SLOVENSKÁ REPUBLIKA EURÓPSKEHO PATENTOVÉHO SPISU E …

SLOVENSKÁ REPUBLIKA

(19) SK

PREKLAD EURÓPSKEHO

PATENTOVÉHO SPISU (97) EP 2 851 096 B1

(11) Číslo dokumentu:

E 30077

ÚRAD

PRIEMYSELNÉHO

VLASTNÍCTVA

SLOVENSKEJ REPUBLIKY

(96) Číslo a dátum podania európskej patentovej

prihlášky: EP12877065.8, 8. 6. 2012

(97) Dátum vydania európskeho patentového

spisu: 28. 11. 2018

(31) Číslo prioritnej prihlášky: 20120052141

(32) Dátum podania prioritnej prihlášky: 16. 5. 2012

(33) Krajina alebo regionálna organizácia priority: KR

(45) Dátum sprístupnenia prekladu európskeho

patentového spisu verejnosti: 4. 6. 2019

Vestník ÚPV SR č.: 06/2019

(62) Číslo pôvodnej prihlášky v prípade vylúčenej

prihlášky:

(86) Číslo podania medzinárodnej prihlášky podľa PCT:

PCT/KR2012/004524

(87) Číslo zverejnenia medzinárodnej prihlášky podľa PCT:

WO 2013/172504

(13) Druh dokumentu: T3

(51) Int. Cl. (2019.01):

A61L 27/00

A61F 2/00

A61K 38/00

A61M 5/00

(73) Majiteľ: Sewon Cellontech Co., Ltd, Seoul, KR;

(72) Pôvodca: YEO Se Ken, Yongin-si Gyeonggi-do, KR;

CHANG Cheong Ho, Seoul, KR;

YOO Ji Chul, Namyangju-si Gyeonggi-do, KR;

SUH Dong Sam, Seoul, KR;

LEE Jun Keun, Seoul, KR;

WOO Sang Hun, Bucheon-si Gyeonggi-do, KR;

(74) Zástupca: HÖRMANN & PARTNERS s.r.o., Bratislava - mestská časť Nové Mesto, SK;

(54) Názov: Kompozícia na obnovu chrupavkového tkaniva, spôsob jej výroby a jej použitie

Poznámka: V lehote deviatich mesiacov odo dňa zverejnenia oznámenia o udelení európskeho patentu môže každý

podať na Európsky patentový úrad námietky proti udelenému európskemu patentu. Námietky sa podávajú písomne

a musia byť odôvodnené. Námietky sa považujú za podané až po zaplatení poplatku za námietky (Čl. 99(1) Európskeho

patentového dohovoru).

Preklad európskeho patentového spisu bol predložený podľa § 63 ods. 2 zákona č. 435/2001 Z. z. Za správnosť prekladu

Úrad priemyselného vlastníctva Slovenskej republiky nezodpovedá.

(10

)

S

K

E 3

0077

T

3

Ing. Zuzana Hörmannová 1patentový zástupcaBratislava, SK

EP 2 851 096 HÖRMANN &PARTNERS s.r.o. 37408/H

www.htpatent.sk

KOMPOZÍCIA NA OBNOVU CHRUPAVKOVÉHO TKANIVA, SPÔSOB JEJ

VÝROBY A JEJ POUŽITIE

Opis

Oblasť techniky

[0001] Predkladaný vynález sa týka kompozície na obnovu chrupavkového

tkaniva, spôsobu jej výroby a spôsobu jej použitia, a konkrétnejšie kompozícia

na báze kolagénu ako biomateriálu je pripravená v injikovateľnej forme, ktorá

môže byť transplantovaná do oblastí s defektom chrupavky, a kompozícia je

teda priamo vložená do aplikačných miest prostredníctvom ihly injekčnej

striekačky bez chirurgickej incízie na umožnenie podpory obnovy tkaniva, čím

sa indukuje účinná regenerácia chrupavkového tkaniva, a indukuje sa teda

pomerne ľahká a rýchla obnova a regenerácia chrupavky pri súčasnej redukcii

stresu spojeného s chirurgickým zákrokom u živočíchov, s výnimkou ľudských

bytostí, takže kvalita a spoľahlivosť prípravku môžu byť významne zlepšené, a

tým sa uspokoja rôzne túžby (potreby) spotrebiteľov ako ich užívateľov, a

pacientom sa teda zaistí dobrý účinok.

Doterajší stav techniky

[0002] Ako je dobre známe, poškodenie chrupavky je spôsobené

traumatizáciou, ako je pád, priamy úder alebo točivá sila, alebo ochorením, ako

je artritída, osteonekróza, zápalová artritída alebo osteochondritis dissecans.

Kĺbová chrupavka je tkanivo, ktoré nemá žiadnu neurovaskulárnu distribúciu,

má pozoruhodne nízku samoregeneračnú schopnosť v porovnaní s inými

tkanivami a vykazuje rôzne výsledky v dôsledku rôznych chirurgických operácií

v závislosti na veľkosti a umiestení lézie.

[0003] Kĺbová chrupavka je hladký, veľmi klzký a lesklý biely materiál a je

udržovaná minimalizácia trenia a odolnosti proti opotrebeniu pri pohybe kĺbu. Je

známe, že po poškodení sa kĺbová chrupavka neregeneruje. Poškodenie

2

EP 2 851 096 37408/H

chrupavky ako telesného tkaniva je sprevádzané silnou bolesťou, ktorá

spôsobuje ťažkosti v každodennom živote, a pokiaľ je chronická, poškodená

chrupavka progreduje do degeneratívnej artritídy. Liečba na regeneráciu

poškodených chrupavkových tkanív teda musí byť uskutočňovaná v čase

poškodenia chrupavky, aby sa zabránilo progresii do degeneratívnej artritídy.

[0004] Na liečenie poškodenej oblasti s defektom chrupavky sa používajú

injekcie liekov, fyzikálne terapie, intraartikulárne injekcie steroidov alebo

kyseliny hyalurónovej, alebo podobne, ako neoperačné liečebné metódy, ktoré

iba zmierňujú symptómy a bolesť, ale nemajú žiadny vplyv na liečenie

ochorenia. Alternatívne sa používa stimulácia kostnej drene a postranná

osteochondrálna transplantácia ako operačná liečebná metóda. Po primárnej

stimulácii kostí, ktorá sa vykonáva na mieste, kde je poškodená chrupavka

zmäkčená alebo je exponovaná kosť, je poškodená chrupavka obnovená, čím

sa zmierňuje bolesť a zabráni sa tomu, aby krv prúdiaca z kosti do synovie

rozkladala synoviu a degradovala kapacitu synovie. Avšak stimulácia kostí je

nedostatočne účinná a kyselina hyalurónová dočasne znižuje bolesť, ale

nevedie k indukcii do vhodných nových chrupavkových tkanív. Okrem toho

osteochondrálna transplantácia vyžaduje chirurgický zákrok a je ťažšia a

z hľadiska nákladov je zaťažujúca. V nedávnej dobe bola na liečenie

poškodenej kĺbovej chrupavky uskutočňovaná autológna implantácia

chondrocytov tak, že je odobraté chrupavkové tkanivo pacienta, aby sa z neho

izolovali a kultivovali bunky chrupavky, ktoré sú potom znovu transplantované.

