Pertemuan ke-3

Teknik Aseptik

Kotaminanasi dapat berasal dari :1. Eksplan2. Botol Kultur3. Lingkungan kerja4. Pelaksana kegiatan

Ruang kerja

Sterilisasi lingkungan kerja

Karbol, lysol, dll

LAFC UV, Alkohol 70% , Formalin

UV ½-1 jam

Sterilisasi Alat dan AquadesScalpel, gunting, pinset, petridis, botol

kultur, erlenmeyer, kertas saring

Bungkus dengan kertas

Autoklaf, 121○C, 17.5 psi, 1 jam

Sterilisasi media

Autoklaf, 121○C, 15-17.5 psi, 20-30 menit

Sterilisasi aquadest

Autoklaf, 121○C, 15-17.5 psi, 1 jam

Beberapa jenis bahan sterilisasi eksplan beserta kisaran konsentrasi dan lama perendaman

Bahan Konsentrasi Lama perendaman

Kalsium hipoklorid 1 - 10 % 5-30 menitNatrium hipoklorid 1 – 2 % 7 – 15 menitHidrogen peroksida 3 – 10 % 5 – 15 menitGas klorin - 1 – 4 jamPerak Nitrat 1 % 5 – 30 menitMerkuri klorid 0,1 – 0,2 % 10 – 20 menitBetadine 2,5 – 10 % 5 – 10 menitFungisida 2 gram/l 20 – 30 menitAntibiotika 50 mg/l 0,5 – 1 jamAlkohol 70 % 0,5 – 1 menit

Contoh tahap-tahap sterilisasi eksplan

• 1. Fungisida/antibiotik –merkuri klorid – bilas dg aquadest steril• 2. Alkohol-sodium hipoklorid-merkuri

klorid-aquadest steril• 3. Alkohol-sodium hipoklorid-

aquadest steril

Cara menggunakan Laminar Air Flow Cabinet:

1. Nyalakan UV minim 30 menit (hindarkan sinar uv dari badan dan mata).

2. masukkan alat-alat (lampu alkohol, bunsen burner; wadah alkohol; petridis steril; kertas tissue/kapas; bahan tanam; media tanam yg sudah disterilisasi/disemprot alkohol 70%)

3. Hidupkan blower4. Nyalakan lampu alkohol5. Siap digunakan