SAS-3 Serum Protein SBperamed.com/peramed/docs/300200_5060169852334_EN.pdf · Le kit SAS-3 Protéines sériques SB sépare les protéines sériques en 6 fractions principales (albumine,

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SAS-3 Serum Protein SB

Instructions For UseREF. 300200

SAS-3 Protéines Sériques SBFiche technique

SAS-3 Serumprotein SBAnleitung

Sieroproteine SB SAS-3 Istruzioni per l’uso

Proteínas Séricas SB SAS-3 Instrucciones de uso

Contents

English 1Français 6Deutsch 11Italiano 16Español 21


IINNTTEENNDDEEDD PPUURRPPOOSSEEThe SAS-3 Serum Protein SB kit is intended for the separation and quantitation of Serum Proteins byagarose gel electrophoresis.

Serum contains over 100 individual proteins, each with a specific set of functions which are subject tospecific variation in concentration under different pathological conditions

1.

Since the introduction of moving boundary electrophoresis by Tiselius2, and the subsequent use of zone

electrophoresis, Serum Proteins have been fractionated on the basis of their charge at a particular pH.The SAS-3 Serum Protein SB kit separates serum proteins into 6 main classes (albumin, alpha 1-globulin, alpha 2-globulin, beta1-globulin, beta 2-globulin, and gamma globulin) according to charge inan agarose gel. The proteins are then stained to allow visualisation and quantitative interpretation.Each of the classical electrophoretic zones, with the exception of albumin, normally contains 2 or morecomponents. The relative proportions of these fractions have proven to be useful aids in the diagnosisand prognosis of certain disease states

3-5.

WWAARRNNIINNGGSS AANNDD PPRREECCAAUUTTIIOONNSSAll reagents are for in-vitro diagnostic use only. Do not ingest or pipette by mouth any kit component.Wear gloves when handling all kit components. Refer to the product safety data sheet for risk andsafety phrases and disposal information.

CCOOMMPPOOSSIITTIIOONN11.. SSAASS--33 SSeerruumm PPrrootteeiinn SSBB GGeell ((xx1100))

Contains agarose in a Tris / Barbital buffer with thiomersal and sodium azide as preservative. The gel is ready for use as packaged.

22.. AAcciidd BBlluuee SSttaaiinn CCoonncceennttrraattee ((11xx 7755mmll))Contains concentrated Acid Blue stain. Dilute the contents of the bottle to 700ml with purifiedwater. Stir overnight and filter before use. Store in a tightly stoppered bottle.

33.. DDeessttaaiinn SSoolluuttiioonn CCoonncceennttrraattee ((22xx 110000mmll))Contains concentrated Destain Solution. Dilute the contents of the bottle to 5 litres with purifiedwater. Store in a tightly stoppered bottle.

44.. OOtthheerr KKiitt CCoommppoonneennttssEach kit contains Instructions For Use and sufficient Blotter C to complete 10 gels.

SSTTOORRAAGGEE AANNDD SSHHEELLFF--LLIIFFEE11.. SSAASS--33 SSeerruumm PPrrootteeiinn SSBB GGeell

Gels should be stored at 15...30°C and are stable until the expiry date indicated on the package.DO NOT REFRIGERATE OR FREEZE. Deterioration of the gel may be indicated by 1) crystallineappearance indicating the gel has been frozen, 2) cracking and peeling indicating drying of the gelor 3) visible contamination of the agarose from bacterial or fungal sources.

22.. AAcciidd BBlluuee SSttaaiinnThe stain concentrate should be stored at 15...30°C and is stable until the expiry date indicated onthe label. Diluted stain solution is stable for 6 months at 15...30°C. It is recommended to discardused stain immediately to prevent depletion of staining capability. Poor staining performance mayindicate deterioration of the stain solution.

1

SAS-3 SERUM PROTEIN SB

English

33.. DDeessttaaiinn SSoolluuttiioonnThe destain concentrate should be stored at 15...30°C and is stable until the expiry date indicatedon the label. Diluted destain solution is stable for 6 months at 15...30°C. Cloudiness may indicatedeterioration of the destain solution.

IITTEEMMSS RREEQQUUIIRREEDD BBUUTT NNOOTT PPRROOVVIIDDEEDDCat. No. 310200 Sample Applicator Blades (1 x 10)Cat. No. 310300 Sample Applicator Blades (5 x 10)Cat. No. 210100 Disposable sample cups (100)Cat. No. 3100 REP Prep

SSAAMMPPLLEE CCOOLLLLEECCTTIIOONN AANNDD PPRREEPPAARRAATTIIOONNFreshly collected serum is the specimen of choice. Whilst samples can be stored at 15...30°C for upto 4 days, 2...6°C for up to 2 weeks or 6 months at -20°C for standard 5 band patterns

6, the beta 2-

globulin band (Complement C3) will degrade rapidly on storage. Urine and CSF can also be usedfollowing a suitable concentration step (50 - 100X). The use of plasma will result in a fibrinogen bandbetween the beta and gamma fractions.

IInntteerrffeerriinngg FFaaccttoorrss:: 1) Haemolysis may cause false elevation in the alpha 2 and beta fractions. 2) Inaccurate results may be obtained on specimens left uncovered, due to evaporation.

SSTTEEPP BBYY SSTTEEPP PPRROOCCEEDDUURREE1. Program the following parameters into the instrument:

SStteepp TTiimmee ((mmmm::ssss)) TTeemmppeerraattuurree ((°°CC)) VVoollttaaggee OOtthheerrEElleeccttrroopphhoorreessiissLoad Sample 00:30 21 Speed 1Apply Sample 00:30 21 Speed 1 *Electrophoresis 13:00 18 480Dry 08:00 54* - Use Location 1 for SPIFE 3000 and SAS-3.

SSttaaiinneerrStain 04:00 Recirculate ONDestain 02:00 Recirculate ONDestain 02:00 Recirculate ONDry 16:00 70

2. Place the correct number of applicator blade assemblies in position on the instrument:

NNuummbbeerr ooff SSaammpplleess AApppplliiccaattoorr PPoossiittiioonnSSPPIIFFEE CCoommbboo SSPPIIFFEE 22000000//33000000//SSAASS--33

60 2, 9, 16 2, 8, 1440 2, 9 2, 820 2 2

2

3. ii)) SSPPIIFFEE CCoommbboo uusseerrss:: Pipette 17µl of the sample into the appropriate well of the sample base.Protect the samples from evaporation.iiii)) SSPPIIFFEE 22000000 // 33000000 // SSAASS--33 uusseerrss:: Pipette 35µl of the sample into the appropriate disposablesample cups. Protect the samples from evaporation.

4. Remove the gel from the packaging and discard the overlay.5. Dispense 2ml of REP Prep onto the left side of the chamber and carefully place the gel into the

chamber, aligning the holes in the gelbond with the pins in the chamber and avoiding bubbles underthe gel. Attach the electrodes onto the outside of the electrode posts so that they are in contactwith the gel blocks.

6. Blot the surface of the gel with a blotter C, discard the blotter.7. Select the Serum Protein test program and, following the prompts, apply the samples and perform

the electrophoresis.8. Following electrophoresis, remove the electrodes and remove both gel blocks using the Gel Block

Remover.9. Attach the gel to the staining chamber holder.10. Select the Serum Protein test program on the staining unit and, following the prompts, Stain,

Destain and Dry the gel.11. At the end of the staining cycle, remove the gel from the staining chamber. The gel is now ready

for examination.

IINNTTEERRPPRREETTAATTIIOONN OOFF RREESSUULLTTSS..It is recommended that any evaluation of the gels is performed against normal values produced for thismethod in each individual laboratory.

For a complete review of serum protein evaluation, see Ritzmann, S.E, 19825. Studies show that the

values are the same for both males and non-pregnant females. Some differences are seen in pregnantfemales at term and women on oral contraceptives.Age has some effect on normal levels. Cord blood has a decreased total protein, albumin, alpha 2 andbeta fractions; slightly increased alpha 1 and normal or increased gamma fraction (largely of maternalorigin). The gamma globulins drop rapidly until about 3 months of age, while other fractions havereached adult levels by this time. Adult levels of the gamma globulins are not reached until 10-16 yearsof age. The albumin decreases and beta globulin increases over the age of 40.

11.. QQuuaalliittaattiivvee EEvvaalluuaattiioonn::The gels may be visually inspected for the presence or absence of particular bands of interest.