Tento postup trvá dlhú dobu na uskutočnenie dvoch operácií a odber tkanív,

a nie je teda ľahko dosiahnuteľný v dôsledku ekonomickej záťaže pacientov a

poskytovateľov zdravotnej starostlivosti.

[0005] Nový spôsob transplantácie biomateriálu, ktorým je zmesná

kompozícia na báze kolagénu, je teda žiaduci ako jednoduchý postup pre

oblasť s defektom chrupavky. Tento spôsob je užitočný pri včasnej liečbe

oblasti s defektom chrupavky a následne môže znížiť počet pacientov

vyžadujúcich závažné operácie, ako je transplantácia chondrocytov a

chirurgický zákrok pre kĺbové náhrady.

3

EP 2 851 096 37408/H

[0006] V poslednej dobe bolo vykonávaných niekoľko pokusov s aplikáciou

biomateriálov do oblasti s defektom chrupavky.

[0007] Štruktúra ľudského tela sa skladá z buniek a biologicky vytvorených

polymérov. Proteíny nachádzané v ľudskom tele sú reprezentatívnymi

materiálmi. Pokiaľ sa používajú ako prírodné materiály, môžu byť aplikované vo

forme podobnej prírodnému stavu a možno očakávať regeneráciu ľudských

tkanív. Prírodné tkanivá môžu byť použité ako lekárske biologické tkanivá, ktoré

môžu poskytnúť biologické funkcie, ktoré umelé materiály poskytnúť nemôžu,

takže prírodné tkanivá sa vkladajú do ľudského tela, aby poskytli

biokompatibilné prostredie medzi okolitými tkanivami, a ďalej fungujú ako

biologické tkanivá, ako sú prírodné tkanivá.

[0008] Konkrétne kolagén je zložkou štruktúrnych proteínov a predstavuje

1/3 celkových proteínov u cicavca, ktoré tvoria mäkké tkanivá, ako je dermis,

šľacha/väz, krvná cieva a chrupavka, a tvrdé tkanivá ľudského tela.

[0009] Kolagén je v súčasnej dobe používaný na rôzne lekárske účely, ako

je hemostatický účinok, krytie rany a odstránenie vrások. Výrobky z kolagénu,

ktoré boli dlhodobo lekársky používané, sú používané doteraz bez

bezpečnostných problémov.

[0010] Kolagén má výhody, ako je nízka antigenicita, vysoká biologická

kompatibilita a biologická absorbovateľnosť, adhézia k bunkám, bunkový rast,

indukcia bunkovej diferenciácie, koagulácia krvi, hemostatický účinok a

biokompatibilita s inými polymérmi.

[0011] Okrem toho, ako materiál na báze kolagénu, kompozícia, v ktorej je

zmiešaný kolagén, kyselina hyalurónová a fibrínové lepidlo, môže vykazovať

pozoruhodné účinky pri obnove a regenerácii chrupavky.

[0012] Kyselina hyalurónová ako biomateriál je vysoko viskózny

polysacharidový materiál, ktorý je jedným druhom biopolyméru, a nachádza sa

v kohútich hrebienkoch, synoviálnej tekutine, koži, a podobne. Kyselina

hyalurónová je v súčasnej dobe používaná ako adjuvans pri oftalmologickej

chirurgii a ako liečebné činidlá u arthritis deformans v dôsledku vysokej

lubrikačnej sily.

4

EP 2 851 096 37408/H

[0013] Prípravok s koncentráciou kyseliny hyalurónovej 10 mg/ml, ktorý je v

súčasnej dobe dostupný na trhu, je činidlo zlepšujúce funkciu kĺbu, ktoré

odstraňuje bolesť spôsobenú gonartrózou a zmrznutým ramenom, a dočasne

znižuje bolesť, ale spôsobuje problémy v prípade závažného zápalu.

[0014] Za účelom vyriešenia vyššie uvedených problémov boli podané a

zaregistrované niektoré dokumenty doterajšieho stavu techniky. Bol teda

zaregistrovaný dokument doterajšieho stavu techniky 1 ako kórejská patentová

prihláška č. 1 114 773 (2012.02.02, Patent Application No. 2009-0101388,

"Method for Preparing Composition for Articular Cartilage Repairer").

[0015] Bol tiež zverejnený dokument doterajšieho stavu techniky 2 ako

kórejská patentová prihláška č. 2004-0008125 (2004.01.28, Patent Application

No. 2003-7010108, "Compositions and Methods for Treatment and Repair of

Defects or Lesions in Articular Cartilage Using Synovial-Derived Tissue or

Cells").

[0016] Bol tiež zaregistrovaný dokument doterajšieho stavu techniky 3 ako

kórejská patentová prihláška č. 684 932 (2007.02.13, Patent Application No.

2005-0030837, "Method for Cartilage Regeneration Using Mesenchymal Stom

Cells and Ultrasound Stimulation")

[0017] Dokument WO02/36147A1 opisuje spôsob prípravy matrice na

podporu obnovy tkaniva, ktorý zahŕňa kroky oxidácie exogénneho

polysacharidu za vzniku modifikovaného exogénneho polysacharidu majúceho

aldehydové skupiny a reakciu uvedeného modifikovaného exogénneho

polysacharidu s mineralizovaným kolagénom za podmienok, kedy uvedené

aldehydové skupiny kovalentne reagujú tak, že sú zosieťované

s mineralizovaným kolagénom za vzniku uvedenej matrice.

[0018] Avšak vyššie uvedené techniky doterajšieho stavu techniky majú

nasledujúce nedostatky.

[0019] Doterajší stav techniky má teda vážny problém v tom, že nemôže

byť poskytnutá kompozícia zmiešaná s biokompatibilným kolagénom na

regeneráciu novej chrupavky.

[0020] Okrem toho v doterajšom stave techniky sú ťažkosti s tým, že

zmesná kompozícia nie je aplikovaná v injikovateľnej forme, takže je vážnym

5

EP 2 851 096 37408/H

problémom to, že poškodené miesta chrupavkového tkaniva nemôžu byť

pohodlne a účinne stabilizované, a teda nemôže byť podporovaná indukcia

regenerácie chrupavky.

