Tecnicas de Tincion Especiales as

Embed Size (px)

Citation preview

MALLORY Tcnica No.1 (Mtodo para colgena) TEJIDOS: Lengua, Piel, etc. FIJACIN: Zenker o formol al 10% TCNICA: Cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Remover los cristales de cloruro de mercurio con yodo por 5min. 3.- Lavar con agua de la llave. 4.- Tiosulfato de sodio durante 5 minutos. 5.- Lavar con agua de la llave. 6.- Sol. de fucsina cida durante 1 minuto. 7.- Transferir directamente a la sol. Azul de Anilina-NaranjaG. 1hora. 8.- Deshidratar en alcoholes de 96, absoluto y aclarar con xilol 9.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Ncleos, acidfilos (clulas alfa)............................... rojo. Colgena, basfilos (clulas beta)............................. azul. Eritrocitos, mielina........................................................ amarillo. SOLUCIONES: I.- Fucsina cida al 0.5% Fucsina cida.................................................................. 0.5% Agua destilada................................................................. 100.0 ml. II.- Sol. Azul de anilina-naranja G. Azul de anilina soluble en agua...................................... 0.5 g. Naranja G...................................................................... 2.0 g. Acido fosfotngstico....................................................... 1.0 g. Agua destilada................................................................ 100.0 ml. III.- Sol. Yodo de Lugol. Yodo.................................................................................. 1.0 g. Yoduro de potasio............................................................ 2.0 g. Agua destilada.................................................................. 100.0 ml. IV.- Sol. Tiosulfato de Sodio al 5% Tiosulfato de sodio............................................................... 5.0 g. Agua destilada..................................................................... 100.0 ml. Hematoxilina cido fosfotngstico (Mallory) Tcnica No. 2 (Mtodo para msculo, fibrina y colgena) TEJIDOS: Lengua, Piel, Corazn, etc. FIJACION: formol al 10%

TECNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Sol. Zenker durante 1 hora para mordentar. 3.- Remover los precipitados de mercurio con Sol. Yodo de Lugol 5 minutos. 4.- Lavar con agua de la llave. 5.- Sol. de Tiosulfato de Sodio 5 minutos hasta que aclare. 6.- Lavar con agua de la llave. 7.- Sol. de Hematoxilina cido fosfotngstico de 12 a 24 horas. 8.- Diferenciar con alcohol de 96%, checar microscopio. 9.- Alcohol absoluto 2 cambios, aclarar con xilol. 10.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Fibrina, fibras musculares...................................................... azul Colgena................................................................................ rojiza Ncleos................................................................................... azul SOLUCIONES: I.- Sol. Hematoxilina. ac. fosfotngstico. Hematoxilina......................................................................... 1.0 g. Acido fosfotngstico.............................................................. 20.0 g. Agua destilada....................................................................... 100.0 ml. Disolver los ingredientes slidos en porciones separadas de agua. La hematoxilina debe disolverse con calor, cuando se enfre se combinan. Agregar 0.177 g de permanganato de potasio. Filtrar cuando se use. II.- Sol. Zenker. Agua destilada......................................................................... 95.0 ml. Dicromato de potasio............................................................... 2.5 g. Disolver por calor leve. Enfriar y agregar: Cloruro de mercurio.................................................................. 5.0 g. Acido actico glacial................................................................. 5.0 ml. III.- Sol. Tiosulfato de sodio al 5% Tiosulfato de sodio.................................................................... 5.0 g. Agua destilada........................................................................... 100.0 ml. IV.- Sol. Yodo de Lugol. Yodo........................................................................................... 1.0 g. Yoduro de potasio....................................................................... 2.0 g. Agua destilada............................................................................. 100.0 ml. Paso 8.- El alcohol de 96 es para quitar el exceso de colorante.

GOMORY Tcnica No. 3 (Mtodo para mucina, fibras elsticas, colgena). TEJIDOS: Piel, Lengua, Pulmn, Arteria, etc. FIJACION: formol al 10% TECNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Varios cambios en alcohol de 96%. 3.- Sol. de Fuscina Aldehdo durante 30 min. 4.- Quitar el exceso de colorante con alcohol de 96%. 5.- Lavar con agua de la llave. 6.- Contrastar con sol. de Van Gieson o metanil amarillo. 7.- Deshidratar en alcoholes de 96%, absoluto y aclarar con xilol. 8.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Colgena.......................................................................... prpura claro. Mucina.............................................................................. prpura. Fibras elsticas................................................................. prpura. Otros elementos de tejido................................................. segn el colorante. SOLUCIONES: I.- Sol. Fuscina aldehdo Fuscina bsica................................................................. 1.0 g. Alcohol de 70%................................................................ 200.0 ml. Acido clorhdrico concentrado.......................................... 2.0 ml. II.- Sol. Van Gieson. Nota: ver tcnica # 10 III.- Sol. metanil amarillo. Nota: ver tcnica # 25 GOMORY Tcnica No. 4 (Mtodo para fibras reticulares) TEJIDOS: Hgado, Ganglio, Rin, etc. FIJACIN: formol al 10% TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Oxidar en Permanganato de Potasio durante 1 minuto. 3.- Lavar en agua de la llave. 4.- Diferenciar con Metabisulfito de Potasio durante 1 minuto. 5.- Lavar con agua de la llave.

6.- Sensibilizar en sol. Sulfato Frrico de Amonio durante 1 minuto. 7.- Lavar con agua de la llave y agua destilada. 8.- Impregnar en sol. de Plata Amoniacal durante 1 min. 9.- Baos en agua destilada. 10.- Sol. reductora de Formol durante 3 minutos. 11.- Lavar bien con agua de la llave. 12.- Diferenciar con solucin Cloruro de Oro. 13.- Baos con agua destilada. 14.- Sol. de Metabisulfito de Potasio durante 1 minuto. 15.- Fijar en Tiosulfato de Sodio durante 1 minuto. 16.- Lavar bien con agua de la llave. 17.- Deshidratar con Alcoholes de 96%, Absoluto y aclarar con Xilol. 18.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Fibras reticulares................................................................ negras. Contraste............................................................................ gris. SOLUCIONES: I.- Sol. Plata amoniacal. A 10ml. de Sol. de Nitrato de Plata al 10%, agregar 2.5ml. de hidrxido de potasio al 10%, precipitar con hidrxido de amonio al 28%, agitando hasta que aclare. Agregar 4 gotas de nitrato de plata por cada 10.0 ml. de nitrato de plata usado. II.- Permanganato de Potasio al 0.5% Permanganato de potasio.................................................... 0.5 g. Agua destilada..................................................................... 100.0 ml. III.- Sol. de Sulfato de Amonio frrico al 2% Sulfato de amonio frrico...................................................... 2.0 g. Agua destilada....................................................................... 100.0 ml. IV.- Sol. Metabisulfito de potasio al 2% Metabisulfito de potasio........................................................... 2.0 g. Agua destilada......................................................................... 100.0 ml. V.-Sol. Cloruro de Oro Nota:Ver tcnica No.46 VI.-Sol. Formol al 20% Formol 37-40%.......................................................................... 20.0 ml. Agua destilada.......................................................................... 80.0 ml. * VII.- Sol. Cloruro de Oro al 0.2% Nota: Ver tcnica No.6 VIII.- Sol. Tiosulfato de Sodio al 2% Tiosulfato de Sodio .................................................................... 2.0 gr. Agua Destilada ........................................................................ 100.0 ml.

