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Prodotti Oasis per l'estrazione dei campioni
Purezza con SPE
2 [ ]3
La linea di prodotti Oasis offre:
n Il massimo grado di recupero SPE
n Gli estratti più puri
n Riduzione dell'effetto matrice
n La minor variabilità dei metodi
I PRODOTTI SPE PIÙ DIFFUSI NEI LABORATORI DI ANALISI BIOLOGICHE
* Brevetti U.S.A. 5,882,521 (1996), 5,976,376 (1998), 6,106,721 (1999), 6,254,780 (2001), 6,322,695 (2001),
6,468,422 (2002), 6,726,842 (2004), 6,773,583 (2004), 6,723,236 (2004), altri brevetti in attesa di approvazione.
2 [ ]3
L'innovativo design della linea di prodotti Oasis® per l'estrazione in
fase solida mira a semplificare e migliorare la preparazione dei campioni.
Il connubio tra l'adsorbente opportuno, il formato dei dispositivi e la
metodologia consente ai ricercatori che eseguono analisi biologiche di
avvalersi costantemente di metodi SPE affidabili, riproducibili e sensibili.
Gli adsorbenti Oasis per SPE, coperti da nove brevetti USA*, offrono
caratteristiche uniche di purezza, stabilità e ritenzione. La rivoluzionaria
piastra brevettata Oasis µElution è la prima del genere a consentire di
ottenere volumi di eluizione degli estratti puri di soli 25 µL, garantendo al
contempo un elevato recupero SPE degli analiti.
[ ]4
LE RAGIONI ALLA BASE DELLA SCELTA SPE
La preparazione dei campioni è una fase essenziale di ogni metodo analitico (per es. LC/MS/MS). Si calcola che, dal 60 al 80 % dell'attività e dei costi operativi di un laboratorio analitico, viene impiegato nella preparazione dei campioni da introdurre nello strumento.
L'importanza della preparazione dei campioni, in particolare nel caso delle applicazioni SPE, è legata a quattro fattori principali: la rimozione dell'effetto matrice (inclusa la riduzione della soppressione ionica), la diminuzione della variabilità dei metodi, la concentrazione degli analiti di interesse e il miglioramento delle prestazioni del sistema di analisi.
SPE offrE Soluzioni ai SEguEnt i t rE P rinciPali P roblEmi nElla SEParazionE dEi camPioni
Per le analisi ad alta sensibilità, per esempio le applicazioni UPLC®/MS/MS, la corretta preparazione dei campioni è una fase cruciale per minimizzare l'effetto matrice e concentrare gli analiti di interesse. La preparazione dei campioni eseguita con i prodotti Oasis può essere utilizzata con i sistemi UPLC/MS/MS per ottenere estratti di massima purezza.
Il sistema qui illustrato integra il modello Xevo™ TQ MS, uno spettrometro di massa all'avanguardia che coniuga il software MassLynx™ e l'innovazione delle tecnologie ScanWave™ e IntelliStart, e il sistema Waters ACQUITY UPLC®.
L'estrazione in fase solida (SPE) è uno strumento di comprovata efficacia per la rimozione di interferenze e consente di eseguire analisi LC/MS/MS sensibili, selettive e affidabili.
rimozionE dEllE intErfErEnzE dalla matricE dEl camPionE
Spesso i composti di interesse sono presenti in concentrazioni troppo basse per poter eseguire analisi quantitative accurate e precise. La tecnica SPE consente di arricchire analiti specifici senza concentrare le specie interferenti.
concEntrazionE dEll’analita o dEgli analiti di intErESSE
I prodotti Oasis per SPE rimuovono efficacemente fosfolipidi e liso-fosfolipidi, ossia i principali fattori alla base della soppressione ionica nelle analisi LC/MS/MS. La rimozione di tali interferenze consente di ridurre la variabilità dei metodi e di incrementare la risposta MS, permettendo quindi di ottenere LOQ più bassi.
riduzionE dElla SoP P rESSionE ionica
I miglioramenti della tecnologia SPE, coniugati all'automazione, rendono l'SPE non soltanto uno strumento economicamente conveniente ma anche una tecnica di preparazione dei campioni efficace in termini di tempo. Ciò si traduce in un miglioramento delle prestazioni dei sistemi di analisi grazie a:
n Introduzione di analiti in solventi compatibili con i metodi MS
n Prolungamento della durata delle colonne analitiche, riduzione dei tempi di inattività/manutenzione
n Riduzione della soppressione ionica per migliorare la risposta del segnale
miglioramEnto dEllE PrEStazioni dEi SiStEmi analitici
CHIMICA
[ ]5
Nel 1996 Waters ha rivoluzionato la tecnologia SPE grazie all'introduzione di Oasis HLB, il primo adsorbente polimerico bagnabile con acqua e idrofobo allo stesso tempo. Il lancio di questo prodotto ha modificato per sempre i metodi SPE. La linea Oasis include cinque prodotti SPE brevettati ideali per soddisfare ogni esigenza di preparazione dei campioni:
innovazioni Wat ErS nEll’ESt razionE Su faSE Solida (SPE)
OASIS WCX
OASIS MCX
OASIS WAX
OASIS HLB
OASIS MAX
OASIS WCX
OASIS MCX
pKa <11 meq/g
pKa ~50.75 meq/g
OASIS WAX
pKa ~60.6 meq/g
Water-wettableStable from pH 0–14No silanol interactions
OASIS HLB
HydrophilicRetention of Polars
LipophilicRP Retention
OASIS MAX
pKa >180.25 meq/g
n OASIS MCX: Adsorbente in modalità mista a scambio cationico (MCX) in fase inversa per basi
n OASIS MAX: Adsorbente in modalità mista a scambio anionico (MAX) in fase inversa per acidi
n OASIS WCX: Adsorbente in modalità mista a scambio cationico debole (WCX) in fase inversa per basi forti e ammine quaternarie
n OASIS WAX: Adsorbente in modalità mista a scambio anionico debole (WAX) in fase inversa per acidi forti (quali i solfonati)
n OASIS HLB: Adsorbente in fase inversa a bilancio idrofilo-lipofilo (HLB) per acidi, basi e neutri
[ ]6 [ ]7
Esclusivo copolimero Oasis HLB bagnabile con acqua
N-VINYLPYRROLIDONE DIVINYLBENZENE
HYDROPHILIC-LIPOPHILIC BALANCE
Specific Surface Area: 810 m2/g, Average Pore Diameter: 80 ÅTotal Pore Volume: 1.3 cm3/g, Average Particle Diameter: 5 µm, 15 µm, 25 µm, 30 µm or 60 µm
Riproducibilità da batch a batch dell'adsorbente Oasis HLB —Uno straordinario decennio di risultati uniformi
Effetto dell’essicamento durante il recupero
Oasis HLB Cartridge (30 mg) C18 Cartridge (100 mg)
% R
ecov
ery
Drying Time (minutes)
ProcainamideAcetaminophenRanitidinePropranololDoxepin
Drying Time (minutes)
% R
ecov
ery
0
20
40
60
80
100
0 4 80
20
40
60
80
100
0 5 10
No impact of sorbent drying on HLBHigh, consistent recovery
No Batch Reservations Needed: Consistently high recoveries over more than 10 years of production.
85
95
105
% R
ecov
ery
Procanamide – 1.90% RSD Ranitidine – 1.68% RSD Acetaminophen – 1.65% RSD
Recovery for:
Gli adsorbenti tradizionali in silice a fase inversa non offrono riproducibilità da lotto a lotto perchè presentano scarsa stabilità a pH acido, capacità ionica relativamente bassa e difficoltà di legame. Per garantire prestazioni uniformi gli utilizzatori controllano la qualità degli adsorbenti e conservano lotti specifici.
riproducibilità eccezionale da lotto a lotto
Oasis HLB è un adsorbente in fase inversa bagnabile con acqua a bilancio idrofilo-lipofilo che soddisfa ogni esigenza dei metodi SPE. È costituito da un rapporto bilanciato di due monomeri: n-vinilpirrolidone idrofilo e divinilbenzene lipofilo. La presenza di un “gancio” polare neutro migliora la ritenzione di analiti polari in fase inversa.
Waters ha prodotto una linea di adsorbenti SPE che vantano alcune caratteristiche speciali di questo substrato unico: stabilità a pH estremi e in un ampio spettro di solventi, straordinaria ritenzione dei composti polari e una capacità di ritenzione idrofoba relativa 3 volte superiore rispetto ai tradizionali adsorbenti per SPE in silice a fase inversa. Gli adsorbenti bagnabili con acqua Oasis presentano un’eccellente capacità di ritenzione per un più ampio spettro di analiti polari anche nei casi in cui il letto di adsorbente si secca durante il condizionamento o il caricamento dei campioni. Ciò consente di usufruire di metodi SPE più robusti e di eliminare la necessità di ripetere la preparazione dei campioni.
La maggiore capacità di ritenzione (k) consente di trattenere più analiti, riducendo le perdite e migliorando la riproducibilità e il recupero complessivi del metodo SPE.
L’adsorbente Oasis HLB è disponibile in cinque dimensioni delle particelle (60 µm, 30 µm, 25µm, 15 µm e 5 µm) e nei formati cartuccia, piastra e colonna, e permette quindi di selezionare il prodotto adatto in base al volume, alla viscosità e alla torbidità dei campioni.
adsorbente universale per composti acidi, neutri e basici
ADSORBENTE
Gli adsorbenti Oasis hanno garantito un'eccellente riproducibilità a lungo termine da batch a batch per oltre dieci anni. Come risultato di un attento processo di design e delle più stringenti regole di controllo qualità, è stato raggiunto un nuovo standard di riproducibilità per gli adsorbenti SPE. L'intera linea di adsorbenti e dispositivi Oasis è prodotta negli stabilimenti Waters certificati ISO 9000 e in
conformità alle linee guida cGMP dell'FDA degli Stati Uniti relative ai dispositivi medicali di classe 1.
Batch multipli di ciascun prodotto Oasis HLB, MCX, MAX, WCX e WAX sono stati utilizzati con successo per saggi bioanalitici validati in un ambiente di laboratorio regolamentato.
adSorbEnt E oaSiS Hlb
[ ]6 [ ]7
Interazione composto-adsorbente su adsorbente Oasis MCX
Interazione composto-adsorbente su adsorbente Oasis MAX
SO–3
SO–3
NO
MCX sorbentMixed-mode Cation eXchange
Reversed-phase interaction
Strong cation-exchange mode
Best retention at least 2 pH units below pKa
of the analyte
+CH3
CH 3
O
OH
NHH
Propranolol(basic drug)
Sulfonic-acid-cation-exchange capacity:
1.0 meq/g
Highly selective retention enables much stronger washes,resulting in very clean extracts.