Podrobný opis vynálezu

Technický problém

[0021] Predkladaný vynález bol vyvinutý za účelom riešenia vyššie

uvedených problémov v doterajšom stave techniky a predkladaný vynález

poskytuje kompozíciu na obnovu chrupavkového tkaniva, spôsob jej výroby a

spôsob jej použitia. Podľa prvého aspektu predkladaného vynálezu je

poskytnutá kompozícia na obnovu chrupavkového tkaniva, pričom kompozícia

sa pripraví zmiešaním kolagénu, ktorý má nariedenú koncentráciu 5 - 60 mg/ml

vody alebo fosfátmi pufrovaného fyziologického roztoku; a kyseliny

hyalurónovej, ktorá má nariedenú koncentráciu 5 - 20 mg/ml vody alebo

fosfátmi pufrovaného fyziologického roztoku s použitím dvojcestnej injekčnej

striekačky alebo zmiešavača. Prostredníctvom vyššie opísaného technického

znaku druhým aspektom predkladaného vynálezu je to, že keď je kompozícia

na báze kolagénu ako biomateriálu pripravená v injikovateľnej forme, ktorá

môže byť transplantovaná do oblastí s defektom chrupavky na podporu obnovy

tkaniva, môže byť účinne indukovaná regenerácia chrupavkového tkaniva, a

indukuje sa teda pomerne ľahká a rýchla obnova a regenerácia chrupavky pri

súčasnej redukcii stresu spojeného s chirurgickým zákrokom u živočíchov,

s výnimkou ľudských bytostí. Okrem toho tretím aspektom predkladaného

vynálezu je vyvinúť zmesnú kompozíciu s biokompatibilným kolagénom na

regeneráciu novej chrupavky. Konkrétne štvrtým aspektom predkladaného

vynálezu je to, že zmesná kompozícia je aplikovaná v injikovateľnej forme, čím

sa pohodlne a účinne stabilizujú poškodené miesta chrupavkového tkaniva bez

operácie. Okrem toho piatym aspektom predkladaného vynálezu je to, že môže

byť redukovaná bolesť spôsobená defektom chrupavky. Okrem toho šiestym

aspektom predkladaného vynálezu je to, že môže byť podporovaná indukcia

6

EP 2 851 096 37408/H

regenerácie chrupavky. Okrem toho siedmym predmetom predkladaného

vynálezu je to, že kvalita a spoľahlivosť prípravku môžu byť významne

zlepšené, a tým sa uspokoja rôzne túžby (potreby) spotrebiteľov ako ich

užívateľov, a pacientom sa teda zaistí dobrý účinok.

Technické riešenie

[0022] Podľa jedného aspektu predkladaného vynálezu je poskytnutá

kompozícia na obnovu chrupavkového tkaniva, kompozícia je pripravená

zmiešaním kolagénu, ktorý má nariedenú koncentráciu 5 - 60 mg/ml vody alebo

fosfátmi pufrovaného fyziologického roztoku; a kyseliny hyalurónovej, ktorá má

nariedenú koncentráciu 5 - 20 mg/ml vody alebo fosfátmi pufrovaného

fyziologického roztoku s použitím dvojcestnej injekčnej striekačky alebo

zmiešavača.

[0023] Podľa ďalšieho aspektu predkladaného vynálezu je poskytnutý

spôsob prípravy kompozície na obnovu chrupavkového tkaniva, tento spôsob

zahŕňa: prípravu kolagénu, ktorý má nariedenú koncentráciu 5 - 60 mg/ml vody

alebo fosfátmi pufrovaného fyziologického roztoku; prípravu kyseliny


fosfátmi pufrovaného fyziologického roztoku; zmiešanie kolagénu a kyseliny

hyalurónovej s použitím dvojcestnej injekčnej striekačky alebo zmiešavača; a

odvzdušnenie zmesnej kompozície na obnovu chrupavkového tkaniva

s použitím odstredivky.

[0024] Nárokovaná kompozícia je vhodná na použitie v spôsobe obnovy

chrupavkového tkaniva, tento spôsob zahŕňa: upevnenie nohy prasaťa

v držiaku, poškodenie kĺbovej chrupavky s použitím chirurgického nástroja, a

potom indukciu oblastí defektov 2 ~ 4 cm2 s použitím vŕtačky; pripojenie

injekčnej ihly k zásobníku injekčnej striekačky naplnenej kolagénom; a zašitie

rozrezaného miesta šijacím materiálom a priamu injekciu do glenoidnej dutiny

(priestoru vyplneného synoviou) prasačieho kolena, kolagénu s koncentráciou

5 ~ 60 mg/ml obsiahnutého v injekčnej striekačke, kyseliny hyalurónovej s

koncentráciou 5 ~ 20 mg/ml obsiahnutej v injekčnej striekačke, a kompozície na

7

EP 2 851 096 37408/H

obnovu chrupavkového tkaniva, v ktorej je zmiešaný kolagén a kyselina

hyalurónová.

Výhodné účinky

[0025] Ako je uvedené vyššie, predkladaný vynález poskytuje kompozíciu

na obnovu chrupavkového tkaniva, pričom kompozícia sa pripravuje zmiešaním

kolagénu, ktorý má nariedenú koncentráciu 5 - 60 mg/ml vody alebo fosfátmi

pufrovaného fyziologického roztoku; a kyseliny hyalurónovej, ktorá má



zmiešavača.

[0026] Prostredníctvom vyššie opísaného technického znaku podľa

predkladaného vynálezu, keď je kompozícia na báze kolagénu ako biomateriálu

pripravená v injikovateľnej forme, ktorá môže byť transplantovaná do oblastí

s defektom chrupavky, môže byť účinne indukovaná regenerácia

chrupavkového tkaniva, a indukuje sa teda pomerne ľahká a rýchla obnova a

regenerácia chrupavky pri súčasnej redukcii stresu spojeného s chirurgickým

zákrokom u živočíchov, s výnimkou ľudských bytostí.

[0027] Okrem toho podľa predkladaného vynálezu môže byť poskytnutá

zmesová kompozícia s biologicky kompatibilným kolagénom na regeneráciu

novej chrupavky.

[0028] Konkrétne podľa predkladaného vynálezu je zmesová kompozícia

aplikovaná v injikovateľnej forme, čím sa pohodlne a účinne stabilizujú

poškodené miesta chrupavkového tkaniva.

[0029] Okrem toho podľa predkladaného vynálezu môže byť redukovaná

bolesť spôsobená defektom chrupavky.

[0030] Okrem toho podľa predkladaného vynálezu môže byť indukovaná

regenerácia chrupavky.

[0031] Podľa predkladaného vynálezu kvalita a spoľahlivosť prípravku

môžu byť v dôsledku vyššie uvedených účinkov významne zlepšené, a tým sa

8

EP 2 851 096 37408/H

uspokoja rôzne túžby (potreby) spotrebiteľov ako ich užívateľov, a pacientom sa

teda zaistí dobrý účinok. Predkladaný vynález je teda veľmi užitočný.