22.. QQuuaannttiittaattiivvee EEvvaalluuaattiioonn::Scan the gels, gel side down, at 595nm.

In either case, an elevation or decrease in particular serum components or the detection of unusualserum components require further investigation. The completed SAS-3 Serum Protein SB gel is stablefor an indefinite period of time.

QQUUAALLIITTYY CCOONNTTRROOLLKemtrol Serum Controls (Cat. No's. 7024 and 7025) can be used to verify all phases of the procedureand should be used on each plate run. Refer to the package insert provided for appropriate assayvalues.

3


English

LLIIMMIITTAATTIIOONNSSSince all electrophoresis procedures are non-linear, it is important to follow these Instructions For Useclosely to ensure optimal resolution and reproducible results. Failure to follow these Instructions ForUse may affect the results obtained.

RREEFFEERREENNCCEE VVAALLUUEESSUsing 14 normal specimens from male and female donors with an age range of 20-59 years, thefollowing normal ranges were obtained (these are presented as a guideline only):

PPrrootteeiinn FFrraaccttiioonn MMeeaann ((%%)) + 22SSDD RRaannggeeAlbumin 60.5 54.9 - 66.1Alpha1 2.8 2.1 - 3.5Alpha2 8.5 6.1 - 10.9Beta 1 8.3 6.5 - 10.1Beta 2 4.1 2.7 - 5.5Gamma 15.8 11.7 - 19.9

PPEERRFFOORRMMAANNCCEE CCHHAARRAACCTTEERRIISSTTIICCSSRReepprroodduucciibbiilliittyy

WWiitthhiinn GGeell ((nn==6600)) BBeettwweeeenn GGeell ((nn==118800))MMeeaann ((%%)) CCVV ((%%)) MMeeaann ((%%)) CCVV ((%%))

Albumin 59.29 1.7 59.12 2.3Alpha 1 3.19 11.7 3.15 12.8Alpha 2 9.72 3.5 9.69 4.2Beta 1 8.19 3.7 8.21 3.9Beta 2 6.59 4.5 6.52 4.5Gamma 13.02 4.0 13.31 4.9

SSeennssiittiivviittyyThe method is sensitive to 0.3 g/L per band, determined as the lowest concentration of protein whichwas evident as a discrete band on the completed gel.

LLiinneeaarriittyyThe linearity of the method is a function of densitometer specification as well as gel performance. It is recommended that each customer determine the linearity of the method based upon thedensitometer in use in the laboratory.

BBIIBBLLIIOOGGRRAAPPHHYY1. Alper, C.A. 'Plasma Protein Measurements as a Diagnostic Aid', N. Eng. J. Med., 1974; 291 : 287-290.2. Tiselius, A. 'A New Apparatus for Electrophoretic Analysis of Colloidal Mixtures', Trans. Faraday

Soc., 1937; 33 : 524.3. Ritzmann, S.E. and Daniels, J.C. 'Diagnostic Proteinology: Separation and Characterization of

Proteins, Qualitative and Quantitative Assays' in Laboratory Medicine, Harper and Row, Inc.,Hagerstown, 1979.

4. Tietz, N.W. (Ed.), Textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphia, pages 579-582,1986.

4

5. Ritzmann, S.E. (Ed.), Protein Abnormalities Volume 1 : Physiology of Immunoglobulins -Diagnostic and Clinical Aspects’, Allen R. Liss, Inc., New York, 1982.

6. Tietz, N.W. (Ed.), Textbook of Clinical Chemistry, (3rd Edition), W.B. Saunders Co., Philadelphia,page 524, 1995.

5


English

UUTTIILLIISSAATTIIOONNLe kit SAS-3 Protéines sériques SB est utilisé pour la séparation et la quantification des protéinessériques par électrophorèse en gel d’agarose.

Le sérum contient plus de 100 protéines qui ont chacune une fonction spécifique et qui peuvent subirdes variations quantitatives en fonction de diverses conditions pathologiques

1.

Depuis l’introduction par Tiselius2

de la mobilité électrophorétique, les protéines sériques sontfractionnées en fonction de leur charge à un pH déterminé.Le kit SAS-3 Protéines sériques SB sépare les protéines sériques en 6 fractions principales (albumine,alpha 1, alpha 2, bêta 1, bêta 2 et gammaglobulines) selon leur charge en gel d’agarose. Les protéinessont ensuite colorées afin de les mettre en évidence et de réaliser une interprétation quantitative.Chaque fraction, à l’exception de celle de l’albumine, contient normalement au moins 2 composants.La proportion relative de ces différentes fractions peut aider à établir un diagnostic et un pronosticpour certains états morbides

3-5.

PPRRÉÉCCAAUUTTIIOONNSSTous les réactifs sont à usage diagnostic in-vitro uniquement. Ne pas ingérer ou pipeter à la boucheaucun composant. Porter des gants pour la manipulation de tous les composants. Se reporter auxfiches de sécurité des composants du kit pour la manipulation et l’élimination.

CCOOMMPPOOSSIITTIIOONN11.. PPllaaqquuee SSAASS--33 PPrroottééiinneess sséérriiqquueess SSBB ((xx1100))

Contient de l’agarose dans un tampon Tris / Barbital additionné de thimérosal et d’azide de sodiumcomme conservateurs. Le gel est prêt à l’emploi.

22.. CCoolloorraanntt bblleeuu aacciiddee ((11xx 7755mmll))Contient du colorant bleu acide concentré. Dissoudre le contenu du flacon dans 700ml d’eaudistillée, laisser sous agitation toute une nuit. Filtrer avant utilisation. Conserver en bouteillehermétiquement fermée.

33.. SSoolluuttiioonn ddééccoolloorraannttee ((22xx 110000mmll))Contient la solution décolorante concentrée. Diluer le contenu du flacon dans 5 litres d’eaudistillée. Conserver en bouteille hermétiquement fermée.

44.. AAuuttrreess ccoommppoossaannttss dduu kkiittChaque kit contient également 1 fiche technique et des buvards C pour 10 gels.

SSTTOOCCKKAAGGEE EETT CCOONNSSEERRVVAATTIIOONN11.. PPllaaqquuee SSAASS--33 PPrroottééiinneess sséérriiqquueess SSBB

Les gels doivent être conservés entre 15...30°C; ils sont stables jusqu’à la date de péremptionindiquée sur l’emballage. NE PAS RÉFRIGÉRER OU CONGELER. Les conditions suivantesindiquent une détérioration du gel: 1) des cristaux visibles indiquant que le gel a été congelé, 2) des craquelures indiquant une déshydratation du gel, 3) une contamination visible, bactérienneou fongique.

22.. CCoolloorraanntt bblleeuu aacciiddeeLe colorant concentré doit être conservé entre 15...30°C; il est stable jusqu’à la date depéremption indiquée sur l’étiquette. Le colorant reconstitué est stable 6 mois entre 15...30°C. Il est recommandé de jeter le colorant utilisé afin d’éviter que la capacité de coloration ne diminue.Si la performance de coloration diminue, cela indique une détérioration de la solution colorante.

6

33.. SSoolluuttiioonn ddééccoolloorraanntteeLe décolorant concentré doit être conservé entre 15...30°C; il est stable jusqu’à la date depéremption indiquée sur l’étiquette. Le décolorant dilué est stable 6 mois entre 15...30°C. Un aspect floconneux indique une détérioration de la solution décolorante.

MMAATTÉÉRRIIEELLSS NNÉÉCCEESSSSAAIIRREESS NNOONN FFOOUURRNNIISSRéf. 310200 Applicateurs échantillons (1 x 10)Réf. 310300 Applicateurs échantillons (5 x 10)Réf. 210100 Cupules échantillons jetables (100)Réf. 3100 Solution de REP-prep

PPRRÉÉLLÈÈVVEEMMEENNTTSS DDEESS ÉÉCCHHAANNTTIILLLLOONNSSL’utilisation de sérums fraîchement prélevés est fortement recommandée. Bien que les échantillonspuissent être conservés 4 jours entre 15...30°C, 2 semaines entre 2...6°C ou 6 mois à -20°C pour les5 bandes classiques

6, la bande des bêta-2-globulines (complément C3) se dégrade rapidement en cas

de conservation. Il est possible d’utiliser des échantillons d’urine ou de LCR après concentration (50 à100 fois). L’utilisation de plasma laisse apparaître une bande de fibrinogène entre les fractions bêta etgamma.