R+CH 2
CH3
CH3
C H4 9N
NO
MAX sorbentMixed-mode Anion eXchange
Reversed-phase retention
Suprofen(acidic drug)
Quaternary-amine-anion-exchange capacity:
0.25 meq/g
S
CH 3O
COO–
Strong anion-exchange mode
Best retention at least 2 pH units above pKa
of the analyte
+
Highly selective retention enables much stronger washes,resulting in very clean extracts.
Elevata selettività e sensibilità per composti basiciL'adsorbente Oasis MCX è ideato per superare le limitazioni dei tradizionali adsorbenti in silice per modalità mista SPE. Si tratta di un adsorbente polimerico bagnabile con acqua in modalità mista a scambio cationico prodotto da Waters mediante un innovativo processo brevettato che ne garantisce la riproducibilità. Oasis MCX offre due modalità di ritenzione, scambio ionico e fase inversa, su un unico copolimero organico, pulito, stabile, ad ampia superficie e stabile per valori di pH compresi tra 0 e 14.
Oltre alla stabilità in un ampio intervallo di pH tipica dei polimeri DVB, Oasis MCX presenta una maggior capacità legante rispetto ad altri adsorbenti in silice in modalità mista per SPE. La capacità di manipolare completamente il pH (0-14) durante lo sviluppo, l’ottimizzazione e l’uso di metodi SPE su adsorbenti in modalità mista, consente un facile sviluppo di metodi ed assicura procedure ad elevata robustezza. Non vi è presenza di bassi recuperi o perdita di composti polari dovuta alla dissoluzione di particelle di silice ad elevato pH e scissione di fasi legate a basso pH.
L’uso efficiente di adsorbenti SPE in modalità mista per l’estrazione di composti basici da matrici biologiche (quali plasma, urina, bile e omogenati) richiede elevata capacità di ritenzione, in fase inversa per la ritenzione delle interferenze e a scambio ionico per la ritenzione selettiva degli analiti. I comuni adsorbenti in modalità mista in
Adsorbente in modalità mista a scambio e in fase inversa
Elevata selettività e sensibilità per composti acidiL'adsorbente Oasis MAX è ideato per superare le limitazioni dei tradizionali adsorbenti in silice per modalità mista SPE. Si tratta di un adsorbente polimerico bagnabile con acqua in modalità mista a scambio anionico forte, stabile per valori di pH da 0 a 14. Ora è possibile utilizzare metodi SPE affidabili per rilevare, confermare o quantificare composti e/o metaboliti acidi nei fluidi biologici. Le procedure SPE che impiegano la selettività e la robustezza di Oasis MAX consentono di separare gli analiti dai campioni complessi in due frazioni: composti acidi e composti basici/neutri. Gli estratti di frazionamento possono essere analizzati con più metodi analitici o addirittura con tecniche combinate (LC/MS e GC/MS).
Il processo produttivo innovativo, controllabile e riproducibile sviluppato da Waters si traduce in prodotti Oasis MAX che offrono capacità di scambio ionico dell'ammina quaternaria pari a 0,25 meq/g. Oasis MAX è disponibile in due dimensioni di particelle: 60 µm e 30 µm.
Adsorbente in modalità mista a scambio anionico (MAX) e in fase inversa
ADSORBENTE
adSorbEnt E oaSiS mcX
adSorbEnt E oaSiS maX
silice sono sintetizzati tramite un processo complesso e difficile da controllare e presentano valori di capacità di scambio ionico relativamente contenuti (compresi nell'intervallo 0,06-0,2 meq/g). Il processo produttivo innovativo, controllabile e riproducibile sviluppato da Waters si traduce in prodotti Oasis WCX che offrono capacità di scambio ionico dell'acido carbossilico pari a 1,0 meq/g. Oasis MAX è disponibile in due dimensioni di particelle: 60 µm e 30 µm.
[ ]8
Interazione composto-adsorbente su adsorbente Oasis WCX
Interazione composto-adsorbente su adsorbente Oasis WAX
Reversed-phase interaction
Weak cation-exchangeinteraction
WCX sorbentWeak Cation eXchange
COO -
N
N+
O
OCH3
CH3
CH3H C3
CH O3
Highly selective retention enables much stronger washes,resulting in very clean extracts.
Carboxylic-acid-cation-exchange capacity: 0.75 meq/g
+NH
NO
+NH
Reversed-phase interaction
Weak anion-exchangeinteraction
WAX sorbentWeak Anion eXchange
SO–3
2
Highly selective retention enables much stronger washes,resulting in very clean extracts.
Piperazine-anion-exchangecapacity: 0.6 meq/g
Selettività e sensibilità elevate per basi fortiOasis WCX è stato ideato per fornire preparazioni di campioni di qualità superiore per le basi forti e le ammine quaternarie. Si tratta di un adsorbente polimerico bagnabile con acqua in modalità mista a scambio cationico debole, stabile per valori di pH da 0 a 14 e che offre tutti i vantaggi di Oasis HLB. I metodi SPE robusti e ad alta selettività che utilizzano Oasis WCX consentono di rilevare, confermare e quantificare composti basici forti e ammine quaternarie nei fluidi biologici.
Il processo produttivo innovativo, controllabile e riproducibile sviluppato da Waters si traduce in prodotti Oasis WCX che offrono capacità di scambio ionico dell'acido carbossilico pari a 0,75 meq/g. Sono disponibili tre dimensioni delle particelle: 60 µm, 30 µm, e 5 µm.
adsorbente in modalità mista a scambio cationico debole (WCX) e in fase inversa
Selettività e sensibilità elevate per acidi fortiOasis WAX è stato ideato per fornire preparazioni di campioni di qualità superiore per gli acidi forti. Si tratta di un adsorbente polimerico bagnabile con acqua in modalità mista a scambio anionico debole, stabile per valori di pH da 0 a 14 e che offre tutti i vantaggi di Oasis HLB. I metodi SPE robusti e ad alta selettività che utilizzano Oasis WAX consentono di rilevare, confermare e quantificare acidi forti nei fluidi biologici.
Il processo produttivo innovativo, controllabile e riproducibile sviluppato da Waters si traduce in prodotti Oasis WAX che offrono capacità di scambio ionico della piperazina pari a 0,6 meq/g. Sono disponibili tre dimensioni delle particelle: 60 µm, 30 µm, e 5 µm.
adsorbente in modalità mista a scambio anionico debole (WCX) e in fase inversa
adSorbEnt E oaSiS WcX
adSorbEnt E oaSiS WaX
ADSORBENTE
FORMATO
[ ]9
L'intera linea di adsorbenti e dispositivi Oasis è prodotta negli stabilimenti Waters certificati ISO 9000 e in conformità alle linee guida cGMP dell'FDA degli Stati Uniti relative ai dispositivi medicali di classe 1.
linEa di P rodot t i oaSiS PEr SPE
n PIASTRE OASIS µELUTION
n PIASTRE DI ESTRAzIONE OASIS A 96
POzzETTI
n CARTUCCE PER CILINDRI SIRINGA
OASIS
n CARTUCCE IN vETRO OASIS
n COLONNE ON-LINE OASIS
[ ]10 [ ]11
FORMATO
PiaSt rE oaSiS μElut ion
n Design brevettato delle piastre µElution*
n La tecnologia alla base delle piastre consente di ottenere volumi di eluizione minimi di soli 25 µL
n Evaporazione e ricostituzione non sono necessarie; è sufficiente eluire e iniettare
n Ideale per volumi ridotti di campione
n Incremento nella concentrazione fino a 15 volte
n Compatibili con la maggior parte dei sistemi robotizzati di gestione dei campioni liquidi per una SPE automatica, affidabile e ad alta produttività (HT-SPE)
PiaSt rE di ESt razionE oaSiS a 96 PozzEt t i
n Design innovativo di pozzetto a due fasi (premiato dal riconoscimento R&D 100, 1999)
n Produttività e recupero elevati
n Disponibili nei formati da 5 mg, 10 mg, 30 mg e 60 mg per pozzetto
n Compatibili con la maggior parte dei sistemi robotizzati di gestione dei campioni liquidi per una SPE automatica, affidabile e ad alta produttività (HT-SPE)
linEa di Prodot t i oaSiS PEr SPE
* Patente en EE.UU. nº 6,723,236
[ ]10 [ ]11
FORMATO
cartucc E PEr c il indri Siringa oaSiS
n Cilindro siringa e filtri porosi ultra-puliti
n Disponibile in cartucce da 1 cc a 35 cc
n Disponibile da 10 mg a 5 g di adsorbente per cartuccia
n Cartucce per cilindri siringa senza flangia disponibili: 1 cc, 3 cc, 6 cc
n Sono inoltre disponibili: cartucce Plus con attacco Luer e punta di uscita, 225 mg
cartucc E in v Et ro oaSiS
n Siringa in vetro ultra-pulita con filtro poroso in Teflon®.
n Analisi di interferenti endocrini a livelli di parte per bilione
n Disponibili nel formato da 5 cc (200 mg)
colonnE on-linE oaSiS
n Analisi on-line estremamente veloci, riproducibili e robuste
n Compatibili con ogni sistema di analisi on-line
n Ampia scelta di configurazioni, dimensioni delle particelle e fasi stazionarie degli adsorbenti
[ ]13[ ]12
Disk Technology
Ratio Bed H/D = 0.13
Wide and ShortSorbent Bed
Vacuum
�Elution Technology
Narrow and TallSorbent Bed
Vacuum
Ratio Bed H/D = 1.15
Elution Volume
Oasis µElution Technology Disk Technology
>85% recovery in 25 µL Minimum of 100 µL needed for best result
% R
ecov
ery
0
20
40
60
80
10025 µL
100 µL Spiked Saline
acetaminophen
practolol
N-acetylprocainamide
betamethasone
caffeine
naproxen
amitriptyline
propranolol
Oasis HLBµElution plate
Brand E C18 Brand S C18Brand E UR
75 µL 75 µL 75 µL
The innovative features of the Oasis µElution plates enable sensitive,robust, reproducible results without evaporation and reconstitution.
Confronto tra tecnologia da µEluizione e tecnologia su disco
Confronto sul recupero tra tecnologia da µEluizione e tecnologia su disco
Attualmente sul mercato sono disponibili due principali tecniche SPE per l'eluizione di volumi ridotti: tecnologia su disco SPE e Oasis µElution. Le prestazioni offerte dalle due tecnologie differiscono in misura considerevole a causa di tre fattori: rapporto altezza/diametro, volume di esclusione e volume di eluizione.
