con plantas medicinales como es el

caso del geraneo.

El Pelargonium graveolens(geranio) conocida como hierba aguja o hierba de san Roberto usada,

es muy común en lugares con grandes concentraciones de cal tal es el caso del norte de áfrica,

América, aunque también en zonas europeas y asiáticas además crece en lugares apartados desde

el nivel del mar alcanzando aproximadamente 1900 metros del nivel del mar.

Esta planta alcanza una altura de 60 cm de altura su raíz es en forma de nabo sus hojas de

Margen dentado miden de 4 a 9 cm y poseen lóbulos bastantes marcados y profundos ,su

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Flor es color rosado, rojo y blanco aproximadamente unos 8 mm de de longitud la cual

Posee una simetría radiada al pedúnculo.Pertenece a la familia de las geraniáceas existen como

500 especies de geranios pero el aceite esencial se extrae de unas pocas variedades.

Principalmente del pelargonium graveolens que es una planta perenne pero a menudo crece

como anual. Las hojas son más aromáticas que las flores ,el aroma de su aceite esencial es como

rosa de tierra, suave, seca y dulce ,el aceite de geranio es tónico, astringente, hemostático,

antiséptico, antibacteriano, antidiabético, cicatrizante, analgésico, equilibrante, hormonal, sobre

todo para enfermedades dermatológicas (acné).Contiene citronelol (20-40%), geraniol (7-18%)

también tiene citronellol, felantreno, pineno, alcohol amílico, linalol, mentol.

El aceite esencial del geranio cobra importancia en el mercado mundial ya que se Encuentra

dentro de los 10 aceites más importantes en cuanto a su producción y valor comercial. El aceite

esencial citronelol es un aceite con mayor demanda en la industria perfumista y farmacéutica

debido a su nota floral muy similar a la escencia de rosas.

Existen numerosas investigaciones relacionadas con el aceite esencial que contienen las

hojas de geranio como es el caso del estudio realizado por Rudy Janet flores Álvarez y

Hermes Osvaldo López arenales en el año 2006 departamento de Quindío capital

armenia Colombia trabajo titulado “plan de negocio para el cultivo, producción y

comercialización de aceites esenciales crudos derivados de plantas aromáticas para la

unidad productiva ubicadas en Quindío “

Trabajando con la muestra de hojas de geranio llegan a la conclusión de que en las hojas

es en donde más se encuentra el aceite esencial muy usado en varices, infecciones de la

piel como el acné

JUSTIFICACIÓN:

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Dado que en la actualidad en el Perú se ha incrementado el porcentaje de resistencias bacterianas a

los antibióticos, y considerando lo anteriormente expuesto, sobre el probable efecto antibacteriano,

se considera que es necesaria la realización del presente trabajo de investigación orientado a

determinar el efecto del aceite esencial de las hojas de Pelargonium graveolens “Geranio” sobre

la bacteria propiunibacterium acnés.

La finalidad de esta investigación es la de poder proporcionar una base científica para la medicina

tradicional y dar una solución al alcance de la población, ya que en muchas ocasiones no se cuenta

con los recursos económicos suficientes para poder llevar un tratamiento farmacológico, laser, etc.

Es por ello que hemos tomado como parte de utilidad a las plantas medicinales que son de bajo

costo y de alcance accesible.

PROBLEMA:

¿Cuál es el efecto delaceite escencial presente en las hojas de Pelargonium graveolens

Sobre la bacteria propionibacterium acnés?.

HIPOTESIS:

El aceite esencial presente en las hojas de pelargonium graveolens presenta efecto

Bactericida frente al propionibacterium acnés.

OBJETIVOS:

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OBJETIVO GENERAL:

Evaluar el efecto del aceite esencial de las hojas de pelagonium graveolens sobre

la bacteria propionibacterium acnés.

OBJETIVOS ESPECIFICOS:

Determinar el efecto del aceite esencial a las concentraciones de 5%,

25%,50%,100% sobre la bacteria propionibacterium acnés .

Determinar el porcentaje de inhibición de las concentraciones de los aceites

esenciales al 5%,25%,50%,100% sobre la bacteria propionibacterium acnés

VARIABLES:

VARIABLE INDEPENDIENTE: Extracion del aceite escencial del pelargonium

graveolens “geranio”.