FFaacctteeuurrss iinntteerrfféérreennttss::1) Un sérum hémolysé risque de présenter une bande entre les fractions alpha-2 et bêta. 2) Des résultats erronés peuvent être obtenus sur des échantillons ayant subi une concentration par

évaporation.

MMÉÉTTHHOODDOOLLOOGGIIEE1. Régler les paramètres suivants sur l’instrument:

ÉÉttaappee DDuurrééee ((mmmm::ssss)) TTeemmppéérraattuurree ((°°CC)) TTeennssiioonn AAuuttrreeÉÉlleeccttrroopphhoorrèèsseeCharger échantillon 00:30 21 Vitesse 1Déposer échantillon 00:30 21 Vitesse 1*Électrophorèse 13:00 18 480Sécher 08:00 54

* Utiliser Emplacement 1 (Loc 1) avec le SPIFE 3000 et le SAS-3.

CCoolloorraattiioonnColorer 04:00 Rec ONDécolorer 02:00 Rec ONDécolorer 02:00 Rec ONSécher 16:00 70

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SAS-3 PROTÉINES SÉRIQUES SB

Français

2. Placer le nombre correct d’applicateurs en position dans l’instrument.

NNoommbbrreess dd’’éécchhaannttiilllloonnss PPoossiittiioonn ddee ll’’aapppplliiccaatteeuurrSSPPIIFFEE CCoommbboo SSPPIIFFEE 22000000//33000000//SSAASS--33

60 2, 9, 16 2, 8, 1440 2, 9 2, 820 2 2

3. ii)) SSPPIIFFEE CCoommbboo:: Pipeter 17µl d’échantillon dans le puits approprié de l’embase échantillon. Éviterque les échantillons ne s’évaporent.iiii)) SSPPIIFFEE 22000000 // 33000000 // SSAASS--33:: Pipeter 35µl d’échantillon dans les cupules échantillons jetablesappropriées. Éviter que les échantillons ne s’évaporent.

4. Enlever le gel de l’emballage et retirer le film plastique.5. Déposer 2ml de solution REP-prep dans la partie gauche de la chambre et placer le gel dans la

chambre, en alignant les orifices du Gel-Bond avec les picots de fixation de la chambre et en évitantqu’il n’y ait des bulles sous le gel. Fixer les électrodes sur l’extérieur des plots que sorte qu’ellessoient en contact avec les ponts d’agarose.

6. Sécher la surface du gel à l’aide d’un buvard C puis le jeter.7. Sélectionner le programme Protéines sériques puis, en suivant les messages, déposer les

échantillons et réaliser l’électrophorèse.8. Une fois la migration terminée, enlever les électrodes et les ponts d’agarose à l’aide de la raclette.9. Fixer le gel sur le support de la chambre de coloration.10. Sélectionner le programme Protéines sériques du module de coloration puis, en suivant les

messages, colorer, décolorer et sécher le gel.11. Une fois le cycle de coloration terminé, enlever le gel de la chambre de coloration. Il est alors prêt

pour être examiné.

IINNTTEERRPPRRÉÉTTAATTIIOONN DDEESS RRÉÉSSUULLTTAATTSSIl est recommandé de réaliser chaque évaluation en comparant les gels à un modèle normal obtenudans les mêmes conditions pour chaque laboratoire.

Pour une interprétation complète, se référer à Ritzmann, S.E, 19825. Différentes études montrent que

les valeurs normales sont les mêmes pour l’homme et la femme non-enceinte. Certaines modificationssont observées chez la femme à terme et chez la femme sous contraceptif oral.Les valeurs normales varient suivant l’âge. Le sang de cordon a des protéines totales diminuées ainsique l’albumine, les alpha-2 et les bêta; la fraction des alpha-1 est légèrement augmentée et celle desgamma est normale ou augmentée (en grande partie d’origine maternelle). Les gammaglobulinesdiminuent rapidement jusqu’à un âge d’environ 3 mois, pendant que les autres fractions atteignentprogressivement les valeurs adultes. La valeur adulte des gammaglobulines n’est pas atteinte avant 10-16 ans. Après 40 ans, l’albumine et les bêta-globulines augmentent.

11.. ÉÉvvaalluuaattiioonn qquuaalliittaattiivvee::Une lecture visuelle des plaques permet de déterminer si les bandes d’une protéine spécifique sontprésentes ou non.

22.. ÉÉvvaalluuaattiioonn qquuaannttiittaattiivvee::Lire la plaque de gel, agarose vers le bas, à 595nm.

8

Dans tous les cas, une élévation ou une diminution d’un composant particulier du sérum ou la détectiond’une protéine inhabituelle doit conduire à d’autres investigations. Après traitement, le gel SAS-3Protéines sériques SB est stable indéfiniment.

CCOONNTTRRÔÔLLEE QQUUAALLIITTÉÉLes contrôles Kemtrol Serum (réf. 7024 et 7025) peuvent être utilisés afin de vérifier toutes les phasesde la méthode et doivent être déposés sur chaque plaque. La notice indique les valeurs appropriéesdu dosage.

LLIIMMIITTEESSComme les procédures d’électrophorèse ne sont pas linéaires, il est important de respecterscrupuleusement la fiche technique afin d’obtenir une résolution optimale et des résultatsreproductibles. Si ce n’est pas le cas, cela peut affecter les résultats obtenus.

VVAALLEEUURRSS DDEE RRÉÉFFÉÉRREENNCCEELes plages normales suivantes ont été obtenues à partir de 14 échantillons normaux, provenant dedonneurs hommes et femmes âgés entre 20 et 59 ans (ces valeurs ne sont données qu’à titre indicatif):

FFrraaccttiioonn pprroottééiiqquuee MMooyyeennnnee ((%%)) ÉÉccaarrtt--ttyyppee ((iinntteerrvvaallllee))Albumine 60,5 54,9 - 66,1Alpha 1 2,8 2,1 - 3,5Alpha 2 8,5 6,1 - 10,9Bêta 1 8,3 6,5 - 10,1Bêta 2 4,1 2,7 - 5,5Gamma 15,8 11,7 - 19,9

PPEERRFFOORRMMAANNCCEESSRReepprroodduuccttiibbiilliittéé

IInnttrraa--ppllaaqquuee ((nn==6600)) IInntteerr--ppllaaqquuee ((nn==118800))MMooyyeennnnee ((%%)) CCVV ((%%)) MMooyyeennnnee ((%%)) CCVV ((%%))

Albumine 59.29 1.7 59.12 2.3Alpha 1 3.19 11.7 3.15 12.8Alpha 2 9.72 3.5 9.69 4.2Bêta 1 8.19 3.7 8.21 3.9Bêta 2 6.59 4.5 6.52 4.5Gamma 13.02 4.0 13.31 4.9

SSeennssiibbiilliittééLa méthode est sensible à partir de 0,3g/l par bande, concentration la plus faible en protéinespermettant la visualisation d’une fine bande une fois le gel terminé.

LLiinnééaarriittééLa linéarité est fonction des caractéristiques du densitomètre ainsi que des performances du gel. Il est recommandé à chaque client de déterminer la linéarité de cette méthode en fonction dudensitomètre utilisé au sein du laboratoire.

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SAS-3 PROTÉINES SÉRIQUES SB

Français

BBIIBBLLIIOOGGRRAAPPHHIIEE1. Alper, C. A. ‘Plasma Protein Measurements as a Diagnostic Aid’, N. Eng. J. Med., 1974 ; 291 :

287-290.2. Tiselius, A. ‘A New Apparatus for Electrophoretic Analysis of Colloidal Mixtures’, Trans. Faraday

Soc., 1937 ; 33 : 524.3. Ritzmann, S. E et Daniels, J. C. ‘Diagnostic Proteinology: Separation and Characterization of

Proteins. Qualitative and Quantitative Assays’ in Laboratory Medicine, Harper and Row, Inc.,Hagerstown, 1979.

4. Tietz, N. W. (éd.), Textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphie, pages 579-582, 1986.

5. Ritzmann, S. E. (éd.), ’Protein Abnormalities Volume 1 : Physiology of Immunoglobulins -Diagnostic and Clinical Aspects’, Allen R. Liss, Inc., New York, 1982.

