3/15/2018

1

COCI GRAM POZITIVI

Genul Staphylococcus

3/15/2018

2

Caractere generale

• staphilos (gr.)= ciorchine • aerobi• clorura de sodiu 7,5% (halotoleranţi)• catalazo – pozitivi• imobili• in vivo majoritatea produc capsula

Reprezentati

• Staphylococcus aureus• responsabil de majoritatea infectiilor umane stafilococice• Bacterie patogena, NU face parte din flora normala• Stafilococ coagulazo-pozitiv

• Staphylococcus epidermidis• Face parte din microbiocenoza nazala, cutanata…..

=> infectii oportuniste la pacienti imunodeprimati: cistite, septicemii, endocardite, meningite, infectii nosocomiale

– Stafilococ coagulazo-negativ

• Staphylococcus saprophyticus• Bacterie oportunista• infectii de tract urinar• Stafilococ coagulazo-negativ

3/15/2018

3

Factorii de patogenitate ai S. aureus

Enzimele extracelulare formarea leziunilor tisulare si diseminarea bacteriilor

1. Coagulaza = cel mai important factor de patogenitate • transformarea fibrinogenului in fibrina

a) liberacoagularea plasmei, formarea de coaguli mici endovenosi, incarcati cu stafilococ diseminare

b) legata manta de fibrina in jurul stafilococilor => rol antifagocitar

Diagnosticul de laborator in infectiile stafilococice

I. Recoltarea produselor patologice- In functie de localizarea infectiei- Sange pentru realizarea de hemoculturi- Inaintea tratamentului cu antibiotice- ! Respectarea regulilor generale de asepsieII. Examenul microscopic direct din produsul patologic recoltat de la pacient

(preparat nativ, frotiu colorat Gram)III. Inocularea produselor patologice pe medii de cultura: geloza sange, mediul

Chapman; incubarea mediilor inoculate in termostat, la 37°C pentru 18-24hIV. Identificarea stafilococilor in functie de:- Caracterele morfo-tinctoriale- Caracterele de cultura- Caracterele biochimice- Prezenta coagulazeiV. Testarea sensibilitatii la antibiotice a tulpinii de stafilococ izolate de la pacient=

realizarea antibiogramei

3/15/2018

4

Caractere microscopice

- coci Gram pozitivi- asezati in gramezi

Genus Staphylococcus

frotiu din cultura frotiu din produs patologic

3/15/2018

5

Caractere de cultura

Mediul geloza simpla (bacterienepretentioasa nutritiv)

Pigment galben auriu (S. aureus)

Caractere de cultura – pigmentpigment galben auriu- S. aureus pigment alb - S.epidermidis

3/15/2018

6

Caractere de cultura- geloza sange (hemoliza)hemoliza completa=hemoliza α

Caractere de cultura-hemolizahemoliza cald-rece =hemoliza β

3/15/2018

7

Mediul Chapman

Mediu selectiv si diferential(evidentiaza o proprietatebiochimica a tulpinii)Componente: geloza simpla + NaCl 7,5% + manitol + rosu fenol Utilizare: selectiv pentru stafilococ

Cultura de S.aureus pe mediu solid hiperclorurat

cu manitol

Cultura de S. saprophyticus pe mediu solid hiperclorurat cu manitol

3/15/2018

8

TESTE DE PATOGENITATE IN VITRO Coagulaza libera

Test negativ Test pozitiv

TESTE DE PATOGENITATE IN VITROCoagulaza legata

3/15/2018

9

TESTE DE PATOGENITATE IN VIVO

Test Dolman- enterotoxina

Antibiograma

• β- lactamine !!!! (Oxacilina, Meticilina)

• Aminoglicozide• Macrolide• Vancomicina• Linezolid• Co-trimoxazol• Fluorochinolone

3/15/2018

10

Genul Streptococcus

Genul Streptoccocus

• grup heterogen• numar mare de specii de streptococi

- prezente in lapte si branzeturi (Streptococcus lactis),

– Comensale• microbiocenoze : cavitatea nazala, orofaringe, intestin,

tegument.

– Patogene: Streptococcus pyogens, cel mai frecvent patogen izolat din infectiile umane.

3/15/2018

11

Caractere generale

• Coci Gram pozitiv• dispusi in lanturi de dimensiuni variabile• capsula:

– acid hialuronic : Streptococii -hemolitici grup A– polizaharide: Streptococcus pneumoniae

• catalazo - negativi• aerob-anaerob facultativi; • Streptococii anaerobi - genul Peptostreptococcus (5

specii)

Clasificarea streptococilor – hemoliza pe geloza sange• hemoliza β: clara, hematiile sunt lizate total

= streptococi β -hemolitici• hemoliza - incompleta, verzuie • streptococi γ - nehemolitici,

- nepatogeni

3/15/2018

12

Clasificare Rebecca Lancefield

• Polizaharidul (carbohidratul) “C” (din structura peretelui celular)

• Pe baza specificitatii antigenice a polizaharidului C,• grupe de streptococi (Lancefield) A-T, alcatuite din

una sau mai multe specii. • grupul A - cel mai important in patologia umana• grupul D, B, C si G

CLASIFICAREA STREPTOCOCILOR

3/15/2018

13

Streptococi -hemolitici

• hemoliza incompleta, de culoare verde • Streptococcus viridans:

- comensali– endocardita– Streptococcus mutans, salivarius - placa dentara

• Streptococcus pneumoniae (pneumococ) - pneumonia bacteriana,

• Enterococcus (faecalis, faecium) - infectii intraspitalicesti, in special infectii urinare.

