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专注医考 精于辅导 1 临床检验学讲义

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    临床检验学讲义

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    目录

    《临床检验学》............................................................................................................2第一章 血液样本采集和血涂片制备................................................................2

    第一节 血液生理概要................................................................................2第二节 采血方法........................................................................................3第三节 抗凝剂选择....................................................................................6第四节 血涂片制备....................................................................................6第五节 细胞染色........................................................................................7第六节 方法学评价....................................................................................8第七节 质量控制........................................................................................9

    第二章 红细胞检查............................................................................................9第一节 概要................................................................................................9第二节 红细胞计数..................................................................................10第三节 血红蛋白测定..............................................................................14第四节 红细胞形态检查..........................................................................17第五节 血细胞比容(HCT)测定..........................................................20第六节 红细胞平均指数..........................................................................22第七节 红细胞体积分布宽度..................................................................24第八节 网织红细胞计数..........................................................................25第九节 点彩红细胞..................................................................................28第十节 红细胞沉降率测定......................................................................28

    第三章 白细胞检查..........................................................................................30第一节 白细胞生理概要..........................................................................30第二节 白细胞计数..................................................................................32第三节 白细胞分类计数..........................................................................34第四节 嗜酸性粒细胞计数......................................................................39第五节 白细胞形态检查..........................................................................42

    第四章 血液分析仪及其临床应用..................................................................44第一节 概述..............................................................................................44第二节 检测原理......................................................................................44第三节 白细胞直方图..............................................................................46第四节 红细胞、血小板直方图..............................................................46第五节 方法学评价..................................................................................46第六节 临床应用......................................................................................47

    第五章 血型和输血..........................................................................................50第一节 红细胞 AB0 血型系统 ................................................................50第二节 红细胞 Rh血型系统检查............................................................56第三节 新生儿溶血病检查......................................................................58第五节 人类白细胞抗原检查..................................................................59第六节 血小板血型系统检查..................................................................60

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    第七节 血液保存液..................................................................................61第八节 输血与输血反应..........................................................................61

    第六章 尿液生成和标本采集及处理..............................................................64第一节 尿液生成......................................................................................64第二节 尿液检验目的..............................................................................64第三节 尿标本采集..................................................................................65第四节 尿标本处理..................................................................................66

    第七章 尿理学检验..........................................................................................67第一节 尿量..............................................................................................67第二节 尿颜色和透明度..........................................................................68第三节 尿比密测定..................................................................................71第四节 尿渗量测定..................................................................................72第五节 尿气味..........................................................................................72

    第八章 尿有形成分检查..................................................................................72第一节 检测方法......................................................................................72第二节 尿细胞检查..................................................................................74第三节 尿管形检查..................................................................................78第四节 尿结晶检查..................................................................................81第五节 尿沉渣定量检查..........................................................................82

    第九章 尿液化学检查......................................................................................83第一节 尿液酸碱度测定..........................................................................83第二节 尿液蛋白质检查..........................................................................85第三节 尿液糖检查..................................................................................87第四节 尿液酮体检查..............................................................................89第五节 尿液胆红素检查..........................................................................90第六节 尿液尿胆原和尿胆素检查..........................................................91第七节 尿血红蛋白检查..........................................................................92第八节 尿液本周蛋白检查......................................................................93第九节 尿液微量清蛋白测定..................................................................94第十节 尿液蛋白电泳..............................................................................95第十一节 尿液肌红蛋白检查..................................................................96第十二节 尿液β2-微球蛋白测定 .........................................................96第十三节 尿液人绒毛膜促性腺激素检查..............................................97第十四节 尿液 Tamm-Horsfall 蛋白测定 ...............................................99第十五节 尿液α1-微球蛋白测定 .......................................................100第十六节 尿液纤维蛋白降解产物检查................................................100第十七节 尿乳糜液和脂肪检查............................................................100第十八节 其他化学物质检查................................................................101

    第十章 尿液分析仪及其临床应用................................................................103第一节 尿干化学分析仪........................................................................103第二节 尿有形成分分析仪....................................................................108

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    第三节 方法学评价................................................................................110第十一章 粪便检验........................................................................................111

    第一节 标本采集....................................................................................111第二节 理学检查....................................................................................112第三节 化学检验....................................................................................113第四节 显微镜检查................................................................................115第五节 粪便检验的质量控制................................................................117

    第十二章 脑脊液检验....................................................................................118第一节 标本采集与处理........................................................................118第二节 理学检查....................................................................................119第三节 显微镜检查................................................................................120第四节 化学与免疫学检查....................................................................122第五节 病原生物学检查........................................................................125第六节 质量控制与临床应用................................................................125

    第十三章 浆膜腔积液检验............................................................................128第一节 胸腔、腹腔和心包腔积液检查................................................128第二节 关节腔积液检查........................................................................134第十四章 精液检查................................................................................137第十五章 前列腺液检查........................................................................142第十六章 阴道分泌物检查....................................................................143第十七章 羊水检查................................................................................146

    第十四章 免疫学检验....................................................................................149第一节 免疫原和抗血清制备................................................................149第二节 免疫佐剂....................................................................................149

    第十五章 单克隆抗体与基因工程抗体的制备............................................150第一节 杂交瘤技术的基本原理............................................................150

    第十六章 凝集反应........................................................................................151第一节 凝集反应的特点........................................................................151第二节 直接凝集反应............................................................................151第三节 间接凝集反应............................................................................152第四节 抗球蛋白试验............................................................................152

    第十七章 沉淀反应........................................................................................153第一节 沉淀反应的特点........................................................................153第二节 液体内沉淀试验........................................................................153第三节 凝胶内沉淀试验........................................................................154第四节 免疫电泳技术............................................................................154

    第十八章 放射免疫技术................................................................................155第一节 放射免疫技术(RIA) ..................................................................155第二节 免疫放射分析(IRMA) .........................................................155

    第十九章 荧光免疫技术................................................................................156第一节 有关荧光的基本知识................................................................156

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    第二节 荧光免疫分析的类型................................................................157第二十章 酶免疫技术....................................................................................157

    第一节 酶免疫技术的特点....................................................................157第二节 酶联免疫吸附试验....................................................................159

    第二十一章 化学发光免疫分析技术............................................................160第一节 概述............................................................................................160第二节 化学发光剂................................................................................160

    第二十二章 生物素-亲和素免疫放大技术 ..................................................161第一节 生物素理化性质与标记............................................................161

    第二十三章 固相膜免疫测定........................................................................162第一节 概述............................................................................................162第二节 免疫金标记技术........................................................................163第三节 膜载体免疫测定的种类与原理................................................163

    第二十四章 免疫细胞的分离及其表面标志检测技术................................164第一节 免疫细胞的分离........................................................................164第二节 淋巴细胞表面标志的检测........................................................165

    第二十五章 免疫细胞功能检测技术............................................................166第一节 淋巴细胞的功能检测................................................................166第二节 吞噬细胞功能检测技术............................................................166第三节 免疫细胞功能检测的临床应用................................................166

    第二十六章 细胞因子与细胞粘附因子的测定............................................167第一节 细胞因子的概述........................................................................167第二节 细胞因子测定方法及应用........................................................167

    第二十七章 免疫球蛋白检测及应用............................................................167第一节 血清 IgG、IgA、IgM 测定 .....................................................167第二节 血清 IgD、IgE 测定..................................................................168第三节 异常免疫球蛋白的检测及临床意义........................................168

    第二十八章 补体检测及应用........................................................................169第一节 补体系统的组成和性质............................................................169第二节 补体系统的生物活性................................................................169第三节 补体总活性测定........................................................................170第四节 补体结合试验............................................................................171第五节 单个补体成分测定....................................................................171

    第二十九章 免疫检验自动化仪器分析........................................................171第一节 自动化免疫浊度分析系统........................................................171第二节 自动化学发光免疫分析系统....................................................173

    第三十章 临床免疫检验的质量保证............................................................173第一节 概述............................................................................................173第二节 免疫检验的质量控制原则........................................................174

    第三十一章 感染性疾病与感染免疫检测....................................................175第三十二章 超敏反应性疾病及免疫学检测................................................177

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    第一节 Ⅰ型超敏反应............................................................................177第二节 Ⅱ型超敏反应............................................................................178第三节 Ⅲ型超敏反应............................................................................179第四节 Ⅳ型超敏反应..........................................................................180

    第三十三章 自身免疫性疾病及其免疫检测................................................181第一节 概述............................................................................................181第二节 自身免疫疾病与免疫损伤........................................................181第三节 常见的自身免疫性疾病............................................................182第四节 常见自身免疫性疾病的自身抗体检测....................................182

    第三十四章 免疫增殖性疾病及其免疫检测................................................184第一节 免疫增殖性疾病的概念及分类................................................184第二节 免疫增殖性疾病的免疫损伤机制............................................184第三节 常见免疫球蛋白增殖病............................................................185第四节 免疫球蛋白异常增生常用的免疫检测....................................186

    第三十五章 免疫缺陷性疾病及其免疫检验................................................187第一节 免疫缺陷病的分类和特点........................................................187第二节 原发性免疫缺陷病....................................................................188第三节 继发性免疫缺陷病....................................................................189第四节 获得性免疫缺陷综合征............................................................189第五节 免疫缺陷病的实验室检测........................................................190

    第三十六章 肿瘤免疫与免疫学检验............................................................192第一节 肿瘤抗原....................................................................................192第二节 机体抗肿瘤的免疫学效应机制................................................192第二节 肿瘤免疫学检验........................................................................193