Esiste una correlazione tra il rapporto altezza/diametro (H/D) della fase e le sue prestazioni in un dispositivo SPE. Un rapporto altezza/diametro inferiore a 1,0 non è consigliabile in rapporto alle prestazioni. Nel caso della tecnologia su disco SPE (per esempio disco a membrana/fibra di vetro), una massa ridotta di adsorbente è integrata in una struttura di supporto sottile che presenta buone proprietà di flusso ma un rapporto altezza diametro contenuto (H/D=0,13). Al contrario, la tecnologia Oasis µElution impiega un pozzetto rastremato internamente, impaccato con adsorbente Oasis ad alta capacità e con un valore H/D pari a 1,15, circa 9 volte superiore rispetto alla tecnologia su disco SPE. I pozzetti delle piastre Oasis µElution funzionano in modo analogo a una colonna cromatografica, minimizzando la perdita di analita nel corso delle fasi critiche della procedura SPE e incrementando l'efficienza di estrazione complessiva.
Un piccolo volume di esclusione è necessario per raggiungere un volume di eluizione minimo. Le piastre su disco SPE presentano volumi di esclusione compresi nell'intervallo 35-65 µl, mentre le piastre Oasis µElution dotate di filtri porosi vantano volumi minimi di soli 15 µl. La presenza di un volume di esclusione 2-4 volte inferiore minimizza il volume di eluizione e riduce la perdita di analita durante l'eluizione, migliorando quindi recupero e precisione.
confronto tra le tecnologie oasis µElution e su disco
n Eluizione in un volume minimo di soli 25 µL
n Evaporazione né ricostituzione non necessarie
n Ideale per volumi ridotti di campione
n Incremento nella concentrazione fino a 15 volte
Finalmente potete eseguire con fiducia le purificazioni SPE el’arricchimento degli analiti per volumi estremamente ridotti di campione (10-25 µL) fino a un massimo di 375 µL. Le piastre Waters Oasis µElution coniugano il design brevettato, i comprovati adsorbenti Oasis e i semplici protocolli che garantiscono l’elevato recupero degli analiti e la purezza degli estratti in volumi di eluizione minimi di soli 25 μL.
l’ultima innovazionE WatErS nElla tEcnologia SPE
P iaSt rE oaSiS µElut ion
FORMATO
La riduzione del volume di eluizione SPE è essenziale per le prestazioni, il recupero e la precisione delle applicazioni SPE. I volumi di eluizione tipici delle piastre Oasis µElution sono compresi nell'intervallo 25–50 µl, nettamente inferiori ai normali volumi di eluizione della tecnologia su disco SPE, che variano tra 75 e 300 µl.
L'eluizione riproducibile in un volume di soli 25 µL migliora e ottimizza i metodi SPE. È possibile eseguire le applicazioni SPE su volumi estremamente ridotti di campione. L'arricchimento del campione migliora di ben 15 volte. Scegliendo il solvente di eluizione in modo che sia compatibile con la fase mobile LC/MS, non è più necessario eseguire la laboriosa fase di evaporazione dell'eluato, né l'evaporazione/ricostituzione. Le caratteristiche innovative delle piastre Oasis µElution consentono di ottenere risultati sensibili, affidabili e riproducibili senza ricorrere all'evaporazione né alla ricostituzione. Le prestazioni analitiche sono superiori in termini di sensibilità, selettività e robustezza.
[ ]13
% R
ecov
ery
SPE Recovery for 200 ng/mL Imipramine and 200 ng/mL Atenolol on Oasis MCX µElution Plate
SPE Recovery for Polar andNon-Polar Analytes in Plasma Example
SPE Recovery for Polar andNon-Polar Analytes in Urine Example
Matrix Effects for Polar andNon-Polar Analytes in Plasma
0
20
40
60
80
100
50 100 150 200 250 300 350 µL
Loaded Plasma Volumes (Undiluted) Loaded Urine Volumes (Undiluted) Loaded Plasma Volumes (Undiluted)
-40
-30
-20
-10
0
10
20
30
40
50 100 150 200 250 300 350 µL
Atenolol (polar)
Imipramine(non-polar)
n = 8
% R
ecov
ery
Ion
Enha
ncem
ent
Ion
Supp
ress
ion
0
20
40
60
80
100
50 100 150 200 250 300 350 µL
La capacità dei dispositivi SPE è definita come la massa totale di analiti e componenti endogeni del campione che il letto di adsorbente ritiene in presenza delle condizioni di carico. La perdita di analita ha luogo quando si supera la capacità del letto di adsorbente. Le proprietà chimico-fisiche degli adsorbenti Oasis sono state sviluppate per offrire capacità di carico estremamente elevate, nonostante ciascun pozzetto di una piastra Waters Oasis µElution contenga soltanto 2 mg di adsorbente Oasis.
Per determinare la capacità delle piastre Oasis μElution, in una serie di volumi crescenti di campioni di plasma e urina (da 50 µL a 350 µL con incrementi pari a 50 µL) sono stati iniettati imipramina (base non polare) in concentrazione 200 ng/mL e atenololo (base polare) in concentrazione 200 ng/mL. Le aliquote di plasma sono state diluite in rapporto 1:1 con una soluzione acquosa di H3PO4 mentre le aliquote di urina sono state diluite in rapporto 1:1 con H2O e quindi caricate sulla piastra µElution. Il recupero SPE è stato calcolato e riportato in un grafico per ciascun livello di carico.
capacità di carico delle piastre µElution
FORMATO
Il design premiato delle piastre Waters, disponibile con cinque adsorbenti e quattro opzioni di massa di adsorbente, garantisce un elevato rendimento SPE in un unico dispositivo. Le piastre Oasis a 96 pozzetti sono progettate per l'utilizzo con numerose stazioni di estrazione e con la maggior parte dei sistemi robotizzati per la gestione dei liquidi. Grazie all'esclusivo equilibrio tra proprietà idrofobe e bagnabilità in acqua degli adsorbenti Oasis,
l'essiccamento di specifici pozzetti della piastra a 96 pozzetti non incide sulla qualità dei risultati. Come d'abitudine, i prodotti Oasis per SPE garantiscono affidabilità grazie a un recupero elevato e riproducibile per un ampio spettro di analiti, compresi i composti polari e basici, con deviazioni standard relative inferiori al 5% (n=96).
v ErSat il i P iaSt rE di ESt razionE oaSiS a 96 PozzEt t i PEr aP Plicazioni ad alta P rodut t iv ità
PiaSt rE oaSiS a 96 PozzEt t i
Design delle piastre Waters a 96 pozzetti
Variando la dimensione e la posizione del filtro di ingresso colonna (frit), è possibile riempire i singoli pozzetti della piastra con quantità di adsorbente diverso. Il design della piastra consente recuperi ottimali, anche con piccole quantità di adsorbente per volumi di eluizione più piccoli.
5 mg 10 mg 30 mg 60 mg
Design di pozzetto a due fasi premiato dal riconoscimento R&D100, 1999
Condition:200 µL CH3OH
Equilibrate:200 µL H2O
Load:Various volumes of:
- Plasma diluted 1:1 with 4% H3PO4 in H2O - Urine diluted 1:1 with H2O
Wash 2:200 µL CH3OH
Wash 1:200 µL 2% CHOOH in H2O
Elute:2 x 25 µL 5% NH4OH in 60:40
CH3CN:CH3OH
Dilute:50 µL H2O
Inject:5 µL
Protocollo SPE per piastre Oasis MCX µElution a 96 pozzetti
[ ]14
colonnE SPE on-linE PEr lc /mS/mS
colonnE on-linE oaSiS
FORMATO
I vari modelli sono disponibili con i cinque adsorbenti Oasis brevettati (HLB, MCX, MAX, WCX, WAX) e per un'ampia gamma di dimensioni delle particelle e formati. Le colonne on-line Oasis consentono di analizzare un analita specifico in una matrice se utilizzate congiuntamente alle opportune colonne analitiche narrow-bore Waters (quali le colonne XBridge™, SunFire™, Atlantis®, XTerra® o Symmetry®).
1
2
3
Configurazione dei sistemi on-line
IsocraticHPLC
GradientHPLC
10 Port Valve2 positions
Waste
OasisOn-Line Column
Narrow BoreAnalytical Column
MassSpectrometer
MassSpectrometer
Alliance HT
515System
LOADPOSITION
Waste
AnalyticalColumn
AnalyticalColumn
543
2
110
9
8
76
Oas
is
MassSpectrometer
Alliance HT
515System
INJECTIONPOSITION
Waste
543
2
110
9
8
76
Oas
is
Sono disponibili tre configurazioni di colonne on-line Oasis per l’HPLC ideate per rispondere a ogni esigenza di analisi on-line.
n La colonna a cartuccia Oasis è compatibile con il supporto Sentry™ dotato di raccordo da stringere a mano per le sostituzioni veloci e pratiche (1).
n La colonna a connessione diretta Oasis può essere avvitata direttamente su una valvola di commutazione o collegata ai raccordi tipici delle colonne HPLC convenzionali (2).
n La colonna Oasis è dotata dei raccordi e dell’hardware delle tradizionali colonne HPLC (3).
[ ]14
METODOLOGIA
[ ]15
n METODO OASIS 2X4
n METODOLOGIA OTTIMIzzATA OASIS 2X4
n METODO OASIS 2X4 OTTIMIzzATO
PER PIASTRE µELUTION
n METODO OASIS HLB GENERICO
n METODOLOGIA OTTIMIzzATA OASIS HLB
n METODOLOGIA AvANzATA OASIS
mEtodologia oaSiS
Lo sviluppo di metodi SPE implica la conoscenza della matrice del campione, ossia la natura e la concentrazione relativa degli analiti interessati come pure i composti endogeni che potrebbero interferire. Dopodiché, scelte giudiziose di sorbenti e solventi per le fasi di carico, lavaggio ed eluizione creano protocolli stabili, affidabili e selettivi.
Il team di chimici della Waters ha sviluppato diverse strategie per semplificare questo processo.
[ ]16 [ ]17
METODOLOGIA
3a: mEtodo oaSiS 2X4
Il metodo Oasis 2x4 rappresenta una tecnica semplice e logica per la selezione di un sorbente e protocollo SPE. Due protocolli e quattro adsorbenti forniscono la flessibilità per l’estrazione di acidi, basi e neutri per elevati recuperi SPE rimuovendo nello stesso tempo i componenti della matrice che potrebbero interferire con l’analisi.