VAN GIENSON Tcnica No. 5 (Mtodo para colgena y msculo) TEJIDOS: Lengua, Piel, Corazn, etc. FIJACIN: formol al 10% TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Teir ncleos con hematoxilina de Weigert durante 10 min. 3.- Lavar con agua de la llave. 4.- Sol. de Van Gieson de 1 a 3min. 5.- Deshidratar con alcoholes de 96%, absoluto y aclarar con xilol. 6.- Montar con resina. RESULTADOS: Colgena.................................................................................... roja. Msculo y epitelio....................................................................... amarillo. Ncleos....................................................................................... negros. SOLUCIONES: I.- Hematoxilina de Weigert Nota: ver tcnica # 7 II.- Sol. de Van Gieson. Nota: ver tcnica # 10. RETCULO DE WILDER Tcnica No. 6 (Mtodo para fibras reticulares) TEJIDOS: Hgado, Ganglio, Rin, etc. FIJACIN: formol al 10% TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Oxidar en Acido Fosfomolbdico al 10% durante 1 minuto. 3.- Lavar bien con agua de la llave. 4.- Sensibilizar con Nitrato de Uranio durante 1 minuto al 1%. 5.- Lavar bien con agua destilada durante 20seg. 6.- Sol. de Plata Amoniacal durante 1 min. 7.- Baos rpidos en alcohol de 96% (puede sustituirse por agua destilada). 8.- Sol. Reductora durante 1 min. (cambie la solucin frecuentemente). 9.- Lavar con agua destilada. 10.-Diferenciar con cloruro de oro hasta que las secciones tomen un tono ms oscuro (negro)= fibras reticulares. 11.-Lavar con agua destilada. 12.-Sol. de Tiosulfato de Sodio al 5% durante 1 min.

13.-Lavar con agua de la llave. 14.-Contrastar con sol. de Nuclear Fast Red durante 1 a 5 minutos. 15.-Deshidratar con alcohol de 96%, absoluto y aclarar con xilol. 16.-Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Fibras reticulares.................................................................................. negras. Colgena............................................................................................... rosa. Otros elementos de tejido...................................................................... rojo. SOLUCIONES: I.- Sol. de Acido Fosfomolbdico al 10%. Acido fosfomolibdico........................................................................... 10.0 g. Agua destilada.................................................................................... 100. 0 ml. II.- Sol. de Nitrato de Uranio al 1%. Nitrato de uranio................................................................................. 1.0 g. Agua destilada.................................................................................... 100.0 ml. III.- Sol. Plata Amoniacal. Preparar 24 hrs. antes (Sol. Stock) A 5.0 ml. de solucin acuosa de Nitrato de Plata al 10.2 % agregar gotas de hidrxido de amonio (amoniaco) para precipitar la solucin, agitar constantemente y continuar agregando gotas de amoniaco hasta que la solucin se aclare. Se agregan 5 ml. de hidrxido de sodio al 3.1%, disolver el precipitado que se form con gotas de amoniaco hasta que aclare. Aforar la solucin hasta 50.0 ml. con agua destilada. Guardar en refrigerador para evitar precipitado. Nota: Para que no se precipite la sol. amoniacal al ponerla en refrigeracin se puede preparar de la siguiente forma: Slo mezclando el nitrato de plata al 10.2% con el hidrxido de amonio hasta aclarar, guardar en refrigerador 24 horas, despus seguir la preparacin como sigue: Plata amoniacal (Sol. de Trabajo) Preparar al momento de usar. Tomar 5 ml de Sol. Stock de Plata Amoniacal. Agregar 5 ml de Hidrxido de sodio al 3.1% y aclarar con gotas de Hidrxido de Amonio. Aforar a 50 ml con agua destilada. IV.- Sol. Reductora. Formol neutro al 40% ................................................................0.5 ml. Nitrato de Uranio al 1%..............................................................1.5 ml. Agua destilada ..........................................................................50.0 ml. Nota: Preparar al momento y mover las laminillas dentro de la solucin. Si no toman las laminas el tono oscuro (negro), se puede empezar nuevamente la tincin del paso 2. Agitar las lminas en cada solucin que entren. V.- Sol. de Cloruro de Oro al 0.2%. Sol. cloruro de oro al 1%...................................................................... 10.0 ml. Agua destilada...................................................................................... 40.0 ml.

VI.- Tiosulfato de Sodio al 5% Tiosulfato de sodio................................................................................ 5.0 gr. Agua destilada.......................................................................................100.0ml. VII.- Sol. Nuclear Fast Red. Nota: ver tcnica # 26. A.- Rojo rpido nuclear.......................................................................... 0.1gr. B.- Sulfato de aluminio al 5%................................................................. 100ml. Disolver A en B calentndose ligeramente, enfriar, filtrar y agregar unos granos de fenol como preservativo. Nota: *Guardar todos los reactivos en refrigerador. *Lavar todo el material con agua destilada antes de usar y una vez terminada la tincin lavar el material con mezcla crmica. TRICROMICA DE MASSON Tcnica No. 7 (Mtodo para msculo, colgena, queratina) TEJIDOS: Piel, Lengua, Corazn, etc. FIJACIN: Bouin o formol al 10% TCNICA: Cortes en parafina a 5 micras PROCEDIMIENTO: 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada 2.- Mordentar en sol. de Bouin durante 1 hora 3.- Lavar bien en agua de la llave hasta que desaparezca el color amarillo 4.- Teir ncleos con Hematoxilina de Weigert durante 5 minutos 5.- Lavar bien en agua de la llave 6.- Sol. Biebrich Scarlet-Fuchsin Acida durante 2 minutos 7.- Baos con agua destilada *8.- Aclarar con sol. de cido fosfotngstico-fosfomolbdico durante 10 minutos 9.- Baos con agua destilada 10.-Sol. Azul de Anilina durante 5 minutos 11.-baos con agua destilada *12.-Aclarar con cido actico glacial al 1% durante 3 minutos 13.-Deshidratar con alcohol de 96%, alcohol absoluto, aclarar con xilol, montar con resina. RESULTADOS: Citoplasma, queratina, fibras musculares e intracelulares..........................rojo Ncleos......................................................................................................negro Colgena....................................................................................................azul SOLUCIONES: I.- Sol. Hematoxilina de Weigert Sol. A

Cristales de Hematoxilina............................................... 1.0 gr. Alcohol 96% ................................................................... 100.0 ml. Sol. B Cloruro Frrico acuoso al 29%....................................... 4 ml. Agua destilada ............................................................... 95 ml. Acido Clorhdrico conc.................................................... 1 ml. Sol. de Trabajo Partes iguales de Sol. A y Sol. B II.- Sol. de Bouin Sol. saturada acuosa de cido pcrico ........................... 75.0 ml. Formol 37-40% .............................................................. 25 ml. Acido Actico Glacial ..................................................... 5.0 ml. III.- Sol. Biebrich Scarlet-Fucsina Acida Biebrich Scarlet al 1% acuoso ...................................... 90.0 ml. Fucsina Acida al 1% acuoso ........................................ 10.0 ml. Acido Actico Glacial .................................................... 1.0 ml. IV.- Acidos Fosfomolbdico-Fosfotngstico Acido fosfotngstico ..................................................... 2.5 gr. Acido fosfomolbdico .................................................... 2.5 gr. Agua destilada ............................................................. 100.0 ml. V.-Sol. Azul de Anilina Azul de Anilina ............................................................... 2.5 gr. Acido Actico Glacial .................................................... 2.0 ml. Agua destilada .............................................................. 100.0 ml. VI.-Sol.Acido Actico Glacial al 1% Acido actico glacial .................................................... 1.0 ml. Agua destilada ............................................................. 100 ml. *8.- Retirar los residuos de la Sol.Biebrich Scarlet *12.- Retirar los residuos de la Sol. Azul de Anilina METODO DE JONES Tcnica No.8 (Membrana basal) TEJIDOS: Rin, Piel, Ganglio, etc. FIJACIN: formol al 10% TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Oxidar con Acido Perydico al 0.5% durante 15minutos.