    第三十七章 移植免疫及其免疫检测............................................................195第一节 引起排斥反应的靶抗原............................................................195第二节 排斥反应的种类及发生机制....................................................195

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    《临床检验学》

    第一章 血液样本采集和血涂片制备

    第一节 血液生理概要

    (一)血液的组成

    血液由血细胞(红细胞、白细胞、血小板)和血浆组成。离体后血液自然凝固,分离

    的淡黄色透明液体称为血清。血液加抗凝剂后分离出来的淡黄色液体称为血浆。血清与血

    浆差别是:血清缺少某些凝血因子,如凝血因子Ⅰ(纤维蛋白原)、Ⅱ(凝血酶原)、

    Ⅴ、Ⅷ等。

    全血适用于临床血液学检查,如血细胞计数、分类和形态学检查等。血浆适用于血浆

    生理性和病理性化学成分的测定,特别是内分泌激素测定;血浆除钙离子外,含有其他全

    部凝血因子,也适用于血栓与止血的检查。血清适用于临床化学和临床免疫学检查。

    (二)血液理化性质

    1.血量:指存在于血液循环系统中全部血液的总量,相当于血浆量与血细胞量的总和。

    正常人血量约为 70±10ml/kg体重,成人约 4~5L,约占体重的 6%~8%,其中血浆占

    55%,血细胞占 45%。小儿血量与体重之比略高于成人,男性比女性血量稍多,但女性妊娠

    期间血量可增加 23%~25%。

    2.颜色:血液的红色来自红细胞内血红蛋白。动脉血氧合血红蛋白含量较高,呈鲜红

    色;静脉血还原血红蛋白含量高,呈暗红色。严重贫血者血液红色变浅。严重 CO中毒或氰

    化物中毒者血液呈樱红色。餐后,尤其是高脂膳食后,血浆呈乳白色。溶血患者血浆呈红

    色。

    3.酸碱度:随人体饮食中摄入的酸性或碱性物质、体内代谢产生的酸性物质,如乳酸、

    乙酰乙酸、β-羟丁酸、H3P04、H2S04等影响,血液 pH波动在很小范围内。正常人血液 pH

    为 7.35~7.45,动脉血 pH7.40,静脉血 pH为 7.35。

    4.比密和渗透量

    (1)血液比密:正常男性约为 1.055~1.063,女性约为 1.051~1.060,相对粘度为

    4~5;血浆比密约为 1.025~1.030;血细胞比密约为 l.090。血液比密与红细胞含量、红

    细胞内血红蛋白含量有关。血浆比密和血浆内蛋白浓度有关。

    (2)血浆渗透量:正常人约为 290~310mOsm/kg·H2O。

    (三)血液特性

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    1.红细胞的悬浮稳定性:正常人血液中红细胞呈均匀混悬状态。与红细胞膜表面的唾

    液酸根(形成 Zeta电位使红细胞间相互排斥保持一定距离)、正常血浆成分、血浆粘度及

    血流动力学等因素有关。

    2.粘滞性:正常人全血粘度约为生理盐水粘度的 4~5倍,血浆粘度约为生理盐水粘度

    的 1.6倍。血液粘度与血细胞比容和血浆粘度有关。其中,血浆粘度受血浆中纤维蛋白原、

    球蛋白等大分子蛋白质的影响,它们的浓度越高,血浆粘度越高。此外,血管内壁和血流

    动力学因素亦可影响血液粘度。

    3.凝固性:通常,血液从血管取出后,在数分钟内便自行凝固,是凝血因子激活的结

    果。

    (四)血液生理功能

    1.运输功能:可将自肺部吸入的氧气和自消化道吸收的各种营养成分(如葡萄糖、氨

    基酸、矿物质等),经过血液运输到全身各个脏器和组织,同时将各个脏器和组织产生的

    各种代谢产物(如 C02、尿素等),通过血液输送到肺、肾等排泄器官排出体外。

    2.协调功能:将各种激素、酶类运输到相关组织器官,实现对全身各组织器官功能活

    动的协调。

    3.维护机体内环境稳定:通过循环与身体各部位广泛沟通,对体内水电解质平衡、酸

    碱平衡、体温恒定有重要作用,使机体保持一个适宜而稳定的理化环境。

    4.防御功能:白细胞、抗体、补体、细胞因子具有强大免疫功能。血小板、凝血因子

    具有止血和凝血作用。

    第二节 采血方法

    血样本的正确采集是获得准确、可靠实验结果的关键。在样本采集前,应根据实验要

    求,决定采血方法、所需血量及适用抗凝剂。

    本节要点:

    (1)静脉采血法

    (2)皮肤采血法

    (3)真空采血法

    (4)方法学评价

    (5)质量控制

    (一)静脉采血法

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    1.概述:静脉采血多采用位于体表的浅静脉,通常采用肘部静脉、手背静脉、内踝静

    脉或股静脉。小儿可采颈外静脉血液。根据采血量可选用不同型号注射器,配备相应的针

    头。某些特殊检查,为避免血小板激活,要使用塑料注射器和硅化处理后的试管或塑料试

    管。

    2.操作方法和注意事项

    (1)患者准备:采血前应向患者耐心解释,以消除疑虑和恐惧心理。如个别患者进针

    时或采血后发生眩晕,应让其平卧休息。必要时可嗅吸芳香氨酊、针刺(或指压)人中和

    合谷等穴位。若因低血糖诱发眩晕,可立即静脉注射葡萄糖或让患者口服糖水。如有其他

    情况,应找医生共同处理。

    (2)检查注射器:静脉采血前要仔细检查针头是否安装牢固,针筒内是否有空气和水

    分。所用针头应锐利、光滑、通气,针筒不漏气。

    (3)消毒:先用 30g/L碘酊棉签自所选静脉穿刺处从内向外、顺时针方向消毒皮肤,

    待碘酊挥发后,再用 75%乙醇棉签以同样方法拭去碘迹。

    (4)穿刺:以左手拇指固定静脉穿刺部位下端,右手拇指和中指持注射器针筒,食指

    固定针头下座,使针头斜面和针筒刻度向上,沿静脉走向使针头与皮肤成 30°角斜行快速

    刺入皮肤,然后以 5°角向前穿破静脉壁进入静脉腔。见回血后,将针头顺势探入少许,

    以免采血时针头滑出;但不可用力深刺,以免造成血肿,同时立即去掉压脉带。

    (5)抽血:针栓只能外抽,不能内推,以免静脉内注入空气形成气栓,造成严重后果。

    (6)放血与混匀:取下注射器针头,将血液沿试管壁缓缓注入抗凝管中,防止溶血和

    泡沫产生。

    (二)皮肤采血法

    1.概述:曾被称为毛细血管采血法,是采集微动脉、微静脉和毛细血管的混合血,同

    时含细胞间质和细胞内液。通常,选择耳垂或手指部位。耳垂采血痛感较轻、操作方便,

    但血循环较差、受气温影响较大、检查结果不够恒定(如红细胞、白细胞、血红蛋白和血

    细胞比容等测定结果比手指血或静脉血高),一般情况下不宜使用。手指采血操作方便,

    检查结果比较恒定,世界卫生组织(WHO)推荐采集左手无名指指端内侧血液,婴幼儿可采

    集大拇趾或足跟内外侧缘血液,严重烧伤患者,可选择皮肤完整处采血。

    目前可用激光无痛采指血仪采血,原理是仪器中激光发生器发出一串单脉冲激光束,

    在一次性耗材(镜头片)的配合下,细微的光束打在手指上,在很短时间内使皮肤组织溶

    解、挥发,出现一个小孔,而打孔后的残留物成等离子状态,吸附在镜头片表面。仪器采

    血有效地避免了皮肤浅层组织液、细胞外液等渗入血液,确保检测结果准确,同时也可消

    除交叉感染,达到无痛采血的效果。

    2.操作方法和注意事项

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    (1)所选择采血部位的皮肤应完整,无烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症等。除特殊情

    况外,不要耳垂采血。

    (2)本试验具有创伤性,必须严格按无菌技术操作,防止采血部位感染,做到一人一

    针一管,避免交叉感染,最好用一次性器材。

    (3)皮肤消毒后,应待 75%乙醇挥发后采血,否则流出的血液扩散而不成滴。

    (4)采血时,先应按摩左手中指或无名指指端内侧,使局部组织自然充血。针刺深度

    2~3mm。

    (5)因第 1滴血混有组织液,应擦去。如血流不畅切勿用力挤压,以免造成组织液混

    入,影响结果的准确性。

    (6)进行多项检查时,采血的顺序依次为血小板计数、红细胞计数、血红蛋白测定、

    白细胞计数、血型鉴定等。

    (三)真空采血法

    又称为负压采血法。真空采血装置有套筒式、头皮静脉式两种。封闭式采血无需容器

    之间的转移,减少了溶血现象,能有效保护血液有形成分,保证待验样本原始性状的完整

    性,使检验结果更可靠,同时,样本转运方便,能有效避免医护人员和患者间交叉感染。

    各种真空定量采血容器,根据需要标有不同的色码,适于不同检验项目(表 1-1-1)。

    (四)方法学评价

    1.皮肤采血:缺点是易于溶血、凝血、混入组织液,而且局部皮肤揉擦、针刺深度不

    一、个体皮肤厚度差异等都影响检查结果,所以,皮肤采血检查易发生凝块,结果重复性

    差、准确性不好。

    2.静脉采血:开放式采血法的操作环节多、难于规范统一,在移液和丢弃注射器时可

    能造成血液污染。封闭式采血法的操作规范,有利于样本收集运送和保存,防止院内血源

    性传染病。

    (五)质量控制

    1.患者:患者活动情况、精神状态、药物、年龄、性别、种族、样本采集时间、吸烟、

    季节等都会影响检测结果。如正常人一日之间,白细胞数、嗜酸性粒细胞数、血小板数等

    均有一定的波动。

    2.采血:采血前,患者应尽量减少运动保持平静。住院患者应在早晨卧床时取血。冬

    天,患者从室外进入室内,应等其暖和后再采血。止血带结扎时间超过 2分钟,大静脉血

    流受阻而使毛细血管内压增高,血管内液与组织液交流,使分子质量<5000的物质逸入组

    织液,或缺氧引起血液成分的变化,使检查结果增高或减低。

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    3.溶血:血细胞内、外各种成分有梯度差,有的成分相差数 10倍(表 1-1-2),故在