VARABLE DEPENDIENTE: Efecto antibacteriano del aceite escencial del

pelargonium graveolens “geranio”.

II.2 METODOLOGIA

II.2.1 TIPO DE DISEÑO

Diseño de investigación de estímulo creciente

GC E

GP1 T1 GP1’

T2 GP2’

GC’

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GC: grupo control

E: etanol 80%gl

GC’: evaluación del grupo control

T1: aceite esencial de pelargonium graveolens al 5%



T4: Disco de sensibilidad de tetraciclina 10 µg

GP1: evaluación en grupos problema luego de 24 horas

GP1’: evaluación del efecto del aceite esencial al 5%



GP4’: Evaluacion de la sensibilidad de tetraciclina 10 µg

GP2

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2.2.2 DEFINICIÓN DE LA POBLACIÓN OBJETIVO Y MUESTRA DE

ESTUDIO

POBLACIÓN

MUESTRA:

1 Kg de hojas de Pelargonium graveolens “Geranio” que se

recolectarán en el jardín botánico “Rosa Elena de Ríos

Martínez” de la facultad de farmacia y bioquímica de la

universidad nacional de Trujillo de la provincia de Trujillo,

región La Libertad.

3 cepas de bacterias (Propiunibacterium acnes, que serán

proporcionadas por el Hospital Belén de Trujillo-La libertad.

2.2.2.1 CRITERIOS DE EXCLUSIÓN

Serán excluidos las hojas amarillas

Hojas atacadas por hongos bacterias e insectos

Hojas recogidas luego de un día lluvioso

2.2.2.2 CRITERIOS DE INCLUSION

Hojas verde de color uniforme de pelargonim

graveolens

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Recoger hojas de pelargonium graveolens antes de la

floración

2.2.3 METODO

2.2.3.1 IDENTIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN TAXÓMICA

DE LA ESPECIE

Se llevará un ejemplar de la planta al HerbariumTruxillenxis

(HUT) para su identificación y posterior verificación taxonómica

según el sistema filogenético de la especie.

2.2.3.2 RECOLECCION DE LA MUESTRA

La especie de Pelargonium graveolnes “que se recolectarán en el

jardín botánico “Rosa Elena de los Ríos Martínez” de la

facultad de farmacia y bioquímica de la universidad nacional

de Trujillo de la provincia de Trujillo, región La Libertad.

La recolección de la especie se realizará por el método convencional

o clásico de herborización, seleccionando el material en el campo y

verificando que esté en buenas condiciones, de preferencia en las

mañanas.

2.2.3.3 OBTENCION DE LA MUESTRA

Selección

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Se realizara el proceso de selección de las hojas de pelargonium

graveolens “geranio”, que será transportado al laboratorio de

Farmacognosia y Farmacobotánica de la Facultad de Farmacia y

Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, en donde se

eliminará las sustancias extrañas presentes en el material

vegetal.

Limpieza y Lavado

Para eliminar los residuos de tierra, restos de contaminantes del

cultivo, etc. se procederá a limpiar las hojas de pelargonium

graveolens con algodón suavemente y, si es necesario lavar el

material con agua destilada ligeramente.

2.2.3.4 EXTRACTO DEL ACEITE ESCENCIAL DE LAS HOJAS

DE Pelargonium graveolens

los aceites esenciales se obtienen por el siguiente metodo:

1. Destilación por arrastre de vapor

Procedimiento:

Se pesara 1k de hojas frescas de pelrgonium graveolens

previamente lavadas se procederá a cortar en trosos

pequeños y se colocan en el equipo de destilación de

arrastre de vapor de agua

El método utilizado para la extracción del aceite esencial

de geranio es el tradicional arrastre por vapor, el cual

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consiste en hacer evaporar agua en una cámara especial y

conducir el vapor hacia la zona donde se encuentran las

hojas frescas y cortadas de geranio, de tal manera que el

vapor caliente ingrese al interior de las hojas arrastrando el

aceite contenido en ellas para luego ser conducido a un

sistema de refrigeración y de esta manera retornar al esta-

do líquido, en donde por diferencia de densidades el aceite

y el agua se separan. Y se coloca mezcla Na2SO4 anhidro

en un enbase previa decantación para absorver del aceite

el agua.