3.- Sumergir completamente las secciones en agua destilada 5 seg. 4.- Sol. Plata Amoniacal durante 15minutos. 5.- Sumergir completamente las secciones en agua destilada 5 segundos. 6.- Solucin Reductora durante 2 minutos. 7.- Lavar con agua destilada, contrastar con Verde Claro. Lavar bien. 8.- Deshidratar con alcoholes de 96%, absoluto y aclarar con xilol. 9.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Membrana basal...................................................................................... negra. Contraste...................................................................................................verde. SOLUCIONES: I.-Sol. Acido Perydico al 0.5% Nota: ver tcnica # 22 II.- Sol. Plata Amoniacal. Nota: ver tcnica # 6 III.- Sol. Reductora. Nota: ver tcnica # 6 IV.- Sol. verde claro. Nota: ver tcnica # 46 TRICROMICA DE GALLEGO Tcnica No. 9 (Mtodo para colgena y msculo) TEJIDOS: Lengua, Corazn, Piel, etc. FIJACIN: formol al 10% TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Formol al 10% durante 10 minutos. 3.- Sol. Fuscina Actica de 1 a 5 minutos. 4.- Baos con agua destilada. 5.- Sol. Virofijadora de 1 a 5 minutos. 6.- Baos con agua destilada. 7.- Contastar con Picrocarmn de Indigo durante 10 seg. aprox. 8.- Baos con agua destilada. 9.- Deshidratar con alcoholes de 96%, absoluto y aclarar con xilol. 10.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Colgena...................................................................................... azul. Fibras musculares........................................................................ verde amarillo Ncleos......................................................................................... rojos. Epitelio.......................................................................................... rojo.

SOLUCIONES: I.- Sol. de Ziehl-Neelsen. Nota: ver tcnica # 42 II.- Sol. Fuscina Actica. Formol al 10%............................................................................... 100.0 ml. Sol. de Ziehl-Neelsen.................................................................... 0.5-1.-0 ml. Acido actico...................................................................................... 1.0 ml. III.- Sol. Virofijadora Formol al 10%................................................................................ 100.0 ml. Acido acetico glacial....................................................................... 1.0 ml. IV.- Sol. Picrocarmn de Indigo. Sol. acuosa de carmn de indigo al 1%.......................................... 30.0 ml. Sol. acuosa de cido pcrico sol. saturada..................................... 60.0 m VERHOEFF Tcnica No. 10 (Mtodo para fibras elsticas). TEJIDOS: Piel, Pulmn, Arteria, etc. FIJACIN: formol al 10% TCNICA: Cortes en parafina a 5 micras PROCEDIMIENTO: 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Sol. de Verhoeff durante 15 minutos. 3.- Lavar con agua de la llave. 4.- Diferenciar con Cloruro Frrico al 2% hasta que las fibras estn negras. 5.- Lavar con agua de la llave. 6.- Contrastar con sol. de Van Gieson durante 3 minutos. 7.- Deshidratar rpidamente en alcohol de 96%, absoluto y aclarar en xilol. 8.- Montar en resina sinttica. RESULTADOS: Fibras elsticas..................................................................................... negras. Colgena............................................................................................... rojas. Otros elementos de tejido......................................................................amarillo. SOLUCIONES: I.- Sol. de Verhoeff. Hematoxilina.......................................................................................... 1.0 gr. Alcohol absoluto..................................................................................... 22.0ml. *Filtrar y agregar Cloruro frrico al 10%.............................................................................. 8.0 ml. Sol. yodo de lugol.....................................................................................8.0 ml. Nota: Agitar la solucin antes de usar (para obtener una mezcla homognea)

II.- Sol. yodo de Lugol. Yodo........................................................................................................ 1.0 gr. Yoduro de potasio................................................................................... 2.0 gr. Agua destilada....................................................................................... 100.0ml III.- Sol. de Van Gieson. Fuscina cida al 1%................................................................................ 5.0ml. Sol. saturada acuosa de ac. pcrico.........................................................95.0ml. Nota: En el paso #6 no dejar en la sol. de Van Gieson por ms de 1 min. El compuesto de cido pcrico decolora las fibras elsticas. REYES MOTA Tcnica No. 11 (Mtodo para fibras elsticas) TEJIDOS: Piel, Pulmn, Arteria, etc. FIJACIN: formol al 10% TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Sol. Cloruro de Oro durante toda la noche a temperatura ambiente. 3.- Lavar con agua destilada. 4.- Hiposulfito de sodio al 5% durante 5 minutos. 5.- Lavar con agua de la llave. 6.- Baos en agua destilada. 7.- Sol. del trabajo de Fuscina de Ziehl Neelsen durante 1 min. 8.- Formol al 10% un bao. 9.- Lavar con agua destilada. 10.- Sol. Picrocarmn deIndigo durante 5 min. aprox. 11.- Lavar con agua de la llave. 12.- Deshidratar con alcoholes de 96%, absoluto y aclarar con xilol. 13.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Fibras elsticas............................................................................. rojas. Contraste.......................................................................................verde amarillo SOLUCIONES: I.- Sol. de Ziehl Neelsen. Fuscina bsica............................................................................. 1.0 g. Alcohol absoluto........................................................................... 10.0ml. Agua destilada.............................................................................. 100.0ml. Cristales de fenol diluidos............................................................. 5.0 ml. II.- Sol. de trabajo de Zielh Neelsen Sol. de Ziehl-Neelsen................................................................... 5.0 ml. Agua destilada.............................................................................. 100.0ml.