    采集、运输、保管、分离血细胞时应尽量避免溶血。因容器不洁、接触水、强力振荡、操

    作不慎等可引起溶血,使红细胞计数、血细胞比容、血浆或血清化学成分(如钾、镁、转

    氨酶、胆红素)等多项指标检验结果增高或减低,不能确切反映原始标本的实际含量。

    4.样本处理:血液样本采集后应立即送检,并尽快进行检查,样本保存不当直接影响

    实验结果。血浆在 4℃保存 24h后,某些凝血因子活性减少 95%。低温(4℃)保存血液可

    使血小板计数结果减低。因此,应根据实验项目确定最佳的保存条件。

    5.结果分析:分析结果时,应考虑药物、饮食等因素对结果的影响。同时,应密切结

    合临床。如患者有严重腹泻或呕吐时,红细胞计数可因脱水而相对性增高。

    第三节 抗凝剂选择

    抗凝剂选择

    抗凝是用物理或化学方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性,以阻止血液凝固。

    能够阻止血液凝固的物质,称为抗凝剂或抗凝物质。

    一、常用抗凝剂和使用方法如下

    1.乙二胺四乙酸(EDTA)盐:常用有钠盐(EDTA-Na2·H20)或钾盐(EDTA-K2·2H2O),

    能与血液中钙离子结合成螯合物,使 Ca2+失去凝血作用,阻止血液凝固。根据国际血液学

    标准化委员会(ICSH)建议,CBC抗凝剂用量为 EDTA-K2·2H2O,量为 1.5~2.2mg/ml血

    液。不适于凝血检查、血小板功能试验。

    2.草酸盐:常用有草酸钠、草酸钾、草酸铵,溶解后解离的草酸根离子能与样本中钙

    离子形成草酸钙沉淀,使 Ca2+失去凝血作用,阻止血液凝固。2mg草酸盐可抗凝 1ml血液。

    但不适于凝血检查。而且,草酸盐浓度过高还会导致溶血、改变血液 pH,干扰血浆钾、钠、

    氯和某些酶活性的测定。

    双草酸盐抗凝剂:适用于血细胞比容、CBC、网织红细胞计数等检查,不适于血小板计

    数、白细胞分类计数。

    3.肝素:是加强抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)灭活丝氨酸蛋白酶作用,阻止凝血酶的形成,并

    阻止血小板聚集等作用,从而阻止血液凝固。肝素是红细胞透渗脆性试验的理想抗凝剂。

    但不适于 CBC、细胞形态学检查。每毫升血液肝素用量为(15±2.5)U,多为肝素钠盐或

    钾盐。

    4.枸橼酸盐:常用有枸橼酸钠,能与血液中钙离子结合形成螯合物,阻止血液凝固。

    枸橼酸盐抗凝剂的抗凝力不如上述抗凝剂。枸橼酸钠与血液的抗凝比例为 1:9或 1:4。

    适用于红细胞沉降率、凝血检查,是输血保养液的成分。

    第四节 血涂片制备

    一、玻片的清洁

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    新载玻片常带有游离碱质,必须以 1mol/L HCl浸泡,清洗。载玻片应清洁、干燥、

    中性、无油腻。

    二、血涂片的制备

    1.手工推片法:影响涂片厚薄的因素有:血滴大小、推片与载玻片间夹角(25°-30°)

    、推片速度、血细胞比容。一张良好的血片,应厚薄适宜、头体尾明显、细胞分布均匀、

    血膜边缘整齐、并留有一定空隙。

    2.载玻片压拉法:适用于血细胞活体染色。

    3.棕黄层涂片法:适用于白细胞减低患者的白细胞分类计数、红斑狼疮细胞检查等。

    一般良好的涂片是:厚薄适宜,头体尾分明,细胞分布均匀,边缘整齐,两边和两端

    留有空隙各 0.3cm和 0.5cm,血膜占血片的 2/3。

    第五节 细胞染色

    血涂片在用光学显微镜观察前需要固定和染色。固定是将细胞蛋白质和多糖等成分迅

    速交联凝固,以保持细胞原有形态结构不发生变化。染色是使细胞的主要结构,如细胞膜、

    细胞质、细胞核等染上不同的颜色,以便于镜下观察识别。

    血涂片染色方法大多源自罗氏染色法,常用瑞氏染色法、姬姆萨染色法。

    一、瑞氏染色法

    1.瑞氏染料

    由酸性染料伊红(E-)和碱性染料亚甲蓝(M+)组成。伊红通常为钠盐,有色部分为

    阴离子。亚甲蓝(又名美蓝)为四甲基硫堇染料,有对醌型和邻醌型两种结构。通常为氯

    盐,即氯化美蓝,有色部分为阳离子。美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料

    (即天青)。将适量伊红、美蓝溶解在甲醇中,即为瑞氏染料。甲醇的作用:一是溶解美

    蓝和伊红;二是固定细胞形态。

    2.染色原理

    既有物理的吸附作用,又有化学的亲和作用。各种细胞成分化学性质不同,对各种染

    料的亲和力也不一样。如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结合,染

    粉红色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性,与碱性染

    料美蓝或天青结合,染紫蓝色或蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美

    蓝均可结合,染淡紫红色,称为嗜中性物质、原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁含较多

    酸性物质,染成较浓厚的蓝色;中幼红细胞既含酸性物质,又含碱性物质,染成红蓝色或

    灰红色;完全成熟红细胞,酸性物质彻底消失后,染成粉红色。

    3.pH的影响 (pH6.4~pH6.8)

    细胞各种成分均属蛋白质,因蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液 pH而定,在偏酸

    性环境中正电荷增多,易与伊红结合,红细胞和嗜酸性粒细胞染色偏红,细胞核呈淡蓝色

    或不染色;在偏碱性环境中负电荷增多,易与美蓝结合,所有细胞呈灰蓝色,颗粒呈深暗,

    嗜酸性颗粒呈暗褐,甚至棕黑色,中性颗粒偏粗,呈紫黑色。稀释染液必须用缓冲液,冲

    洗用水应近中性,否则可导致细胞染色呈色异常,形态难以识别,甚至错误。

    4.染色方法和注意事项

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    (1)血涂片干透后固定,否则细胞在染色过程中容易脱落。

    (2)冲洗时应以流水冲洗,不能先倒掉染液,以防染料沉着在血涂片上。冲洗时间不

    能过久,以防脱色。如血涂片上有染料颗粒沉积,可滴加甲醇,然后立即用流水冲洗。

    (3)染色过淡可以复染,复染时应先加缓冲液,然后加染液。染色过深可用流水冲洗

    或浸泡,也可用甲醇脱色。

    (4)瑞氏染色Ⅰ液由瑞氏染料、甲醇(AR级以上)和甘油组成,Ⅱ液为磷酸盐缓冲

    液(pH6.4~pH6.8)。

    二、姬姆萨染色法

    1.染色原理

    姬姆萨染液由天青、伊红组成。染色原理和结果与瑞氏染色基本相同。

    2.染色方法和注意事项

    ①需先用甲醇固定 3~5分钟。

    ②姬姆萨染液由姬姆萨染料、甘油和甲醇组成。染色前,用磷酸盐缓冲液

    (pH6.4~pH6.8)稀释姬姆萨染液 10~20倍。

    第六节 方法学评价

    一、血涂片制备

    手工推片法用血量少、操作简单,是应用最广泛的方法。棕黄层涂片法可提高异常情

    况的阳性检出率。此外,疟原虫、微丝蚴等检查可采用厚血涂片法。离心涂片法,可获得

    分布均匀、形态完好的细胞涂片。

    二、血液细胞染色

    瑞氏染色法是最经典、最常用染色法,尤其对于细胞质成分、中性颗粒等可获得很好

    的染色效果,但对细胞核的着色能力略差。姬姆萨染液对细胞核、寄生虫(如疟原虫等)

