Q.A. Moisés Méndez Ramírez

Bioquímica Experimental

2020-1

▪Transformación y Principio transformante

▪ Inducción de Competencia

▪ DNA puede intercambiarse entre bacterias por tres formas

▪ Conjugación

▪ Transducción

▪ Transformación

(Contacto Célula-Célula)

(Contacto Virus-Célula)

(No contacto)

Mecanismo de transferencia de material genético.

El organismo puede incorporar DNA del medio externo a su propio cromosoma por recombinación.

Frederick Griffiths (1928)

“Hay una sustancia química en las

células muertas que puede

transformar a las células vivas”

Streptococcus pneumoneae

Gram +

No móvil

Factores de patogenicidad:

Pili y CAPSULA

• “La transformación no ocurre sin

DNA”.

• “El DNA es el material genético

que se hereda a las células”

Ostwal Avery (1944)

▪ En otras palabras…

COMPETENCIA

▪ Estado en el que las bacterias son capaces de introducir DNA exógeno.

Puede ser inducida o natural a ciertas condiciones: nutricionales, reparación, evolutivos.

Haemophilus influenzae

Neisseria gonorrhoeae

Helicobater pylori

Bacillus subtilis

Streptococcus pneumoniae

G +

G -

▪ Electroporación

Exposición a campo eléctrico que crea poros artificiales.

(Glicerol: previene choque osmótico)

▪ Choque térmico

Incrementa permeabilidad de la membrana en presencia de iones (Ca2+)

Vector de clonación

Vehículo que permite introducir fragmentos de DNA de interés, puede auto-replicarse de

forma autónoma y combinarse con DNA de la célula huésped.

Un vector al cual se le ha insertado

DNA de interés se denomina Vector

recombinante

▪ Plásmidos (1-5 kb)

Se replican a lo largo de la vida de la celula

▪ Fago lambda (9-25 kb)

Se replican en ciclo lítico matando a la célula

▪ Cósmidos (35-50 kb)

Plásmido con secuencia de fago que permite empaquetar insertos largos de DNA

▪ Cromosomas de levaduras (>1000kb)

Contienen regiones de telómero y centrómero con largos insertos

Para usar un vector debe cumplir con tres características principales:

• Origen de replicación.

Marca el inicio de la replicación

• Sitio de Clonación Múltiple

Permite insertar la secuencia de interés

• Marcador de selección

Distingue a las células que poseen el vector

(resistencia AB, auxotrofías,

Transformación de E. coli

▪ Se obtiene mediante el cociente del número de células transformantes obtenidas (UFC) entre la cantidad de DNA empleado.

𝐸𝑓𝑖𝑐𝑖𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑡𝑟𝑎𝑛𝑠𝑓𝑜𝑟𝑚𝑎𝑐𝑖ó𝑛 =𝑛𝑜. 𝑇𝑟𝑎𝑛𝑠𝑜𝑓𝑟𝑚𝑎𝑛𝑡𝑒𝑠

𝐷𝑁𝐴 𝑎ñ𝑎𝑑𝑖𝑑𝑜∗𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑑𝑒 𝑟𝑒𝑎𝑐𝑐𝑖ó𝑛

𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑑𝑒 𝑝𝑙𝑎𝑞𝑢𝑒𝑜