Acido actico glacial..................................................................... 1.0 ml. III.- Sol. Picrocarmn de Indigo. Sol. saturada de cido pcrico....................................................... 100.0ml. Carmn de Indigo........................................................................... 0.25 gr. Agua destilada.............................................................................. 15.0ml. IV.- Sol. Hiposulfito de Sodio al 5% Hiposulfito de sodio......................................................................... 5.0 gr. Agua destilada................................................................................. 100.0ml. V.- Sol. de Cloruro de Oro Nota: ver tcnica # 46. FONTANA-MASSON Tcnica No. 12 (Mtodo para melanina y grnulos argentafinos) TEJIDOS: Piel, Melanoma. FIJACIN: formol al 10% TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: use laminilla de control. 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Sol. de Nitrato de Plata a 56C hasta que las secciones tomen un color caf plido. 3.- Lavar con agua destilada caliente, enfriar y continuar con la tincin. 4.- Diferenciar con Cloruro de Oro hasta que las secciones tomen un color gris. 5.- Baos en agua destilada. 6.- Sol. de Tiosulfato de sodio al 5% durante 5 minutos. 7.- Lavar con agua destilada. 8.- Contrastar con Nuclear Fast Red durante 1 a 5 minutos. 9.- Lavar con agua de la llave. 10.- Deshidratar en alcoholes de 96%, absoluto y aclarar con xilol. 11.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Pigmento de melanina, grnulos argerfilos............................ negros. Ncleos....................................................................................... rosa. SOLUCIONES: I.- Sol. de Nitrato de Plata. Disolver 10.0 g. de Nitrato de plata en 100.0 ml. de agua destilada. A 95.0ml. de esta solucin agregar hidrxido de amonio poco a poco agitando constantemente hasta que aclare. Se agregan los otros 5.0 ml. de Nitrato de Plata, aclarar con hidrxido de amonio, dejar que se asiente sin agitar. Dejar madurar durante la noche. Cuando ya esta lista para usarse se diluyen 12.5 ml. en 37.5 ml. de agua destilada. II. - Sol. Cloruro de oro. Nota: ver tcnica # 46.

III. - Sol. Tiosulfato de sodio al 5%. Nota: ver tcnica # 46. IV.- Sol. Nuclear fast red. Nota: ver tcnica # 46. Nota: La plata al 10% se debe preparar con 24 hrs. de anticipacin, guardar en refrigeracin para evitar el precipitado. Todos los reactivos se guardan en refrigeracin. *Enjuagar las pinzas en agua destilada antes de meterlas a la solucin de plata. GOMORY Tcnica No. 13 (Mtodo para grnulos citoplsmicos) TEJIDOS: Pncreas, Hgado con hepatitis B. FIJACIN: Bouin o formol al 10%. TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Oxidar en sol. fresca de Permanganato de Potasio-ac./sulfrico durante 5 minutos. 3.- Decolorar con sol. de Acido Oxlico al 3% durante 1 minuto. 4.- Lavar con agua de la llave. 5.- Baos en alcohol de 70%. 6.- Teir con sol. de Fuscina Aldehdo durante 2 a 5 minutos. 7.- Baos en alcohol de 70%. 8.- Contrastar si desea con Hematoxilina y Orange G. de 1 a 5 minutos. 9.- Deshidratar con alcoholes de 96%, absoluto y aclarar con xilol. 10.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Grnulos de clulas pancreticas B.............................................prpura. Grnulos de pituitaria................................................................... prpura. Clulas A.......................................................................................naranja. SOLUCIONES: I.- Sol. Aldehdo-fuscina. Fuscina bsica............................................................................. 0.5 gr. Alcohol de 70%............................................................................ 100.0 ml. Acido clorhdrico concentrado...................................................... 1.0 ml. Paraldehdo................................................................................... 1.0 ml. Nota: guardar a temperatura ambiente durante 24 a 48 hrs, despus ya se puede usar. Guardar en el refrigerador. II.- Sol. Orange G Nota: ver tcnica # 15 III.- Sol. Permanganato de potasio-cido sulfrico. Permanganato de potasio.............................................................. 0.25 g. Acido sulfrico................................................................................ 0.25ml. Agua destilada................................................................................ 100.0ml.

IV.- Acido Oxlico al 3% Acido oxlico....................................................................................... 3.0 g. Agua destilada..................................................................................... 100.0 ml. WILSON-EZRIN Tcnica No. 14 (Mtodo para grnulos de la pituitaria) TEJIDOS: Hipfisis FIJACIN: formol al 10%. TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Oxidar en Acido Perydico durante 5 minutos. 3.- Baos en agua destilada. 4.- Reactivo de Schiff durante 15 minutos. 5.- Sol. de Acido sulfurosa tres cambios de 3 minutos cada uno. 6.- Lavar con agua de la llave. 7.- Sol. de Orange G. durante 1 min. 8.- Sol. Acido fosfotngstico durante 30 seg. 9.- Baos en agua de la llave. 10.- Sol. Azul de Metyl durante 1 minuto. 11.- Lavar con agua de la llave. 12.- Deshidratar con alcoholes de 96%,absoluto y aclarar con xilol. 13.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Grnulos beta.................................................................................... rojos. Grnulos gama.................................................................................. prpura. Acidfilos........................................................................................... amarillos SOLUCIONES: I.- Sol. Acido Perydico al 1% Acido perydico.................................................................................. 1.0 g. Agua destilada.................................................................................... 100.0 g. II.-Sol. reactivo de Schiff. Nota: ver tcnica # 22 III. Sol. Orange G. al 1% Orange G............................................................................................. 1.0 g. Agua destilada..................................................................................... 100.0 ml. IV.- Sol. Acido Fosfotngstico al 5%. Acido fosfotngstico............................................................................. 5.0 g. Agua destilada......................................................................................100.0 ml. V.- Sol. Azul de Metyl al 1%

Azul de metyl........................................................................................ 1.0 gr. Agua destilada.......................................................................................100.0 ml VI.- Sol. acido- sulfurosa. Metabisulfito de sodio acuoso al 10%............................................... 60.0 ml. Acido clorhdrico 1N...........................................................................50.0 ml Agua destilada.................................................................................. 1000.0ml. P.A.S. ORANGE G.Tcnica No. 15 (Mtodo para clulas basfilas y acidfilas) TEJIDOS: Hipfisis FIJACIN: formol al 10% TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Oxidar en Acido Perydico al 0.5 % durante 5 min. 3.- Lavar con agua de la llave. 4.- Reactivo de Schiff durante 15 minutos. 5.- Lavar con agua de la llave. 6.- Teir los ncleos si es requerido con Hematoxilina de Harris, decolorar con alcohol cido, lavar con agua de la llave, virar en agua amoniacal, despus se lava con agua de la llave. 7.- Teir con Orange G/cido fosfotngstico de 5 a 10 segs. 8.- Baos rpidos en agua destilada. 9.- Deshidratar en alcoholes de 96%, absoluto y aclarar con Xilol. 10.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Clulas basfilas.............................................................................. magenta. Clulas acidfilas............................................................................... naranja. Ncleos.............................................................................................. azules. SOLUCIONES: I.- Sol. de Schiff Nota: ver tcnica # 22 II.- Sol. Orange G- Ac. Fosfotngstico Orange G............................................................................................ 2.0 g. Acido fosfotngstico............................................................................ 5.0 g. Agua destilada..................................................................................... 100.0ml. III.- Sol. Acido Perydico al 0.5% Acido perydico................................................................................... 0.5 gr. Agua destilada..................................................................................... 100.0 ml.