6. Tietz, N.W. (éd.), Textbook of Clinical Chemistry, (3e édition), W.B. Saunders Co., Philadelphie,page 524, 1995.

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AANNWWEENNDDUUNNGGSSBBEERREEIICCHHDas SAS-3 Serum-Protein SB Kit dient zur Auftrennung und Quantifizierung von Serumproteinenmittels Elektrophorese im Agarose-Gel.

Serum enthält über 100 einzelne Proteine, jedes mit einer Reihe spezifischer Funktionen, die unterverschiedenen pathologischen Bedingungen gewissen spezifischen Konzentrationsschwankungenunterliegen

1.

Seit der Einführung der Elektrophorese mit beweglicher Front (moving boundary electrophoresis)durch Tiselius

2und der nachfolgenden Verwendung der Zonen-Elektrophorese wurden Serum-

Proteine bei einem bestimmten pH-Wert gemäß ihrer elektrischen Ladung aufgetrennt.Mit dem SAS-3 Serum-Protein SB Kit werden die Serum-Proteine entsprechend ihrer Ladung imAgarose-Gel in 6 Hauptfraktionen (Albumin, Alpha-1-Globulin, Alpha-2-Globulin, Beta-1-Globulin,Beta-2-Globulin und Gammaglobulin) aufgetrennt. Nach einer anschließenden Färbung können dieProteinbanden visuell oder quantitativ ausgewertet werden. Mit Ausnahme des Albumins enthält jededer klassischen Elektrophorese-Zonen in der Regel 2 oder mehrere Komponenten. Die relativenAusmaße dieser Fraktionen haben sich bei der Diagnose und Prognose bestimmter Erkrankungen alsnützliches Hilfsmittel erwiesen

3-5.

WWAARRNNHHIINNWWEEIISSEE UUNNDD VVOORRSSIICCHHTTSSMMAASSSSNNAAHHMMEENNAlle Reagenzien sind nur zur in-vitro Diagnostik bestimmt. Nicht einnehmen oder mit dem Mundpipettieren. Beim Umgang mit den Kit-Komponenten ist das Tragen von Handschuhen erforderlich.Siehe Sicherheitsdatenblatt mit den Gefahrenhinweisen und Sicherheitsvorschlägen sowieInformationen zur Entsorgung.

IINNHHAALLTT11.. SSAASS--33 SSeerruumm--PPrrootteeiinn SSBB--GGeell ((xx1100))

Enthält Agarose in einem Tris / Barbitalpuffer mit Thiomersal und Natriumazid alsKonservierungsmittel. Das Gel ist gebrauchsfertig verpackt.

22.. „„SSaauurreess--BBllaauu““ FFaarrbbssttooffffkkoonnzzeennttrraatt ((11xx 7755mmll))Enthält konzentrierte „Saures-Blau“ Farbstofflösung. Den Inhalt der Flasche mit dest. Wasser auf700ml verdünnen. Über Nacht rühren und vor dem Gebrauch filtrieren. In einer festverschlossenen Flasche aufbewahren.

33.. EEnnttffäärrbbeellöössuunngg--KKoonnzzeennttrraatt ((22xx 110000mmll))Enthält konzentrierte Entfärbelösung. Den Inhalt der Flasche mit dest. Wasser auf 5 Literverdünnen. In einer fest verschlossenen Flasche aufbewahren.

44.. WWeeiitteerree KKiitt--KKoommppoonneenntteennJeder Kit enthält eine Methodenbeschreibung sowie ausreichend Blotter C für 10 Gele.

LLAAGGEERRUUNNGG UUNNDD SSTTAABBIILLIITTÄÄTT11.. SSAASS--33 SSeerruumm--PPrrootteeiinn SSBB--GGeell

Gele sollten bei 15...30°C gelagert werden und sind bis zum aufgedruckten Verfallsdatum stabil.NICHT IM KÜHLSCHRANK ODER TIEFKÜHLSCHRANK AUFBEWAHREN! Der Zustand desGels kann sich verschlechtern. Dafür gibt es folgende Merkmale: 1) Kristallisation weist aufvorangegangenes Einfrieren hin, 2) Risse und Ablösen weisen auf ein Austrocknen des Gels hin, und3) sichtbare Kontamination der Agarose durch Bakterien oder Pilze.

11

SAS-3 SERUMPROTEIN SB

Deutsch

22.. „„SSaauurreess--BBllaauu““ FFaarrbbssttooffffDas Farbstoffkonzentrat sollte bei 15...30°C gelagert werden und ist bis zum aufgedrucktenVerfallsdatum stabil. Die verdünnte Farbstofflösung ist bei einer Temperatur von 15...30°C für 6Monate stabil. Es wird empfohlen, benutzten Farbstoff sofort zu entsorgen, um eine Minderungder Färbeleistung zu verhindern. Eine schlechte Färbeleistung kann auf eine Verschlechterung derFärbelösung hinweisen.

33.. EEnnttffäärrbbeellöössuunnggDas Entfärbekonzentrat sollte bei 15...30°C gelagert werden und ist bis zum aufgedrucktenVerfallsdatum stabil. Verdünnte Entfärbelösung ist bei einer Temperatur von 15...30°C für 6Monate stabil. Trübung kann auf den Verfall der Entfärbelösung hinweisen.

NNIICCHHTT MMIITTGGEELLIIEEFFEERRTTEESS,, AABBEERR BBEENNÖÖTTIIGGTTEESS MMAATTEERRIIAALLKat. Nr. 310200 Probenapplikatorkämme (1 x 10)Kat. Nr. 310300 Probenapplikatorkämme (5 x 10)Kat. Nr. 210100 Einweg-Probengefäße (100)Kat. Nr. 3100 REP-Prep-Lösung

PPRROOBBEENNEENNTTNNAAHHMMEE UUNNDD VVOORRBBEERREEIITTUUNNGGFrisch entnommenes Serum ist das Untersuchungsmaterial der Wahl. Für ein Standard-5-Bandenmuster

6können die Proben bei 15...30°C bis zu 4 Tagen, bei 2...6°C bis zu 2 Wochen, oder bei

-20°C 6 Monate gelagert werden. Die Beta-2-Globulinbande (Komplement C3) degeneriert allerdingsbei Lagerung sehr schnell. Urin und Liquorproben können nach angemessener Konzentrierung (50-100-fach) ebenfalls verwendet werden. Die Verwendung von Plasma führt zu einer Fibrinogen-Bande zwischen der Beta- und Gamma-Fraktion.

SSttöörrffaakkttoorreenn::1) Hämolytische Proben können falsche Alpha-2- und Beta-Werte zeigen. 2) Proben, die nicht abgedeckt über längere Zeit stehen, können durch Verdunstungseffekt falsche

Werte ergeben.

SSCCHHRRIITTTT--FFÜÜRR--SSCCHHRRIITTTT MMEETTHHOODDEE1. Das Gerät mit den folgenden Parametern programmieren:

SScchhrriitttt DDaauueerr ((mmmm::ssss)) TTeemmppeerraattuurr ((°°CC)) SSppaannnnuunngg AAnnddeerreeEElleekkttrroopphhoorreesseeProbenaufnahme 00:30 21 Geschwindigkeit 1Probenapplikation 00:30 21 Geschwindigkeit 1*Elektrophorese 13:00 18 480Trocknen 08:00 54

* - Platz 1 für SPIFE 3000 und SAS-3 verwenden.

FFäärrbbeeggeerräättFärben 04:00 Umlauf EINEntfärben 02:00 Umlauf EINEntfärben 02:00 Umlauf EINTrocknen 16:00 70

12

2. Die richtige Anzahl Applikatorkamm-Halterungen in Position auf dem Gerät anbringen:

PPrroobbeennaannzzaahhll AApppplliikkaattoorrppoossiittiioonnSSPPIIFFEE CCoommbboo SSPPIIFFEE 22000000//33000000//SSAASS--33

60 2, 9, 16 2, 8, 1440 2, 9 2, 820 2 2

3. ii)) SSPPIIFFEE CCoommbboo BBeennuuttzzeerr:: 17µl Probe in die entsprechende Vertiefung der Probenbasispipettieren. Proben vor Verdunstung schützen.iiii)) SSPPIIFFEE 22000000 // 33000000 // SSAASS--33 BBeennuuttzzeerr:: 35µl Probe in die entsprechenden Einweg-Probengefäßepipettieren. Proben vor Verdunstung schützen.

