Upload
others
View
13
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
i
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Pangkalan Bun, Kalimantan Tengah pada 02 September
1995, merupakan anak kedua dari Bapak Sugianto Zaman dan Ibu Suyatni. Penulis
menyelesaikan pendidikan di Sekolah Dasar Katholik Santa Maria Pangkalan Bun
(2001 – 2007), Sekolah Menengah Pertama Negeri 1 Arut Selatan (2007 – 2010), dan
Sekolah Menengah Atas Negeri 1 Pangakalan Bun (2010 – 2013).
Pada tahun 2013 penulis diterima sebagai mahasiswa di Fakultas Kedokteran
Hewan Universitas Udayana melalui jalur SBMPTN. Selanjutnya penulis melakukan
penelitian di Laboratorium Bioteknologi Balai Besar Veteriner (BBVET) Denpasar
dengan judul “Profil Pita Protein Plasma Anjing Kintamani Yang Dideteksi
Dengan Metode SDS-PAGE” sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana Kedokteran Hewan pada Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Udayana.
ii
ABSTRAK
Anjing kintamani bali merupakan plasma nutfah asli Indonesia. Anjing kintamani
telah diperjualbelikan hingga keluar negeri dengan harga mahal, sehingga dalam
perdagangannya diperlukan strategi untuk menentukan kualitas anjing tersebut. salah
satu metode yang akurat untuk menentukan status kesehatan anjing adalah dengan
SDS-PAGE (Sodium Dodecyl Sulphate Polyacrylamide Gel Electrophoresis). Melalui
uji tersebut dapat ditentukan jumlah pita protein, berat molekul dan juga fraksi protein
dalam plasma darah anjing kintamani. jumlah pita protein plasma anjing kintamani
betina umur > 1 tahun dan < 1 tahun berturut-turut antara 6 – 10 pita dan 6 – 9 pita,
jumlah pita protein plasma anjing kintamani jantan umur > 1 tahun dan < 1 tahun
berturut-turut antara 7 – 10 pita dan 4 – 10 pita. Berat molekul pita protein plasma
anjing kintamani betina berumur >1 tahun dan < 1 tahun berturut-turut 84,266 kDa;
66,478 kDa; 57,2633 kDa; 38,58 kDa; 29,69 kDa; 20,858 kDa; 18,64 kDa; 12,82 kDa;
9,61 kDa dan 9,034 kDa dan 107,318 kDa; 76,49 kDa; 59,822 kDa; 47,324 kDa; 0;
24,9433 kDa; 20,956 kDa; 13,384 kDa; 10,0975 kDa; dan 9,468 kDa. Berat molekul
pita protein plasma anjing kintamani jantan > 1 tahun dan < 1 tahun berturut-turut
69,142 kDa; 50,502 kDa; 41,105 kDa; 32,868 kDa; 26,81 kDa; 19,804 kDa; 17,806
kDa; 13,06 kDa; 9,9375 kDa; dan 9,63 kDa dan 82,4333 kDa; 56,378 kDa; 49,65 kDa;
35,885 kDa; 22,12 kDa; 21,6967 kDa; 18,43 kDa; 12,4533 kDa; 9,66 kDa; dan 9,3
kDa. Protein plasma anjing kintamani betina umur > 1 tahun dan < 1 tahun, dan anjing
kintamani jantan umur < 1 tahun terdiri dari 4 fraksi yaitu globulin β, albumin,
prealbumin dan Low Molecular Weight (LMW) Protein , sedangkan protein plasma
anjing kintamani jantan umur > 1 tahun terdiri dari 3 fraksi protein yaitu albumin,
prealbumin dan LMW protein.
Kata Kunci : Pita Protein, Anjing Kintamani Bali, Plasma Darah
iii
ABSTRACT
Kintamani bali dog is original germplasm of Indonesia. Kintamani dogs have
been trafficked to abroad with high prices, so in the trade required a strategy to
determine the quality of the dog. One of the most accurate methods to determine the
dog's health status is with SDS-PAGE (Sodium Dodecyl Sulphate Polyacrylamide Gel
Electrophoresis). Through these tests can be determined the number of protein bands,
molecular weight and also the protein fraction in the blood plasma dog kintamani. The
number of female protein bands of female dogs aged > 1 year and < 1 year in a row
between 6 - 10 bands and 6 - 9 bands, the number of plasma protein bands of kintamani
dogs of male > 1 year and < 1 year in a row between 7 – 10 bands and 4 - 10 bands.