AZUL DE TOLUIDINA Tcnica No. 16 (Mtodo para clulas cebadas) TEJIDOS: Piel, Cordn umbilical y otros. FIJACIN: formol al 10%. TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Sol. Azul de toluidina durante 30 min. a 37C. 3.- Bao rpido de agua de la llave. 4.- Isopropanol durante 1 minuto aproximadamente. 5.- Aclarar en Xilol y montar. RESULTADOS: Amiloide y componentes ortocromticos.............................................. azul. Nota: al observarse en el microscopio de luz con un filtro polarizado el amiloide se ve rojo plido. SOLUCIONES: I.- Sol. Azul de Toluidina al 1%. Azul de toluidina................................................................................... 1.0gr. Alcohol isopropano (isopropanol)......................................................... 100.0 ml. GRIMELIUS Tcnica No. 16 (Mtodo para grnulos argirfilos) FIJACIN: formol al 10%. TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: use laminilla de control. 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Impregnar con sol. de Plata A durante 30 min. a 100C, tiempo exacto. Nota al reverso *Darle de 3 a 5 horas en horno a 60C 3.- Bao rpido de agua destilada, calentada. 4.- Revelar con sol. B durante 1 minuto. (precalentada a 60c) tiempo exacto. 5.- Lavar muy bien con agua destilada calentada por 1min. 6.- Repetir los pasos del No. 2 al No. 4 y checar al microscopio. 7.- Lavar con agua destilada. 8.- Contrastar con Nuclear Fast Red durante varios segundos. 9.- Lavar con agua de la llave. 10.- Deshidratar en alcoholes de 96%, absoluto y aclarar en xilol. 11.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Grnulos argirfilos de clulas endocrinas....................................... negros. Grnulos argirfilos de tumores carcinoides..................................... negros. Ncleos............................................................................................. caf rojizo.

SOLUCIONES: I.- Sol. Impregnadora A Nitrato de plata al 1%.......................................................................... 2.0 ml. Buffer de Acetatos con pH 5.6............................................................. 5.0 ml. Agua destilada..................................................................................... 43.0 ml. II.- Sol. Reveladora B Sulfito de sodio........................................................................5.0 g 2.5 gr. Hidroquinona...........................................................................1.0 g 0.5 gr. Agua destilada.........................................................................100.0 ml 50 ml. III.- Sol. Buffer de acetatos 0.2 M pH 5.6 Solucin salina: (acetato de sodio con pm. 136).................................... 2.7 gr. Agua destilada.....................................................................................100.0 ml. Solucin cida: (cido actico con pm 60)............................................. 1.2 ml. Agua destilada..................................................................................... 100.0 ml. Nota: de la solucin salina poner 90.0 ml. aproximadamente. de la solucin cida poner 10.0 ml. aproximadamente. IV.- Sol. Nuclear Fast Red. Nota:Ver tcnica No.26 Nota: En los pasos 2 y 6 hacer los cambios evitando que escurran los lquidos, as como tambin evitar manchar la lmina con el precipitado de los dedos, se recomienda usar pinzas, repetir hasta que tome color caf rojizo. Los pasos 2-4 usar 30, 30 y 10. Nota: Manejar la tincin cuando los vasos de koplic ya estn calientes (1 hr.), para poder realizar la tcnica fuera del horno. Estas soluciones se deben preparar a la hora de utilizarse. Calentar junto con las lminas. Nota: Lavar todo el material con agua destilada, antes de empezar a trabajar. Guardar todos los reactivos en el refrigerador. ROJO OLEOSO Tcnica No. 17 (Mtodo para lpidos) Grasas TEJIDOS: Mama, Hgado, Rin con grasa y otros tejidos ricos en grasa. FIJACIN: formol al 10 %. TCNICA: cortes en fresco o fijados en formol en criostato. PROCEDIMIENTO: 1.- Montar los cortes del criostato en laminillas limpias.

2.- Fijar los cortes en formol al 10% durante 10 segundos. (No es necesario si ya estn fijados). 3.- Deshidratar en dos cambios de Propilenglicol durante 5 minutos. 4.- Teir en solucin de Rojo Oleoso O durante 7 minutos a 60c. 5.- Hidratar con Propilenglicol al 85% agitando durante 3 minutos. 6.- Lavar con agua de la llave. 7.- Teir ncleos con Hematoxilina de Harris durante 1 a 7 minutos. 8.- Lavar con agua de la llave. 9.- Montar con gelatina glicerinada. RESULTADOS: Lpidos.................................................................................................. rojo. Ncleos................................................................................................. azules. SOLUCIONES: I.- Sol. Rojo Oleoso O Disolver 0.7 gr. de Rojo Oleoso O en 100.0 ml de propilenglicol en un hot plate a 100-110c con agitacin constante durante 10 minutos. Filtrar caliente con papel filtro watman #2, dejar enfriar a temperatura ambiente. La solucin puede durar semanas. II.- Propilenglicol al 85% Propilenglicol.......................................................................................... 85.0ml. Agua destilada........................................................................................ 15.0ml. Notas: En el paso 7, pasar las lminas por agua amoniacal para darles brillantez, sin pasar por Alcohol cido. Previamente enjuagadas en agua de la llave. En el paso 8 dejar 3-5 minutos para que tome el contraste. SUDAN NEGRO Tcnica No. 18 (Mtodo para lpidos) TEJIDOS: Mama, Hgado, Rin con grasa. FIJACIN: formol al 10 %. TCNICA: cortes en criostato PROCEDIMIENTO: 1.- Cortar los tejidos en criostato, pasarlos a agua destilada. 2.- Propilenglicol absoluto durante 10 minutos. 3.- Sol. de Sudan Negro durante30 minutos. 4.- Diferenciar con Propilenglicol al 85% durante 3 minutos agitando constantemente las laminillas. 5.- Baos en agua destilada. 6.- Contrastar con Nuclear Fast Red durante 5 minutos. 7.- Lavar bien con agua destilada. 8.- Montar con gelatina glicerinada. RESULTADOS: Lpidos..............................................................................................azul oscuro. Ncleos.............................................................................................rojo.

SOLUCIONES: I.- Sol. Sudan Negro. Disolver 0.7 gr. de Sudan Negro en 100.0ml. de Propilenglicol por calentamiento a 100c. Agitando en hot plate durante 5 minutos. Filtrar caliente para remover el exceso de reactivo. Despus de enfriarse se vuelve a filtrar. II.- Sol. Propilenglicol al 85%. Propilenglicol...................................................................................... 85.0 ml. Agua destilada....................................................................................15.0 ml. III.- Sol. Nuclear Fast Red. Nota: ver tcnica # 26 ROJO CONGO Tcnica No. 19 (Mtodo para amiloide) TEJIDOS: Hgado, Bazo, Rin con amiloide. FIJACIN: formol al 10% TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: use laminilla de control. 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Sol. de Hematoxilina de Weigert durante 3 minutos. 3.- Sumergir las laminillas en sol. alcohlica-salina durante 20 minutos. 4.- Teir en sol. de Rojo Congo durante 20 minutos. 5.- Deshidratar en alcohol 96%, absoluto y aclarar en xilol. 6.- Montar en resina sinttica. RESULTADOS: Amiloide, tejido elstico, grnulos eosinfilos...........................................rojo. Ncleo.......................................................................................................azul. SOLUCIONES: I.- Sol. Alcoholica-salina Cloruro de sodio.................................................................... 2.0 gr. Alcohol al 80%....................................................................... 100.0 ml. Hidrxido de sodio al 1%....................................................... 1.0 ml. II.- Sol. Rojo Congo Rojo congo............................................................................. 2.0 gr. Sol. Alcohlica-salina............................................................. 100.0 ml. III.- Sol. Hematoxilina de Weigert. Nota: ver tcnica # 7 Nota: En el paso No.2 se puede usar Hematoxilina de Harris, estandarizando el tiempo de 1 a 3 minutos, posteriormente pasar por alcohol cido,agua amoniacal y continuar la tincin en el paso 3.