Stručný opis obrázkov

[0032]

Obr. 1 je obrázok ilustrujúci zmiešavanie kompozície na obnovu

chrupavkového tkaniva.

Obr. 2 je obrázok ilustrujúci zmiešavanie kompozície na obnovu

chrupavkového tkaniva s použitím dvojcestnej injekčnej striekačky.

Obr. 3 je obrázok ilustrujúci materiál na obnovu chrupavky pripravený v

injikovateľnej forme.

Obr. 4 je obrázok ilustrujúci materiál na obnovu chrupavky zafarbený na

modro za účelom overenia účinkov po injekcii.

Obr. 5 je obrázok ilustrujúci defekty chrupavky indukované na overenie

účinku injikovateľného materiálu na obnovu chrupavky.

Obr. 6 je obrázok ilustrujúci pripojenie injekčnej ihly pre priamu injekciu

do tela.

Obr. 7 je obrázok ilustrujúci priamu injekciu do oblasti s defektom

chrupavky prasačieho kolena.

Obr. 8 je obrázok ilustrujúci oblasť s defektom chrupavky vyplnenú

materiálom na obnovu chrupavky ako výsledok overenia účinkov po

injekcii.

Obr. 9 je obrázok ilustrujúci plniacu kompozíciu, ktorá je zachovaná, bez

toho aby bola zmytá vodou.

Obr. 10 je obrázok ilustrujúci morfológiu transplantácie po transplantácii

zmesovej kompozície kolagénu a fibrínového lepidla.

Obr. 11 a 12 sú fluorescenčné mikroskopické snímky ilustrujúce

proliferáciu buniek chrupavky vo fibrínovom lepidle.


proliferáciu buniek chrupavky v zmesovej kompozícii kolagénu a

fibrínového lepidla.

9

EP 2 851 096 37408/H


proliferáciu buniek chrupavky v 6% zmesovej kompozícii kolagénu a

fibrínového lepidla.

Spôsob uskutočnenia vynálezu

[0033] Ďalej bude v tomto texte podrobne opísané výhodné uskutočnenie

predkladaného vynálezu na dosiahnutie vyššie uvedených účinkov s odkazom

na priložené obrázky.

[0034] Kompozícia na obnovu chrupavkového tkaniva, spôsob jej prípravy

a spôsob jej použitia podľa predkladaného vynálezu sú ukázané na obr. 1 až

10.

[0035] V nasledujúcich opisoch, pokiaľ je zistené, že podrobné opisy

známych funkcií alebo konštrukcií spojených s predkladaným vynálezom

zakrývajú podstatu predkladaného vynálezu, budú tieto podrobné opisy

vynechané.

[0036] Okrem toho termíny, ktoré budú opísané neskôr, sú definované

s ohľadom na funkcie v predkladanom vynáleze, a definície pojmov je teda

potrebné interpretovať v celej predkladanej prihláške, pretože termíny môžu byť

interpretované v súlade so zámerom výrobcu alebo podľa zvyklostí.

[0037] Predkladaný vynález predovšetkým poskytuje kompozíciu na

obnovu chrupavkového tkaniva, kompozícia sa pripravuje zmiešaním kolagénu,

ktorý má nariedenú koncentráciu 5 - 60 mg/ml vody alebo fosfátmi pufrovaného

fyziologického roztoku; a kyseliny hyalurónovej, ktorá má nariedenú

koncentráciu 5 - 20 mg/ml vody alebo fosfátmi pufrovaného fyziologického

roztoku s použitím dvojcestnej injekčnej striekačky alebo zmiešavača.

[0038] Kompozícia na obnovu chrupavkového tkaniva sa pripraví zahrnutím

krokov: príprava kolagénu, ktorý má nariedenú koncentráciu 5 - 60 mg/ml vody

alebo fosfátmi pufrovaného fyziologického roztoku; príprava kyseliny


fosfátmi pufrovaného fyziologického roztoku; zmiešanie kolagénu a kyseliny

hyalurónovej s použitím dvojcestnej injekčnej striekačky alebo zmiešavača; a

10

EP 2 851 096 37408/H

odvzdušnenie zmesnej kompozície na obnovu chrupavkového tkaniva


[0039] Konkrétne je odstredivá separácia s použitím centrifúgy

charakterizovaná tým, že sa vykonáva pri 2000 - 5000 G, pričom teplota

miestnosti sa udržuje na teplote 1 až 30°C.

[0040] Kompozícia na obnovu chrupavkového tkaniva pripravená vyššie

uvedeným spôsobom je vhodná na použitie (spôsob liečby nie je súčasťou

vynálezu) zahrnutím krokov: upevnenie nohy prasaťa v držiaku, poškodenie

kĺbovej chrupavky s použitím chirurgického nástroja, a potom indukciu oblastí

s defektom 2 ~ 4 cm2 s použitím vŕtačky; pripojenie injekčnej ihly k zásobníku

injekčnej striekačky naplnenej kolagénom; a zašitie rozrezaného miesta šijacím

materiálom a priamu injekciu do glenoidnej dutiny (priestoru vyplneného

synoviou) prasačieho kolena, kolagénu s koncentráciou 5 ~ 60 mg/ml

obsiahnutého v injekčnej striekačke, kyseliny hyalurónovej s koncentráciou 5 ~

20 mg/ml obsiahnutej v injekčnej striekačke, a kompozície na obnovu

chrupavkového tkaniva, v ktorej je zmiešaný kolagén a kyselina hyalurónová.

[0041] Okrem toho, podľa predkladaného vynálezu môže byť kompozícia

na obnovu chrupavkového tkaniva pripravená zahrnutím krokov: príprava

kolagénu, ktorý má nariedenú koncentráciu 5 - 60 mg/ml vody alebo fosfátmi

pufrovaného fyziologického roztoku; príprava kyseliny hyalurónovej, ktorá má


fyziologického roztoku; a príprava vzorky, v ktorej sa 60 mg/ml kolagénu a 5

mg/ml kyseliny hyalurónovej zmieša v pomere 9:1 až 1:9, alebo v ktorej sa 60

mg/ml kolagénu a 20 mg/ml kyseliny hyalurónovej zmieša v pomere 5:5.

