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8/17/2019 Prueba de Pyr
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LA PRUEBA DE PYR
1. INTRODUCCIÓN
PYR es un método colorimétrico rápido para la identificación
presuntiva de ciertos grupos
de bacterias en base a la actividad de la enzima arilamidasa
pyrolidonyl. L-piroglutámico
ácido beta-naftilamida se impregna en el disco de prueba o de la
tarjeta y sirve como
sustrato para la detección de arilamidasa pyrolidonyl. La
idrólisis del sustrato
rendimientos beta-naftilamida !ue se combina con el reactivo de
PYR "p-dimetilamino-
cinamalde#do$ para formar un color rosa brillante de color rojo
cereza. % las pruebas
positivas de PYR permite la identificación presuntiva de
estreptococos del grupo %
(Streptococcus pyogenes) y el grupo & enterococos.
%demás' los investigadores andeterminado !ue la actividad PYR es
una prueba clave para la diferenciación de algunas
especies de Staphylococcus coagulasa negativos y para
algunos géneros de la familia
Enterobacteriaceae.
(s una prueba rápida' utilizada fundamentalmente para la
identificación de )treptococcus
pyogenes y (nterococcus spp. (s *til para la caracterización
preliminar de
)treptococcus' (nterococcus y de microorganismos similares a
estreptococos. &entro del
+énero (nterococcus se obtiene realizando una serie de pruebas
bio!u#micas basadas
en la utilización de distintos az*cares y aminoácidos.
2. FUNDAMENTO
La prueba del ,PYR permite la identificación presuntiva de
ciertas bacterias en base a la
actividad enzimática l-pirrolidonilarilamidasa "PYRasa$. Los
microorganismos !ue
contienen esta enzima idrolizan en forma rápida el sustrato
presente en los discos y
liberan un grupo pirrólico !ue reacciona con el reactivo
cinamalde#do originándose un
compuesto de color rosado-rojizo.onstituye una prueba altamente
sensible y de utilidad
como los discos de /acitracina 0.01 2 "R(3 /4510156$ y la prueba
de tolerancia a la sal
"R(3 (nterococos 7edio 8ipertónico$. 9ambién se la utiliza junto
con la prueba de
leucinoaminopeptidasa "&iscos de L.%.P. R(3 /4514151$ y los
discos de :ancomicina ;0
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aemolyticus y )tapylococcus intermedius$ son generalmente PYRasa
positivo' por lo
!ue se puede utilizar esta prueba en su identificación.
Reacciona con el reactivo revelador
=-= dimetilamino cinamaldeido
;. COMPOSICIÓN
- &iscos impregnados con el sustrato pirrolidonil > beta
> naftilamida- Reactivo revelador? solución de p-dimetilamino
cinamalde#do
4. OBJETIVOS:
- Realizar la prueba presuntiva especifica para los
estreptococos /- emol#ticos y la
mayor parte de las especies de (nterococcus.- &iferenciar el
)treptococcus pyógenes de otras especies de )treptococcus y de
la
especie de (nterococcus.-
5. PARTE EXPERIMENTAL5.1. Mate!a"e#
• Papel impregnado"discos$ en una solución de
"Pirrolidonil-beta-naftilamina$. Listo
para usar. (l envase contiene s#lica gel como desecante.
• Revelador? 4 ml de solución acuosa de
p-dimetil-aminocinnamaldeido.
• )olución fisiológica estéril.
• %gar )angre.
• %gua destilada.
•
+otero plástico para el agregado del revelador.• Placa de
petri.
• 9ubos de ensayo
• %sa.
• ronómetro.
• /a@o 7ar#a.
• 7eceros
5.2. P$%e&!'!e(t$ S!e')a
% partir de un cultivo puro de agar sangre del
microorganismo en
estudio' del cual se a identificado !ue son cocos +ram
positivos
catalasa negativa' acer una suspensión densa en A0 2l de
solución fisiológica estéril y agregar un disco de PYR.
&ejar !ue los discos tomen temperatura ambiente.
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9omar un tubo de emólisis' agregar 0'5 ml de agua destilada y
realizar una
suspensión bien densa' tomando ; ó más colonias del cultivo
puro. olocar en ba@o 7ar#a a ;6B y agregar 4 disco de
PYR-(nterococos.
%gitar el tubo teniendo la precaución de !ue el disco
!uede sumergido en la
suspensión. 7antener a ;6B durante ;0 minutos. Luego agregar una
gota de la solución Reveladora y observar el cambio de
color
del disco' durante A minutos.
I(%*)a%!+((n aerobiosis a ;A > ;6C durante ;0 minutos. uando
se utiliza
para diferenciar )tapylococcus' la incubación se debe
realizar'
seg*n algunos investigadores' en aerobiosis' a ;A > ;6C
durante 5
oras.
5.,. E#ta)!"!&a& - %$(#ea%!+(
Los discos &iferenciales PYR-(nterococos son estables asta
la feca
!ue indica el envase' conservados refrigerados entre 5-40B.
5.4. M*e#ta
=o se deben utilizar cultivos mezclados o espec#menes
cl#nicos
directos' para la realización de la prueba de
PYR-(nterococos.
5.5. I(te/eta%!+( &e "$# Re#*"ta&$#
%gregar dos gotas de reactivo cinamaldeido y dejar a
temperatura aambiente asta A minutos. Dbservar el color
desarrollado?
• Positivo? presencia de actividad enzimática
pirrolidonilarilamidasa?
disco color rosado a rojo.
• =egativo? ausencia de actividad enzimática
pirrolidonilarilamidasa?
disco yEo solución color amarillo o incoloro.
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5.0. Ce/a# &e %$(t$" e#*"ta&$ (nterococcus faecalis
"F$
)treptococcus pyogenes "F$
)tapylococcus aureus "-$
5.. C*!&a&$#
• &ejar !ue el envase tome temperatura ambiente
antes de su uso' para
evitar condensación de umedad dentro del mismo.
• &espués de su uso tapar bien y colocar el envase
dentro del refrigerador.
• =o utilizar discos cuyo vencimiento aya eGpirado.
• 2tilizar una suspensión bien densa para evitar resultados
falsos negativos.
0. BIBLIORAF3A
ttp?EEbritanialab.com.arEespEproductosEb45Epyraenterococos.tm.7anual
de instrucciones
/rizuela > lab. H.lin. 7icrobiol.' 55?665-666' 4IJA.
3ica técnica de laboratorio /ritania.
%=(KD)
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• Positivo? presencia de actividad enzimática
pirrolidonilarilamidasa?
disco color rosado a rojo.
• =egativo? ausencia de actividad enzimática
pirrolidonilarilamidasa?
disco yEo solución color amarillo o incoloro.
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UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS
FACULTAD DE MEDICINA UMANA Y CIENCIAS DE LASALUD
ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE FARMACIA YBIO6U3MICA
TEMA: PRUEBA DE PYR
DOCENTE: 6.F. MARIELLA UERRERO BENAVIDES.
PRESENTADO POR LOS ALUMNOS:
MELISSA OBLITAS CCAUATA.
BRYAN PA7L TITO CALDERÓN.
8ATERINE LAOS DE9A.
8ATERINE RONDON MEDINA.
CINTIA CALDERON
RONALD COROPUNA
ARE6UIPA 2;10
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