Molecular weight of plasma bands of female dog kintamani aged > 1 year and < 1 year
consecutive 84.266 kDa; 66,478 kDa; 57.2633 kDa; 38.58 kDa; 29.69 kDa; 20,858
kDa; 18.64 kDa; 12.82 kDa; 9.61 kDa and 9,034 kDa and 107.318 kDa; 76.49 kDa;
59,822 kDa; 47,324 kDa; 0; 24,9433 kDa; 20,956 kDa; 13,384 kDa; 10,0975 kDa; And
9,468 kDa. Molecular weight of plasma protein band of male kintamani > 1 year and
< 1 year in a row 69,142 kDa; 50,502 kDa; 41,105 kDa; 32.868 kDa; 26.81 kDa; 19,804
kDa; 17,806 kDa; 13.06 kDa; 9.9375 kDa; And 9.63 kDa and 82.4333 kDa; 56,378
kDa; 49.65 kDa; 35.885 kDa; 22.12 kDa; 21.6967 kDa; 18.43 kDa; 12,4533 kDa; 9.66
kDa; And 9.3 kDa. Female kintamani dog plasma proteins > 1 year and < 1 year, and
male kintamani dog < 1 year old consist of 4 fractions of β globulin, albumin,
prealbumin and Low Molecular Weight (LMW) Protein, while plasma protein male
kintamani dog > 1 year consists of 3 protein fractions of albumin, prealbumin and
LMW protein.
Keyword: Protein Band, Balinese Kintamani Dog, Blood Plasm
iv
UCAPAN TERIMA KASIH
Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa atas segala berkat
rahmat dan karunia-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan penyusunan skripsi ini.
Penulisan skripsi dengan judul “Profil Pita Protein Plasma Anjing Kintamani Yang
Dideteksi Dengan Metode Sds-Page” diajukan untuk memenuhi salah satu syarat
memperoleh gelar Sarjana Kedokteran Hewan pada Fakultas Kedokteran Hewan
Universitas Udayana. Dalam penyusunan dan penulisan skripsi ini tidak terlepas dari
bantuan, bimbingan, serta dukungan dari berbagai pihak. Oleh karena itu, penulis
dengan tulus hati mengucapkan terimakasih kepada:
1. Bapak Dr. drh. Nyoman Adi Suratma, MP, selaku Dekan Fakultas Kedokteran
Hewan Universitas Udayana.
2. Ibu Dr. drh. I. G. Ayu Agung Suartini, M.Si., selaku pembimbing I atas
bimbingan, nasehat dan motivasi yang telah diberikan selama penelitian dan
penulisan skripsi ini hingga selesai.
3. Bapak Dr. drh. I Wayan Suardana, M.Si, selaku pembimbing II yang telah
meluangkan waktunya untuk membimbing penulis dan memberikan arahan serta
nasehat selama penelitian hingga terselesainya penulisan skripsi ini.
4. Bapak Prof. Dr. drh Iwan Harjono Utama,M.S, Bapak Dr. drh I Nengah Wandia,
M.Si, dan Ibu Dr. drh. Luh Gde Sri Surya Heryani, M.Biomed selaku penguji
yang telah bersedia meluangkan waktu dan memberikan bimbingan, kritik, saran
serta nasehat yang sangat berguna dalam penyusunan skripsi ini.
5. Bapak Dr. drh Wayan Bebas, M.Kes selaku Pembimbing Akademik yang telah
memberikan arahan dan bimbingan selama penulis menempuh kuliah di Fakultas
Kedokteran Hewan Universitas Udayana.
6. Semua dosen dan staf akademik Fakultas Kedokteran Hewan Universitas
Udayana yang telah membantu dan membimbing penulis selama menempuh
kuliah di Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Udayana.
v
7. Orang tua penulis bapak Sugianto Zaman dan ibu Suyatni atas doa restu,
bimbingan, motivasi, kasih sayang, serta dukungan moral maupun materil.
8. Keluarga penulis Yulia Puspita Sari, Mayang Sarumpun Mangurai dan keluarga
besar lainnya atas doa restu, kasih sayang, motivasi serta dukungan moral dan
material.
9. Teman seperjuangan dalam melakukan penelitian yaitu, Dewi Febriani, I Wayan
Syartama Hadi Nugraha, Wahid Danang Pranatha, dan Putu Alit Anggara Putra.