1.1. Diseño Experimental:

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Las placas de experimentación serán divididas en 6 grupos, a

diferentes concentraciones

GRUPO I: concentración basal

GRUPO II: concentración al 5%

GRUPO III :concentración al 25%

GRUPO IV: concentración al 50%

GRUPO V: Disco de sensibilidad de tetraciclina 10 µg .

GRUPO VI : grupo problema

Grupo I: la concentración basal se la realiza la muestra de agar agar se determina mediante el

sembrado tipo estrías de la propionibacterium

Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) de la tetraciclina

Preparación del inóculo

Para poder obtener el inóculo del microrganismo en la fase de crecimiento adecuada se

sembró la cepa bacteriana en placas TSA y se incubó a 37°C durante 72 horas en

condiciones anaerobias, debido a las características particulares de crecimiento de

Propionibacterium acnes. Alícuotas de esta población se trasladaron a tubos TSB

(Trypticase Soy Agar), que incubados a 37°C durante 72 horas en anaerobiosis

proporcionaron una suspensión aproximada de 107UFC adecuada para el ensayo.

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Método del ensayo

La determinación de la CMI (1) de la tetraciclina se realizó en medio Mueller-Hinton. Se

partió de una concentración del 1% (solución madre), ya que el producto es soluble en agua

destilada a esta concentración. La solución madre se filtró a través de un filtro de 0,22 μm y

se realizaron una serie de diluciones a fin de obtener placas Mueller-Hinton con las

siguientes concentraciones: 0,5 mg/ml; 0,25 mg/ml; 0,125 mg/ml; 0,062 mg/ml; 0,031

mg/ml; 0,015 mg/ml; 0,007 mg/ml y 0,0035 mg/ml. Estas placas se sembraron en estrías

con el cultivo de 72 horas de Propionibacterium acnes y se incubaron 72 horas en

condiciones anaeróbicas. Asimismo, se sembraron placas control de Mueller-Hinton sin

ciclopiroxolamina. Independientemente, se llevó a cabo un análisis previo consistente en la

determinación de la CMI mediante el procedimiento estándar de microtitulación en placa

utilizando caldo Mueller- Hinton. Sin embargo, este procedimiento se desechó debido a la

interacción del producto ensayado (ciclopiroxolamina) y el medio de cultivo, que

ocasionaba un precipitado que impedía la visualización de los resultados. Por ello, se

empleó un procedimiento alternativo consistente en el ensayo en medio sólido.

Determinación del poder inhibitorio del gel formulado con tetraciclina 1%

Preparación del inóculo

Para obtener el inóculo del microrganismo en la fase de crecimiento adecuada, se sembró la cepa

en placas TSA y se incubaron a 37°C durante 72 horas en condiciones anaeróbicas. Tras la

incubación, alícuotas de esta población se trasladaron a tubos TSB, que incubados a 37°C durante

72 horas en anaerobiosis proporcionaron una suspensión aproximada de 107 UFC adecuada para el

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ensayo. A continuación, se realizó una dilución 1/100 en 9,9 ml de Ringer 1/4, obteniéndose así

una suspensión de aproximadamente 105 UFC/ml.

Preparación del producto

El gel de ciclopiroxolamina 1% fue ensayado en condiciones normales de uso, en forma de

un gel limpiador facial formulado con tetraciclina 1%.

Método del ensayo

Mediante un hisopo estéril se sembró en crecimiento confluente la suspensión de 105

UFC/ml de Propionibacterium acnes sobre placas de TSA y Agar-Sangre. Seguidamente se

colocó en el centro de las placas un disco de antibiograma tipo Whatmann de 6,5 mm de

diámetro embebido en el gel de ciclopiroxolamina 1%. La siembra se efectuó por

duplicado.

Una vez colocado el disco, se incubaron las placas a 37°C durante 72 horas en condiciones

de anaerobiosis. Tras el período de incubación, se procedió a la lectura de los resultados.

Análisis de resultados obtenidos

Los resultados obtenidos serán analizados y sometidos a análisis estadísticos

utilizando el test de ANOVA, para comparar el efecto bactericida de la destilación

de corriente de vapor de hojas de pelargonium graveolens los cuales serán

expresados en graficas.

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Referencias bibliográficas

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http://es.wikipedia.org/wiki/Propionibacterium_acnes


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