Hemoliza α (partiala)

3/15/2018

14

Streptococi -hemolitici

• hemoliza completa, clara pe geloza sange• Streptococcus pyogenes - streptococ -

hemolitic grup A Lancefield, – responsabil pentru majoritatea bolilor

streptococcice

• Streptococcus agalactiae - streptococ -hemolitic grup B Lancefield, – patogen pentru nou nascuti

Diagnosticul de laborator in infectiile streptococice

I. Recoltarea produselor patologice- In functie de localizarea infectiei- Sange pentru realizarea de hemoculturi- Inaintea tratamentului cu antibiotice- ! Respectarea regulilor generale de asepsieII. Examenul microscopic direct din produsul patologic recoltat de la pacient

(preparat nativ, frotiu colorat Gram); NU cand produsul patologic este secretie faringiana

III. Inocularea produselor patologice pe medii de cultura: geloza sange, geloza socolatie; incubarea mediilor inoculate in termostat, la 37°C pentru 18-24h

IV. Identificarea streptocilor in functie de:- Caracterele morfo-tinctoriale- Caracterele de cultura- Caracterele biochimice- Caracterele antigenice – identificarea grupului din care fac parteV. Testarea sensibilitatii la antibiotice a tulpinii de streptococ izolate de la pacient=

realizarea antibiogramei (NU e necesara pentru streptococul de grup A)

3/15/2018

15

Genul Streptococcus- Caractere microscopice

Frotiu din cultura Frotiu din produs patologic

Streptococcus spp.Frotiu din produs patologic

3/15/2018

16

Hemoliza β (totala)

Identificarea streptococilor

• Catalaza – negativ

– Bacitracina – diferentiaza strept. grup A de alti streptococi: streptococul de grup A = Streptococcus pyogenes este intordeauna sensibil la Bacitracina

– Latex aglutinarea (Ag capsular)– pentru determinarea grupului de streptococ

3/15/2018

17

Identificarea streptococilorIdentificarea streptococilor

Diagnostic serologic :Detectarea anticorpilor anti-streptolizină O (ASLO). Valori normale: 200- 250 U/ml. ASLO > 250 U/ml indică o infecţie streptococică recentăDiagnostic biologic :

Testul Dick → scarla nă

Diagnostic de laborator

3/15/2018

18

Antibiograma

• !!!!– Streptococul beta-hemolitic de grup A

(Streptococcus pyogenes) este sensibil la Penicilina

– Eritromicina/efectuarea antibiogramei pt. pacientii alergici la P

– Antibiograma pe Muller-Hinton cu sange

Streptococcus pneumoniaeProprietati generale

• coci ovalari Gram pozitivi, • aspect de varf de lance sau flacara de lumanare,• dispusi in diplo (diplococi), • Capsula polozaharidica: 90 tipuri capsulare• Pe geloza sange - hemoliza de tip α, incompleta

3/15/2018

19

Streptococcus pneumoniaeFrotiu colorat Gram din produs patologic

Geloza socolatie-- mediu complex pentru bacterii pretentioase nutritiv

Geloza sange- mediu complex, pentru bacteriipretentioase nutritiv

3/15/2018

20

Streptococcus pneumoniaeaspectul coloniilor pe geloza sange

Identificarea pneumococilor

• Sensibilitatea la Optochin– diferentiaza S. pneumoniae(Sensibili) de streptococii viridans (Rezistenti)

3/15/2018

21

Streptococcus pneumoniaeAntibiograma

• Penicilina G de electie, dar a aparut rezistenta=> testarea sensibilitatii la antibiotice prin realizarea antibiogramei

• Cefalosporine de generaţia III – Ceftriaxona• Chinolone• Linezolid• Vancomicina• Aminoglicozide

Strepococi viridans

• frecvent comensali: in faringe, cavitatea bucala, • Streptococcus mutans, Streptococcus sanguis,

Streptococcus mitis

• S. mutans intervine in producerea cariei dentare

• endocardite subacute streptococice– patrunderea streptococilor viridans in circulatie (ex. după extractii dentare)

• bacteriemie

3/15/2018

22

Streptococcus agalactiae

= Streptococ de Grup B • flora normala genito-intestinala si a tractului genital

feminin, – 5-35% dintre femeile gravide colonizate (vagin/rect)– cauzặ majora de boala (pneumonii, meningite, septicemii)

la n.n. – infectii post partum la femei

Streptococul de grup B

3/15/2018

23

Identificarea streptococilor

– CAMP – diferentiaza strept. grup B de alti streptococi

• Marirea hemolizei cu S. aureus = streptococ de grup B

– Latex aglutinarea (Ag capsular)

3/15/2018

24

Streptococii de grup D

– Streptococcus bovis– Streptococcus suis

• S. bovis– Bacteremie– Endocardita (pacienti cu leziuni ale colonului)Caracterristici:- Testul bila-esculina +- Au antigen de grup D in peretele celular

Genul Enterococcus

• au antigen de grup D in peretele celular (au apartinut streptococilor grupului D pana in 1984- genomic DNA analysis )

• Enterococcus faecalis• Enterococcus facium• flora normala din tractul gastro-intestinal, biliar, vagin, uretra• a 2-a cauza de infectii nosocomiale in U.S.A.

3/15/2018

25

Enterococcus – boli produse

– Infectii de tract urinar– Bacteriemie– endocardite

– Diverticulite– Meningita – infectii abdominale/pelviene

Enterococcus

– Antibiograma !!!– Au rezistenta naturala la Cefalosporine– Tulpinile sensibile: Ampicilina,

Vancomicina, Aminoglicozide

– Standard al calitatii apei

3/15/2018

26

Identificarea streptococilor

• Testul la bila-esculina

– diferentiaza streptococii de Grup D / Enterococcus (+) de alti streptococi (-)

Identificarea streptococilor

Cresterea pe medii cu sare – diferentiaza Enterococcus (+) de streptococii de Grup D (-)

3/15/2018

27