Le fasi indicate nel seguente diagramma permettono di ottenere recuperi elevati e gli estratti più puliti:
n Caratterizzazione dell'analita (composto neutro, acido o base, pKa).
n Scelta di uno dei quattro adsorbenti Oasis.
n Applicazione del protocollo indicato (1 o 2).
n Determinazione dei recuperi SPE mediante analisi LC.
Neutrals WeakerBases
WeakerAcids
For Bases pKa 2-10:
Use Oasis MCX
For Acids pKa 2-8:
Use Oasis MAX
For Strong Bases pKa >10:
Use Oasis WCX
For Strong Acids pKa <1:
Use Oasis WAX
Apply Protocol 2
Prepare Sample
Condition/EquilibrateLoad Sample
5% NH4OH
Elute 1:100% CH3OH
Elute 2:2% HCOOH in CH3OH
Oasis 2x4 MethodOnly 2 protocols and 4 sorbents to
analyze all types of compounds:acids, bases, and neutrals
Prepare Sample
Condition/EquilibrateLoad Sample
Wash: Wash:2% HCOOH
Elute 1:100% CH3OH
Elute 2:5% NH4OH in CH3OH
Base Strong Acid Acid Strong Base
Apply Protocol 1
Il kit di cartucce e piastre per la selezione dell'adsorbente Oasis consente il rapido sviluppo di metodi SPE per le analisi LC/MS. Grazie alla disponibilità dei quattro adsorbenti a scambio ionico Oasis (MCX, MAX, WAX e WCX) su una sola piastra è possibile determinare facilmente il miglior metodo di isolamento di composti sconosciuti, composti zwitterionici o miscele di analiti che presentano proprietà di ritenzione/eluizione distinte.
Notare che gli analiti neutri possono essere isolati da tutti e quattro gli adsorbenti nella fase Eluizione 1 in entrambi i protocolli. È necessario scegliere l’adsorbente a scambio ionico che meglio rimuove le interferenze specifiche dalla matrice. Segue un esempio.
Kit di cartucce e piastre per la selezione dell'adsorbente Oasis
Oasis MCXProtocol 1 – Elute 2
Oasis WAXProtocol 1 – Elute 1
Oasis MAXProtocol 2 – Elute 2
Oasis WCXProtocol 2 – Elute 1
0 50 100%
SPE Recovery
Cephalexin
[Cephalosporin antibiotic]
A difficult amphoteric analyte
pKa = 2.6
pKa = 7.3
Aliquots of prepared sample processed using Oasis 2x4 Method protocol designated for each
of 4 sorbents. Eluates from Elute 1 and Elute 2 steps analyzed by LC/MS/MS.
Clearly, Oasis MCX is the sorbent of choice.
S
NNH
O
HH
NH 2
O
HO ORecovery is high on all four Oasis sorbents,but removal of phospholipids, a primary causeof matrix ion suppression, is best on Oasis MCX.Protein precipitation is a poor choice for samplepreparation prior to LC/MS/MS analysis.
Cleanliness of 100% MeOH Elute 1 Monitoring 5 PhospholipidMRM Transitions
2% Phospholipids
%
100 1: MRM of 5 Channels ES+TIC
2.55e72.50
Oasis MCX — Protocol 1
1.75 2.00 2.25 2.50 2.75 3.00 3.25 3.50 3.75 4.00 Min
%
0
1001: MRM of 5 Channels ES+
TIC2.55e7
2.522.60
Oasis WCX — Protocol 2
%
1001: MRM of 5 Channels ES+
TIC2.55e72.522.60
Oasis MAX — Protocol 2 9% Phospholipids
11% Phospholipids
12% Phospholipids
%
100 1: MRM of 5 Channels ES+TIC
2.55e72.50
2.60
Oasis WAX — Protocol 1
%
1001: MRM of 5 Channels ES+
TIC2.55e7
3.262.52 3.16
2.60
3.08
ProteinPrecipitation 100% Phospholipids
0 50 100%
SPE Recovery
O
OH
H H
O
OH
OH
Prednisone
Valutazione del metodo Oasis 2x4 per la cefalexina
Scelta di adsorbente e protocollo ottimali per i composti neutri Esempio: prednisone nel plasma
[ ]16 [ ]17
METODOLOGIA
método oasis 2x4: demostración del concepto
Per dimostrare la semplicità, la logica e l'efficacia del metodo Oasis 2x4, sono stati preparati cinque campioni di plasma di ratto, ciascuno contenente uno dei seguenti analiti:
n Imipramina, una base – pKa dell’acido coniugato = 9,4
n Ibuprofen, un acido – pKa = 5,2
n Acido decanosulfonico, un acido forte – pKa < 0,5
n Valetamato, un’ammina quaternaria (base forte) – pKa dell’acido coniugato > 12
n Prednisone, un composto neutro
Ciascun campione di plasma è stato diluito (1/1, v/v) e acidificato con acido fosforico (4% in acqua). Le rispettive aliquote sono state quindi analizzate impiegando il protocollo e l'adsorbente a modalità mista a scambio ionico Oasis indicato dal metodo Oasis 2x4 per il corrispondente tipo di analita. Per determinare i recuperi SPE è stata utilizzata l’analisi LC/MS/MS.
L’analita neutro è stato analizzato su tutti e quattro gli adsorbenti, come indicato nella pagina precedente. Tra i quattro metodi disponibili, l'adsorbente Oasis MCX con il protocollo 1 si è dimostrato superiore per la rimozione di quasi tutti i fosfolipidi, eliminando quindi la principale fonte di effetti della matrice, un fattore noto di soppressione ionica, perdita di sensibilità e quantificazione inaccurata nel caso delle analisi LC/MS.
L'impiego della combinazione consigliata di adsorbente/protocollo del metodo Oasis 2x4 ha consentito di ottenere recuperi praticamente quantitativi ed eccellente purezza per ciascuno degli analiti ionici o ionizzabili utilizzati nel test. I risultati di questo esperimento sono mostrati nelle seguenti quattro figure.
MRM ES+281.2 > 85.95
4.16e6
Oasis MCX
SPE Recovery: 108%n=4, 2–18% RSD
Imipramine [pKa = 9.4]
pKa <1
1 3 5 Min0
3.19
For BasespKa 2–10:
Use Oasis MCX
Protocol 1
Imipramine
N
N
Oasis WAX
1 3 5 min0
2.71
MRM ES+221.1 > 79.8
2.85e3
SPE Recovery: 94%n=8, 3–6% RSD
Decanesulfonic acid [pKa <0.5]
pKa ~6
For Strong AcidspKa < 1:
Use Oasis WAX
Protocol 1
Decanesulfonicacid
SO
O O– Na+
Oasis MAX
SPE Recovery: 100%n=6, 6–13% RSD
pKa ~18
Ibuprofen [pKa = 5.2]
MRM ES+205 > 161
1.34e4
1 3 5 min0
2.63
For AcidspKa 2–8:
Use Oasis MAX
Protocol 2
Ibuprofen
OH
O
Oasis WCX
MRM ES+306.2 > 163
2.10e6
1 3 5 min0
2.71
pKa ~5SPE Recovery: 106%
n=4, 9–13% RSD
Valethamate [pKa >12]
For Strong BasespKa > 10:
Use Oasis WCX
Protocol 2
Valethamate
ON+
O Br–
Test con il metodo Oasis 2x4 su MCX: isolamento base
Test con il metodo Oasis 2x4 su WAX: isolamento acido forte
Test con il metodo Oasis 2x4 su MAX: isolamento acido
Test con il metodo Oasis 2x4 su WCX: isolamento base
[ ]18 [ ]19
METODOLOGIA
Removes interferingacids [unionized] and
neutral compounds andacidic interferences
Locks ionized drug onstrong cation-exchangesites; removes proteins
and salts
Weak base removestertiary and
aromatic amines
Wash 3:1.5 mL 2.5% TEA in CH3OH
Wash 2:2 mL 100% CH3OH
Elute: 2 mL 5% NH4OH in CH3OH
Wash 1:2 mL 5% CH3OH in 0.1 N HCI
Load:10 mL spiked urine
(acidified with 100 µL 5 N HCI)
3b: mEtodologia ot t imizzata oaSiS 2X4
L'ottimizzazione del metodo Oasis 2x4 su adsorbenti in modalità mista (MCX, MAX, WCX, WAX) sfrutta l'intero potenziale di due diversi meccanismi di separazione cromatografica: fase inversa e scambio ionico. Le variazioni di pH sono utilizzate per manipolare i rispettivi stati di ionizzazione dei siti di scambio ionico sull'adsorbente e delle frazioni acide o basiche degli analiti e delle specie interferenti. In questo modo, la ritenzione può essere condotta in maniera selettiva tramite interazioni idrofobe o ioniche. Allo stesso tempo, la concentrazione del solvente organico viene modificata per perfezionare l'eluizione in base alle caratteristiche idrofobe
relative. Ciò consente di ottenere estratti più puri che riducono gli effetti della matrice, migliorano la sensibilità e riducono la variabilità del metodo analitico.
Gli esempi che seguono dimostrano come l'utilizzo di semplici studi di lavaggio-eluizione, nei quali la percentuale di solvente organico viene variata in maniera sistematica, permette di determinare la composizione ottimale delle fasi mobili SPE per i processi di lavaggio ed eluizione selettivi. Esperimenti simili possono essere ideati per altre variabili quali il pH o la forza ionica.
Un secondo esempio illustra gli straordinari vantaggi di un metodo Oasis MCX ottimizzato per la determinazione delle metanfetamine nelle urine. È stato utilizzato uno studio di lavaggio-eluizione per individuare la concentrazione ottimale di trietilammina (TEA) per la soluzione di lavaggio 3 (sotto a sinistra). Ciò ha consentito di
rimuovere in maniera selettiva le interferenze causate dalle ammine terziarie e aromatiche. Come indicato nei dati LC/UV (sotto a destra), sono stati ottenuti eccellenti valori di deviazione standard relativa per la determinazione quantitativa degli analiti amminici primari e secondari.
3b–1: metodo oasis mcX 2x4 — ottimizzato per le basiQuando sono necessarie la massima selettività e sensibilità per i composti basici [pKa 2–10] per ottenere i più bassi limiti di rivelazione (LOD) e quantificazione (LOQ), si consiglia l'ottimizzazione del protocollo 1. Come esempio, è stato effettuato uno studio di lavaggio-eluizione per determinare i
parametri ottimali di ritenzione ed eluizione dell'imipramina su Oasis MCX (sotto a sinistra). Successivamente, i dati sperimentali ottenuti sono stati usati per ottimizzare un metodo selettivo Oasis MCX SPE (sotto a destra) al fine di rimuovere le interferenze causate da composti neutri, acidi e basi.
