Laboratorio

Natalia Regina Mesa Herrera

Bact. MSc. Dr.rer.nat

Endocrinología y Metabolismo

Facultad de Medicina

U de A

Cuantificación de colesterol y

lipoproteínas

1. Determinar el colesterol total y el colesterol

HDL con:

- El metodo de Liebermann Buchard para

colesterol total

- Precipitacion diferencial con polianiones

para colesterol HDL

Objetivos

2. Correlacionar con un resumen del dueño de

la muestra:

Incluir: Edad, sexo,profesion, regimen de vida, presion arterial,

e informacion adicional del laboratorio clinico.

Objetivos

El colesterol

•Mayor parte de la molécula hidrófoba

•Molécula más rígida que los lípidos

complejos

•Estabilizador de membrana

•Importante sobre todo en homeotermos

•Síntesis de otros esteroides

COLESTEROL

Hay problemas con el metabolismo en humanos

ya que se absorbe pero no se elimina fácilmente

Los transportadores de colesterol pueden

depositarlo en las arterias y disminuir su

elasticidad y grosor Aterosclerosis. Hasta un

50% de las muertes en países desarrollados

están relacionadas con este problema.

COLESTEROL

1. Reactivos para colesterol:

- Ácido sulfúrico concentrado

- Ácido p-tolueno sulfónico

- Ácido acético glacial

- Anhidrido acético

Materiales

2. Solución patrón de colesterol

3. Solución de ácido fosfotungstico con Mg2

4. Fotocolorímetro (560 µ)

5. Centrífugas clínicas

6. Baño María 37 ºC

7. Tubos

Materiales

1. Muestra 1:

Pool de suero o plasma

2. Muestra 2:

sobrenadante del suero

precipitado de todas las lipoprotéinas menos

las HDL.

Cuantificación de COL-HDL

1. Quilomicrones y lipoprotienas:

ácido fosfotungstico con Mg2

2. Centrifugación

3. Reacción de color:

Liebermann Burchard

Fundamento 1

1. Mezclar ácido fosfotungstico con Mg2 (0,12ml)

2. Mezclar

3. Dejar reposar 10 min a TºC

4. Centrifugar 30 min 5000rpm

5. Separar el sobrenadante

Procedimiento

1. Ácido p-tolueno sulfónico

2. Ácido acético glacial

Color verde parduzco intenso

COLESTEROL

Fundamento 2

Preparación de tubos

Tubos Blanco Estandar COL. en HDL COL total

Agua destilada 0.1 ml 0 0 0

Est COL 200 mg/dl

0 0.1 ml 0 0

Sobrenadante 0 0 0.1 ml 0

Suero Sanguineo

0 0 0.1 ml

Reactivo de color

5ml 5ml 5ml 5ml

1. Mezclar

2. Dejar reposar 10 min a 37ºC

3. Mezclar

4. Calibrar fotocolorímetro con sln blanco (560µ)

5. Aplicación de la ley de Lambert Beer

6. Calcular la concentración de HDL y COL total

Procedimiento

Absorbancia Colesterol x 200 mg/dl

Absorbancia estandar

Formula

Índice Arterogénico:

Colesterol total

Colesterol en HDKL

Cumplimiento de la ley de Lambert-Beer

Figura 5.