Taula Rodona: Sífilis 2013Les proves

Juliana Esperalba EsquerraServei de Microbiologia

Hospital Universitari Vall d’Hebron

Introducció: Treponema pallidum subsp. pallidum• Ordre Spirochaetales

• Família Spirochaetaceae

• Gènere Treponema

• T. pallidum subsp. pallidum

• Morfologia helicoidal amb flagel

• > 95% homologia entre espècies (morfologia i antigenèticament)

• Gram negatius (*)

• Paràsits obligats del home, únic reservori

Diagnòstic

Clínica

• Sífilis primària / secundària amb lesions• Cribatge / Seguiment posttractament• Neurosífilis• Sífilis congènita

Tècnica diagnòstica

• Diagnòstic directe / indirecte

Mostra• Local / sistèmica

Diagnòstic DIRECTE

TINCIONS I MICROSCOPIA

CAMP FOSC

CONTRAST FASES

GRAM

FLUORESCÈNCIA

TEIXITS

CULTIU BIOLOGIA MOLECULAR

PCR

SEQÜENCIACIÓ

Diagnòstic DIRECTE

TINCIONS I MICROSCOPIA

CAMP FOSC

GRAM

FLUORESCÈNCIA

TEIXITS

1. Sense tincions Microscopia de camp fosc:• Mostres locals de lesions• < 20 minuts des de la recollida de la mostra  motilitat

(làbil: oxigen, calor, pH no fisiològic, desecació)

2. Tinció de Gram  NO (diàmetre < 1 μm)

3. Tinció fluorescent Microscopia de fluorescènciaDFA‐TP (direct fluorescent antibody for T. 

pallidum):• Mostres locals de lesions• Secades: no necessita visualització immediata• Pràcticament no s’utilitza

4. Tincions de teixitsDFAT‐TP (direct fluorescent antibody tissue for T. 

pallidum)IHC (immunohistochemistry)

• Per mostres de teixits lesionats: cervell, gastrointestinals, placenta, cordó umbilical o pell.

• Diagnòstic de fases tardanes o sífilis congènita

Diagnòstic DIRECTE

BIOLOGIA MOLECULAR

PCR

SEQÜENCIACIÓ

PCR (polymerase chain reaction):

• Tècnica diagnòstica més nova• Mostres de LCR, genitals, líquid amniòtic i sang (poca 

sensibilitat en fases avançades)• Ens permetria diferenciar espècies

HUVH:• PCR multiplex a temps real: RealCycler HSVT‐G v.2 

(control intern i control positiu)• Dianes: T. pallidum supesp. pallidum i Haemophilus

ducrey

Diagnòstic INDIRECTE

TREPONÈMIQUES

EIA (enzyme immunoassay)

TPHA (Treponema pallidum haemagglutination)

FTA‐ABS (fluorescent treponemal antibody absorption)

Immunoblots

NO TREPONÈMIQUES

RPR (rapid plasma reagin)

VDRL (venereal disease research laboratory)

Diagnòstic INDIRECTE: TREPONÈMIQUES

Antígen de T. pallidum subsp. pallidum per detectar Ac específicsDetecció d’Ac IgM: útil en el diagnòstic de sífilis congènita.

No són útils pel seguiment del tractament o per diagnòstic de reinfeccions ja que són positius durant molts anys/al llarg de la vida.

Falsos positius

Immunoassaigs

ELISA (enzyme linked immunosorbent assay)CLIA (chemiluminescence)

TPHA (Treponema pallidum haemagglutination)  Hemaglutinació

FTA‐ABS (fluorescent treponemal antibody absorption)  IFI

Immunoblots

Treponèmiques: Cribatge

Treponèmiques: TPHA i FTA‐ABS

Diagnòstic INDIRECTE: NO TREPONÈMIQUES

RPR / VDRL

• Antígen = cardiolipina + colesterol + lecitina• Detecten Ac IgG i IgM en resposta a cardiolipina o altres lípids segregats 

per les cèl∙lules infectades o pels treponemes.• Reacció immunitària: aglutinació de les partícules lipídiques

VDRL necessita lupaRPR utilitza partícules de carbó que la fan visible

• Ràpid i senzill• Tècniques quantitatives Útil pel seguiment del tractament

• Baixa sensibilitat en fase primària o terciària• Falsos positius• Efecte prozona

Diagnòstic INDIRECTE: RPR

Algoritme HUVH

Sèrum

EIA

TPHA

RPR

FTA‐ABS

LCR

FTA‐ABS

VDRL*

Sèrum per congènita

EIA

(mare)

IgM (IFI)

(nounat)

PCR

Diagnòstic INDIRECTE

Diagnòstic INDIRECTE

Sensibilitat Especificitat

Fase Primària Secundària Latència Terciària

VDRL 78 100 95 71 98

RPR 86 100 98 73 98

FTA‐ABS 84 100 100 96 97

TPHA 88 100 100 94

EIA 92 100 99 100 99

WHO

En resum

Sífilis primària

Directe: lesions

Indirecte:

Precoç: no detecció

Ac

Sífilis secundària

Directe: lesions

Indirecte:

100% sensibilitat

Sífilis latent

(< 1 any)

Indirecte:

T i NT positives

NT van disminuint

Sífilis latent o terciària

(> 1 any)

Indirecte:

T positives

NT positives o negatives

Clínica

Neurosífilis

Directe: PCR

Indirecte:

T sèrum +

FTA‐ABS

VDRL

Congènita

Directe: PCR

Control embaraç

NT falses

IgG > 6m

IgM

Per finalitzar...

• Diagnòstic serològic: dos sèrums mínim

• Gran quantitat de tècniques per un diagnòstic

• Dificultat en la interpretació dels resultats

• Reinfeccions

• Valor de la IgM en sífilis aguda (no congènita)

Gràcies per la vostra atenció