    着色较好,结构更清晰,但对细胞质成分的着色能力略差。采用瑞氏-姬姆萨复合染液可使

    细胞胞质、颗粒、胞核等均获得满意的染色效果。

    瑞氏染料的质量规格用吸光度比值(rA)来评价,rA测定方法:取瑞氏染液

    15~25μl,加甲醇 10ml稀释,混匀,以甲醇为空白管,分别在波长 650nm(美蓝吸收峰

    波长)、525nm(伊红吸收峰波长)测定吸光度(rA=A650/A525)。新配制染料 rA接近

    2,随美蓝逐渐氧化为天青 B(其吸收峰为 650nm,吸光度约为美蓝一半),rA也下降,降

    到 1.3±0.1时,染料即可使用。新鲜配制的染料偏碱,须在室温或是 37℃下贮存一定时

    间,待美蓝逐渐变为天青 B,贮存时间愈久,染色效果愈好。在贮存过程中,必须加塞,

    以防甲醇挥发(如加甘油)和氧化成甲酸,所用甲醇须为 AR级,若其中含过多丙酮,会使

    染色偏酸,白细胞着色不良。

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    第七节 质量控制

    一、血涂片制备

    制备涂片时,血滴愈大、角度愈大、推片速度愈快,血膜愈厚,反之则愈薄。血细胞

    比容增高、血液粘度较高时,应采用小血滴、小角度、慢推,可得满意结果;血细胞比容

    减低、血液较稀时,应采用大血滴、大角度、快推。

    二、血液细胞染色

    染色过深、过浅与血涂片中细胞数量、血膜厚度、染色时间、染液浓度、pH密切相关。

    过深纠正方法是缩短染色时间、稀释染液、调节 pH,过浅纠正方法是延长染色时间、调节

    pH。

    第二章 红细胞检查

    第一节 概要

    (一)红细胞生理

    红细胞是血液中数量最多的有形成分,起源于骨髓造血干细胞,在红细胞生成素作用

    下,经红系祖细胞阶段,分化为原红细胞,经数次有丝分裂发育为早幼、中幼和晚幼红细

    胞。晚幼红细胞通过脱核成为网织红细胞,这一过程在骨髓中进行,约需 72h 。网织红细胞经约 48h 成完全成熟的红细胞,释放入血液,平均寿命约 120d,衰老红细胞主要在脾破坏,分解为铁、珠蛋白和胆红素。

    一方面,红细胞衰老过程中细胞内酶活性减低、膜生理功能所需能量减少、膜脂质成

    分发生变化,使红细胞膜变形性减低、脆性增加,使红细胞容易被脾脏“阻滞”而吞噬、破坏;另一方面,衰老红细胞膜表面所带负电荷减少、红细胞间排斥效应减低、易于聚集、

    体积增大,使红细胞容易被脾脏“阻滞”而吞噬、破坏。红细胞生理功能是通过胞内的血红蛋白来实现的。红细胞有交换和携带气体的功能。

    红细胞经过肺部时,肺泡中氧气经肺泡壁、毛细血管壁进入红细胞内,与红细胞内血红蛋

    白结合,随血液被带到各组织;同时,将组织代谢产生的二氧化碳与血红蛋白结合,经血

    流带回肺部,经肺泡排出体外。如此往复,使全身组织能及时、充分地得到代谢所需的氧

    气,并排出体内多余的二氧化碳。

    (二)血红蛋白

    血红蛋白(Hb 或 HGB)分子是一种微红色的胶体物质,相对分子质量为 64458,是一种呼吸载体,每克血红蛋白可携带 1.34ml 氧,成人约含 600g 血红蛋白,可携约 800ml氧。研究发现,红细胞内充满小颗粒,最小直径约 6.5nm,相当于 1 个血红蛋白分子,颗粒分布:近红细胞膜处最多,细胞中央最少,与红细胞有生理性中央淡染区现象完全一致。

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    1.血红蛋白分子结构及成分血红蛋白分子是有核红细胞、网织红细胞内形成的一种含色素蛋白质。色素部分为亚

    铁血红素,蛋白质部分为珠蛋白。亚铁血红素由原卟啉、铁组成,受 δ-氨基-γ 酮戊酸合成酶、血红素和 Fe2+的调节。Fe2+位于卟啉环中心,有 6 个配位键,4 个配位键与原卟啉分子的 4 个氮原子相连,第 5 个配位键与珠蛋白肽链 F 肽段咪唑基相连,第 6 配位键为空位,能可逆地与氧结合,完成运氧功能。

    珠蛋白肽链分为 α、β 两类:①α 类链包括: α、ξ(zeta)和 θ(theta)链; ②β 类链包括: β、δ、 和 ε(epsilon)链。α 链由 141 个氨基酸组成,β 链由 146 个氨基酸组成。每个Hb 分子由 2 条 α 类肽链和 2 条 β 类肽链组成,每条珠蛋白肽链含有 1 个亚铁血红素。在正常情况下,99%Hb 的铁原子呈 Fe2+状态,称为还原 Hb,1%呈 Fe3+状态,称为高铁血红蛋白,只有 Fe2+状态的 Hb 才能与氧结合,称为氧合血红蛋白。

    2.血红蛋白的合成血红蛋白的合成受激素的调节,一类是红细胞生成素,可促进 δ-氨基-γ 酮戊酸生成和

    铁的利用,从而促进血红素、Hb 的合成;二类是雄激素,睾酮在肝脏内由 5-β 还原酶转变为 5-β 氢睾酮,能促进 δ-氨基-γ 酮戊酸合成酶、红细胞生成素的生成。合成过多时,血红素自发氧化为高铁血红素,高铁血红素能直接抑制 δ-氨基-γ 酮戊酸合成酶,阻止 δ-氨基-γ酮戊酸合成酶生成,以减少血红素合成。

    在人体生长各期,Hb 种类与比例不同。在胚胎发育早期,约妊娠第 5 周,ζ 与 ε 基因表达于卵黄囊的成红细胞中,形成个体发育中第一个有功能的胚胎期血红蛋白:ζ2ε2(Hb

    GowerⅠ);妊娠第 6 周,成红细胞开始由卵黄囊游移到肝脏,ζ 表达水平显著减低,α 和γ 基因开始表达,形成 Hb GowerⅠ(ζ2ε2)、Hb Gower Ⅱ(α2ε2)、Hb Portland(ζ2ε2)和HbF(α2γ2)等胚胎期血红蛋白;妊娠第 8 周,ζ 和 ε 链逐渐消失,γ 链合成达到最高峰,β链开始合成,形成 HbA(α2β2);妊娠第 36 周,β 链合成迅速增加,γ 链合成速率减低;刚出生时,β 链与 γ 链合成量大致相等;出生后 3 个月,β 链合成继续增加,γ 链合成迅速减低,HbA 逐步占 Hb 总量 95%以上,而 HbF 逐步降至 1%以下。δ 链开始合成时间不很清楚,出生后 HbA2(α2δ2)占 Hb 总量的 2%~3%。

    3.血红蛋白的代谢血红蛋白降解产物为珠蛋白和血红素。珠蛋白由蛋白酶、肽酶分解为氨基酸,进入氨

    基酸代谢,可再参与蛋白质、多肽合成或转变成其他含氮物质;血红素中铁由单核-吞噬细胞系统处理,与运铁蛋白结合进入铁代谢库,珠蛋白经一系列蛋白酶和肽酶作用分解为内

    源性氨基酸,与外源性氨基酸混在一起,进入氨基酸代谢,再参与合成蛋白质、多肽、其

    他含氮物。

    第二节 红细胞计数

    一、检测原理(基础知识,专业知识,掌握)

    1.手工显微镜法:用等渗稀释液将血液稀释一定倍数,充入血细胞计数池,在显微镜

    下计数一定体积内的红细胞数,经换算求出每升血液中红细胞数量。

    2.血液分析仪法:用电阻抗和(或)光散射原理。

    二、方法学评价(专业知识,专业实践能力)

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    1.手工显微镜法:是传统方法,不需要特殊设备,但操作复杂、费时。但可作为:①

    对照核实仪器法白细胞减少或血小板减少的情况;②受小红细胞干扰的血小板计数结果的

    校正。

    2.血液分析仪法:是常用方法,比手工法精确(如电阻抗计数法的变异系数为 2%,手

    工法则>11%),且操作简便、快速。当白细胞数量明显增高时,会干扰红细胞计数和体积

    测定而产生误差。

    三、质量控制(专业知识,专业实践能力)

    1.手工法:误差原因为:①样本:血液发生凝固;②操作:稀释、充池、计数不规范;

    ③器材:微量吸管、计数板不标准;④固有误差(计数域误差)。

    (1)标本:血液发生凝固,使细胞计数减少或分布不均。

    (2)操作:稀释、充池、计数不规范。

    (3)器材:微量吸管、计数板不标准。

    (4)固有误差(计数域误差):估计细胞计数的 95%可信限和变异系数。

    2.仪器法:仪器应严格按规程操作,并定期进行室内和室间质控。

    四、参考值(相关专业知识,专业实践能力)

    1.参考值:成年男性(4~5.5)×1012/L;成年女性(3.5~5.0)×1012/L;新生儿

    (6.O~7.0)×1012/L。

    2.医学决定水平:高于 6.8×1012/L,应采取治疗措施;低于 3.5×1012/L,为诊断

    贫血界限,应寻找病因;低于 1.5×1012/L应考虑输血。

    五、临床意义(相关专业知识,专业实践能力,掌握)

