SFRP4 过表达对结肠癌细胞株 HCT116基因表达谱的影响

复旦大学附属肿瘤医院病理科黄 丹

研 究 背 景

研究背景

CA Cancer J Clin. 2008; 58: 161-179

结直肠癌的发病率

研究背景Wnt 信号通路

分泌型卷曲相关蛋白 SFRP • 一组分泌型糖蛋白家族

• SFRPs 有五个家族成员在人类组织中表达

• 定位于染色体 8p 12 ～ 11.1

• 包括一个特有的同源半胱氨酸富含域（ CRD ）的 N- 末端和一个 C- 末端。 （除 SFRP3 以外）

研究背景

分泌型卷曲相关蛋白 SFRP

• 通过与 Wnt 信号的蛋白质相互作用以阻止它们结合到 Fz 蛋白或与 Fz 形成无功能复合物而阻碍Wnt 信号

研究背景

研 究 目 的•检测 SFRP4 基因转染肠癌细胞株 HCT116 后基因表达谱的变化，深入探讨 SFRP4 在结直肠癌发生中的作用机制。

技术路线pcDNATM 3.1-SFRP4 重组质粒

基因芯片检测（ Pathway 分

析）

双酶切鉴定

WB 鉴定 SFRP4 表达转染 HCT116 后筛选稳定表达株

结果– pcDNATM 3.1-SFRP4 质粒的构建及稳定

转染株的鉴定

– 芯片生物信息学分析

– RT-PCR 验证部分基因芯片的结果

pcDNA3.1 载体大小为 5500bp ，SFRP4 基因片段大小为 1056bp

EcoRI 和 HindIII 双酶切重组质粒后凝胶电泳图

Western Blot 检测 pcDNATM 3.1-SFRP4 质粒稳定转染 HCT116 细胞后 SFRP4 的表达

0 道为 pcDNA3.1 空载体， 1 和 2 道为 pcDNA3.1-SFRP4

– pcDNATM 3.1-SFRP4 质粒的构建及稳定转染株的鉴定

– 芯片生物信息学分析

– RT-PCR 验证部分基因芯片的结果

GenBank ID Gene name CommentsInduction-

fold

NM_001040056 MAPK3 丝裂素活化蛋白激酶 3 4.3

NM_001006617 MAPKAP1 丝裂素活化蛋白激酶相关蛋白 1 5.0

NM_002756 MAP2K3 MAPKK3 2.3

NM_007181 MAP4K1 MAPKKKK1 2.8

NM_021970 MAP2K1IP1 MAPKK1相关蛋白 1 2.3

NM_021284 MEK 蛋氨酸脑啡肽 3.0

上调的 MAPK 家族基因

下调的 TNF家族基因

GenBank ID Gene name Comments Induction-fold

NM_006291 TNFAIP2肿瘤坏死因子， alpha-诱导蛋白2

0.25

NM_006290 TNFAIP3肿瘤坏死因子， alpha-诱导蛋白3

0.38

NM_014350 TNFAIP8肿瘤坏死因子， alpha-诱导蛋白8

0.25

NM_003844 TNFRSF10A 肿瘤坏死因子受体超家族 10A 0.44

NM_003840 TNFRSF10D 肿瘤坏死因子受体超家族 10D 0.5

凋亡相关基因的改变

GenBank ID Gene name Comments

Induction-fold

NM_000875 IGF1R 胰岛素样生长因子受体 4.9

NM_000043 FAS TNF受体超家族成员 6 2.6

NM_006538 BCL2L11 Bcl2-L11 0.13

– pcDNATM 3.1-SFRP4 质粒的构建及稳定转染株的鉴定

– 芯片生物信息学分析

– RT-PCR 验证部分基因芯片的结果

1 ，细胞转染 SFRP4 前； 2 ，细胞转染 SFRP4 后。β-actin 作为对照。

RT-PCR 验证基因芯片结果

讨论我们通过基因芯片技术对基因组进行高通量的研究，通过生物信息学分析，我们筛选出比较重要的 p38MAPK 信号通路相关基因、TNF 家族基因和凋亡有关基因的变化来探讨 SFRP4 对肿瘤细胞的作用机制。

讨论– MAPK 信号通路参与细胞增殖、分化及凋亡的

调控，并在细胞恶性转化的病理过程中发挥重要作用

– 肿瘤坏死因子（ TNF ）家族是一类具有广泛生物学活性的分子，具有抗肿瘤、调节细胞生长分化等作用。它能直接抑制肿瘤增殖和诱导凋亡，有较强抗肿瘤的作用

– 结直肠癌细胞表达 SFRP4 后，促进凋亡和抑制凋亡的因子同时发生改变，提示其对凋亡的调控是一个复杂的过程。

谢谢！