10. Gigih Pambudi, Tessa Saputri Marmanto, Putu Gonna Indah Arsana, I Kadek
Suarjana, Eunike Bertin Irianti, Wanda Della Oktarin Hutagaol, Febio Tomasini
Marciano Meus, Amelia Yovita Susanto dan Prasetya Eka Purnomo yang telah
memberikan semangat dan dukungan.
11. Teman-teman 13A Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Udayana yang telah
memberikan pengalaman dan semangat selama penulis menempuh kuliah.
Dalam skripsi ini penulis menyadari masih banyak kekurangan. Oleh sebab itu, segala
saran dan kritik yang sifatnya membangun sangat penulis harapkan. Akhir kata,
semoga skripsi ini bermanfaat bagi para pembaca.
Denpasar, Juni 2017
Penulis
vi
DAFTAR ISI
Halaman
RIWAYAT HIDUP .............................................................................................. i
ABSTRAK .......................................................................................................... ii
ABSRACT ......................................................................................................... iii
UCAPAN TERIMA KASIH ............................................................................... iv
DAFTAR ISI ...................................................................................................... vi
DAFTAR TABEL ............................................................................................. vii
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................ viii
DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................................... ix
BAB I PENDAHULUAN .................................................................................... 1
1.1 Latar Belakang Penelitian .................................................................. 1
1.2 Rumusan Masalah.............................................................................. 2
1.3 Tujuan Penelitian ............................................................................... 2
1.4 Manfaat Penelitian ............................................................................. 2
BAB II TINJUAN PUSTAKA ............................................................................. 4
2.1 Anjing Kintamani .............................................................................. 4
2.2 Darah ................................................................................................. 6
2.3 Plasma Darah ..................................................................................... 6
2.4 Protein plasma ................................................................................... 7
2.4.1 Albumin ................................................................................... 9
2.4.2 Globulin ................................................................................. 10
2.4.3 Fibrinogen .............................................................................. 10
2.4.4 Protrombin ............................................................................. 11
2.5 Elektroforesis................................................................................... 11
2.5.1 Metode SDS-PAGE (Sodium Dodecyl Sulphate Polyacrylamide
Gel Electrophoresis) ........................................................................ 12
2.6 Kerangka Konsep ............................................................................ 14
BAB III MATERI DAN METODE.................................................................... 15
3.1 Objek Penelitian .............................................................................. 15
3.2 Bahan Penelitian .............................................................................. 15
3.3 Alat Penelitian ................................................................................. 15
3.4 Rancangan Penelitian ....................................................................... 15
3.5 Variabel Penelitian .......................................................................... 16
3.6 Cara Pengumpulan Data .................................................................. 16
3.7 Prosedur Penelitian .......................................................................... 17
3.8 Analisis Data ................................................................................... 17
3.9 Lokasi dan Waktu Penelitian............................................................ 17
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................ 18
4.1 Hasil ................................................................................................ 18
4.2 Pembahasan ..................................................................................... 29
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN.............................................................. 34
5.1 Kesimpulan ..................................................................................... 34
5.2 Saran ............................................................................................... 35
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 36
vii
DAFTAR TABEL
No Teks Halaman
1. Komponen Darah Anjing ............................................................................ 6
2. Ketetapan Nilai Plasma Protein Anjing ....................................................... 9
3. Data Sampel Anjing Kintamani................................................................. 18
4. Berat Molekul Protein Plasma Anjing Kintamani Betina di Atas 1 Tahun . 22
5. Berat Molekul Protein Plasma Anjing Kintamani Betina di Bawah 1
Tahun ....................................................................................................... 23
6. Berat Molekul Protein Plasma Anjing Kintamani Jantan di Bawah 1
Tahun ....................................................................................................... 23
7. Berat Molekul Protein Plasma Anjing Kintamani Jantan di Atas 1 Tahun . 24
8. Luas Kurva Anjing Kintamani Betina ....................................................... 28
9. Luas Kurva Anjing Kintamani Jantan ....................................................... 28
10. Persentase Luas Kurva Anjing Kintamani Betina ...................................... 29
11. Persentase Luas Kurva Anjing Kintamani Jantan ...................................... 29
12. Perhitungan Elektroforesis SDS-PAGE Standar Marker Protein 1 ............. 39
13. Perhitungan Elektroforesis SDS-PAGE Standar Marker Protein 2 ............. 40
14. Perhitungan Elektroforesis SDS-PAGE Standar Marker Protein 3 ............. 41
15. Perhitungan Elektoforesis SDS-PAGE Sampel 1 ....................................... 42
16. Perhitungan Elektoforesis SDS-PAGE Sampel 2 ....................................... 42
17. Perhitungan Elektoforesis SDS-PAGE Sampel 3 ....................................... 43