    1.生理性变化

    (1)年龄与性别的差异:新生儿,由于出生前处于生理性缺氧状态,故红细胞明显增

    高,较成人约增加 35%,出生 2周后逐渐下降,2个月婴儿约减少 30%。男性在 6~7岁时

    最低,随年龄增大而逐渐上升,25~30岁达到高峰,30岁后随年龄增大而逐渐下降,直到

    60岁尚未停止。

    女性也随年龄增大而逐渐上升,13~15岁达到高峰,随后受月经、内分泌等因素影响

    而逐渐下降,21~35岁维持最低水平,以后随年龄增大而逐渐上升,与男性水平相当。红

    细胞计数男女在 15~40岁期间差别明显,主要是男性雄性激素水平较高,其中睾丸酮有促

    进红细胞造血的作用。

    (2)精神因素:感情冲动、兴奋、恐惧、冷水浴刺激等可使肾上腺素增多,导致红细

    胞暂时增多。

    (3)剧烈体力运动和劳动:安静时全身每分钟耗氧 0.3~0.4L,运动时可达

    2~2.5L,最高可达 4~4.5L,因需氧量增加,使红细胞生成素生成增加、骨髓加速释放红

    细胞,导致红细胞增多。

    (4)气压减低:高山地区居民和登山运动员因大气稀薄、氧分压低,在缺氧刺激下,

    红细胞代偿性增生,骨髓产生更多红细胞,导致红细胞增高。高海拔人群约增加 14%。

    (5)妊娠和老人:妊娠中、后期,为适应胎盘循环需要,通过神经、体液调节,孕妇

    血浆容量明显增加使血液稀释,导致红细胞减少,妊娠约减少 16%。老年人因造血功能明

    显减退,导致红细胞减少。

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    2.红细胞和血红蛋白量减少

    见于临床上各种原因的贫血。通过红细胞计数、血红蛋白测定或血细胞比容测定可诊

    断贫血,明确贫血程度。贫血原因分析应结合体检和进一步检查。按病因将贫血分成:

    (1)造血原料不足

    (A)缺铁,铁是制造血红蛋白的原料,铁供应或吸收不足,原料不足使铁重新利用率

    减少、血红蛋白合成量减少。

    (B)铁失利用,例如,如铁粒幼细胞贫血(红细胞小、中心淡染区扩大、血清铁和贮

    存铁增加、幼稚细胞核周有铁颗粒)或先天性或后天性红细胞酶缺陷者铁不能被利用、堆

    积在细胞内外,使发育中细胞的功能障碍,红细胞过早死亡所致。再如,某些药物,如异

    烟肼、硫唑嘌呤等。继发于某些疾病,如类风湿性关节炎、白血病、甲状腺功能亢进、慢

    性肾功能不全、铅中毒等。

    (2)骨髓造血功能减退

    骨髓造血机制破坏,如再生障碍性贫血、骨髓纤维化骨髓增生异常综合症;骨髓被肿

    瘤细胞侵占,如白血病、骨髓瘤、骨转移癌等。以及某些药物,如抗肿瘤药物、磺胺类药

    物、保泰松、有机砷、马利兰等可抑制骨髓造血功能;物理因素,如 X线、钴、镭照射等

    可抑制骨髓造血功能;继发于其他疾病对骨髓的抑制,如慢性肾功能衰竭(因尿素、肌酐、

    酚、吲哚等物质潴留使骨髓造血功能受影响)。

    (3)急性、慢性红细胞丢失过多

    各种原因出血,如月经过多、消化性溃疡、痔疮、十二指肠钩虫病等。

    (4)红细胞破坏过多(红细胞寿命缩短)

    各种原因溶血,如输血溶血反应、蚕豆病、遗传性球形细胞增多症等。

    3.红细胞增多

    (1)原发性红细胞增多

    这是一种骨髓异常增生的疾病。

    如真性红细胞增多症、良性家族性红细胞增多症等。真性红细胞增多症是一种原因不

    明红系细胞异常增殖性疾病,红细胞计数在(7~10)×1012/L,发生于 40~70岁年龄组,

    其外周血红细胞明显增多、白细胞和血小板增高、有时伴慢性粒细胞性白血病。

    (2)继发性红细胞增多

    实际上是骨髓对缺氧的一种代偿或者是对骨髓的刺激。

    ①心血管病:各种先天性心血管疾病,如房室间隔缺损、法洛四联症。②肺部疾病:

    肺气肿、肺源性心脏病、肺纤维化、矽肺和各种引起肺气体交换面积减少。③异常血红蛋

    白病。④肾上腺皮质功能亢进(库欣病),可能与皮质激素刺激骨髓使红细胞生成偏高有

    关。⑤某些药物,如肾上腺素、糖皮质激素、雄激素等。

    (3)相对性红细胞增多

    是由于血液浓缩所致。

    如呕吐、严重腹泻、多汗、多尿、大面积烧伤、晚期消化道肿瘤而长期不能进食等引

    起血液浓缩、血液中有形成分相对增多,多为暂时性增多。

    六、操作方法

    血细胞计数板(改良牛鲍计数板):用优质厚玻璃制成。每块计数板由 H形凹槽分为

    2个同样的计数池。计数池两侧各有一条支持柱,将特制的专用盖玻片覆盖其上,形成高

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    0.10mm的计数池。计数池内划有长、宽各 3.0mm的方格,分为 9个大格,每个大格面积为

    1.0mm2,容积为 0.1mm3(μl)。

    中央大方格用双线分成 25个中方格,位于正中及四角的 5个中方格是红细胞和血小板

    计数区域,每个中方格用单线分为 16个小方格。四角的 4个大方格是白细胞计数区域,用

    单线划分为 16个中方格。

    根据 1941年国际标准局(NBS)规定,大方格每边长度允许误差为±1%,即

    1±0.01mm,盖玻片与计数池间隙深度允许误差为±2%,即 0.1±0.002mm。

    2.盖玻片:是专用的玻璃盖片,要求表面平整光滑,两面平整度在 0.002mm以内,盖

    玻片规格是 24mm×20mm×0.6mm。

    3.微量吸管:为一次性定量(10或 20μl)毛细玻璃管采血,使用前须经水银称重法

    校正(误差应<±1%)。使用后,应经 2g/L过氧乙酸消毒 2小时,然后依次用蒸馏水冲

    洗、95%乙醇脱水、乙醚干燥。

    4.红细胞计数操作和注意事项

    (1)计数和计算:在 2ml红细胞稀释液中加血 10μl,混匀后,充入计数池,静置

    3~5min后,在高倍镜下,计数中央大方格内 4角和正中 5个中方格内的红细胞数。计数

    时需遵循一定方向逐格进行,以免重复或遗漏,对压线细胞采用数左不数右、数上不数下

    的原则。

    计算公式为:

    红细胞/L=N×25/5×10×106×200=N×1010=N/100×1012。

    N表示 5个中方格内数得红细胞数

    ×25/5:由 5个中方格红细胞数,换算为一个大方格红细胞数

    ×10:由一个大方格红细胞数,换算为 1μl稀释血液内红细胞数

    ×106:1L=106μl

    ×200:为血液稀释倍数

    (2)清洁:应保证计数板和盖玻片清洁。操作时,勿接触计数板表面,以防污染。使

    用后,依次用 95%乙醇、蒸馏水棉球、清洁绸布擦净。

    (3)充池:需一次完成充池,如充池过少、过多或有气泡、继续充液,应重新操作,

    充池后不能移动盖玻片。红细胞在计数池中若分布不均,每个中方格间相差超过 20个应重

    新充池,两次红细胞计数相差不得超过 5%。

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    (4)计数板:改良计数板每年要鉴定 1次,以免影响计数结果的准确性。

    (5)白细胞影响:通常白细胞总数较少,仅相当于红细胞的 1/500~1/1000,对结

    果影响很小,可以忽略不计。但白细胞过高者(WBC>100×109/L),红细胞计数结果应

    进行校正。

    方法有两种:一是直接将患者红细胞数减去白细胞数,二是在高倍镜下观察勿将白细

    胞计入,白细胞体积常比红细胞略大,中央无凹陷,细胞核隐约可见,无黄绿色折光。

    (6)红细胞稀释液:传统稀释液(Hayem液)由 NaCl(氯化钠,调节渗透压)、

    Na2S04·10H2O(结晶硫酸钠,提高比密防止细胞粘连)、HgCl2。(氯化高汞,防腐)和蒸

    馏水组成。枸橼酸钠稀释液由枸橼酸钠(抗凝和维持渗透压)、甲醛(防腐和固定红细胞)

    、氯化钠(调节渗透压)和蒸馏水组成。普通生理盐水或加 1%甲醛生理盐水。

    第三节 血红蛋白测定

    一、检测原理

    1.氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法

    血液中除硫化血红蛋白(SHb)外的各种 Hb(如氧合血红蛋白、碳氧血红蛋白、高铁

    血红蛋白(Hi)或其他衍生物)均可被高铁氰化钾氧化为高铁血红蛋白,再和 CN-结合生

    成稳定的棕红色复合物——氰化高铁血红蛋白,其在 540nm处有一吸收峰,用分光光度计

    测定该处的吸光度,经换算即可得到每升血液中的血红蛋白浓度,或通过制备的标准曲线

    查得血红蛋白浓度。

    2.十二烷基硫酸钠血红蛋白(SDS)测定法

    血液中除 SHb外的各种 Hb均可与低浓度 SDS作用,生成 SDS-Hb棕红色化合物,用分

    光光度计测定波峰 538nm处吸光度,经换算可得到每升血液中的血红蛋白浓度。

    二、方法学评价

    Hb测定方法大致分为:①根据 Hb分子组成测 Hb(全血铁法);②根据血液物理特性

    测 Hb(比密法、折射仪法);③根据 Hb与 O2可逆性结合的特性测 Hb(血气分析法),④

    根据 Hb衍生物光谱特征定量测 Hb(比色法)。

    1.氰化高铁血红蛋白法(HiCN):1966年被 ICSH推荐为参考方法。该法操作简单、

    显色快、结果稳定可靠、读取吸光度后可直接定值等优点。其致命的弱点是氰化钾(KCN)