Analisi delle urine con Oasis MCX: anfetamina e metanfetamina
Metodo Oasis MCX ottimizzato per l'imipramina
Basic drug is loaded inionized [or neutral] formif sample was pretreated
with acid [or base]
Removes interferingacids [unionized] and
neutral compounds andacidic interferences
Basic analyte iseluted; hydrophobicbasic interferences
are retained
Neutralizes bases;removes more polarbasic interferences
Condition/Equilibrate:1 mL CH3OH/H2O
Load sample:1 mL plasma or urine
Wash 1:1 mL 2% HCOOH
Wash 3:1 mL 5% NH4OH in CH3OH/H2O 55/45
Wash 2:1 mL 100% CH3OH
Elute: 1 mL 5% NH4OH in CH3OH/H2O 95/5
Locks ionized drug onstrong cation-exchangesites; removes proteins
and salts
N
N
Imipramina
Maximum % Organic Wash
Indicates Peak Areaof Analyte in LC Analysisof Eluate
20% 30% 40% 50% 60% 70% 80% 90% 100%10%
[% CH3OH in H2O] : [conc. NH4OH] 95:5 v/v
Experiment for Oasis MCX 96-Well Plate 30 mg
10
0
20 30 40 50 60 70 80 90 100
Minimum % Organic Elute
% CH3OH in H2O
4 µg/mL n=6 Recovery RSD1. Amphetamine 96.8% 1.35%2. Methamphetamine 90.4% 4.01%3. Phentermine (I.S.)* — —* Internal Standard
0.00
0.01
AU
0 4 62
1 23
Blank withoutTEA Wash
Blank with2.5% TEA Wash
Spiked Samplewith 2.5% TEA Wash
Amphetamine Methamphetamine Phentermine
NH 2HN NH 2
Studio lavaggio-eluizione
Metodo Oasis MCX ottimizzato per la quantificazione delle metanfetamine nelle urine
[ ]18 [ ]19
METODOLOGIA
Experiment for Oasis WAX 96-Well Plate 30 mg
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
% CH3OH in H2O
Maximum % Organic Wash
Indicates Peak Areaof Analyte in LC Analysisof Eluate
20% 30% 40% 50% 60% 70% 80% 90% 100%10%
[% CH3OH in H2O] : [conc. NH4OH] 95/5 v/v
0
Minimum % Organic Elute
10% 20% 30% 40% 50% 60% 70% 80% 90% 100%
Experiment for Oasis MAX 96-Well Plate 30 mg
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Indicates Peak Areaof Analyte in LC Analysisof Eluate
[% CH3OH in H2O] : [conc. HCOOH] 98/2 v/v
0
Maximum % Organic Wash
Minimum % Organic Elute
% CH3OH in H20
Studio lavaggio-eluizione
Studio lavaggio-eluizione
Metodo Oasis WAX ottimizzato per l'acido decanosulfonico
3b–3: metodo oasis maX 2x4 — ottimizzato per gli acidi
Quando sono necessarie la massima selettività e sensibilità per i composti acidi (pKa 2-8) per ottenere i più bassi limiti di rivelazione (LOD) e quantificazione (LOQ), si consiglia l'ottimizzazione del protocollo 2. Come esempio, è stato effettuato uno studio di lavaggio-eluizione per determinare i parametri ottimali di
ritenzione ed eluizione dell'ibuprofen su Oasis MAX (sotto a sinistra). Successivamente, i dati sperimentali ottenuti sono stati usati per ottimizzare un metodo selettivo Oasis MAX SPE (sotto a destra) al fine di rimuovere le interferenze causate da composti neutri, acidi e basi.
Locks ionized analyteon strong anion-exchange
sites; removesproteins and salts
Neutralizes acids;removes more polaracidic interferences
Acidic drug is loaded inionized [or neutral] formif sample was pretreated
with base [or acid]
Removes interferingbases [unionized] and
neutral compounds
Acidic analyte is eluted;more hydrophobic acidic
interferences are retained
Condition/Equilibrate:1 mL CH3OH/H2O
Load sample:1 mL plasma or urine
Wash 1:1 mL 5% NH4OH
Wash 3:1 mL 2% HCOOH in CH3OH/H2O 45/55
Wash 2:1 mL 100% CH3OH
Elute: 1 mL 2% HCOOH in CH3OH/H2O 90/10
Ionizes weak anion-exchange sites to
lock on analytes; removesproteins and salts
Neutralizes anion-exchange sites; removes
more polar stronglyacidic interferences
Removes interferingbases [ionized] and neutral
compounds [includingunionized acids]
Strongly acidic analyte iseluted; more hydrophobic
acidic interferencesare retained
Condition/Equilibrate:1 mL CH3OH/H2O
Load sample:1 mL plasma or urine
Wash 1:1 mL 2% HCOOH
Wash 3:1 mL 5% NH4OH in CH3OH/H2O 25/75
Wash 2:1 mL 100% CH3OH
Elute: 1 mL 5% NH4OH in CH3OH/H2O 80/20
3b–2: metodo oasis WaX 2x4 — ottimizzato per gli acidi forti
Quando sono necessarie la massima selettività e sensibilità per gli acidi forti (pKa <1) per ottenere i più bassi limiti di rivelazione (LOD) e quantificazione (LOQ), si consiglia l'ottimizzazione del protocollo 1. Come esempio, è stato effettuato uno studio di lavaggio-eluizione per determinare i parametri ottimali di
ritenzione ed eluizione dell'acido decanosulfonico su Oasis WAX (sotto a sinistra). Successivamente, i dati sperimentali ottenuti sono stati usati per ottimizzare un metodo selettivo Oasis WAX (sotto a destra) al fine di rimuovere le interferenze causate da composti neutri, acidi e basi.
Metodo Oasis MAX ottimizzato per l'ibuprofen
S O
O O – Na +
Acido decanosulfonico
OH
O
Ibuprofen
[ ]20 [ ]21
METODOLOGIA
Metodo Oasis WCX ottimizzato per il valetamato
3b–4: metodo oasis WcX 2x4 — ottimizzato per le basi forti
Quando sono necessarie la massima selettività e sensibilità per le basi forti, quali le ammine quaternarie (pKa >10) per ottenere i più bassi limiti di rivelazione (LOD) e quantificazione (LOQ), si consiglia l'ottimizzazione del protocollo 2. Come esempio, è stato effettuato uno studio di lavaggio-eluizione per determinare i parametri ottimali
di ritenzione ed eluizione del valetamato su Oasis WCX (sotto a sinistra). Successivamente, i dati sperimentali ottenuti sono stati usati per ottimizzare un metodo selettivo Oasis WCX SPE (sotto a destra) al fine di rimuovere le interferenze causate da composti neutri, acidi e basi.
Ionizes weak cation-exchange sites to lock on
analytes; removesproteins and salts
Neutralizes cation-exchange sites; removes
more polar stronglybasic interferences
Removes interferingacids [ionized] and neutral
compounds [includingunionized bases]
Strongly basic analyte iseluted; more hydrophobic
basic interferencesare retained
Condition/Equilibrate:1 mL CH3OH/H2O
Load sample:1 mL plasma or urine
Wash 1:1 mL 5% NH4OH
Wash 3:1 mL 2% HCOOH in CH3OH/H2O 25/75
Wash 2:1 mL 100% CH3OH
Elute: 1 mL 2% HCOOH in CH3OH/H2O 75/25
O N +
O Br –
Veletamate
Experiment for Oasis WCX 96-Well Plate 30 mg
% CH3OH in H2O
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
10% 20% 30% 40% 50% 60% 70% 80% 90% 100%
Indicates Peak Areaof Analyte in LC Analysisof Eluate
[% CH3OH in H2O] : [conc. HCOOH] 98/2 v/v
0
Maximum % Organic Wash
Minimum % Organic Elute
Studio lavaggio-eluizione
Il solvente di eluizione del comprovato metodo Oasis 2x4 è ottimizzato per soddisfare il requisito eluotropico del volume di eluizione ridotto. Il metanolo è un valido solvente di eluizione generico, ma spesso non è sufficientemente forte per i volumi di eluizione di 25 µL. Il solvente di eluizione consigliato per l'utilizzo con le piastre μElution deve possedere una forza eluotropica sufficientemente elevata per eluire completamente gli analiti in volumi ridotti ed essere compatibile con una serie di analiti distinti.
Il solvente di eluizione consigliato per il metodo Oasis 2x4 ottimizzato per le piastre µElution è una miscela CH3CN/CH3OH 60:40 con un modificatore. Questo solvente è stato scelto come punto di partenza in quanto soddisfa ogni criterio precedentemente citato.
Le fasi indicate nel seguente diagramma permettono di ottenere recuperi elevati e gli estratti più puliti:
n Caratterizzazione dell’analita (composto neutro, acido o base, pKa).
n Scelta di uno dei quattro adsorbenti Oasis.n Applicazione del protocollo indicato (1 o 2).
n Determinazione dei recuperi SPE mediante analisi LC.
3c: mEtodo oaSiS 2X4 ot t imizzato PEr P iaSt rE µElut ion
Neutrals
For Bases pKa 2-10:
Use Oasis MCX
For Acids pKa 2-8:
Use Oasis MAX
For Strong Bases pKa >10:
Use Oasis WCX
For Strong Acids pKa <1:
Use Oasis WAX
Apply Protocol 2
Prepare Sample
Condition/EquilibrateLoad Sample
5% NH4OH
Elute 1:100% CH3OH
Elute 2: 2% HCOOH in 60:40 CH3CN:CH3OH
Prepare Sample
Condition/EquilibrateLoad Sample
Wash: Wash:2% HCOOH
Elute 1:100% CH3OH
Elute 2: 5% NH4OH in 60:40 CH3CN:CH3OH
Base Strong Acid Acid Strong Base
Apply Protocol 1
[ ]20 [ ]21
METODOLOGIA
metodo oasis 2x4 – Prova della validità
Studio di recupero:
Per dimostrare la semplicità, la logica e l'efficacia del metodo Oasis 2x4, sono stati preparati cinque campioni di plasma di ratto, in ognuno dei quali è stato iniettato uno degli analiti di test caratterizzati in precedenza e riportati di seguito:
— Imipramina: pKa = 9,4 (base)
— Ibuprofen: pKa = 5,2 (acido)
— Valetamato: pKa >12 (ammina quaternaria)
— Acido nonafluoropentanoico: pKa <0,5 (acido forte)
— Prednisone: composto neutro
Ciascun campione di plasma è stato diluito (1:1, v:v) e acidificato con acido fosforico (4% in acqua). Le rispettive aliquote sono quindi state analizzate impiegando il protocollo e l'adsorbente a modalità mista a scambio ionico Oasis indicato dal metodo Oasis 2x4 per il corrispondente tipo di campione. Per determinare i recuperi SPE è stata utilizzata l’analisi LC/MS/MS. L'analita neutro è stato analizzato su ciascuno dei quattro adsorbenti utilizzati.
