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Esame urine : fisico-chimico e microscopia Utilizzo e valori aggiunti Utilizzo e valori aggiunti Sedimento Urinario : metodiche a confronto Sedimento Urinario : metodiche a confronto Contrasto di fase : valore aggiunto Contrasto di fase : valore aggiunto Dott. Giuseppe Natale

Sedimento Urinario : metodiche a …LLesame’esame microscopico del sedimento urinario si esegue : microscopico del sedimento urinario si esegue : 1- a fresco al microscopio ottico

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Esame urine : fisico-chimico e microscopiaUtilizzo e valori aggiuntiUtilizzo e valori aggiunti

Sedimento Urinario : metodiche a confrontoSedimento Urinario : metodiche a confrontoContrasto di fase : valore aggiuntoContrasto di fase : valore aggiunto

Dott. Giuseppe Natale

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Esame urine : fisico-chimico e microscopiaUtilizzo e valori aggiuntiUtilizzo e valori aggiunti

●L’esame microscopico del sedimento urinario si esegue :●L esame microscopico del sedimento urinario si esegue :●1- a fresco al microscopio ottico – metodo “manuale”●2- con metodiche automatizzate, di due tipi :- con analisi citofluorimetricacon analisi citofluorimetrica-con acquisizione delle immagini e scansione delle stesse a videoterminalevideoterminaleEntrambe le metodiche hanno applicazione universale con i i l i i di d i i àsistemi completamente automatici e per grandi produttività

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Esame urine : fisico-chimico e microscopiaUtilizzo e valori aggiuntiUtilizzo e valori aggiunti

Analisi del sedimento “a fresco” per identificare Analisi del sedimento “a fresco” per identificare ppelementi significativielementi significativiA li i b i di tA li i b i di t 100100 150150 (LP)(LP)Analisi a basso ingrandimento: Analisi a basso ingrandimento: 100100--150 150 x (LP)x (LP)Analisi ad alto ingrandimento (HP) Analisi ad alto ingrandimento (HP) 400400--450450xxg ( )g ( )Indicazione numerica (Elementi / HPMF)Indicazione numerica (Elementi / HPMF)

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Esame urine : fisico-chimico e microscopiaUtilizzo e valori aggiuntiUtilizzo e valori aggiunti

Esame microscopico a fresco in modalità manuale: criticità :- raccolta delle urine in una provetta conica (approssimativamente 10 ml);- centrifugazione (5-10 minuti a 800 g);- allestimento dei preparati, utilizzando supporti idonei, e valutazione microscopica;

Ognuno dei passaggi elencati introduce una variabile del procedimento che va adi i ll i i bil i i à d ll’ i i h i iaggiungersi alla inevitabile soggettività dell’esame microscopico, che tuttavia rimane

il “gold standard” , a dispetto di una limitata “accuratezza” dovuta ai numerosi passaggi preanalitici e al significativo impegno di personale qualificato.P ti l t diffi il d t d di è l t if i d t l lParticolarmente difficile da standardizzare è la centrifugazione durante la quale possonoessere perduti almeno il 20% degli eritrociti e il 15% dei leucociti.L’automazione della lettura del sedimento, iniziata più di 20 anni fa, ha comportatogrande miglioramento della precisione quantificazione delle cellule più affidabilegrande miglioramento della precisione, quantificazione delle cellule più affidabile, affinamento degli intervalli di riferimento e soprattutto, aumento della produttività.

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●La strumentazione citofluorimetrica :●La strumentazione citofluorimetrica :

●- utilizza come sorgente luminosa un laser a diodi; il campione aspirato (0 8 1 2 microl ) viene sottoposto acampione aspirato (0,8-1,2 microl.) viene sottoposto a colorazione con due fluorocromi in grado di legarsi ad acidi nucleici:nucleici:

●-dopo un processo di “focalizzazione idrodinamica” viene fatto passare attraverso due celle a flusso una dedicatafatto passare attraverso due celle a flusso, una dedicata all’analisi dei microorganismi e l’altra all’analisi di tutti gli elementi corpuscolati.elementi corpuscolati.

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●Il loro passaggio devia il fascio di luce laser e genera :●Il loro passaggio devia il fascio di luce laser e genera :

●- un segnale di diffusione frontale a 45° (scattering):

●- uno di fluorescenza (frontale e a 45°);

●I parametri misurati vengono convertiti in segnali elettrici, p g g ,che,analizzati,permettono l’identificazione dei diversi elementi presenti nell’urina.

●La cadenza analitica e superiore a 100 test/ora

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Esame urine : fisico-chimico e microscopiaUtilizzo e valori aggiuntiUtilizzo e valori aggiunti

Minima quantità di volume di campione richiesto:Minima quantità di volume di campione richiesto

- Modalità manuale: 1 mLModalità manuale 1 mL

- Modalità automatica: 4 mL

Volume aspirato:p

- Modalità manuale: 800 µL

- Modalità automatica: 1,200 µL

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TECNOLOGIA DI ANALISI DELLA CITOMETRIA A FLUSSOTECNOLOGIA DI ANALISI DELLA CITOMETRIA A FLUSSO IN FLUORESCENZA

Laser a semiconduttori

Coloranti fluorescenti

Conteggio batteri in canale di lettura dedicato, con colorante specifico

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