    试剂有剧毒,使用管理不当可造成公害。

    2.十二烷基硫酸钠血红蛋白测定法(SDS):该法操作简单、呈色稳定、准确性和精确

    性符合要求、无公害等优点。但由于摩尔消光系数尚未最后确认,不能直接用吸光度计算

    Hb浓度,而且 SDS试剂本身质量差异较大会影响检测结果。

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    3.叠氮高铁血红蛋白(HiN3)法:该法优点与 HiCN测定法相似、最大吸收峰在

    542nm、显色快、结果稳定、试剂毒性仅为 HiCN测定法的 1/7,但仍存在公害问题。

    4.碱羟血红蛋白(AHD 575)测定法:该法试剂简单、呈色稳定、无公害、吸收峰在

    575nm、可用氯化血红素作为标准品。但仪器多采用 540nm左右滤光板,限制了此法使用。

    5.溴代十六烷基三甲胺(CTAB)血红蛋白测定法:该法试剂溶血性强又不破坏白细胞,

    适用于仪器上自动检测 Hb和白细胞。缺点是测定结果的准确度和精密度不佳。

    6.沙利(Sahli)酸化血红蛋白法:该法简单易行,但重复性差、误差较大,已被列为

    县以上医院淘汰的实验项目。

    7.血细胞分析仪:优点是操作简单、快速、同时可获得多项红细胞参数,血红蛋白测

    定原理与手工法相似,但由于各型仪器使用溶血剂不同,形成 Hb的衍生物不同。仪器须经

    HiCN标准液校正后才能使用。仪器法测定精度(CV)约为 1%。

    三、质量控制

    1.样本:异常血浆蛋白质、高脂血症、白细胞数超过 30×109/L、脂滴等可产生浊度,

    干扰 Hb测定。

    2.采血部位:部位不同,结果不同,静脉血比毛细血管血低(10~15)%。

    3.结果分析:测定值假性增高的原因是稀释倍数不准、红细胞溶解不当、血浆中脂质

    或蛋白质量增加。

    4.HiCN参考液:是制备标准曲线、计算 K值、校准仪器和其他测定方法的重要物质。

    ICSH公布了制备方法和规格,我国 HiCN部级参考品质量标准为:

    (1)图形扫描波峰 540士 1nm,波谷 504~502nm。

    (2)Aλ540nm/Aλ504nm=1.590~1.630。

    (3)Aλ750nm≤0.002。

    (4)无菌试验:普通培养和厌氧培养阴性。

    (5)精密度:随机抽样 10支测定,CV≤0.5%。

    (6)准确度:以 WHO HiCN参考品为标准进行测定,测定值与标示值之差≤±O.5%。

    (7)稳定性:3年内不变质,测定值不变。

    (8)分装于棕色安瓿内,每支不少于 10ml。

    (9)标签应写明产品名称、批号、含量、有效期、生产日期、贮存法等。

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    5.质控物

    (1)ACD抗凝全血:4℃可保存 3~5周,用于 RBC、Hb和 WBC质控。

    (2)进口全血质控物:用于多参数血细胞分析仪 RBC、Hb和 WBC质控。

    (3)醛化半固定红细胞:4℃可保存 50~60d,用于 RBC、Hb质控。

    (4)溶血液:用于 Hb质控。

    (5)冻干全血:可长期保存,用于 Hb质控。

    四、参考值

    成年男性 成年女性 新生儿

    RBC (4.0-5.5)×1012/L (3.5-5.0)×1012/L (6.0-7.0)×1012/L

    Hb 120-170g/L 110-150g/L 170-200g/L

    HCT0.47±0.04 0.42±0.05

    老年(70岁以上):男性 94.2~122.2g/L;女性 86.5~111.8g/L。

    五、临床意义

    1.生理性变化

    (1)年龄:随年龄增长,Hb可增高或减低,和红细胞变化相似。

    (2)时间:红细胞和血红蛋白量有天内波动,上午 7时达高峰,随后下降。

    2.病理性变化

    血红蛋白测定临床意义和红细胞计数相似,但在贫血程度的判断上优于红细胞计数。

    需注意的是:

    (1)某些疾病,血红蛋白和红细胞浓度不一定能正确反映全身红细胞的总容量。如大

    量失血时,在补充液体前,虽循环血容量缩小,但血液浓度很少变化,从血红蛋白浓度来

    看,很难反映出存在贫血。如水潴留时,血浆容量增大,即使红细胞容量正常,但血液浓

    度减低,从血红蛋白浓度来看,已存在贫血,反之,失水时,血浆容量缩小,即使血液浓

    度增高,但红细胞容量减少,从血红蛋白浓度来看,贫血不明显。

    (2)发生大细胞性贫血或小细胞低色素贫血时,红细胞计数与血红蛋白浓度不成比例。

    大细胞性贫血的血红蛋白浓度相对偏高,小细胞低色素贫血的血红蛋白减低,但红细胞计

    数可正常。

    六、HiCN 法操作注意事项

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    1.测定:在 5ml HiCN转化液中,加血 20μl,充分混合,静置 5min后,在波长 540nm

    处,光径(比色杯内径)1.000cm,HiCN转化液或蒸馏水调零,测定吸光度(A)。

    2.计算:

    (1)直接按公式计算:

    A 是在 540nm处 HiCN的吸光度

    64458mg是 Hb分子量

    1000 是将毫克转换为克

    251 血液稀释倍数

    (2)绘制标准曲线:

    采用 HiCN参考液(50g/L、100g/L、150g/L、200g/L),在分光光度计上,波长

    540nm处,测定各种参考液的吸光度,以参考液血红蛋白含量为横坐标,吸光度为纵坐标,

    绘制标准曲线,或求出换算常数 K(K=SHb/ SA)。根据样本吸光度从曲线上查出对应的

    Hb,或用 K值计算:

    Hb(g/L)=K×A。

    3.HiCN储存:棕色容器(在塑料容器中 CN-丢失,测定结果偏低),有塞。4℃保存数

    月,不能在 0℃保存,试剂失效。

    4.干扰:WBC过高或球蛋白过高,干扰检测结果。解决办法:WBC过高可先离心后取上

    清比色;球蛋白过高可在比色液中加入少量固体 NaCl或碳酸钾,混匀后溶液澄清再比色。

    5.氰化钾试剂处理:废液先以水 1:1稀释,再加次氯酸钠 35ml/L,充分混匀,放置

    15h以上,使 CN-氧化成 CO2和 N2挥发,或水解成 CO32-和 NH4+,再排入下水道。废液不能和

    酸性溶液混合,否则产生剧毒氰氢酸气体。

    第四节 红细胞形态检查

    一、检测原理:显微镜观察

    红细胞形态检查与血红蛋白测定、红细胞计数结果相结合可粗略推断贫血原因,对贫

    血诊断和鉴别诊断有很重要临床价值。将细胞分布均匀的血涂片,进行染色(如瑞氏染色)

    后,根据各种细胞和成分各自的呈色特点,在显微镜下进行观察和识别。

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    二、方法学评价

    血涂片观察一方面用于估计血细胞的相对数量,作为仪器质控方法之一,另一方面通

    过形态学识别,初步判断贫血原因。但制片不当,常使细胞鉴别发生困难,甚至产生错误

    结论。

    三、质量控制

    1.选择细胞分布均匀的区域。

    2.注意检查顺序的完整性:应先在低倍镜下估计细胞分布和染色情况,再用油镜观察

    血膜体尾交界处细胞形态,同时浏览是否存在其他异常细胞,如幼稚或有核红细胞等,有

    时异常成分常集中分布在血片边缘,应注意观察。

    四、参考值

    正常红细胞形态特点:双凹圆盘形,大小一致,平均直径 7.2 ,淡粉红色,中央

    1/3为生理性淡染区,无异常结构。

    五、临床意义

    1.红细胞体积大小变化

    (1)小红细胞:直径<6μm的红细胞。正常人偶见。小红细胞血红蛋白合成障碍,

    生理性淡染区扩大,见于缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血。小红细胞血红蛋白充盈良

    好,生理性淡染区消失,见于遗传性球形细胞增多症。

    (2)大红细胞:直径>10μm 的红细胞,为未完全成熟红细胞,体积较大,因残留脱

    氧核糖核酸,瑞氏染色后呈多色性或嗜碱性点彩。见于巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、恶

    性贫血等。

    (3)巨红细胞:直径>15μm 的红细胞,因叶酸、维生素 B12缺乏使幼稚细胞内 DNA

    合成不足,不能按时分裂,脱核后成为巨大红细胞,血涂片还可见分叶过多中性粒细胞。

    见于巨幼细胞性贫血。

    (4)红细胞大小不均:红细胞间直径相差一倍以上,大者可达 12μm,小者仅

    2.5/μm,与骨髓粗制滥造红细胞有关。见于严重的增生性贫血(如巨幼细胞性贫血)。

    2.红细胞内血红蛋白含量改变

    (1)正常色素性:红细胞呈淡红色,中央有生理性浅染区。见于正常人、急性失血、

    再生障碍性贫血和白血病等。

    (2)低色素性:红细胞中央生理性浅染区扩大,成为环形红细胞,提示血红蛋白含量

    明显减少。见于缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、铁幼粒细胞性贫血、某些血红蛋白

    病。

    (3)高色素性:红细胞中央浅染区消失,整个红细胞染成红色,胞体增大,平均红细

    胞血红蛋白含量增高,平均血红蛋白浓度正常。见于巨幼细胞性贫血。

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    (4)多色性:是尚未完全成熟的红细胞,胞体较大,胞质内尚存少量嗜碱性物质