Analiti iniettati nel plasma di ratto
% S
PE R
ecov
ery
Prednisone (n)Imipramine (b)
Prednisone (n)Nonafluoropentanoic Acid (sa)Prednisone (n)Ibuprofen (a)
Prednisone (n)Valethamate (sb)
Elute 1: CH3OH
Elute 2: 60:40 CH3CN/CH3OH + modifier
0
20
40
60
80
100
Oasis MCX Oasis MAX Oasis WCX Oasis WAX
Protocol 1 Protocol 2
Acido nonafluoropentanoico(SA) pKa <0,5, 200 ng/mL
Ibuprofen (A)(SA) pKa = 5,2, 200 ng/mL
Imipramina (B)(SA) pKa = 9,4, 2 ng/mL
N
N
HO
O
FFFF
F F FF
FOH
O
Valetamato (QA)(SA) pKa >12, 2 ng/mL
ON+
O Br–
Prednisone (N)10 µg/mL
O
OH
H H
O
OH
OH
Metodo Oasis HLB generico per acidi/composti neutri/basi
[e.g., acidifyto disrupt drug–protein binding]
[Optional; e.g.,often not required inµElution plate format]
Prepare Sample(typically acidify)
Condition/Equilibrate:CH3OH/H2O
Load sample solution
Wash:CH3OH/H2O 5/95
Elute:CH3OH
Evaporate and Reconstitute(optional)
3d: mEtodo oaSiS Hlb gEnErico
Nel 1996 Waters ha introdotto Oasis HLB, il primo adsorbente SPEpolimerico a bilancio idrofilo-lipofilo (HLB). Il design mirato della sua struttura chimica e della morfologia delle particelle (vedere pagina 6), ha consentito di incrementare significativamente le prestazioni SPE.
Per isolare una serie di composti acidi, basici e neutri, è consigliabile utilizzare un metodo Oasis HLB generico per eliminare i componenti della matrice non ritenuti (per esempio sali, zuccheri, lipidi polari, proteine) e ottenere al tempo stesso la ritenzione riproducibile, e quindi l'eluizione, degli analiti acidi, basici e neutri caratterizzati da un'ampio spettro di polarità cromatografica.
Quando si trasferiscono i metodi con fase legata C18, tenere presente i seguenti tre vantaggi esclusivi offerti da Oasis HLB:
n La maggior capacità (area superficiale 2–3 volte superiore) comporta l'utilizzo di una quantità proporzionalmente minore di adsorbente. Possibile riduzione del letto e dei volumi di eluizione. I dispositivi di formato ridotto sono più efficienti.
n La maggior capacità di ritenzione (3–5 volte superiore) riduce la perdita di analita, incrementa i fattori di arricchimento e permette di perfezionare le fasi del gradiente migliorando la selettività delle sequenze di lavaggio ed eluizione. Gli analiti particolarmente idrofobi possono richiedere solventi di eluizione più forti. I composti polari come i fenoli (k superiore di oltre
9 volte), che interagiscono tramite legame a idrogeno con le frazioni amidiche della struttura HLB, potrebbero richiedere un solvente protico (per esempio, metanolo) anziché un solvente aprotico (per esempio, acetonitrile) per garantire un'eluizione efficiente.
n L'eccellente stabilità nell'intervallo di pH compreso tra 0 e 14 e la compatibilità con un ampio spettro di solventi organici facilita lo sviluppo di metodi robusti e affidabili.
[ ]22 [ ]23
METODOLOGIA
1
3
2
SampleBlank
SampleBlank
SampleBlank
1
3
20.004 AU 0.004 AU0.004 AU
12
3
10 min8642010 min8642010 min86420
Peak Identification:Peak 1: NorverapamilPeak 2: VerapamilPeak 3: Methoxyverapamil [I.S.]
Oasis HLB Generic Method
Prepare sample solution[acidified to disrupt protein binding]
Condition/Equilibrate:1 mL CH3OH/H2O
Wash 1:1 mL 5% CH3OH
Load sample:1 mL plasma
Elute:1 mL 100% CH3OH
Modified Oasis HLB Generic Method
Prepare sample solution[acidified to disrupt protein binding]
1 mL CH3OH/H2O
Wash 1:1 mL 5% CH3OH
Load sample:1 mL plasma
Wash 2:1 mL 5% CH3OH with 2% NH4OH
Elute:1 mL 65% CH3OH with 2% CH3COOH
Optimized Oasis HLB Method
Prepare sample solution[acidified to disrupt protein binding]
1 mL CH3OH/H2O
Wash 1:1 mL 5% CH3OH with 2% CH3COOH
Load sample:1 mL plasma
Wash 3: 1 mL 65% CH3OH with 2% NH4OH
Wash 2:1 mL 5% CH3OH with 2% NH4OH
Elute:1 mL 65% CH3OH with 2% CH3COOH
Condition/Equilibrate: Condition/Equilibrate:
Come un metodo otttimizzato incide sulla cromatografia: verapamil nel plasma
0
40
0 2 4 6 8 10 12 14
0
pH
Recommended pH range for silica
Recommended pH range for Oasis® Sorbents
32
8
16
24 Neutrals
Base [BH+]Acid [A–]
Base [B]
Acid Retained Base Retained
Low Retention for Base Low Retention for Acid
pKa = 4.8
pKa = 9.0
Acid [HA]
Rete
ntio
n Fa
ctor
k
Teoria: Grafico del fattore di ritenzione (k) / pH per acidi, basi e composti neutri
2% CH3COOH Modified Wash 2% NH4OH Modified Wash
% MeOH
Maximum% Methanol Wash
Maximum% Methanol Wash
Minimum% Methanol Elution
0
0 20 40 60 80 100% MeOH
0
0 20 40 60 80 100
1
2
3
1
2
3
1. Norverapamil 2. Verapamil
3. Methoxyverapamil
indicatespeak area of analytein LC analysis of eluate
H 3CO
H 3CO
CN HN OCH 3
OCH 3
H 3CO
H 3CO
CNN OCH 3
OCH 3
H 3CO
H 3CO
CNN OCH 3
OCH 3
OCH 3
Studio di lavaggio-eluizione per verapamil e metaboliti nel plasma
3E: mEtodologia ot t imizzata oaSiS HlbPer ottimizzare i metodi Oasis HLB è possibile applicare i principi chimici e cromatografici. La selettività viene incrementata regolando il pH e il rapporto di solvente organico con acqua nella fase mobile, per manipolare la ritenzione.
Se gli analiti o le specie interferenti sono ionizzabili, i rispettivi ioni altamente polari possono essere eluiti nelle fasi mobili deboli. Cambiando il pH, vengono convertiti alla forma neutra e ritenuti principalmente dalla forza della loro interazione idrofoba con la superficie dell’adsorbente. Per una separazione riuscita sono necessarie fasi mobili più forti, con concetrazioni superiori di solvente organico.
Gli studi pubblicati dai chimici Waters dimostrano chiaramente i benefici di un tale processo bidimensionale (2D) su Oasis HLB. Le figure seguenti illustrano la teoria della ritenzione, gli studi di lavaggio-eluizione per il verapamil e per due suoi metaboliti e i successivi miglioramenti di selettività ottenuti tramite l'ottimizzazione del metodo Oasis HLB.
[ ]22 [ ]23
METODOLOGIA
3f: mEtodologia avanzata oaSiS
La linea di adsorbenti Oasis esclusivi, brevettati e disponibili in formati flessibili e le strategie di sviluppo di metodi Waters semplificano e ottimizzano le tradizionali applicazioni SPE. Questi prodotti, inoltre, consentono di soddisfare le nuove
esigenze di preparazione dei campioni, sia nel caso delle applicazioni all'avanguardia sia per i problemi SPE ormai considerati insolubili.
Nel caso delle matrici molto complesse, il metodo ottimale per la purificazione e l'isolamento consiste nell'utilizzo combinato di metodi di separazione ortogonali (per esempio fase inversa e scambio ionico). Le singole cartucce possono essere collegate con un adattatore. Pianificando attentamente la compatibilità della fase mobile e le sequenze di modalità di ritenzione, l'eluato finale ottenuto dalla prima cartuccia può essere caricato direttamente nella seconda. Quindi, dopo aver eliminato la prima cartuccia, la seconda può essere lavata ed eluita con volumi di solvente appropriati. L’uso di una prima cartuccia più grande rimuove le interferenze dalla matrice. Una seconda cartuccia più piccola concentra ulteriormente l'analita migliorando il fattore di arricchimento.
Gli omogenati dei tessuti animali sono matrici complesse contenenti una serie di specie interferenti endogene che possono sovraccaricare la capacità di scambio ionico e di fase inversa di un adsorbente SPE. Altre difficoltà si presentano quando gli analiti, per esempio gli antibiotici fluorochinolonici, sono anfoteri. Se confrontato con una purificazione a singola cartuccia, il metodo tandem Oasis MAX–MCX è ottimale per superare con successo tali difficoltà. I cromatogrammi a destra illustrano l'isolamento selettivo e la precisa determinazione di ciprofloxacina ed enrofloxacina a livelli sub-ppb.
SPE ortogonale utilizzando due cartucce — la metodologia più efficace
HCl convertsamphoteric analytesto cations.They elute from MAXinto lower MCX bed wherethey are retained. Acidic interferencesare neutralized by HCl and washedout of both cartridges by CH3OH.
After NaOH treatment,MAX retains amphotericanalytes as anions.Wash steps remove basicand neutral matrix interferences.
Load:5 mL of prepared sample
Condition/Equilibrate:1 mL CH3OH/1 mL 5 N NaOH;
1 mL H2O
Wash 1:1 mL 5% NH4OH in H2O
Wash 2:1 mL CH3OH
Stage 1:Condition, Load, and Wash
Oasis MAX6 cc 150 mg Cartridge
Condition:1 mL CH3OH
Stage 2:ConditionOasis MCX
1 cc 30 mg Cartridge
Elute & Wash:2 mL 0.2 N HCl in CH3OH
Stage 3:Attach MCX Cartridge
to outlet of MAX Cartridge;Elute from MAX into MCX
500µL of 10% NH4OH in CH3OH
Wash:2 mL of CH3OH
Elute:
Neutralize eluate with HCOOHand bring to 1 mL withbuffered mobile phase.