18. Perhitungan Elektoforesis SDS-PAGE Sampel 4 ....................................... 43
19. Perhitungan Elektoforesis SDS-PAGE Sampel 5 ....................................... 44
20. Perhitungan Elektoforesis SDS-PAGE Sampel 6 ....................................... 44
21. Perhitungan Elektoforesis SDS-PAGE Sampel 7 ....................................... 45
22. Perhitungan Elektoforesis SDS-PAGE Sampel 8 ....................................... 45
23. Perhitungan Elektoforesis SDS-PAGE Sampel 9 ....................................... 46
24. Perhitungan Elektoforesis SDS-PAGE Sampel 10 ..................................... 46
25. Perhitungan Elektoforesis SDS-PAGE Sampel 11 ..................................... 47
26. Perhitungan Elektoforesis SDS-PAGE Sampel 12 ..................................... 47
27. Perhitungan Elektoforesis SDS-PAGE Sampel 13 ..................................... 48
28. Perhitungan Elektoforesis SDS-PAGE Sampel 14 ..................................... 48
29. Perhitungan Elektoforesis SDS-PAGE Sampel 15 ..................................... 49
30. Perhitungan Elektoforesis SDS-PAGE Sampel 16 ..................................... 49
31. Perhitungan Elektoforesis SDS-PAGE Sampel 17 ..................................... 50
32. Perhitungan Elektoforesis SDS-PAGE Sampel 18 ..................................... 50
33. Perhitungan Elektoforesis SDS-PAGE Sampel 19 ..................................... 51
34. Perhitungan Elektoforesis SDS-PAGE Sampel 20 ..................................... 51
viii
DAFTAR GAMBAR
No Teks Halaman
1. Anjing kintamani ........................................................................................ 5
2. Komposisi Darah ........................................................................................ 7
3. Pemisahan Protein dengan Elektroforesis .................................................. 12
4. Prinsip Kerja SDS-PAGE ......................................................................... 13
5. Alur Kerangka Konsep ............................................................................. 14
6. Hasil SDS-PAGE Plasma Anjing Kintamani 1 .......................................... 19
7. Hasil SDS-PAGE Plasma Anjing Kintamani 2 .......................................... 20
8. Hasil SDS-PAGE Plasma Anjing Kintamani 3 .......................................... 21
9. Hasil Image-J Sampel ke-1 hingga Sampel ke-9 ........................................ 25
10. Hasil Image-J Sampel ke-10 hingga Sampel ke-18 .................................... 26
11. Hasil Image-J Sampel ke-19 dan Sampel ke-20 ......................................... 27
12. Kurva Persamaan Regresi Logaritma Berat Molekul Marker 1 .................. 39
13. Kurva Persamaan Regresi Logaritma Berat Molekul Marker 2 .................. 40
14. Kurva Persamaan Regresi Logaritma Berat Molekul Marker 3 .................. 41
15. Persiapan Sampel Plasma Anjing Kintamani Bali ..................................... 52
16. Persiapan Alat Elektroforesis .................................................................... 52
17. Pemanasan Sampel pada Suhu 100 0C ....................................................... 52
18. Penuangan Buffer Elektroforesis ............................................................... 53
19. Penuangan Sampel ke Sumuran Gel .......................................................... 53
20. Marker 1 ................................................................................................... 54
21. Sampel 1 ................................................................................................... 54
22. Sampel 2 ................................................................................................... 55
23. Sampel 3 ................................................................................................... 55
24. Sampel 4 ................................................................................................... 56
25. Sampel 5 ................................................................................................... 56
26. Sampel 6 ................................................................................................... 57
27. Sampel 7 ................................................................................................... 57
28. Sampel 8 ................................................................................................... 58
29. Sampel 9 ................................................................................................... 58
30. Marker 2 ................................................................................................... 59
31. Sampel 10 ................................................................................................. 59
32. Sampel 11 ................................................................................................. 60
33. Sampel 12 ................................................................................................. 60
34. Sampel 13 ................................................................................................. 61
35. Sampel 14 ................................................................................................. 61
36. Sampel 15 ................................................................................................. 62
37. Sampel 16 ................................................................................................. 62
38. Sampel 17 ................................................................................................. 63
39. Sampel 18 ................................................................................................. 63
40. Maker 3 .................................................................................................... 64
41. Sampel 19 ................................................................................................. 64
42. Sampel 20 ................................................................................................. 65
ix
DAFTAR LAMPIRAN
No Teks Halaman
1. Perhitungan Elektroforesis SDS-PAGE Standar Marker Protein ................ 39
2. Perhitungan Elektroforesis SDS-PAGE Sampel 1-20 ................................ 42
3. Dokumentasi laboratorium ........................................................................ 52
4. Perhitungan Jumlah Pita............................................................................ 54
1
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang Penelitian
Anjing kintamani bali (AKB) adalah anjing lokal yang hidup di
pegunungan Desa Sukawana, Kecamatan Kintamani, Kabupaten Bangli,
Provinsi Bali (Gunawan et al., 2012). Anjing kintamani bali merupakan
plasma nutfah provinsi Bali yang sangat penting dijaga kelestariannya.