    (RNA),红细胞染成灰红色或淡灰蓝色。见于正常人(占 1%左右)、骨髓造红细胞功能

    活跃(如溶血性或急性失血性贫血)。

    (5)细胞着色不一:同一血涂片同时出现低色素、正常色素性两种细胞,又称双形性

    贫血。见于铁粒幼红细胞性贫血。

    3.红细胞形状改变

    (1)球形红细胞:细胞中央着色深、体积小、直径与厚度比小于 2.4:1(正常值

    3.4:1),球形红细胞气体交换功能较正常红细胞为弱,且容易导致破坏、溶解。见于遗

    传性和获得性球形细胞增多症(如自身免疫溶血性贫血、直接理化损伤如烧伤等)和小儿。

    (2)椭圆形红细胞:细胞呈椭圆形、杆形、两端钝圆、长轴增大,短轴缩短、长是宽

    的 3~4倍,长径为 12.5μm,横径为 2.5μm,其红细胞生存时间一般正常也可缩短,血红

    蛋白正常,与遗传性细胞膜异常基因有关,细胞成熟后呈椭圆形,置于高渗、等渗、低渗、

    正常血清内,其椭圆形保持不变。见于遗传性椭圆形细胞增多症(可达 25%~75%)、大细

    胞性贫血(可达 25%)、缺铁性贫血、骨髓纤维化、巨幼细胞贫血、镰形细胞性贫血、正

    常人(约占 1%,不超过 15%)。

    (3)靶形细胞:细胞中央染色较深,外围为苍白区域,而边缘又深染,形如射击之靶。

    有时,中央深染区呈细胞边缘延伸的半岛状或柄状。细胞直径比正常大,但厚度变薄,由

    于红细胞内血红蛋白化学成分发生变异和铁代谢异常所致,形成过程是:红细胞中血红蛋

    白溶解成镰状或弓形空白区,随后弓形空白区两端继续弯曲延伸,形成环形透明带,细胞

    生存时间约为正常细胞的一半或更短。见于各种低色素性贫血(如珠蛋白生成障碍性贫血、

    HbC病)、阻塞性黄疸、脾切除后。

    (4)口形红细胞:细胞中央有裂缝,中央淡染区呈扁平状,似张开的口形或鱼口,细

    胞有膜异常,Na+通透性增加,细胞膜变硬,使脆性增加,细胞生存时间缩短。见于口形红

    细胞增多症、小儿消化系统疾患引起的贫血、酒精中毒、某些溶血性贫血、肝病和正常人

    (<4%)。

    (5)镰形红细胞:细胞呈镰刀状、线条状或 L、S、V形等,是含有异常血红蛋白

    S(HbS)的红细胞,在缺氧情况下,溶解度减低,形成长形或尖形结晶体,使细胞膜发生

    变形。检查镰形红细胞时需加还原剂如偏亚硫酸钠后观察。见于镰状细胞贫血(HbS-

    S,HbS-C)、镰状细胞特性样本(HbA-S)。

    (6)棘红细胞:细胞表面有针状突起、间距不规则、长和宽不一。见于遗传性或获得

    性β-脂蛋白缺乏症(高达 70%~80%)、脾切除后、酒精中毒性肝病、尿毒症。需与皱缩

    红细胞(锯齿状红细胞)鉴别,皱缩红细胞边缘呈锯齿形、排列紧密、大小相等、外端较

    尖。

    (7)裂红细胞:为红细胞碎片或不完整红细胞,大小不一、外形不规则、呈刺形、盔

    形、三角形、扭转形等,是细胞通过阻塞的、管腔狭小的微血管所致。见于弥散性血管内

    凝血、微血管病性溶血性贫血、重型珠蛋白生成障碍性贫血、巨幼细胞性贫血、严重烧伤。

    正常人(<2%)。

    (8)缗钱状红细胞:红细胞互相连接如缗钱状,是因为血浆中某些蛋白(纤维蛋白原、

    球蛋白)增高,使红细胞正负电荷发生改变所致。

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    (9)有核红细胞(幼稚红细胞):除 1周内婴幼儿血涂片中可见少量有核红细胞外,

    其他则为病理现象,包括:

    ①溶血性贫血:严重的溶血性贫血、新生儿溶血性贫血、自身免疫性溶血性贫血、巨

    幼细胞性贫血。因红细胞大量破坏、机体相对缺氧,使红细胞生成素水平增高,骨髓红系

    增生,网织红细胞和部分幼稚红细胞提前释放人血,说明骨髓有良好的调节功能。

    ②造血系统恶性疾患或骨髓转移性肿瘤:各种急、慢性白血病、红白血病。由于骨髓

    充满大量白血病细胞而使幼红细胞提前释放,或因髓外造血所致,有核红细胞以中、晚幼

    红细胞为主。红白血病时可见更早阶段幼稚红细胞,并伴形态异常。

    ③慢性骨髓增生性疾病:如骨髓纤维化,血涂片可见有核红细胞,来自髓外造血和纤

    维化的骨髓。

    ④脾切除后:骨髓中个别有核红细胞能到达髓窦,当脾切除后,不能被脾脏扣留,从

    而进入外周血。

    (10)其他:①新月形红细胞:红细胞着色极淡、残缺不全、体积大、状如新月形、

    直径约 20μm,见于某些溶血性贫血(如阵发性睡眠性血红蛋白尿症)。②泪滴形红细胞:

    红细胞形如泪滴样或梨状,因细胞内含有 Heinz小体或包涵体,或红细胞膜被粘连而拉长

    所致。见于贫血、骨髓纤维化和正常人。③红细胞形态不整:出现不规则的奇异形状,如

    豆状、梨形、蝌蚪状、麦粒状、棍棒形等。见于某些感染、严重贫血、巨幼细胞性贫血。

    4.红细胞内出现异常结构

    (1)嗜碱性点彩红细胞:瑞氏染色后,胞质内出现形态不一的蓝色颗粒(RNA),属

    于未完全成熟红细胞,颗粒大小不一、多少不等,原因为重金属损伤细胞膜,使嗜碱性物

    质凝集,或嗜碱性物质变性,或血红蛋白合成中阻断原卟啉与铁结合。见于铅中毒。正常

    人血涂片中很少见到嗜碱性点彩红细胞(约占 1/10000)。其他各类贫血见到点彩红细胞

    表明骨髓造血旺盛或有紊乱现象。

    (2)豪焦小体(Howell-Jolly’sbody、染色质小体):成熟红细胞或幼红细胞胞质

    内含有一个或多个直径为 1~2μm暗紫红色圆形小体,为核碎裂、溶解后的残余部分。见

    于脾切除后、无脾症、脾萎缩、脾功能低下、红白血病、某些贫血(如巨幼细胞性贫血)。

    (3)卡波环:在嗜多色性、碱性点彩红细胞胞质中出现紫红色细线圈状结构,呈环形、

    8字形,为核膜残余物、纺锤体残余物(电镜下,可见形成纺锤体的微细管着色点异常)、

    脂蛋白变性物。见于白血病、巨细胞性贫血、增生性贫血、铅中毒、脾切除后。

    (4)寄生虫:红细胞胞质内可见疟原虫、微丝蚴、杜利什曼原虫等病原体。

    第五节 血细胞比容(HCT)测定

    (一)检测原理

    血细胞比容(Hct、Ht、HCT或 PCV)是指在一定条件下,经离心沉淀压紧的红细胞在

    全血样本中所占比值。

    1.离心法:包括温氏法(Wintrobe法)、微量法:是将抗凝血置于孔径统一的温氏管

    或毛细玻管中,以一定转速离心一定时间后,计算红细胞层占全血的体积比。

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    2.血液分析仪法:原理是当细胞通过计数小孔时,形成相应大小的脉冲,脉冲的多少

    即为细胞数量,脉冲高度为细胞体积,通过红细胞平均体积(MCV)和红细胞计数(RBC)

    即求得血细胞比容,Hct=MCV×RBC。

    (二)方法学评价

    1.手工法:有折射计法、粘度法、比密测定法、离心法和放射性核素法。温氏法:采

    用中速离心,不能完全排除红细胞间残留血浆,测定结果偏高,已属淘汰。微量法:采用

    高速离心,细胞间残留血浆比温氏法少(约 2%),且样本用量小、操作简便、残留血浆

    1%~3%。

    2.血液分析仪法:仪器法 CV为 1%,手工法 CV为 2%,仪器法应注意红细胞增多症或血

    浆渗透压异常时会出现误差。

    (三)质量控制

    1.手工法:抗凝剂量不准确、混匀不充分、离心速度不够会产生误差。红细胞形态异

    常(如小红细胞、大红细胞、椭圆形红细胞、镰形红细胞)或红细胞增多症可使血浆残留

    量增加 6%。当红细胞增多时,Hct明显增高,血浆残留也会增加。

    2.血液分析仪法:要注意 Hct是否与 RBC、MCV相关。

    (四)参考值

    Wintrobe法:男性 0.40~0.54;女性 0.37~0.47。

    微量法:男性 0.47±0.04;女性 0.42±0.05。

    (五)临床意义

    1.增高:见于各种原因所致血液浓缩,如大量呕吐、大手术后、腹泻、失血、大面积

    烧伤、真性红细胞增多症(可达 0.80L/L)、继发性红细胞增多症等。

    2.减低:见于各种贫血,但不同类型的贫血,Hct减少程度与 RBC计数值不完全一致。

    3.输液评估:用于评估血浆容量有无增减或浓缩稀释程度,有助于控制补液量和了解

    体液平衡情况,是临床输血、输液治疗疗效观察的指标。

    4.计算平均值:作为红细胞平均体积、红细胞平均血红蛋白浓度计算的基础数据。也

    是影响全血粘度的决定因素之一。

    (六)操作方法和注意事项

    1.温氏法:取 EDTA-K2或肝素钠抗凝静脉血 2ml,加入温氏管中,用水平离心机以

    2264g(即有效半径 22.5cm,3000r/min),离心 30分钟,离心后血液分为 5层,自上而

    下分别为血浆层、血小板层、白细胞层和有核红细胞层、还原红细胞层(紫黑红色)、带

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    氧红细胞层(鲜红色)。读取还原红细胞层柱高的毫米数,乘以 0.01,即为每升血液中红