Stage 4:Discard MAX Cartridge;
Wash & EluteMCX Cartridge
Smaller bed in 1-cc MCXCartridge enables elutionin a smaller volume,increasing enrichment factor.
MCX
Car
trid
ge
MCX
Car
trid
ge
MA
X Ca
rtri
dge
MCX
Car
trid
geM
AX
Cart
ridg
e
Ciprofloxacin
CiprofloxacinpKa of acid ~ 5pKa of base ~ 8–9
Enrofloxacin
Enrofloxacin
0 8 16 24 min
0 8 16 24 min
Chromatogram 2: Result from Tandem Oasis MAX + MCX
Chromatogram 1: Result from a single Oasis MAX Cartridge
N
F
HNN
O
OH
O
N
F
NN
O
OH
O
Metodo Oasis MAX–MCX tandem per gli antibiotici di fluorochinolina anfoteri
Risultati con il metodo Oasis MAX – MCX tandem per gli antibiotici di fluorochinolone nel rene di manzo – con standard interno di 1 µg/kg
[ ]24 [ ]25
INFORMAzIONI SUGLI ORDINI
Prodotti oasis Hlb per l'estrazione dei campioni Prodotti oasis mcX (scambio cationico) per l'estrazione dei campioni
DescrizioneDimensioni particelle
Quantità N. catalogo
Cartuccia Oasis HLB 1 cc/10 mg 30 µm 100/scatola 186000383
Cartuccia Oasis HLB 1 cc/30 mg 30 µm 100/scatola WAT094225
NUOVA cartuccia Oasis HLB 1 cc/30 mg 30 µm 1000/scatola 186003908
Cartuccia senza flangia Oasis HLB 1 cc/30 mg 30 µm 100/scatola 186001879
Cartuccia Oasis HLB conadattatore Gilson ASPC
1 cc/10 mg 30 µm 500/scatola 186000988
Cartuccia Oasis HLB conadattatore Gilson ASPC
1 cc/30 mg 30 µm 500/scatola WAT058882
Cartuccia Oasis HLB 3 cc/60 mg 30 µm 100/scatola WAT094226
Cartuccia senza flangia Oasis HLB 3 cc/60 mg 30 µm 100/scatola 186001880
Cartuccia Oasis HLB conadattatore Gilson ASPC
3 cc/60 mg 30 µm 500/scatola WAT058883
Cartuccia Oasis HLB 6 cc/200 mg 30 µm 30/scatola WAT106202
Oasis HLB 3 cc/400 mg 60 µm 100/scatola 186003849
NUOVA cartuccia Oasis HLB 3 cc/540 mg 60 µm 100/scatola 186004134
Cartuccia senza flangia Oasis HLB 3 cc/540 mg 60 µm 100/scatola 186003852
Cartuccia Oasis HLB 6 cc/150 mg 30 µm 30/scatola 186003365
Cartuccia Oasis HLB 6 cc/150 mg 60 µm 30/scatola 186003379
Cartuccia Oasis HLB 6 cc/500 mg 60 µm 30/scatola 186000115
Cartuccia Oasis HLB 12 cc/500 mg 60 µm 20/scatola 186000116
Cartuccia Oasis HLB 20 cc/1 g 60 µm 20/scatola 186000117
Cartuccia Oasis HLB 35 cc/6 g 60 µm 10/scatola 186000118
Cartuccia Oasis HLB Plus 225 mg 60 µm 50/scatola 186000132
Cartuccia Oasis HLB Vac RC 20 cc/30 mg 30 µm 50/scatola 186000382
Cartuccia Oasis HLB Vac RC 20 cc/60 mg 30 µm 50/scatola 186000381
Cartuccia in vetro Oasis HLB 5 cc/200 mg 60 µm 30/scatola 186000683
Cartuccia Oasis HLB Prospekt 2/Symbiosis* 1,0 x 10 mm 30 µm 96/scatola 186001196
Cartuccia Oasis HLB Prospekt 2/Symbiosis* 2,0 x 10 mm 30 µm 96/scatola 186003925
Recipiente da 30 cc per cartucce Oasis 48/scatola WAT011390
Recipiente da 60 cc per cartucce Oasis 12/scatola WAT024659
Adattatore per recipiente per cartucce da 1 cc, 3 cc, 6 cc 10/scatola WAT054260
Adattatore per recipiente per cartucce da 12 cc, 20 cc, 35 cc 10/scatola WAT048160
Adattatore per recipiente per cartucce da 5 cc, Teflon 10/conf. 405000934
Colonna Oasis HLB 2,1 x 20 mm 5 µm 1/conf. 186002034
Colonna Oasis HLB 3,0 x 20 mm 5 µm 1/conf. 186002037
Colonna Oasis HLB 3,9 x 20 mm 5 µm 1/conf. 186002040
Colonna-cartuccia Oasis HLB 3,9 x 20 mm 5 µm 1/conf. 186001413
Colonna Oasis HLB 4,6 x 20 mm 5 µm 1/conf. 186002043
Colonna Oasis HLB 2,1 x 20 mm 15 µm 1/conf. 186002035
Colonna Oasis HLB 3,0 x 20 mm 15 µm 1/conf. 186002038
Colonna Oasis HLB 3,9 x 20 mm 15 µm 1/conf. 186002041
Colonna-cartuccia Oasis HLB 3,9 x 20 mm 15 µm 1/conf. 186001414
Colonna Oasis HLB 4,6 x 20 mm 15 µm 1/conf. 186002044
Colonna Oasis HLB 2,0 x 15 mm 25 µm 1/conf. 186001792
Colonna Oasis HLB 2,1 x 20 mm 25 µm 1/conf. 186002036
Colonna-cartuccia Oasis HLB 2,1 x 20 mm 25 µm 1/conf. 186000706
Colonna Oasis HLB 3,0 x 20 mm 25 µm 1/conf. 186002039
Colonna Oasis HLB 3,9 x 20 mm 25 µm 1/conf. 186002042
Colonna Oasis HLB 4,6 x 20 mm 25 µm 1/conf. 186002045
Kit di supporto per colonna-cartuccia da 2,1 x 20 mm 1/conf. 186000262
Kit di supporto per colonna-cartuccia da 3,9 x 20 mm 1/conf. WAT046910
Raccordo per colonna di estrazione 1/conf. WAT082745
Kit per filtro precolonna in linea 1/conf. WAT084560
Filtri 5/conf. WAT005139
Guarnizioni in acciaio 1/conf. WAT084567
Piastra Oasis HLB µElution 2 mg/96 pozzetti 30 µm 1/conf. 186001828BA
Piastra Oasis HLB 5 mg/96 pozzetti 30 µm 1/conf. 186000309
Piastra Oasis HLB 10 mg/96 pozzetti 30 µm 1/conf. 186000128
Piastra Oasis HLB 30 mg/96 pozzetti 30 µm 1/conf. WAT058951
Piastra Oasis HLB 60 mg/96 pozzetti 60 µm 1/conf. 186000679
* Da utilizzare con i sistemi Spark Holland Prospekt 2 e Symbiosis
DescrizioneDimensioni par-
ticelleQuantità N. catalogo
Cartuccia Oasis MCX 1 cc/30 mg 30 µm 100/scatola 186000252
Cartuccia senza flangia Oasis MCX 1 cc/30 mg 30 µm 100/scatola 186001881
Cartuccia Oasis MCX 1 cc/60 mg 60 µm 100/scatola 186000782
Cartuccia Oasis MCX 3 cc/60 mg 30 µm 100/scatola 186000254
Cartuccia senza flangia Oasis MCX 3 cc/60 mg 30 µm 100/scatola 186001882
Cartuccia Oasis MCX 3 cc/60 mg 60 µm 100/scatola 186000253
Cartuccia Oasis MCX 6 cc/150 mg 30 µm 30/scatola 186000256
Cartuccia Oasis MCX 6 cc/150 mg 60 µm 30/scatola 186000255
Cartuccia Oasis MCX 6 cc/500 mg 60 µm 30/scatola 186000776
Cartuccia Oasis MCX 20 cc/1 g 60 µm 20/scatola 186000777
Cartuccia Oasis MCX 35 cc/6 g 60 µm 10/scatola 186000778
Cartuccia Oasis MCX Plus 225 mg 60 µm 50/scatola 186003516
Cartuccia Oasis MCX Vac RC 20 cc/60 mg 30 µm 50/scatola 186000261
Cartuccia Oasis MCX Vac RC 20 cc/60 mg 60 µm 50/scatola 186000380Cartuccia Oasis MCX Prospekt 2/Symbiosis*
10 x 1 mm 30 µm 96/scatola 186002098
Colonna a collegamento diretto Oasis MCX
2,1 x 15 mm 30 µm 1/conf. 186002050
Colonna Oasis MCX 2,1 x 20 mm 30 µm 1/conf. 186002046
Colonna-cartuccia Oasis MCX 2,1 x 20 mm 30 µm 1/conf. 186002051
Colonna Oasis MCX 3,0 x 20 mm 30 µm 1/conf. 186002047
Colonna Oasis MCX 3,9 x 20 mm 30 µm 1/conf. 186002048
Colonna Oasis MCX 4,6 x 20 mm 30 µm 1/conf. 186002049
Piastra Oasis MCX µElution 96 pozzetti 30 µm 1/conf. 186001830BA
Piastra Oasis MCX 10 mg/96 pozzetti 30 µm 1/conf. 186000259
Piastra Oasis MCX 30 mg/96 pozzetti 30 µm 1/conf. 186000248
Piastra Oasis MCX 30 mg/96 pozzetti 60 µm 1/conf. 186000250
Piastra Oasis MCX 60 mg/96 pozzetti 60 µm 1/conf. 186000678
[ ]24 [ ]25
INFORMAzIONI SUGLI ORDINI
Kit per lo sviluppo dei metodi oasis
DescrizioneDimensioni par-
ticelleN. catalogo
Piastra per la selezione dell'adsorbente Oasis3 righe ciascuna:MCX, MAX, WCX, WAX
96 pozzetti 30 µm 186003249
NUOVA piastra per la µElution selezione dell'adsorbente OasisµElution, 3 righe ciascuna:MCX, MAX, WCX, WAX
96 pozzetti 30 µm 186004475
Kit di cartucce per la selezionedell'adsorbente-Oasis, 10 ciascuno:MCX, MAX, WCX, WAX
1 cc/30 mg 30 µm 186003463
Prodotti oasis maX (scambio anionico) per l'estrazione dei campioni
DescrizioneDimensioni
particelleQuantità N. catalogo
Cartuccia Oasis MAX 1 cc/30 mg 30 µm 100/scatola 186000366
Cartuccia senza flangia Oasis MAX 1 cc/30 mg 30 µm 100/scatola 186001883
Cartuccia Oasis MAX 3 cc/60 mg 30 µm 100/scatola 186000367
Cartuccia Oasis MAX 3 cc/60 mg 60 µm 100/scatola 186000368
Cartuccia senza flangia Oasis MAX 3 cc/60 mg 30 µm 100/scatola 186001884
Cartuccia Oasis MAX 6 cc/150 mg 30 µm 30/scatola 186000369
Cartuccia Oasis MAX 6 cc/150 mg 60 µm 30/scatola 186000370