CRISTAL VIOLETA Tcnica No. 20 (Mtodo para amiloide) TEJIDOS: Hgado, Bazo, rin con amiloide FIJACIN: formol al 10% TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: use laminillas de control. 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Teir con Solucin de Cristal Violeta (de trabajo) durante 5 horas. 3.- Lavar muy bien con agua de la llave. 4.- Montar con gelatina glicerinada. RESULTADOS: Amiloide.................................................................................... violeta prpura. Otros elementos de tejido......................................................... azul. SOLUCIONES: I.- Sol. (stock) de Cristal Violeta. Cristal violeta a saturar.............................................................aprox. 14.0 gr. Alcohol de 96%.................................................................................. 100.0 ml. II.- Sol. (de trabajo) Cristal Violeta. Sol. stock de cristal violeta......................................................................10.0 ml. Agua destilada........................................................................................300.0ml Acido clorhdrico concentrado.................................................................1.0 ml. III.- Gelatina glicerinada. Gelatina...................................................................................................10.0 gr. Agua destilada.........................................................................................60.0 ml Calentar hasta que la gelatina se disuelva: agregar Glicerina...................................................................................................70.0 ml Fenol.........................................................................................................1.0 ml. CARMIN DE BEST Tcnica No. 21 (Mtodo para glucgeno) TEJIDOS: Hgado, Msculo FIJACIN: Carnoy o alcohol - formol. TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Teir ncleos con Hematoxilina de Mayer 15 minutos. 3.- Lavar con agua de la llave. 4.- Sol. de Carmn (trabajo) durante 30 minutos. 5.- Sol. diferenciadora baos rpidos. 6.- Bao rpido en alcohol de 80%.

7.- Deshidratar en alcoholes de 96%, absoluto y aclarar con xilol. 8.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Glucgeno....................................................................................rosa o rojo. Ncleos........................................................................................azules. SOLUCIONES: I.- Sol. Stock de Carmn. Carmn.........................................................................................2.0 gr. Carbonato de potasio...................................................................1.0 gr. Cloruro de potasio........................................................................5.0 gr. Agua destilada..............................................................................60.0 ml. Calentar ligeramente en un disco de reloj. Cuando se enfre se le agregan 20.0 ml de hidrxido de amonio. Guardar en el refrigerador. II.- Sol. de trabajo de Carmn. Sol. Stock de Carmn.....................................................................10.0 ml. Hidrxido de amonio......................................................................15.0 ml. Alcohol metlico..............................................................................25.0 ml. III.- Sol. Diferenciadora. Alcohol etlico absoluto..................................................................20.0 ml. Alcohol metlico..............................................................................10.0 ml. Agua destilada................................................................................25.0 ml. IV.- Sol. de Hematoxilina de Mayer. Cristales de hematoxilina................................................................1.0 gr. Agua destilada.................................................................................1000.0ml. Yodato de sodio................................................................................ 0.2 gr. Sulfato de aluminio y potasio........................................................... 50.0 gr. Acido ctrico...................................................................................... 1.0 gr. Cloral hidratado..................................................................................50.0 ml. Disolver el sulfato de aluminio y potasio en agua, calentndola ligeramente. Agregar la Hematoxilina a esta solucin. Despus se agregan los dems reactivos, agitndose hasta que se disuelvan bien. El color final de la solucin es rojo violeta. Esta solucin dura meses. McMANUS (P.A.S.)Tcnica No. 22 (Mtodo para mucina, hongos, amibas, etc.) TEJIDOS: Intestino, Rin, Hgado. FIJACIN: formol al 10%. TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Oxidar en sol. de Acido Perydico durante 15 minutos.

3.- Baos en agua destilada. 4.- Reactivo de Schiff durante 15 minutos. 5.- Lavar bien en agua de la llave por 10 minutos. 6.- Teir ncleos con Hematoxilina de Harris durante 1 minuto. 7.- Lavar bien con agua de la llave. 8.- Diferenciar con Alcohol cido, uno o dos baos rpidos. 9.- Lavar con agua de la llave. 10.- Virar a color azul con Agua amoniacal , 3 baos rpidos. 11.- Lavar con agua de la llave. 12.- Deshidratar con alcohol de 96%, absoluto y aclarar con xilol. 13.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Glucgeno, mucina, hongos, amibas, mucopolisacridos.................magenta. Ncleos...............................................................................................azules. SOLUCIONES: I.- Reactivo de Schiff Disolver 1 gr. de Fuscina Bsica en 200 ml. de agua a punto de ebullicin, enfriar, filtrar y agregar 1 gr. Metabisulfito de sodio, agitar constantemente; se le agregan 20.0 ml. de Acido Clorhdrico 1N, agtese vigorosamente hasta que aclare. Decolore completamente con 1 gr. de carbn activado y fltrese. II.- Sol. de Acido Perydico al 0.5%. Acido perydico...................................................................................0.5 gr. Agua destilada.....................................................................................100.0ml. III.- Sol. Acido Clorhdrico Normal. Agua destilada.....................................................................................91.6ml. Acido Clorhdrico concentrado..............................................................8.3 ml. Nota: Guardar todos los reactivos en el refrigerador. MUCICARMIN DE MAYER. Tcnica No. 23 (Mtodo para mucina, hongos). TEJIDOS: Intestino, Estmago FIJACIN: formol al 10%. TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Sol. de Trabajo de Hematoxilina de Weigert durante 7 minutos. 3.- Lavar en agua de la llave. 4.- Sol. diluida de Mucicarmn durante 60 minutos. 5.- Lavar rpidamente en agua destilada. 6.- Sol. Metanil Amarillo durante 1 minuto. 7.- Lavar rpidamente en agua destilada. 8.- Deshidratar en alcohol de 96%, absoluto y aclarar con xilol.

RESULTADOS: Mucina, criptococos.....................................................................de rosa a rojo. Ncleos........................................................................................negros. Otros elementos de tejido............................................................amarillo. SOLUCIONES: I.- Sol. Hematoxilina de Weigert. Nota: ver tcnica # 7. II.- Sol. de Mucicarmn. Carmn............................................................................................1.0 gr. Cloruro de aluminio anhydro...........................................................0.5 gr. Agua destilada.................................................................................2.0 ml. Mezclar lo anterior en un pequeo disco de reloj y calentarlo en una parrilla de calor durante 2 minutos. El liquido toma un color oscuro y una viscosidad como el jarabe. Diluir con 100.0 ml. de alcohol al 50%. Dejar madurar durante 24 hrs, filtrar y diluir una parte de solucin de mucicarmn con cuatro partes de agua de la llave. Usarse. III.- Sol. Metanil Amarillo al 0.25%. Metanil amarillo...............................................................................0.25%. Agua destilada................................................................................100.0 ml. Acido actico glacial.......................................................................0.25 ml. AZUL ALCIANO Tcnica No. 24. (Mtodo para mucosustancias cidas) TEJIDOS: Intestino, Estmago FIJACIN: formol al 10%. TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: 1.- Deshidratar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Mordentar en Solucin de Acido Actico al 3% durante 3 minutos. 3.- Sol. Azul Alciano durante 30 minutos. 4.- Lavar con agua de la llave. 5.- Contrastar con Sol. Nuclear Fast Red durante 3 a 5 minutos. 6.- Lavar con agua de la llave. 7.- Deshidratar con alcohol de 96%, absoluto y aclarar con xilol. 8.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Mucopolisacridos sulfatados acidos, ac. hialurnico........................azul. Ncleos...............................................................................................rojo. Otros elementos de tejido...................................................................rosa.