    细胞体积的升数。

    2.微量法:取抗凝全血或末梢血,充入一次性毛细玻管(管长 75mm,内径约

    0.8~1.0mm,壁厚 0.20~0.25mm,每支含肝素 2U)的 2/3(50mm)处,封口后,用水平

    式毛细管 Hct离心机以 12000r/min(相对离心力 RCF≥10000g),离心 5min,用专用读

    数板或刻度尺,读取还原红细胞层和全层长度,计算 Hct值。

    3.注意事项:橡皮泥封管口底面应平整,以深入毛细血管内 2mm左右为宜。应做双份

    试验,结果之差应<0.01。

    第六节 红细胞平均指数

    (一)检测原理

    1.手工法:通过红细胞计数、血红蛋白量和血细胞比容值计算红细胞平均指数。

    (1)红细胞平均容积:MCV,代表每个红细胞平均体积的大小。

    (2)红细胞血平均红蛋白含量:MCH,代表每个红细胞内平均所含血红蛋白的量。

    (3)红细胞平均血红蛋白浓度:MCHC,代表平均每升红细胞中所含血红蛋白浓度。

    2.血液分析仪:能直接导出 MCV值,再结合直接测定的 RBC和 Hb,计算出

    MCH(=Hb/RBC)和 MCHC(=MCH×MCV)。

    (二)方法学评价

    1.MCV:当红细胞凝集(如冷凝集综合征)、严重高血糖症(葡萄糖高于

    60000mg/L)可使 MCV假性增高。

    2.MCH:高脂血症、白细胞增多症可使 MCH假性增高。

    3.MCHC:受 Hct(血浆残留或出现异常红细胞)和 Hb(高脂血症、白细胞增多症)的

    影响。

    (三)质量控制

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    1.手工法:红细胞计数、血红蛋白、血细胞比容测定数据必须准确可靠。

    2.血液分析仪法:利用人群红细胞平均指数相当稳定的原理,用 XB分析法或浮动均值

    法对血液分析仪进行质量控制。

    (四)参考值见表 1-2-1

    1ml=10 12fl,1g=10 12pg

    (五)临床意义

    红细胞平均指数可作为贫血形态学分类依据(表 1-2-2)。

    小红细胞性贫血可低至 MCV50fl、MCHl5pg、MCHC220g/L;大红细胞可高至

    MCHl50fl、MCH50pg,但 MCHC正常或减低;MCHC增高见于球形细胞增多症,但不超过

    380g/L。

    红细胞平均指数仅代表红细胞平均值,有一定局限性。如溶血性贫血和急性白血病,

    虽属正细胞性贫血,但红细胞可有明显的大小不均和异形,大细胞性贫血,也可有小细胞

    存在,小细胞贫血,也可有大红细胞,必须作血涂片检查才能较为准确地诊断。

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    第七节 红细胞体积分布宽度

    (一)检测原理

    红细胞体积分布宽度(RDW)反映样本中红细胞体积大小的异质程度,即反映红细胞大

    小不等客观指标,常用变异系数(CV)表示,由血液分析仪的红细胞体积直方图导出。

    (二)方法学评价

    RDW是对红细胞体积大小的评价,比血涂片红细胞形态大小的观察更为客观和准确。

    (三)质量控制

    RDW异常受样本中红细胞碎片、红细胞凝集、双相性红细胞的影响。

    (四)参考值

    (五)临床意义

    1.贫血形态学分类:根据红细胞形态大小不同,将贫血分成 6类(表 1-2-4)。

    1983年由 Bessman提出的新贫血分类法对贫血病因鉴别诊断具有更大意义。MCV和

    RDW联合检测对贫血形态学鉴别诊断灵敏度为 86.7%~100%,特异度为 83.4%~100%。

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    2.作为缺铁性贫血(IDA):筛选诊断和疗效观察的指标:RDW增大对 IDA的诊断灵敏

    度达 95%以上,特异性不强,可作为 IDA的筛选诊断指标。当铁剂治疗有效时,RDW开始增

    大,随后逐渐降至正常。

    3.鉴别缺铁性贫血和β-珠蛋白生成障碍性贫血:RDW增大对 IDA的诊断灵敏度达 95%

    以上,特异性不强,可作为 IDA的筛选诊断指标。当铁剂治疗有效时,RDW开始增大,随

    后逐渐降至正常。

    第八节 网织红细胞计数

    (一)检测原理

    网织红细胞(Ret,RET)是晚幼红细胞脱核后到完全成熟红细胞间的过渡细胞,属于

    尚未完全成熟的红细胞,其胞质中残存嗜碱性物质核糖核酸(RNA),经活体染色(新亚甲

    蓝、灿烂甲酚兰(煌焦油蓝)、中性红等染料)后,形成核酸与碱性染料复合物,呈深染

    的颗粒状或网状结构。凡含两个以上的深染颗粒或具有线网状结构的无核红细胞,即为网

    织红细胞。

    1.普通光学显微镜法:在显微镜下计数 1000个红细胞中网织红细胞的百分比或分数。

    2.网织细胞计数仪法和血液分析仪法:用荧光染料(如吖啶橙、派若宁-Y、噻唑橙)

    使网织红细胞内 RNA着色,用流式细胞术(FCM)得到网织红细胞数。

    (二)方法学评价

    1.普通光学显微镜法:试管法操作简便、重复性较好。玻片法取血量少、染色时水分

    易蒸发,造成结果偏低。但显微镜法受主观因素影响较多,且耗时费力。

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    2.网织细胞计数仪法:可客观地将 Ret分成高荧光强度网织红细胞(HFR)、中荧光强

    度网织红细胞(MFR)、低荧光强度网织红细胞(LFR)三类,有助于化疗、放疗、移植患

    者的监测。

    3.血液分析仪法:可提供网织红细胞绝对值(Ret)、网织红细胞百分比(Ret%)、网

    织红细胞分布宽度(RDWr)、网织红细胞平均体积(MCVr/MRV)、网织红细胞血红蛋白浓

    度(HCr)、网织红细胞平均血红蛋白浓度(MCHCr)、网织红细胞血红蛋白分布宽度

    (HDWr)、LFR、MFR、HFR、网织红细胞成熟指数(RMI,RMI=(MFR+HFR)/LFR×100)。

    仪器法优点是测量细胞多、避免主观因素、方法易于标准化。

    (三)质量控制

    1.显微镜法

    影响因素有:操作人员对网织红细胞识别不同、血涂片质量好坏、计数红细胞数量多

    少、计数方法等。Miller窥盘法计数网织红细胞误差可减小,网织红细胞 95%可信限为:

    2.仪器法:仪器法计数红细胞 10000~50000个。出现 Howell-Jolly小体、有核红细

    胞、巨大血小板会使结果假性增高。

    (四)参考值

    显微镜计数法:成人 0.008~0.02或(25~75)×10 9/L,新生儿 0.02~0.06。仪器

    法:表 1-2-5。RMI:男性为 9.1%~32.2%,女性为 12.8%~33.7%。

    (五)临床意义

    网织红细胞计数(尤其是网织红细胞绝对值)是反映骨髓造血功能的重要指标。正常

    情况下,骨髓中网织红细胞均值为 150×10 9/L,血液中为 65×10 9/L。当骨髓 Ret增多,

    外周血减少时,提示释放障碍;骨髓和外周血 Ret均增加,提示为释放增加。从网织红细

    胞成熟类型获得红细胞生成活性的其他信息,正常时,外周血网织红细胞中Ⅲ型约占

    20%~30%,Ⅳ型约占 70%~80%,若骨髓增生明显,可出现Ⅰ型和Ⅱ型 Ret。

    1.判断骨髓红细胞造血情况

    (1)增多:见于

    ①溶血性贫血:溶血时大量网织红细胞进入血循环,Ret可达 6%~8%,急性溶血时,

    可达约 20%,甚至 50%以上,绝对值超过 100×10 9/L。急性失血后,5~10d网织红细胞

    达高峰,2周后恢复正常。

    ②放疗、化疗后:恢复造血时,Ret短暂和迅速增高,是骨髓恢复较敏感的指标。

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    ③红系无效造血:骨髓中红系增生活跃,外周血网织红细胞计数正常或轻度增高。

    (2)减少:见于再生障碍性贫血、溶血性贫血再障危象。典型再生障碍性贫血诊断标

    准之一是 Ret计数常低于 0.005,绝对值低于 15×10 9/L。

    2.观察贫血疗效

    缺铁性贫血、巨幼细胞性贫血患者治疗前,Ret仅轻度增高(也可正常或减少),给

    予铁剂或维生素 B12、叶酸治疗后,用药 3~5天后,Ret开始上升,7~10天达高峰,2周

    左右,Ret逐渐下降,表明治疗有效。

    3.骨髓移植后监测

    骨髓移植后第 21天,如 Ret>15×109/L,表示无移植并发症;小于 15×109/L,伴

    嗜中性粒细胞和血小板增高,可能为骨髓移植失败。

    4.网织红细胞生成指数(RP