Anjing kintamani bali sangat terkenal di luar negeri namun tidak demikian
dengan kampung asalnya, pulau Bali.
Anjing kintamani bali bukanlah anjing yang murah, bahkan penggemar
anjing kintamani bali ada yang mau membeli anjing tersebut dengan harga
jutaan rupiah, sehingga dalam perdagangannya diperlukan strategi untuk
menentukan kualitas anjing tersebut. Tentunya pembeli tersebut
menginginkan anjing yang dibelinya sehat secara klinis, tidak membawa
penyakit subklinis dan baik secara genetik. Anjing kintamani yang baik dapat
dilihat dari status kesehatan, ciri fisiknya baik warna rambut maupun struktur
tubuh. Cara ini tentu kurang tepat untuk melihat kelainan pada genetik
maupun penyakit-penyakit internal maupun yang bersifat subklinis seperti
parasit darah, kelainan pada pembekuan darah, kelainanan imunologis,
kelaianan fungsi organ dalam maupun kelainan hormonal.
Status kesehatan salah satunya dapat dilihat dari pemeriksaan darah.
Darah terdiri dari plasma, serum dan sel-sel darah (Frandson, 1992). Didalam
plasma terdapat protein plasma yang dapat dijadikan patokan menentukan
status kesehatan anjing. Salah satu metode untuk mendeteksi protein yang
beredar dalam plasma secara akurat adalah dengan metode SDS-PAGE
(Sodium Dodecyl Sulphate Polyacrylamide Gel Electrophoresis). Melalui
metode SDS-PAGE, dapat disimpulkan kriteria anjing kintamani yang baik
dan sehat menurut protein yang terkandung didalam plasma anjing kintamani
tersebut. Hingga saat ini, informasi mengenai profil pita protein plasma anjing
kintamani yang sehat belum pernah dilaporkan. Padahal informasi ini penting
2
artinya untuk memastikan anjing sehat secara klinis. Berdasarkan
permasalahan di atas, penelitian ini dilakukan untuk mengetahui data fisiologi
pita dan total protein plasma anjing kintamani yang sehat. Penelitian ini
sangat bermanfaat bagi praktisi dokter hewan dan pembeli anjing untuk dapat
memastikan anjing yang dibelinya sehat secara klinis dan bebas dari penyakit
subklinis.
1.2 Rumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang yang telah diuraikan di atas, maka
dirumuskan masalah sebagai berikut:
1) Bagaimana profil pita protein plasma anjing kintamani yang dideteksi
dengan metode SDS-PAGE?
2) Berapa berat molekul protein masing-masing pita protein plasma anjing
kintamani?
3) Bagaimana klasifikasi protein plasma anjing kintamani yang dianalisis
berdasarkan berat molekulnya?
1.3 Tujuan Penelitian
Tujuan penelitian ini adalah sebagai berikut:
1) Mengetahui profil pita protein plasma anjing kintamani yang dideteksi
dengan metode SDS-PAGE.
2) Mengetahui berat molekul protein masing-masing pita protein plasma
anjing kintamani.
3) Mengetahui klasifikasi protein plasma anjing kintamani yang dianalisis
berdasarkan berat molekulnya.
1.4 Manfaat Penelitian
Hasil penelitian ini diharapkan bermanfaat sebagai:
1) Sumber informasi ilmiah dan data fisiologis profil pita protein plasma
anjing kintamani yang dideteksi dengan metode SDS-PAGE sebagai
acuan untuk menentukan status kesehatan anjing kintamani.