[0042] Kompozícia vhodná na obnovu chrupavkového tkaniva je vhodná na

použitie uskutočňovaním krokov:

(1) príprava roztoku kolagénu obsiahnutého v zásobníku injekčnej striekačky

a prípravku fibrínového lepidla;

(2) upevnenie nohy prasaťa v držiaku, poškodenie kĺbovej chrupavky

s použitím chirurgického nástroja, a potom indukciu oblastí s defektom 2 ~ 4

cm2 s použitím vŕtačky;

11

EP 2 851 096 37408/H

(3) injekcia kolagénového prípravku obsiahnutého v injekčnej striekačke do

oblasti s defektom chrupavky prasačieho kolena za účelom vyplnenia oblasti

s defektom chrupavky kolagénovým prípravkom a umožnenie fibrínovému

lepidlu pokryť kolagén a potom gélovať, čím sa pevne fixuje kolagén;

(4) na rozdiel od kroku (3) potiahnutie oblasti s defektom chrupavky prasaťa

fibrínovým lepidlom a gélovatenie, a potom injekcia kolagénu do gélu

fibrínového lepidla na vyplnenie oblasti s defektom chrupavky; a

(5) nastriekanie sterilnej injekčnej vody smerom dolu v polohe 10 cm nad

miestom injekcie s použitím injekčnej striekačky (25 ml) na overenie

odolnosti proti tečúcej vode a pozorovanie stavu gélu.

[0043] Okrem toho podľa predkladaného vynálezu je kompozícia na

obnovu chrupavkového tkaniva pripravená tak, že sa vysoko viskózny kolagén

a kyselina hyalurónová alebo zmesná kompozícia kolagénu a kyseliny

hyalurónovej, ako kompozícia na obnovu chrupavky, injikuje vo vopred

naplnenej injekčnej striekačke, čím sa používa v injikovateľnej forme.

[0044] Okrem toho podľa predkladaného vynálezu je kompozícia na

obnovu chrupavkového tkaniva použitá tak, že ihla injekčnej striekačky je

pripojená k injikovateľnému typu injekčného činidla pre chrupavku a ihla

injekčnej striekačky je zavedená do miesta aplikácie s použitím ihly injekčnej

striekačky bez chirurgickej incízie, čím sa priamo injikuje kompozícia na obnovu

chrupavky do glenoidnej dutiny (priestoru vyplneného synoviou) prasačieho

kolena.

[0045] Kompozícia na obnovu chrupavkového tkaniva je vhodná na použitie

tak, že sa pripraví vzorka umelým vytvorením oblasti s defektom chrupavky 2 ~

4 cm2; kompozícia na obnovu chrupavky je zafarbená na modro a injikovaná do

vzorky; a potom sa otvorí transplantované miesto, čím sa overí morfológia

kompozície vyplňujúcej oblasť s defektom chrupavky a overí sa stálosť

kompozície vo vode prostredníctvom stupňa adhézie k oblasti s defektom

chrupavky.

[0046] Avšak je treba poznamenať, že nie je úmyslom obmedziť

predkladaný vynález na špecifické uskutočnenia opísané v podrobnom opise,

ale úmyslom je pokryť všetky modifikácie, ekvivalenty alebo substitúcie, ktoré

12

EP 2 851 096 37408/H

patria k technickej myšlienke a technickému rozsahu predkladaného vynálezu,

ktoré sú definované v priložených nárokoch.

[0047] Kompozícia na obnovu chrupavkového tkaniva, spôsob jej výroby a

spôsob na jej použitia budú opísané nižšie.

[0048] Predovšetkým podľa predkladaného vynálezu, keď sa kompozícia

na báze kolagénu ako biomateriálu pripraví vo forme injekcie schopnej

transplantácie do oblastí s defektom chrupavky, môže byť účinne indukovaná

regenerácia chrupavkového tkaniva, čo umožňuje znížiť stres spojený

s chirurgickým zákrokom u živočíchov, s výnimkou ľudských bytostí, a súčasne

sa indukuje relatívne ľahká a okamžitá obnova a regenerácia chrupavky.

[0049] Okrem toho, čo nie je súčasťou predkladaného vynálezu, liečba

defektu chrupavky je možná prostredníctvom jednoduchého postupu, a

s použitím vhodného postupu, pri ktorom sa vykonáva transplantácia

jednoduchej injekčnej kompozície bez chirurgického zákroku, je možná včasná

liečba defektu chrupavky, čím sa zníži počet pacientov vyžadujúcich chirurgický

zákrok na kĺboch. Okrem toho vyššie uvedená preventívna liečba môže viesť k

zníženiu počtu pacientov s osteoartritídou.

[0050] Nasledujú príklady predkladaného vynálezu.

(Príklad 1)

Aplikácia zmesného prípravku kolagénu a kyseliny hyalurónovej na oblasť

s defektom chrupavky zvieraťa

[0051] Účel: Overenie použiteľnosti zmesnej kompozície kolagénu a

kyseliny hyalurónovej injikovateľného typu na oblasť s defektom chrupavky

prasačieho kolena

1. Pripraví sa kolagén s koncentráciami 5, 10, 20, 30 a 60 mg/ml a

kyselina hyalurónová s koncentráciami 5, 10 a 20 mg/ml.

[0052] Koncentrácia kolagénu: Na obnovu chrupavky, ako použitia

predkladaného prípravku, je vyžadovaná koncentrácia kolagénu 5 mg/ml alebo

vyššia, aby sa zachoval stav, v ktorom je oblasť s defektom chrupavky vyplnená

13

EP 2 851 096 37408/H

kolagénom. Vzhľadom k charakteristikám procesu (aseptický prípravok) pri

príprave prípravku na lekárske účely (injikovateľná forma) je ťažké pripraviť

kolagén nad 60 mg/ml s ultra-vysokou viskozitou a skutočne použiť a aplikovať

takýto kolagén. Z tohto dôvodu je koncentrácia kolagénu nastavená na 5 mg/l

až 60 mg/l vrátane.

[0053] Koncentrácia kyseliny hyalurónovej: Je ťažké pripraviť (asepticky

pripraviť) kyselinu hyalurónovú s 20 mg/ml na lekárske účely vzhľadom

k prírodným vlastnostiam kyseliny hyalurónovej (viskozita apod.) a zmiešanie

kyseliny hyalurónovej s kolagénom nie je ľahké. Okrem toho sa vyžaduje, aby

kyselina hyalurónová mala koncentráciu aspoň 5 mg/ml, aby sa zachovala

vlastnosť (viskozita) vyžadovaná pre prípravok. Okrem toho kyselina

hyalurónová pridaná k báze kolagénu pôsobí na mieste chrupavky, a tým

zlepšuje lubrikačnú silu, čím pomáha ohýbaniu chrupavky. Z vyššie uvedených

dôvodov sa kyselina hyalurónová pridáva ku kolagénu a koncentrácia kyseliny

hyalurónovej je nastavená na 5 mg/l až 20 mg/l vrátane.

Príprava zmesnej kompozície kolagénu a kyseliny hyalurónovej a kolagénu

Spôsob miešania A: Spôsob miešania roztoku kolagénu a roztoku suroviny

[0054]

1) Pripravený kolagén sa nariedi vodou alebo fosfátmi pufrovaným

fyziologickým roztokom na prípravu roztoku kolagénu, ktorý má

požadovanú koncentráciu.