4. Gel aus der Verpackung nehmen und die Schutzfolie verwerfen.5. 2ml REP-Prep-Lösung links in die Kammer füllen und das Gel vorsichtig in die Kammer legen,

indem die Löcher der Gelbond-Folie an den Stiften der Kammer ausgerichtet werden. Luftblasenunter dem Gel vermeiden. Die Elektroden an der Außenseite der Elektrodenhaltern befestigen,damit sie mit den Gelblöcken in Kontakt stehen.

6. Die Geloberfläche mit einem Blotter C blotten, Blotter verwerfen.7. Testprogramm „Serum-Protein“ auswählen und gemäß den Eingabeaufforderungen Proben

auftragen. Elektrophorese durchführen.8. Nach der Elektrophorese Elektroden sowie beide Gel-Blöcke mit dem Gelblock-Entferner

entfernen.9. Das Gel an der Halterung der Färbekammer befestigen.10. Am Färbegerät Testprogramm „Serum-Protein“ auswählen und gemäß Eingabeaufforderungen das

Gel färben, entfärben und trocknen.11. Am Ende des Färbevorgangs das Gel aus der Färbekammer nehmen. Das Gel kann nun

ausgewertet werden.

AAUUSSWWEERRTTUUNNGG DDEERR EERRGGEEBBNNIISSSSEEEs wird empfohlen, die Auswertung der Gele gegen Normalwerte durchzuführen, die in demjeweiligen Labor für diese Methode ermittelt wurden.

Für eine komplette Überprüfung der Serum-Protein-Auswertung siehe Ritzmann, S.E. 19825.

Studien zeigen, dass Werte für Männer und nicht schwangeren Frauen identisch sind. Man hat beischwangeren Frauen nahe dem Geburtstermin und bei Frauen, die orale Verhütungsmittel benutzen,einige Abweichungen festgestellt.

Das Alter kann Auswirkungen auf die Normalwerte haben. Nabelschnurblut hat einen verringertenGesamtproteingehalt, Albumin, Alpha-2- und Beta-Fraktionen; leicht erhöhte Alpha-1 und normalebzw. erhöhte Gamma-Fraktion (weitgehend mütterlicher Herkunft). Die Gammaglobuline fallen biszum Alter von 3 Monaten rasch ab, wohingegen andere Fraktionen bis dahin bereitsErwachsenenwerte erreicht haben. Bei den Gammaglobulinen werden Erwachsenenwerte erst imAlter zwischen 10 und 16 Jahren erreicht. Im Alter von über 40 Jahren verringert sich das Albumin,und das Betaglobulin ist erhöht.

13


Deutsch

11.. QQuuaalliittaattiivvee AAuusswweerrttuunngg::Gele optisch auf das Vorhandensein bzw. Fehlen von Banden untersuchen.

22.. QQuuaannttiittaattiivvee AAuusswweerrttuunngg::Die Gele mit der Gelseite nach unten bei 595nm scannen.

Sind bestimmte Serum-Komponenten erhöht oder verringert oder werden ungewöhnlichen Serum-Komponenten nachgewiesen, so sind weitere Untersuchungen erforderlich. Das fertige SAS-3 Serum-Protein-Gel ist praktisch unbegrenzt haltbar.

QQUUAALLIITTÄÄTTSSKKOONNTTRROOLLLLEEKemtrol Serum-Kontrollen (Kat. Nr. 7024 und 7025) dienen zur Überprüfung des gesamtenElektrophoresevorgangs und sollten bei jedem Lauf mitgeführt werden. Siehe Packungsbeilage für dieentsprechenden Testergebnisse.

EEIINNSSCCHHRRÄÄNNKKUUNNGGEENNDa Elektrophoreseverfahren nicht linear verlaufen, ist es wichtig, diese Anleitungen genau zu befolgen,um eine optimale Auflösung und reproduzierbare Ergebnisse zu erhalten. Ein Nichteinhalten dieserAnleitungen kann sich negativ auf die Ergebnisse auswirken.

RREEFFEERREENNZZWWEERRTTEEVon 14 normalen Proben von männlichen und weiblichen Spendern zwischen 20 und 59 Jahren wurdendie folgenden Normalwerte ermittelt (diese gelten nur als Richtlinie):

PPrrootteeiinnffrraakkttiioonn MMiitttteellwweerrtt ((%%)) ++ 22ss--BBeerreeiicchhAlbumin 60,5 54,9 - 66,1Alpha 1 2,8 2,1 - 3,5Alpha 2 8,5 6,1 - 10,9Bêta 1 8,3 6,5 - 10,1Bêta 2 4,1 2,7 - 5,5Gamma 15,8 11,7 - 19,9

LLEEIISSTTUUNNGGSSEEIIGGEENNSSCCHHAAFFTTEENNRReepprroodduuzziieerrbbaarrkkeeiitt

IInnnneerrhhaallbb eeiinneess GGeellss ((nn==6600)) ZZwwiisscchheenn ddeenn GGeelleenn ((nn==118800))MMiitttteellwweerrtt ((%%)) VVKK ((%%)) MMiitttteellwweerrtt ((%%)) VVKK ((%%))

Albumin 59.29 1.7 59.12 2.3Alpha 1 3.19 11.7 3.15 12.8Alpha 2 9.72 3.5 9.69 4.2Beta 1 8.19 3.7 8.21 3.9Beta 2 6.59 4.5 6.52 4.5Gamma 13.02 4.0 13.31 4.9

14

EEmmppffiinnddlliicchhkkeeiittDie Sensibilität der Methode beträgt 0,3g/l pro Bande und wurde als die niedrigste Protein-Konzentration ermittelt, die als diskrete Bande auf dem fertigen Gel zu erkennen war.

LLiinneeaarriittäättDie Linearität der Methode ist von der Densitometer-Spezifikation sowie der Leistung des Gelsabhängig. Es wird jedem Kunden empfohlen, die Linearität der Methode mit dem im Laborverwendeten Densitometer selbst zu bestimmen.

LLIITTEERRAATTUURR1. Alper, C.A. ‘Plasma Protein Measurements as a Diagnostic Aid’, N. Eng. J. Med., 1974; 291 : 287-

290. 287-290.2. Tiselius, A. ‘A New Approach for Electrophoretic Analysis of Colloidal Mixtures’, Trans. Faraday

Soc., 1937; 33 : 524.3. Ritzmann, S.E. and Daniels, J.C. ‘Diagnostic Proteinology: Separation and Characterization of

Proteins, Qualitative and Quantitative Assays’ in Laboratory Medicine, Harper and Row, Inc.,Hagerstown, 1979.

4. Tietz, N.W. (Ed.), Textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphia, Seite 579-582, 1986.

5. Ritzmann, S.E. (Ed.), Protein Abnormalities Volume 1 : Physiology of Immunoglobulins - Diagnosticand Clinical Aspects’, Allen R. Liss, Inc., New York, 1982.


15


Deutsch

PPRRIINNCCIIPPIIOOIl kit SAS-3 Sieroproteine SB viene utilizzato per la separazione e la quantificazione delle proteineseriche mediante elettroforesi su gel di agarosio.

Il siero contiene oltre 100 singole proteine, ciascuna con specifiche funzioni, le quali variano la loroconcentrazione a seconda delle differenti condizioni patologiche in corso

1.

Dall’invenzione dell’elettroforesi a fronte mobile ad opera di Tiselius2, e il successivo utilizzo

dell’elettroforesi di zona, le proteine del siero sono state frazionate in base alla loro carica ad unparticolare pH.Il kit SAS-3 Sieroproteine SB permette di separare, in base alla loro carica elettrica in un gel di agarosio,le sieroproteine in 6 classi principali (albumina, alfa1-globulina, alfa2-globulina, beta1-globulina, beta2-globulina e gamma-globuline). Le proteine, vengono quindi colorate per permettere unavisualizzazione ed interpretazione quantitativa. Ciascuna delle classiche zone elettroforetiche, adeccezione dell’albumina, contiene normalmente 2 o più componenti. Le relative proporzioni, di questefrazioni, dimostrano l’utilità nella diagnosi e prognosi di certe malattie

3-5.

AAVVVVEERRTTEENNZZEE EE PPRREECCAAUUZZIIOONNIITutti i reagenti devono essere utilizzati esclusivamente per diagnosi in vitro. Non ingerire né pipettarecon la bocca i componenti del kit. Indossare guanti protettivi durante l’uso dei componenti del kit.Riferirsi alle schede tecniche e dati di sicurezza per le avvertenze sui componenti dei kit.