Cartuccia Oasis MAX 6 cc/500 mg 60 µm 30/scatola 186000865
Cartuccia Oasis MAX Plus 225 mg 60 µm 50/scatola 186003517
Cartuccia Oasis MAX Vac RC 20 cc/30 mg 30 µm 50/scatola 186000372
Cartuccia Oasis MAX Vac RC 20 cc/60 mg 30 µm 50/scatola 186000371
Cartuccia Oasis MAX Vac RC 20 cc/60 mg 60 µm 50/scatola 186000378
Cartuccia Oasis MAX Prospekt 2/
Symbiosis*10 x 1 mm 30 µm 96/scatola 186002099
Colonna a collegamento diretto Oasis
MAX2,1 x 15 mm 30 µm 1/conf. 186002056
Colonna Oasis MAX 2,1 x 20 mm 30 µm 1/conf. 186002052
Colonna-cartuccia Oasis MAX 2,1 x 20 mm 30 µm 1/conf. 186002057
Colonna Oasis MAX 3,0 x 20 mm 30 µm 1/conf. 186002053
Colonna Oasis MAX 3,9 x 20 mm 30 µm 1/conf. 186002054
Colonna Oasis MAX 4,6 x 20 mm 30 µm 1/conf. 186002055
Piastra Oasis MAX µElution 2 mg/96 pozzetti 1/conf. 186001829
Piastra Oasis MAX 10 mg/96 pozzetti 30 µm 1/conf. 186000375
Piastra Oasis MAX 30 mg/96 pozzetti 30 µm 1/conf. 186000373
Piastra Oasis MAX 60 mg/96 pozzetti 30 µm 1/conf. 186001256
Piastra Oasis MAX 60 mg/96 pozzetti 60 µm 1/conf. 186001205
* Da utilizzare con i sistemi Spark Holland Prospekt 2 e Symbiosis
Prodotti oasis WcX (scambio cationico debole) per l'estrazione dei campioni
DescrizioneDimensioni particelle
Quantità N. catalogo
Cartuccia Oasis WCX da 1 cc 30 mg 30 µm 100/scatola 186002494
Cartuccia Oasis WCX da 3 cc 60 mg 30 µm 100/scatola 186002495
NUOVA cartuccia Oasis WCX da 6 cc 150 mg 30 µm 30/scatola 186002498
Cartuccia Oasis WCX da 1 cc 30 mg 60 µm 100/scatola 186002496
Cartuccia Oasis WCX da 3 cc 60 mg 60 µm 100/scatola 186002497
Cartuccia Oasis WCX Plus 225 mg 60 µm 50/scatola 186003518
Piastra Oasis WCX µElution 2 mg/96 pozzetti 30 µm 1/conf. 186002499
Piastra Oasis WCX a 96 pozzetti 10 mg/96 pozzetti 30 µm 1/conf. 186002501
Piastra Oasis WCX a 96 pozzetti 30 mg/96 pozzetti 30 µm 1/conf. 186002503
Cartuccia Oasis WCX Prospekt 2/Symbiosis* 1,0 x 10 mm 30 µm 96/scatola 186002892
Colonna Oasis WCX da 2,1 x 20 mm 30 µm 186002505
Colonna Oasis WCX da 3,9 x 20 mm 30 µm 186002507
Colonna Oasis WCX da 2,1 x 20 mm 5 µm 186002510
Colonna Oasis WCX da 3,9 x 20 mm 5 µm 186002512
Prodotti oasis WaX (scambio anionico debole) per l'estrazione dei campioni
DescrizioneDimensioni
particelleQuantità N. catalogo
Cartuccia Oasis WAX da 1 cc 30 mg 30 µm 100/scatola 186002489
Cartuccia Oasis WAX da 3 cc 60 mg 30 µm 100/scatola 186002490
Cartuccia Oasis WAX da 6 cc 150 mg 30 µm 30/scatola 186002493
Cartuccia Oasis WAX da 1 cc 30 mg 60 µm 100/scatola 186002491
Cartuccia Oasis WAX da 3 cc 60 mg 60 µm 100/scatola 186002492
Cartuccia Oasis WAX Plus 225 mg 60 µm 50/scatola 186003519
Piastra Oasis WAX µElution 96 pozzetti 30 µm 1/conf. 186002500
Piastra Oasis WAX a 96 pozzetti 10 mg/96 pozzetti 30 µm 1/conf. 186002502
Piastra Oasis WAX a 96 pozzetti 30 mg/96 pozzetti 30 µm 1/conf. 186002504
NUOVA piastra Oasis WAX a 96 pozzetti 60 mg 30 µm 1/conf. 186003915
Cartuccia Oasis WAX Prospekt 2/Symbiosis* 1,0 x 10 mm 30 µm 96/scatola 186002893
Colonna Oasis WAX da 2,1 x 20 mm 30 µm 186002508
Colonna Oasis WAX da 3,9 x 20 mm 30 µm 186002509
Colonna Oasis WAX da 2,1 x 20 mm 5 µm 186002511
Colonna Oasis WAX da 3,9 x 20 mm 5 µm 186002513
[ ]26
INFORMAzIONI SUGLI ORDINI
Descrizione Quantità N. catalogo
Stazione di estrazione per piastra Oasis a 96 pozzetti 1/scatola 186001831
Kit A per stazione di estrazione per piastra (comprende la stazione di estrazione per piastra, vassoio, lamina di tenuta e piastra di raccolta dei campioni da 350 µl)
WAT097944
Kit B per stazione di estrazione per piastra(come il kit A, con piastra di raccolta dei campioni da 1 ml) WAT097945
Kit C per stazione di estrazione per piastra(come il kit A, con piastra di raccolta dei campioni da 2 ml) WAT097946
Stazione di estrazione per piastra Stazione di estrazione per cartucce
Piastra Oasis µElution a 96 pozzetti
(richiede lo spaziatore della stazione)
Piastra Oasis a 96 pozzetti
(non richiede lo spaziatore)
Piastra di
raccolta
Spaziatore per piastra
µElution (incluso
nel kit della stazione) Collettore della piastra
di estrazione
186001831
Stazione di estrazione Waters
Descrizione N. catalogo
Stazione di estrazione Waters a 20 posti senza rack(include 20 punte di ago, 25 tappi e uno strumento di espulsione)
WAT200677
Stazione di estrazione Waters a 20 posti(fornita con rack per provette da 13 x 75 mm) WAT200606
Stazione di estrazione Waters a 20 posti(fornita con rack per provette da 13 x 100 mm) WAT200607
Stazione di estrazione Waters a 20 posti(fornita con rack per provette da 16 x 75 mm) WAT200608
Stazione di estrazione Waters a 20 posti(fornita con rack per provette da 16 x 100 mm) WAT200609
Pompa per vuoto per SPE
(include due vacuometri e regolatore di pressione)
Kit di guarnizioni per la
pompa per vuoto
accessori per stazione di estrazione per piastra
Descrizione Quantità N. catalogo
Vassoio eliminabile 25/scatola WAT058942
Piastra di raccolta dei campioni, 350 µl 50/scatola WAT058943
Piastra di raccolta dei campioni, 2 ml 50/scatola WAT058958
Lamina di tenuta e piastra di raccolta dei campioni da 96 pozzetti 50/conf. WAT058959
Pompa per vuoto (115 V 60 Hz) per SPE 725000417
Pompa per vuoto (240 V 50 Hz) per SPE 725000418
Kit di guarnizioni per la pompa pervuotoIl kit include: 2 guarnizioni in espanso 2 O-ring arancione
186003522
accessori per colonne e cartucce di estrazione
Descrizione Quantità N. catalogo
Kit di supporto per colonna-cartuccia da 2,1 x 20 mm 1/conf. 186000262
Kit di supporto per colonna-cartuccia da 3,9 x 20 mm 1/conf. WAT046910
Raccordo per colonna di estrazione 1/conf. WAT082745
Kit per filtro precolonna in linea 1/conf. WAT084560
Filtri 5/conf. WAT005139
Guarnizioni in acciaio 1/conf. WAT084567
Pompa per vuoto (115 V 60 Hz) per SPE 725000417
Pompa per vuoto (240 V 50 Hz) per SPE 725000418
Recipiente da 30 cc (per cartucce Oasis Plus, Light, Vac e Classic) 48/conf. WAT011390
Recipiente da 60 cc (per cartucce Oasis Plus, Light e Vac) 12/conf. WAT024659
Adattatore, Luer maschio-maschio (per cartucce Oasis Classic) 100/conf. WAT024310
Adattatore (per collegare il recipiente alle cartucce Oasis Vac da 1, 3 e 6 cc)
12/conf. WAT054260
Adattatore (per collegare il recipiente alle cartucce Oasis Vac da 12, 20 e 35 cc)
10/conf. WAT048160
[ ]26 [ ]27
Austria e area di esportazione europea (Europa centrale, meridionale e orientale, CSI e Medio Oriente) +43 1 877 18 07
Australia 61 2 9933 1777
Belgio 32 2 726 1000
Brasile 55 11 5094-3788
Canada 1 800 252 4752 x2205
Cina 86 21 6879 5888
CIS/Russia +7 495 3367000
Repubblica Ceca 420 2 617 1 1384
Danimarca 45 46 59 8080
Finlandia 09 5659 6288
Francia 33 1 30 48 72 00
Germania 49 6196 400600
Hong Kong 852 29 64 1800
Ungheria 36 1 350 5086
India e subcontinente indiano 91 80 2837 1900
Irlanda 353 1 448 1500
Italia 02 265 0983
Giappone 81 3 3471 7191
Corea 82 2 820 2700
Messico 52 55 5200 1860
Paesi Bassi 31 76 508 7200
Norvegia 47 63 84 60 50
Polonia 48 22 833 4400
Portorico 1 787 747 8445
Singapore 65 6273 1221
Spagna 34 93 600 9300
Svezia 46 8 555 11 500
Svizzera 41 56 676 70 00
Taiwan 886 2 2543 1898
Regno Unito 44 208 238 6100
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Luglio 2008, 720001692IT 2008 IH-PDF
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