SOLUCIONES: I.- Sol. Acido Actico glacial al 3%. Acido actico glacial.........................................................................3.0 ml. Agua destilada..................................................................................97.0ml. II.- Sol. Azul Alciano al 1%. Azul alciano......................................................................................1.0 gr. Acido actico glacial al 3%...............................................................100.0 ml. Ajustar el pH. a 2.5. filtrar y agregar unos granos de fenol. III.- Sol. Nuclear Fast Red Nota: Ver tcnica # 26. FUSCINA ALDEHIDO Tcnica No. 25 (Mtodo para grnulos citoplasmticos) . TEJIDOS: Intestino, Estmago FIJACIN: Solucin de Bouin o formol al 10%. TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: use laminilla de control. 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Oxidar en Sol. fresca de Permanganato de Potasio-Acido sulfrico por 5 minutos. 3.- Decolorar con Sol. Acido Oxlico durante 1 minuto. 4.- Lavar con agua de la llave. 5.- Baos en alcohol de 70%. 6.- Teir con Sol. de Fuscina Aldehdo de 2 a 5 minutos. 7.- Baos en alcohol de 70%. 8.- Lavar con agua de la llave. 9.- Sol. de Contraste durante 5 minutos. 10.- Lavar rpidamente con agua destilada. 11.- Deshidratar con alcoholes de 96%, absoluto y aclarar con xilol. 12.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Grnulos y clulas B............................................................violeta-prpura. Grnulos y clulas A............................................................amarillo. Grnulos y clulas D............................................................verde. Colgena..............................................................................verde. Mucopolisacridos................................................................violeta-prpura. SOLUCIONES: I.-Sol. Fuscina-aldehdo Fuscina aldehdo...................................................................1.0 gr. Paraldehdo...........................................................................2.0 ml. Acido clorhdrico concentrado...............................................1.0 ml. Alcohol de 70%......................................................................100.0 ml.

Disolver 1.0 gr. de Fuscina Bsica en 100.0 ml. de alcohol de 70%, agregar 1.0 ml. de cido clorhdrico y 2.0 ml. de paraldehdo, guardar a temperatura ambiente durante 24 a 48 horas. La sol. toma color violeta. Filtrar y guardar en el refrigerador a 4C. II.- Sol. Permanganato de Potasio-ac. sulfrico Permanganato de potasio......................................................0.25 gr. Acido sulfrico........................................................................0.25 ml. Agua destilada........................................................................100.0 ml. III.- Sol. de Contraste. Verde claro................................................................................0.2 gr. Naranja G..................................................................................1.0 gr. Acido fosfotngstico..................................................................0.5 gr. Acido actico glacial..................................................................1.0 ml. Agua destilada...........................................................................100.0 ml. Nota: Se disuelven los ingredientes slidos en 50 ml. de agua y los cidos en los otros 50.0 ml. HIERRO COLOIDAL Tcnica No. 26. (Mtodo para mucopolisacridos neutros). TEJIDOS: Intestino, Estmago FIJACIN: formol al 10%. TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Baos en Acido Actico glacial al 12% durante 3 minutos. 3.- Sol. de Trabajo de Hierro Coloidal durante 1 hora. 4.- Baos en Acido Actico glacial al 12% cuatro cambios de 3 minutos c/u. 5.- Sol. de Acido Clorhdrico-Ferrocianuro de Potasio durante 10 minutos. 6.- Lavar con agua de la llave. 7.- Sol. de Nuclear Fast Red durante 1.5 minutos y checar el color. 8.- Lavar con agua de la llave. 9.- Deshidratar con alcohol de 96%, absoluto y aclarar con xilol. 10.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Mucopolisacridos neutros, mucina...........................................azul turquesa. Ncleo........................................................................................rojo. Otros elementos de tejido..........................................................rosa. SOLUCIONES: I.- Cloruro Frrico al 29%. Cloruro Frrico.............................................................................29.0 gr. Agua destilada............................................................................100.0 ml.

II.- Sol. Hierro Coloidal. A 250.0 ml. de agua destilada a punto de ebullicin agregar 4.4 ml. de sol. Cloruro Frrico al 29% y se enfra para usar. III.- Sol. Hierro coloidal ( trabajo). Sol. Hierro coloidal (stock).............................................................20.0 ml. Agua destilada...............................................................................15 ml. Acido actico glacial...................................................................... 5.0 ml. Mezclar justo antes de usar. IV.- Sol. Acido actico al 12%. Acido actico glacial......................................................................12.0 ml. Agua destilada............................................................................... 88.0 ml. V.- Sol. Ferrocianuro de Potasio al 5%. Ferrocianuro de potasio....................................................................5.0 gr. Agua destilada..................................................................................100.0 ml. VI.- Sol. Acido Clorhdrico al 5%. Acido clorhdrico...............................................................................5.0 ml. Agua destilada..................................................................................95.0 ml. VII.- Sol. ac. clorhdrico-ferrocianuro de potasio. Ferrocianuro de potasio al 5%..........................................................20.0 ml. Acido clorhdrico al 5%......................................................................20.0 ml. VIII.- Sol. Nuclear Fast Red. Disolver 0.1 gr. de Nuclear Fast Red en 100.0 ml de Sulfato de Aluminio al 5% calentndose ligeramente. Enfriar, filtrar y agregar unos gramos de fenol como preservativo. Nota: en el paso # 5 el tejido debe tomar un color azul verdoso. P.A.S-AZUL ALCIANO Tcnica No. 27 (Mtodo para mucosustancias cidas y neutras) TEJIDOS: Intestino, Estmago FIJACIN: formol al 10%. TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Sol. Azul Alciano (ph 2.5 o 1.0) durante 30 minutos. 3.- Lavar muy bien con agua de la llave. 4.- Oxidar en Acido Perydico durante 10 minutos. 5.- Lavar muy bien con agua de la llave. 6.- Sol. Reactivo de Schiff durante 10 minutos. 7.- Sol. de Metabisulfito de Sodio durante 6 minutos. 8.- Lavar muy bien con agua de la llave.

9.- Deshidratar con alcoholes de 96%, absoluto y aclarar con xilol. 10.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Mucosustancias cidas....................................................................azules. Mucosustancias neutras...................................................................magenta. SOLUCIONES: I.- Sol. Acido Perydico al 1% Nota: ver tcnica # 14 II.- Sol. Reactivo de Schiff. Nota: ver tcnica # 22 III.- Sol. Azul Alciano pH 2.5 Nota: ver tcnica # IV.Sol. Metabisulfito de sodio al 0.5 g. Metabisulfito de sodio...........................................................................0.5 gr. Agua destilada......................................................................................100.0 ml. MANUS (P.A.S.) Tcnica No. 28 (Mtodo para diferenciar glucgeno con diastasa) TEJIDOS: Hgado, Msculo FIJACIN: formol al 10%. TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: use laminilla de control. 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Colocar saliva sobre el tejido en la laminilla durante 10 minutos. 3.- Lavar bien en agua de la llave, despus con agua destilada. 4.- Sol. Schiff durante 15 minutos. 5.- Lavar bien con agua de la llave. 6.- Teir ncleos con Hematoxilina de Harris durante 1 minuto. 7.- Lavar con agua de la llave. 8.- Diferenciar con Alcohol cido (baos). 9.- Lavar con agua de la llave. 10.- Virar con agua amoniacal (baos). 11.- Lavar con agua de la llave. 12.- Deshidratar con alcoholes de 96%, absoluto y aclarar con xilol. 13.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Glucgeno....................................................................eliminado por la diastasa Ncleos.....................................................................................................azules. SOLUCIONES: Nota: todas las soluciones estn anotadas en la tcnica # 22.