2) Pripravená kyselina hyalurónová (práškový typ) sa nariedi vodou

alebo fosfátmi pufrovaným fyziologickým roztokom tak, aby mala

zodpovedajúcu koncentráciu.

3) Pripravené roztoky sa zmiešajú s použitím dvojcestnej injekčnej

striekačky umožňujúcej zmiešanie počas krátkej doby alebo s použitím

zmiešavača (rotácie) (obr. 1 a 2).

14

EP 2 851 096 37408/H

4) V prípade, že suroviny a roztoky používané na miešanie sú vopred

skladované v chladnom stave (2 ~ 8°C), miešanie sa vykonáva ľahko a

hladko.

Spôsob miešania B: Spôsob priameho zmiešania suroviny (prášku) s roztokom

kolagénu

[0055]

1) Pripravený kolagén sa nariedi vodou alebo fosfátmi pufrovaným

fyziologickým roztokom na prípravu roztoku kolagénu, ktorý má

požadovanú koncentráciu.

2) Kyselina hyalurónová (práškový typ) sa pridá do roztoku kolagénu,

ktorý má vhodnú koncentráciu, nasleduje miešanie.

3) Pripravený roztok sa priamo zmieša s použitím dvojcestnej injekčnej

striekačky umožňujúcej miešanie počas krátkej doby alebo s použitím

miešadla.

4) Vyššie uvedený spôsob miešania je potrebný na prípravu vysoko

koncentrovaného prípravku a miešanie sa vykonáva ľahko a hladko,

zatiaľ čo je okolité prostredie udržiavané počas miešania na nízkej

teplote.

Príprava kompozície na báze kolagénu do injikovateľnej formy

[0056]

1) Kolagén a zmesná kompozícia na báze kolagénu sú odvzdušnené


2) Podmienky centrifugácie sú také, že je udržovaná teplota miestnosti (1

~ 30°C) a odstredivý účinok (hodnota G) je 2000 až 5000 G.

3) Zásobník injekčnej striekačky sa naplní s použitím pumpy na kvapaliny

s vysokou viskozitou. Je potrebné dávať pozor, aby sa nevytvárali

prázdne priestory, postupným zdvíhaním trysky zdola hore.

15

EP 2 851 096 37408/H

4) Tesnenie sa umiestni na zadnú plochu zásobníka injekčnej striekačky

s použitím vákua pre úplné utesnenie injekčnej striekačky, čím sa

zabráni úniku kvapaliny zo zásobníka injekčnej striekačky.

5) Naplnený zásobník injekčnej striekačky sa uchováva pri teplote

miestnosti, aby sa zachovali vlastnosti jedinečné pre kolagén (1-30°C).

[0057] Roztok nesmie byť zmrazený ani denaturovaný vysokou teplotou.

2. Na overenie účinku po injekcii do tela sa pripravená vzorka zafarbí

malým množstvom modro farbiaceho činidla (trypanová modrá, viažuca

sa na proteín) (obr. 4).

3. Použitie metódy a overenie účinku (nie je súčasťou vynálezu)

1) Potom, čo je noha prasaťa upevnená v držiaku, je kĺbová

chrupavka kolena s použitím chirurgického nástroja narušená a sú

indukované veľké oblasti (približne 4 cm2) a malé (približne 2 cm2)

oblasti defektov s použitím vŕtačky (obr. 5).

2) Ihla striekačky je pripojená k zásobníku injekčnej striekačky

naplnenej kolagénom, alebo podobne. Ihla injekčnej striekačky je

dlhá najmenej 1 1/2 palca (38 mm).

3) Miesto rezu sa zašije šijacím materiálom a prípravok s každou

koncentráciou obsiahnutou v injekčnej striekačke sa injikuje

priamo do glenoidnej dutiny (priestoru vyplneného synoviou)

prasačieho kolena (obr. 7).

4) Vykonáva sa pohyb kolenného kĺbu (kontinuálny pasívny pohyb

(CMP)) za účelom podpory účinku injikovaného materiálu, ktorý

prirodzene vypĺňa oblasti defektov. Okrem toho je zošité miesto

rozrezané tak, aby sa exponovala časť chrupavky, do ktorej je

prípravok injikovaný, na pozorovanie.

4. Výsledky: Prípravok injikovaný do oblastí s defektom chrupavky

prirodzene vypĺňa oblasti s indukovanými defektmi, čo vykazuje účinok

preferovaný operatérom (obr. 8).

(Príklad 2)

16

EP 2 851 096 37408/H

Experiment na overenie adhezivity zmesovej kompozície kolagénu a kyseliny

hyalurónovej

[0058]

1. Kolagén s koncentráciami 10, 30 a 60 mg/ml (1, 3 a 6 %) a kyselina

hyalurónová s koncentráciami 5, 10 a 20 mg/ml (0,5, 1,0 a 2,0 %), ktoré sú

obsiahnuté v striekačkách, sa pripravia rovnakým spôsobom ako v príklade 1.

Okrem toho sa pripraví vzorka, v ktorej sa 60 mg/ml kolagénu a 5 mg/ml

kyseliny hyalurónovej zmieša v pomere 9:1 až 1:9 a vzorka, alebo v ktorej sa

60 mg/ml kolagénu a 20 mg/ml kyseliny hyalurónovej zmieša v pomere 5:5.

Účinok zmesovej kompozície kolagénu a kyseliny hyalurónovej zodpovedá

súčtu účinku spôsobeného vlastnosťami kolagénu (biokompatibilné zložky

chrupavky a biodegradácia) a účinku spôsobeného vlastnosťami kyseliny

hyalurónovej (lubrikačná sila), a je teda pripravená kompozícia vhodná na

obnovu chrupavky.

2. Meranie viskozity v závislosti na zmiešavacom pomere kolagénu a kyseliny

hyalurónovej

Viskozita každej vzorky sa meria s použitím viskozimetra (DV-1 + PRE).

Položka merania: viskozita

Teplota merania: 4°C

Meranie RPM: 0,5

Rotor: č. SC4-15

[Tabuľka 1]

VzorkaViskozita

(CP, 10^3)Poznámka

6 % kolagén 147Maximálna

viskozita

6% kolagén + 0,5% kyselina hyalurónová

(9:1)142 -


(8:2)106 -

17

EP 2 851 096 37408/H


(7:3)79 -


(6:4)64 -


(5:5)57 -


(4:6)46 -


(3:7)22 -


(2:8)15 -


(1:9)3 -

0,5% kyselina hyalurónová 0,5Minimálna

viskozita

3. Test adhezivity v závislosti na zmiešavacom pomere kolagénu a

hyalurónovej kyseliny

[0059] Porovnanie adhezivity sa vykonáva meraním adhezívnej

vzdialenosti materiálu pre každú vzorku s použitím reometra (CR-500 DX).