CCOOMMPPOOSSIIZZIIOONNEE11.. GGeell SSAASS--33 SSiieerroopprrootteeiinnee SSBB ((xx1100))

Contiene agarosio in tampone tris / barbital con tiomersal e sodio azide come conservante. Il gel è pronto all’uso così come viene fornito.

22.. CCoolloorraannttee ccoonncceennttrraattoo AAcciiddoo BBlluu ((11xx 7755mmll))Contiene colorante Acido Blu. Diluire l’intero contenuto del flacone a 700ml con acqua distillata.Agitare “overnight” e filtrare prima dell’uso. Conservare in una bottiglia tappata ermeticamente.

33.. SSoolluuzziioonnee ddeeccoolloorraannttee ccoonncceennttrraattaa ((22xx 110000mmll))Contiene soluzione decolorante concentrata. Diluire l’intero flacone a 5 litri con acqua distillata.Conservare in una bottiglia tappata ermeticamente.

44.. AAllttrrii ccoommppoonneennttii ddeell kkiittCiascun kit contiene un foglio procedurale e blotter C in quantità sufficiente per completare 10 gel.

CCOONNSSEERRVVAAZZIIOONNEE EE SSTTAABBIILLIITTÀÀ11.. GGeell SSAASS--33 SSiieerroopprrootteeiinnee SSBB

I gel devono essere conservati a 15...30°C e sono stabili fino alla data di scadenza riportata sullaconfezione. NON REFRIGERARE NÉ CONGELARE. Il deterioramento del gel può essereindicato da 1) formazioni cristalline per effetto di congelamento, 2) screpolature e fessurazione pereffetto di essiccamento oppure, 3) contaminazione visibile dell’agarosio causata da batteri o funghi.

22.. CCoolloorraannttee AAcciiddoo BBlluuIl colorante concentrato deve essere conservato a 15...30°C ed è stabile fino alla data di scadenzariportata sull’etichetta. La soluzione colorante diluita è stabile per 6 mesi a 15...30°C. Si raccomanda di gettare immediatamente il colorante utilizzato per evitare la riduzione dellacapacità di colorazione. Risultati insoddisfacenti della colorazione possono indicare undeterioramento della soluzione colorante.

16

33.. SSoolluuzziioonnee ddeeccoolloorraanntteeLa soluzione decolorante concentrata deve essere conservata a 15...30°C ed è stabile fino alla datadi scadenza riportata sull’etichetta. La soluzione decolorante diluita è stabile per 6 mesi a15...30°C. La presenza di torbidezza può indicare il deterioramento della soluzione decolorante.

MMAATTEERRIIAALLII NNEECCEESSSSAARRII,, MMAA NNOONN IINN DDOOTTAAZZIIOONNEECod. N. 310200 Lamelle di applicazione dei campioni (1 x 10)Cod. N. 310300 Lamelle di applicazione dei campioni (5 x 10)Cod. N. 210100 Coppette per campioni monouso (100)Cod. N. 3100 Preparazione REP

RRAACCCCOOLLTTAA EE PPRREEPPAARRAAZZIIOONNEE DDEEII CCAAMMPPIIOONNIIIl siero fresco è il campione da preferire. Mentre i campioni possono essere conservati fino a 4 giornia 15...30°C, fino a 2 settimane a 2...6°C o 6 mesi a -20°C, per i pattern a 5 bande standard

6, la banda

della beta-2 globulina (complemento C3) subisce un rapido degrado in fase di conservazione. Si possono utilizzare campioni di urine e CSF previa opportuna concentrazione (50-100X). L’utilizzodel plasma può portare alla comparsa del fibrinogeno tra la frazione beta e la frazione gamma.

FFaattttoorrii dd’’iinntteerrffeerreennzzaa::1) L’emolisi può causare falsi incrementi delle frazioni alfa2 e beta. 2) Si possono ottenere risultati inattendibili se i campioni vengono conservati non coperti, a causa

dell’evaporazione.

PPRROOCCEEDDUURRAA1. Impostare i seguenti parametri nello strumento:

FFaassee TTeemmppoo ((mmmm::ssss)) TTeemmppeerraattuurraa ((°°CC)) TTeennssiioonnee AAllttrrooEElleettttrrooffoorreessiiCaricare campione 00:30 21 Velocità 1Applicare campione 00:30 21 Velocità 1*Elettroforesi 13:00 18 480Asciugare 08:00 54

* - Utilizzare l’impostazione 1 per SPIFE 3000 e SAS-3.

CCoolloorraattoorreeColorare 04:00 Ricircolo ONDecolorare 02:00 Ricircolo ONDecolorare 02:00 Ricircolo ONAsciugare 16:00 70

2. Collocare il numero esatto di lamelle di applicazione sullo strumento:

NNuummeerroo ddii ccaammppiioonnii PPoossiizziioonnee ddeellll’’aapppplliiccaattoorreeSSPPIIFFEE CCoommbboo SSPPIIFFEE 22000000//33000000//SSAASS--33

60 2, 9, 16 2, 8, 1440 2, 9 2, 820 2 2

17

SAS-3 SIEROPROTEINE SB

Italiano

3. ii)) PPeerr ggllii uuttiilliizzzzaattoorrii ddii SSPPIIFFEE CCoommbboo:: Pipettare 17µl di campione nel pozzetto appropriato dellabase di campioni. Evitare che i campioni evaporino.iiii)) PPeerr ggllii uuttiilliizzzzaattoorrii ddii SSPPIIFFEE 22000000 // 33000000 // SSAASS--33:: Pipettare 35µl di campione nelle coppette percampioni monouso appropriate. Evitare che i campioni evaporino.

4. Estrarre il gel dalla confezione ed eliminare la pellicola protettiva.5. Distribuire 2ml di preparazione REP sul lato sinistro della camera e sistemare con cautela il gel nella

camera stessa, allineando i fori del gelbond con i piedini presenti nella camera ed evitando che siformino bolle sotto il gel. Fissare gli elettrodi all’esterno dei puntali, in modo tale che entrino acontatto con i blocchi di gel.

6. Asciugare la superficie del gel con un blotter C, quindi gettarlo.7. Selezionare il programma del test Sieroproteine e, seguendo le indicazioni, applicare i campioni e

dare inizio all’elettroforesi.8. In seguito all’elettroforesi, rimuovere gli elettrodi e rimuovere entrambi i blocchi di gel utilizzando

il Gel Block Remover.9. Fissare il gel al supporto della camera di colorazione.10. Selezionare il programma del test Sieroproteine sull’unità di colorazione e, seguendo le indicazioni,

colorare, decolorare e asciugare il gel.11. Al termine del ciclo di colorazione, rimuovere il gel dalla camera di colorazione. Ora il gel è pronto

per essere esaminato.

IINNTTEERRPPRREETTAAZZIIOONNEE DDEEII RRIISSUULLTTAATTIISi consiglia ad ogni singolo laboratorio di valutare i gel rispetto ai valori normali prodotti per questometodo.

Per uno studio approfondito della valutazione delle sieroproteine ved. Ritzmann, S.E, 19825. Alcuni

studi dimostrano che i valori proteici rimangono invariati negli uomini e nelle donne non in gravidanza.Alcune differenze si possono verificare nelle gestanti a termine e in donne che utilizzano contraccettiviorali.L’età produce alcuni effetti sui valori normali. Il sangue cordale presenta minori frazioni di proteinetotali, albumina, alfa-2 e beta; si riscontra un lieve aumento di alfa-1, mentre rimane invariata oppureaumenta la frazione gamma (in gran parte di origine materna). Le gammaglobuline si riduconorapidamente fino ai 3 mesi di età circa, mentre altre frazioni hanno raggiunto i livelli dell’età adulta giàin questa fase. Le gammaglobuline non raggiungono i livelli dell’età adulta fino ai 10-16 anni. Oltre i 40anni, l’albumina diminuisce e le beta globuline aumentano.

11.. VVaalluuttaazziioonnee qquuaalliittaattiivvaa:: I gel possono essere ispezionati visivamente per accertare la presenza o assenza di bande diparticolare interesse.

22.. VVaalluuttaazziioonnee qquuaannttiittaattiivvaa:: Analizzare i gel (con il lato del gel rivolto verso il basso) a 595nm.