[0060] Rýchlosť pohybu držiaka vzoriek (10 mm/s)

[0061] Je meraná vzdialenosť pohybu do miesta, kde je adhézia prerušená,

počas pohybu držiaka vzorky.

18

EP 2 851 096 37408/H

[Tabuľka 2]

Vzorka

Adhezívna

vzdialenosť

materiálu

(mm)

Poznámka

1% kolagén 19 -

3% kolagén 47 -

6% kolagén 61 Maximálna adhézia

6% kolagén + 0,5% kyselina

hyalurónová (9:1)55 -



















19

EP 2 851 096 37408/H

Vzorka

Adhezívna

vzdialenosť

materiálu

(mm)

Poznámka

0,5% kyselina hyalurónová 13 Minimálna adhézia

1,0% kyselina hyalurónová 19 -

2,0% kyselina hyalurónová 23 -

[0062] Výsledky: Bola potvrdená adhézia zmesnej kompozície kolagénu a

kyseliny hyalurónovej a bolo pozorované, že čím vyššia je koncentrácia

kolagénu, tým vyššia je viskozita.

(Príklad 3)

Testovanie na overenie stálosti kolagénu a hyalurónovej kyseliny vo vode po

ich transplantácii

[0063] Účel: Overenie odolnosti voči faktoru, ktorý naruší kontinuálnu

adhéziu (fixáciu) a plnenie injikovaného prípravku vzhľadom k defektným

oblastiam

1. Pripraví sa kolagén s koncentráciami 30 a 60 mg/ml (3 a 6 %) a kyselina

hyalurónová s koncentráciami 10 a 20 mg/ml (1,0 a 2,0 %), ktoré sú

obsiahnuté v injekčných striekačkách, s použitím rovnakej metódy ako v

príklade 1.

2. Potom, čo je noha prasaťa upevnená v držiaku, je kĺbová chrupavka

kolena s použitím chirurgického nástroja narušená a sú indukované veľké

oblasti (približne 4 cm2) a malé (približne 2 cm2) oblasti defektov s použitím

vŕtačky.

3. Prípravok s každou koncentráciou naplňujúci injekčnú striekačku sa

injikuje do oblastí s defektom chrupavky prasačieho kolena a tieto oblasti

vypĺňa.

20

EP 2 851 096 37408/H

4. Injekčná voda je nastriekaná smerom dolu v polohe 10 cm nad miestom

injekcie s použitím injekčnej striekačky (25 ml).

5. Odolnosť prípravku, ktorý vyplnil oblasti s defektom chrupavky, proti

tečúcej vode, je pozorovaná voľným okom.

6. Výsledky: Prípravok, ktorý vyplnil oblasti s defektom chrupavky, odolával

tečúcej vode (nebol zmytý), a teda kontinuálne adheroval k defektným

oblastiam, čím udržoval stav, v ktorom boli defektné oblasti vyplnené

prípravkom (obr. 9).

(Príklad 4) Nie je súčasťou predkladaného vynálezu

Spôsob aplikácie kolagénu a fibrínového lepidla na oblasti s defektom

chrupavky a test na bunkovú proliferáciu v kompozícii

[0064] Cieľ: Overenie použiteľnosti kolagénu a fibrínového lepidla

injikovateľného typu a na obnovu defektu chrupavky aplikáciou kolagénu a

fibrínového lepidla

1. 6% roztok kolagénu obsiahnutý v zásobníku injekčnej striekačky sa

pripraví rovnakým spôsobom ako v príklade 1 a pripraví sa prípravok

fibrínového lepidla. Základnými špecifikáciami fibrínového lepidla

produkovaného a používaného pri tomto spôsobe je koncentrácia

fibrinogénu 71-127 mg/ml a koncentrácia trombínu 400-600 IU/ml

(špecifikácia bežného komerčného prípravku).

2. Potom, čo je noha prasaťa upevnená v držiaku, je narušená kĺbová

chrupavka kolena s použitím chirurgického nástroja a sú indukované veľké

oblasti (približne 4 cm2) a malé (približne 2 cm2) oblasti defektov s použitím

vŕtačky.

3. Kolagénový prípravok s koncentráciou 6 % obsiahnutý v injekčnej

striekačke sa injikuje do oblastí s defektom chrupavky prasačieho kolena a

tieto oblasti vypĺňa, a potom sa umožní fibrínovému lepidlu pokryť kolagén a

potom gélovať, čím sa pevne fixuje kolagén.

21

EP 2 851 096 37408/H

4. Na rozdiel od položky "3", fibrínovým lepidlom sú potiahnuté oblasti

s defektom chrupavky prasaťa a potom gélujú, a potom je injikovaný 6%

kolagén do gélu fibrínového lepidla na vyplnenie oblastí s defektom

chrupavky.

5. Sterilná injekčná voda je nastriekaná smerom dolu v polohe 10 cm nad

miestom injekcie s použitím injekčnej striekačky (25 ml), aby sa overila

odolnosť proti tečúcej vode, a tým stav gélu.

Výsledky: Prípravok vyplňujúci oblasti s defektom chrupavky si udržuje

formu pevného gélu a odoláva tečúcej vode, a teda kontinuálne adheruje

k defektným oblastiam, čím sa udržuje stav, v ktorom boli defektné oblasti

vyplnené prípravkom (obr. 10).

6. Vykonáva sa test na proliferácie buniek chrupavky v zmesnej kompozícii

kolagénu a fibrínového lepidla.

[0065] Pripravené bunky chrupavky (1,2 X 1070 buniek/2 ml) sa zmiešajú

so zmesovou kompozíciou.

[0066] CO2 kultivácia sa vykonáva pri teplote 37°C po dobu 7 dní.

[0067] Proliferácia buniek chrupavky s použitím analýzy Calcein-AM je

pozorovaná fluorescenčným mikroskopom.

[0068] (Zľava fibrínové lepidlo, zmesová kompozícia 3% kolagén/fibrínové

lepidlo a zmesová kompozícia 6% kolagén/fibrínové lepidlo)

Tabuľka 3

Číslo (deň 0) Obr. 11 Obr. 13 Obr. 15

Deň 7 Obr. 12 Obr. 14 Obr. 16

[0069] Výsledky: Ako výsledok overenia bunkovej proliferácie v kompozícii

bolo pozorované, že proliferácia buniek bola vyššia v 3% zmesovej kompozícii

kolagénu a fibrínového lepidla a v 6% zmesovej kompozícii kolagénu a

fibrínového lepidla ako v samotnom fibrínovom lepidle.

Priemyslová použiteľnosť

22

EP 2 851 096 37408/H

[0070] V rámci technickej myšlienky kompozícia na obnovu chrupavkového

tkaniva, spôsobu jej prípravy a jej použitia podľa predkladaného vynálezu, sú

rovnaké výsledky v podstate reprodukovateľné. Konkrétne sa predkladaný

vynález vykonáva za účelom podpory technologického rozvoja a prispieva

k priemyslovému rozvoju, a teda by práva predkladaného vynálezu mali byť

chránené patentovým zákonom.

Ing. Zuzana Hörmannová 23patentový zástupcaBratislava, SK

EP 2 851 096 HÖRMANN &PARTNERS s.r.o. 37408/H

www.htpatent.sk

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Kompozícia na obnovu chrupavkového tkaniva, táto kompozícia sa pripraví

zmiešaním kolagénu, ktorý má nariedenú koncentráciu 5 - 60 mg/ml vody alebo

fosfátmi pufrovaného fyziologického roztoku; a kyseliny hyalurónovej, ktorá má



zmiešavača.

2. Spôsob prípravy kompozície na obnovu chrupavkového tkaniva, tento

spôsob zahŕňa: prípravu kolagénu, ktorý má nariedenú koncentráciu 5 - 60

mg/ml vody alebo fosfátmi pufrovaného fyziologického roztoku; prípravu

kyseliny hyalurónovej, ktorá má nariedenú koncentráciu 5 - 20 mg/ml vody

alebo fosfátmi pufrovaného fyziologického roztoku; zmiešanie kolagénu a

kyseliny hyalurónovej s použitím dvojcestnej injekčnej striekačky alebo

zmiešavača; a odvzdušnenie zmesovej kompozície na obnovu chrupavkového

tkaniva s použitím odstredivky.

3. Spôsob podľa nároku 2, pričom odstredivá separácia s použitím centrifúgy sa

vykonáva pri 2000 - 5000 G, zatiaľ čo sa teplota miestnosti udržuje na teplote 1

- 30°C.

4. Kompozícia podľa nároku 1 na použitie pri spôsobe na obnovu

chrupavkového tkaniva, pričom tento spôsob zahŕňa: upevnenie nohy prasaťa v

držiaku, porušenie kĺbovej chrupavky s použitím chirurgického nástroja, a

potom indukciu oblastí s defektom 2 ~ 4 cm2 s použitím vŕtačky; pripojenie

injekčnej ihly k zásobníku injekčnej striekačky naplnenej kolagénom; a zašitie

rozrezaného miesta šijacím materiálom a priamu injekciu do glenoidnej dutiny

(priestoru vyplneného synoviou) prasačieho kolena, kolagénu s koncentráciou 5

- 60 mg/ml obsiahnutého v injekčnej striekačke, kyseliny hyalurónovej s

24

EP 2 851 096 37408/H

koncentráciou 5 - 20 mg/ml obsiahnutej v injekčnej striekačke, a kompozície na

obnovu chrupavkového tkaniva, v ktorej je zmiešaný kolagén a kyselina

hyalurónová.

5. Spôsob prípravy kompozície na obnovu chrupavkového tkaniva podľa nároku

2, tento spôsob ďalej zahŕňa: prípravu vzorky, v ktorej sa 60 mg/ml kolagénu a

5 mg/ml kyseliny hyalurónovej zmieša v pomere 9:1 až 1:9, alebo v ktorej sa 60

mg/ml kolagénu a 20 mg/ml kyseliny hyalurónovej zmieša v pomere 5:5.


chrupavkového tkaniva, tento spôsob zahŕňa: (1) prípravu roztoku kolagénu

obsiahnutého v zásobníku injekčnej striekačky a prípravku fibrínového lepidla;

(2) upevnenie nohy prasaťa v držiaku, porušenie kĺbovej chrupavky s použitím

chirurgického nástroja, a potom indukciu oblastí s defektom 2 ~ 4 cm2

s použitím vŕtačky; (3) injekciu kolagénového prípravku obsiahnutého

v injekčnej striekačke do oblasti s defektom chrupavky prasačieho kolena za

účelom vyplnenia oblasti s defektom chrupavky kolagénovým prípravkom a

umožnenie fibrínovému lepidlu pokryť kolagén a potom gélovať, čím sa pevne

fixuje kolagén; (4) na rozdiel od kroku (3) potiahnutie oblasti s defektom

chrupavky prasaťa fibrínovým lepidlom a gelovatenie, a potom injekcia

kolagénu do gélu fibrínového lepidla na vyplnenie oblasti s defektom chrupavky;

a (5) nastriekanie sterilnej injekčnej vody smerom dolu v polohe 10 cm nad

miestom injekcie s použitím injekčnej striekačky (25 ml) na overenie odolnosti

proti tečúcej vode a pozorovanie stavu gélu.

7. Spôsob prípravy kompozície na obnovu chrupavkového tkaniva podľa nároku

2, pričom vysoko viskózny kolagén a kyselina hyalurónová alebo zmesová

kompozícia kolagénu a kyseliny hyalurónovej, ako kompozícia na obnovu

chrupavky, sa injikuje do vopred naplnenej injekčnej striekačky, čím sa používa

v injikovateľnej forme.

25

EP 2 851 096 37408/H


chrupavkového tkaniva, pričom ihla injekčnej striekačky je pripojená

k injikovateľnému typu injekčného činidla pre chrupavku a ihla injekčnej

striekačky je zavedená do miesta aplikácie s použitím ihly injekčnej striekačky

bez chirurgickej incízie, čím sa priamo injikuje kompozícia na obnovu chrupavky

do glenoidnej dutiny (priestoru vyplneného synoviou) kolena prasaťa.


chrupavkového tkaniva, pričom vzorka je pripravená umelým vytvorením oblasti

s defektom chrupavky 2 - 4 cm2; kompozícia na obnovu chrupavky je zafarbená

na modro a injikovaná do vzorky; a potom sa otvorí transplantované miesto, čím

sa overí morfológia kompozície vyplňujúcej oblasť s defektom chrupavky a

overí sa stálosť kompozície vo vode prostredníctvom stupňa adhézie k oblasti

s defektom chrupavky.

26

EP 2 851 096 37408/H

[Obr. 1]

[Obr. 2]

27

EP 2 851 096 37408/H

[Obr. 3]

[Obr. 4]

28

EP 2 851 096 37408/H

[Obr. 6]

[Obr. 5]

29

EP 2 851 096 37408/H

[Obr. 8]

[Obr. 7]

30

EP 2 851 096 37408/H

[Obr. 9]

[Obr. 10]

31

EP 2 851 096 37408/H

[ Obr. 12]

[ Obr. 11]

32

EP 2 851 096 37408/H

[Obr. 14]

[Obr. 13]

33

EP 2 851 096 37408/H

[Obr. 16]

[Obr. 15]

Documents

SLOVENSKÁ REPUBLIKA EURÓPSKEHO PATENTOVÉHO SPISU E …