In altri casi, un aumento o diminuzione di particolari componenti del siero, oppure la presenza dicomponenti del siero insolite, richiede un’ulteriore indagine. Il gel completato di SAS-3 SieroproteineSB è stabile per un tempo indefinito.

18

CCOONNTTRROOLLLLOO QQUUAALLIITTÀÀI controlli del siero Kemtrol (Cod. N. 7024 e 7025) possono essere utilizzati per verificare tutte le fasidella procedura e devono inoltre essere utilizzati su ogni piastra. Per maggiori informazioni sui valoriattesi, fare riferimento al foglietto illustrativo presente nella confezione.

LLIIMMIITTAAZZIIOONNIIDal momento che tutte le procedure elettroforetiche sono non-lineari, è importante seguireattentamente queste istruzioni per l’uso per ottenere un’ottimale risoluzione e riproducibilità deirisultati. Il mancato rispetto di queste istruzioni per l’uso può compromettere i risultati ottenuti.

VVAALLOORRII DDII RRIIFFEERRIIMMEENNTTOOUtilizzando 14 campioni normali provenienti da donatori di entrambi i sessi e di età compresa tra 20 e59 anni, sono stati ottenuti i seguenti range (forniti a puro titolo indicativo):

FFrraazziioonnii pprrootteeiicchhee MMeeddiiaa ((%%)) ++ 22SSDD ((rraannggee))Albumina 60.5 54.9 - 66.1Alfa-1 2.8 2.1 - 3.5Alfa-2 8.5 6.1 - 10.9Beta-1 8.3 6.5 - 10.1Beta-2 4.1 2.7 - 5.5Gamma 15.8 11.7 - 19.9

CCAARRAATTTTEERRIISSTTIICCHHEE PPRREESSTTAAZZIIOONNAALLIIRRiipprroodduucciibbiilliittàà

EEnnttrroo iill ggeell ((nn==6600)) TTrraa ii ggeell ((nn==118800))MMeeddiiaa ((%%)) CCVV ((%%)) MMeeddiiaa ((%%)) CCVV ((%%))

Albumina 59.29 1.7 59.12 2.3Alfa-1 3.19 11.7 3.15 12.8Alfa-2 9.72 3.5 9.69 4.2Beta-1 8.19 3.7 8.21 3.9Beta-1 6.59 4.5 6.52 4.5Gamma 13.02 4.0 13.31 4.9

SSeennssiibbiilliittààIl metodo è sensibile fino a 0,3g/L per banda, determinato come la minima concentrazione di proteine,le quali sono visibili sotto forma di banda distinta sul gel completato.

LLiinneeaarriittààLa linearità del metodo è una funzione della specificazione densitometrica nonché delle prestazioni delgel. Si raccomanda ad ogni cliente di determinare la linearità del metodo sulla base del densitometroin uso nel laboratorio.

19

SIEROPROTEINE SB SAS-3

Italiano

BBIIBBLLIIOOGGRRAAFFIIAA1. Alper, C.A. ‘Plasma Protein Measurements as a Diagnostic Aid’, N. Eng. J. Med., 1974; 291 : 287-

290.2. Tiselius, A. ‘A New Apparatus for Electrophoretic Analysis of Colloidal Mixtures’, Trans. Faraday

Soc., 1937; 33 : 524.3. Ritzmann, S.E and Daniels, J.C. ‘Diagnostic Proteinology: Separation and Characterization of


4. Tietz, N.W. (Ed.), Textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphia, pages 579-582, 1986.



20

UUSSOO PPRREEVVIISSTTOOEl kit de proteínas séricas SB SAS-3 tiene como objeto la separación y cuantificación de proteínasséricas por electroforesis con gel de agarosa.

El suero contiene más de 100 proteínas individuales, cada una de ellas con una serie de funcionesespecíficas que están sujetas a variaciones en su concentración bajo diferentes condiciones patológicas

1.

Desde la introducción de la electroforesis marginal móvil por Tiselius2

y el empleo subsiguiente de laelectroforesis de zona, las proteínas séricas SB se han fraccionado tomando como base su carga conun pH determinado.El kit de proteínas séricas SB SAS-3 separa, en un gel de agarosa, las proteínas séricas en 6 clasesprincipales (albúmina, alfa 1-globulina, alfa 2-globulina, beta1-globulina, beta2-globulina ygammaglobulina) según su carga. Luego las proteínas son coloreadas para permitir su visualización einterpretación cuantitativa. Cada una de las zonas electroforéticas clásicas, con la excepción de laalbúmina, contiene normalmente 2 o más componentes. Las proporciones relativas de estas fraccioneshan demostrado su utilidad como ayuda en el diagnóstico y pronóstico de ciertos estados deenfermedad

3-5.

AADDVVEERRTTEENNCCIIAASS YY PPRREECCAAUUCCIIOONNEESSTodos los reactivos son exclusivamente para uso diagnóstico in-vitro. No ingerir ni chupar con la bocaningún componente del kit. Usar guantes para manejar todos los componentes del kit. Consultar lahoja con los datos de seguridad del producto acerca de los riesgos de los componentes, avisos deseguridad y consejos para su eliminación.

CCOOMMPPOOSSIICCIIÓÓNN11.. GGeell ddee pprrootteeíínnaass sséérriiccaass SSBB SSAASS--33.. ((xx1100))

Contiene agarosa en un tampón de Tris-Barbital, con Tiomersal y azida de sodio comoconservantes. El gel viene envasado listo para usar.

22.. CCoolloorraannttee aazzuull áácciiddoo ccoonncceennttrraaddoo.. ((11xx 7755mmll))Contiene colorante concentrado azul ácido. Diluir el contenido del vial en 700ml con aguadestilada. Dejar agitando durante toda la noche y filtrarlo antes del uso. Guardar en un frascoherméticamente cerrado.

33.. SSoolluucciióónn ddeeccoolloorraannttee ccoonncceennttrraaddaa.. ((22xx 110000mmll))Contiene solución decolorante concentrada. Diluir el contenido del frasco en 5 litros con aguadestilada. Guardar en un frasco herméticamente cerrado.

44.. OOttrrooss ccoommppoonneenntteess ddeell kkiittCada kit contiene una hoja de instrucciones y secante C hasta completar 10 geles.

AALLMMAACCEENNAAMMIIEENNTTOO YY PPEERRÍÍOODDOO DDEE VVAALLIIDDEEZZ11.. GGeell ddee pprrootteeíínnaass sséérriiccaass SSBB SSAASS--33..

Los geles han de almacenarse a 15...30°C y permanecen estables hasta la fecha de caducidadindicada en el envase. NO REFRIGERAR NI CONGELAR. El deterioro del gel puede estarindicado por: 1) apariencia cristalina, indicativo de que el gel ha sido congelado, 2) agrietamiento ydescamación, indicativo del resecamiento del gel, o 3) contaminación visible de la agarosa porfuentes bacterianas o micóticas.

21

PROTEÍNAS SÉRICAS SB SAS-3

Español

22.. CCoolloorraannttee aazzuull áácciiddoo..El colorante concentrado ha de almacenarse a 15...30°C y es estable hasta la fecha de caducidadindicada en el envase. La solución colorante preparada es estable durante 6 meses a 15...30°C. Es aconsejable desechar inmediatamente el colorante usado para evitar el agotamiento de sucapacidad de coloración. Unos malos resultados en la coloración pueden ser indicio de deteriorode la solución colorante.

33.. SSoolluucciióónn ddeeccoolloorraanntteeEl concentrado decolorante debe guardarse a 15...30°C y permanece estable hasta la fecha decaducidad indicada en el envase. La solución decolorante diluida es estable durante 6 meses a15...30°C. La aparición de turbidez puede ser indicio de deterioro de la solución decolorante.

AARRTTÍÍCCUULLOOSS NNEECCEESSAARRIIOOSS NNOO SSUUMMIINNIISSTTRRAADDOOSSNº de catálogo 310200 Aplicadores de muestras 1 x 10Nº de catálogo 310300 Aplicadores de muestras 5 x 10Nº de catálogo 210100 Vasos de recogida de muestras desechables 100Nº de catálogo 3100 REP Prep

RREECCOOGGIIDDAA YY PPRREEPPAARRAACCIIÓÓNN DDEE MMUUEESSTTRRAASSLa muestra consistirá en suero recién obtenido. Aunque las muestras pueden almacenarse 4 días a15...30°C, 2 semanas a 2...6°C, ó 6 meses a -20°C para un modelo estándar de 5 bandas

6, la banda beta

2-globulina (Complemento C3) se degradará rápidamente al almacenarse. También se puede usarorina y CSF siguiendo una fase de concentración adecuada (50 - 100X). El empleo de plasma tendrácomo resultado la aparición de una banda de fibrinógeno entre las fracciones beta y gamma.

FFaaccttoorreess pprroobblleemmááttiiccooss::1) La hemólisis puede causar una falsa elevación de las fracciones alfa-2 y beta. 2) Se pueden obtener resultados imprecisos en muestras que se hayan dejado sin cubrir, debido a la

evaporación.

PPRROOCCEEDDIIMMIIEENNTTOO PPAASSOO AA PPAASSOO1. Programar los siguientes parámetros en el instrumento:

PPaassoo HHoorraa ((mmmm::ssss)) TTeemmppeerraattuurraa ((ººCC)) TTeennssiióónn OOttrroossEElleeccttrrooffoorreessiissCargar muestra 00:30 21 Velocidad 1Aplicar muestra 00:30 21 Velocidad 1*Electroforesis 13:00 18 480Secar 08:00 54

* - Utilizar posición 1 para SPIFE 3000/SAS-3

CCoolloorraaddoorrColorear 04:00 Recirculación ONDecolorar 02:00 Recirculación ONDecolorar 02:00 Recirculación ONSecar 16:00 70

22

2. Colocar en el instrumento el número correcto de unidades de aplicadores:

NNúúmmeerroo ddee mmuueessttrraass PPoossiicciióónn ddeell aapplliiccaaddoorrSSPPIIFFEE CCoommbboo SSPPIIFFEE 22000000//33000000//SSAASS--33

60 2, 9, 16 2, 8, 1440 2, 9 2, 820 2 2

3. ii)) UUssuuaarriiooss ddee SSPPIIFFEE CCoommbboo:: Introducir con una pipeta 17µl de la muestra en cada cavidad de labase para muestras. Proteger las muestras de la evaporación.iiii)) UUssuuaarriiooss ddee SSPPIIFFEE 22000000 // 33000000 // SSAASS--33:: Con una pipeta, introducir 35µl de la muestra en losvasos de recogida de muestras desechables apropiados. Proteger las muestras de la evaporación.

4. Sacar el gel del envase y desechar la lámina sobrepuesta.5. Administrar 2ml de REP Prep al lado izquierdo de la cámara y colocar cuidadosamente el gel en la

cámara, alineando los orificios en la ligazón del gel con las espigas de la cámara y evitando laformación de burbujas debajo del gel. Conectar los electrodos a la parte externa de los bordes,de forma que estén en contacto con los bloques de gel.

6. Secar la superficie del gel con un secante C y luego desechar el secante.7. Seleccionar el programa de pruebas de proteínas séricas y, siguiendo las indicaciones, aplicar las

muestras y realizar la electroforesis.8. Tras la electroforesis, retirar los electrodos y ambos bloques de gel utilizando el extractor de

bloques de gel.9. Sujetar el gel al soporte de la cámara de coloración.10. Seleccionar el programa de prueba de proteínas séricas y, siguiendo las instrucciones, fijar,

decolorar y secar el gel.11. Finalizado el ciclo de coloración, sacar el gel de la cámara de coloración. Ahora, el gel está listo

para ser examinado.

IINNTTEERRPPRREETTAACCIIOONN DDEE RREESSUULLTTAADDOOSSEs aconsejable realizar cualquier evaluación de los geles contrastándola con valores normales obtenidospor este método en cada laboratorio en particular.

Para obtener un análisis completo de la evaluación de proteínas séricas, leer a S. E. Ritzmann, 19825.

Los estudios muestran que los valores son los mismos tanto para hombres como para mujeres noembarazadas. Se han detectado algunas diferencias en mujeres al término de su embarazo y enmujeres que utilizan anticonceptivos orales.La edad tiene algún efecto sobre los niveles normales. La sangre del cordón umbilical tiene fraccionestotales de proteínas, albúmina, alfa 2 y beta reducidas, la fracción alfa 1 ligeramente incrementada ygamma normal o incrementada (en gran parte de origen materno). Las gammaglobulinas se reducenrápidamente cerca de los 3 meses de edad, mientras que otras fracciones ya han alcanzado nivelesadultos. Los niveles adultos de las gammaglobulinas no son alcanzados hasta los 10 - 16 años de edad.La albúmina decrece y la betaglobulina aumenta a partir de los 40 años de edad.

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11.. EEvvaalluuaacciióónn ccuuaalliittaattiivvaa::Los geles se pueden inspeccionar visualmente, para comprobar la existencia o ausencia dedeterminadas bandas de interés.

22.. EEvvaalluuaacciióónn ccuuaannttiittaattiivvaa::Analizar los geles, con el gel hacia abajo, a 595nm.

En cualquier caso, una elevación o disminución de determinados componentes del suero o la detecciónde componentes inusuales en el suero requerirán una investigación posterior. El gel de proteínasséricas SB SAS-3 completado es estable durante un tiempo indefinido.

CCOONNTTRROOLL DDEE CCAALLIIDDAADDLos controles de suero Kemtrol (Nº de catálogo 7024 y 7025) pueden usarse para verificar todas lasfases del procedimiento y debe usarse en cada prueba. Consultar el prospecto del envase, en el quese indican los valores adecuados para los ensayos de laboratorio.

LLIIMMIITTAACCIIOONNEESSPuesto que los procedimientos de electroforesis son no lineales, es importante seguir atentamenteestas instrucciones de uso para asegurar unos resultados de resolución y reproductibilidad óptimos.Omitir el seguimiento de estas instrucciones de uso podría afectar a los resultados obtenidos.

VVAALLOORREESS DDEE RREEFFEERREENNCCIIAALos siguientes márgenes nominales se obtuvieron utilizando 14 muestras normales obtenidas devarones y hembras donantes con edades comprendidas entre 20 y 59 años (estos valores, no obstante,se presentan sólo a modo de guía):

FFrraacccciióónn pprrootteeíínniiccaa MMeeddiiaa ((%%)) MMaarrggeenn ++ 22SSDDAlbúmina 60,5 54,9 - 66,1Alfa 1 2,8 2,1 - 3,5Alfa 2 8,5 6,1 - 10,9Beta 1 8,3 6,5 - 10,1Beta 2 4,1 2,7 - 5,5Gamma 15,8 11,7 - 19,9

CCAARRAACCTTEERRÍÍSSTTIICCAASS FFUUNNCCIIOONNAALLEESSRReepprroodduuccttiibbiilliiddaadd

DDeennttrroo ddeell ggeell ((nn==6600)) EEnnttrree eell ggeell ((nn==118800))MMeeddiiaa ((%%)) CCVV ((%%)) MMeeddiiaa ((%%)) CCVV ((%%))

Albúmina 59.29 1.7 59.12 2.3Alfa 1 3.19 11.7 3.15 12.8Alfa 2 9.72 3.5 9.69 4.2Beta 1 8.19 3.7 8.21 3.9Beta 2 6.59 4.5 6.52 4.5Gamma 13.02 4.0 13.31 4.9

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SSeennssiibbiilliiddaaddEl método es sensible a 0.3g/l por banda, determinado como la concentración más baja de proteínasque se consigue apreciar en forma de banda discreta en el gel completado.

LLiinneeaalliiddaaddLa linealidad del método está en función de la especificación del densitómetro así como de lascaracterísticas del gel. Es aconsejable que cada cliente determine la linealidad del método basándoseen el densitómetro utilizado en el laboratorio.

BBIIBBLLIIOOGGRRAAFFÍÍAA1. Alper, C.A. ‘Plasma Protein Measurements as a Diagnostic Aid’, N. Eng. J. Med., 1974; 291 : 287-

290.2. Tiselius, A. ‘A New Apparatus for Electrophoretic Analysis of Colloidal Mixtures’, Trans. Faraday

Soc., 1937; 33 : 524.3. Ritzmann, S.E. and Daniels, J.C. ‘Diagnostic Proteinology: Separation and Characterization of


4. Tietz, N.W. (Ed.), Textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphia, pages 579-582, 1986.



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SAS-3 Serum Protein SBperamed.com/peramed/docs/300200_5060169852334_EN.pdf · Le kit SAS-3 Protéines sériques SB sépare les protéines sériques en 6 fractions principales (albumine,