HALL Tcnica No. 29 (Mtodo para la bilis) TEJIDOS: Hgado, Vescula FIJACIN: formol al 10%. TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Sol. reactivo de Fouchet durante 5 minutos. 3.- Lavar con agua de la llave y agua destilada. 4.- Sol. Van Gieson durante 5 minutos. 5.- Deshidratar con alcoholes de 96%, absoluto y aclara con xilol. 6.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Bilirrubina (bilis)...........................................................................verde. Colgena.......................................................................................rojo. Msculo.........................................................................................amarillo. SOLUCIONES: I.- Sol. Reactivo de Fouchet Acido tricloroactico.......................................................................25.0 gr. Agua destilada................................................................................100.0 ml. Mezclar y agregar: Cloruro Frrico al 10%......................................................................10.0 ml. II.- Sol. Cloruro Frrico al 10% Cloruro Frrico..................................................................................10.0 gr. Agua destilada.................................................................................100.0ml. III.- Sol. Van Gieson. Nota: ver tcnica # 5. VON KOSSA Tcnica No. 30 (Mtodo para calcio) TEJIDOS: Cualquier tejido calcificado FIJACIN: formol-alcohol o formol al 10%. TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: use laminilla de control. 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Sol. de Nitrato de Plata expuesta a luz de foco de 100 watts durante 1 hora. 3.- Lavar con agua destilada. 4.- Sol. de Tiosulfato de Sodio durante 2 minutos. 5.- Contrastar con Sol. Nuclear Fast Red de 2 a 5 minutos. 6.- Lavar con agua de la llave.

7.- Deshidratar con alcoholes de 96%, absoluto y aclarar con xilol. 8.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Sales de calcio...............................................................................negros. Ncleos...........................................................................................rojos. Citoplasma......................................................................................rosa-plido. SOLUCIONES: I.- Sol. de Nitrato de Plata al 5% Nitrato de plata.................................................................................5.0 gr. Agua destilada..................................................................................100.0ml. II.- Sol. Tiosulfato de Sodio al 5%. Tiosulfato de sodio.............................................................................5.0 gr. Agua destilada....................................................................................100.0 ml. III.- Sol. Nuclear Fast Red. Nota: ver tcnica # 26. UZMAN Tcnica No. 31 (Mtodo para cobre) TEJIDOS: Rin, Hgado con cobre FIJACIN: formol al 10%. TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: 1.- Desparafinar con Xilol, dos cambios. 2.- Partes iguales de Xilol y Alcohol Absoluto dos cambios. 3.- Alcohol Absoluto, dos cambios. 4.- Sol. Acido Rubenico durante 20 minutos. 5.- Agregar Acetato de Sodio slido ( 0.2gr/100.0 ml.) a la tincin y dejar que se asiente dejando las laminillas durante 24 hrs. 6.- Dos cambios de alcohol de 70% de hora y media cada uno. 7.- Alcohol Absoluto durante toda la noche. 8.- Aclarar con Xilol 2 cambios. 9.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Cobre..........................................................precipitado finos granulares negros. SOLUCIONES: I.- Sol. Acido Rubenico ( Dithioxamide). Acido rubenico...................................................................................0.1 gr. Alcohol de 70%...................................................................................100.0 ml.

GOMORY Tcnica No. 32 (Mtodo para hierro) TEJIDOS: Bazo, Hgado FIJACIN: formol al 10%. TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: use laminilla de control. 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Sol. Acido Clorhdrico-Ferrocianuro de Potasio durante 30 minutos. 3.- Lavar con agua de la llave. 4.- Contrastar con Nuclear Fast Red de 3 a 5 minutos. 5.- Lavar con agua de la llave. 6.- Deshidratar en alcohol de 96%, absoluto y aclarar con xilol. 7.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Pigmentos de hierro....................................................................azul. Ncleos.......................................................................................rojo. Citoplasma..................................................................................rosa. SOLUCIONES: I.- Sol. (stock) de Ac. Clorhdrico al 20%. Acido clorhdrico concentrado.....................................................20.0 ml. Agua destilada.............................................................................80.0 ml. II.- Sol. (stock) de Ferrocianuro de Potasio al 10%. Ferrocianuro de potasio...............................................................10.0 gr. Agua destilada..............................................................................100.0 ml. III.- Sol. (trabajo) Ac. Clorhdrico-Ferrocianuro de Potasio. Acido clorhdrico sol. (stock)..........................................................20.0 ml. Ferrocianuro de potasio sol. (stock)...............................................20.0 ml. IV.- Sol. Nuclear Fast Red Nota: ver tcnica # 26. PERL Tcnica No. 33 (Mtodo para hierro). TEJIDOS: Bazo, Hgado FIJACIN: formol al 10%. TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: use laminilla de control. 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Sol. de stock de Ferrocianuro de Potasio durante 5 minutos. 3.- Sol. de trabajo de Ferrocianuro de Potasio-Acido Clorhdricp durante 20 minutos hasta tomar color azuleado.

4.- Lavar con agua destilada. 5.- Contrastar con Nuclear Fast Red durante 5 minutos. 6.- Lavar bien con agua de la llave. 7.- Deshidratar con alcoholes de 96%, absoluto y aclarar con xilol; los baos deben ser rpidos debido a que el Nuclear Fast Red se puede decolorar. RESULTADOS: Hierro.........................................................................................azul brillante. Ncleos......................................................................................rojos. Citoplasma.................................................................................rosa plido. SOLUCIONES: I.- Sol. Stock de Ferrocianuro de Potasio al 10% Ferrocianuro de potasio..............................................................10 gr. Agua destilada............................................................................ 100.0 ml. II.- Sol. stock de Acido Clorhdrico al 10%. Acido clorhdrico concentrado.....................................................10.0ml. Agua destilada.............................................................................90.0 ml. III.- Sol. de trabajo de Ferrocianuro de Potasio-HCL. Sol. stock de Ferrocianuro de Potasio...........................................35 ml. Sol. stock de Acido Clorhdrico......................................................15 ml. A partes iguales 20:20 IV.- Sol. Nuclear Fast Red. Nota: ver tcnica # 26. Nota: En caso de que no se tia la laminilla en forma adecuada, desteir con agua amoniacal y reiniciar la tincin a partir del Ferrocianuro de Potasio. Si an as no se tie, se deja en agua de la llave hasta que vire a azul y se contrasta Sol. de Trabajo, se puede usar: Ferrocianuro de Potasio-Acido Actico al 12% a partes iguales. HOLMES Tcnica No. 34 (Mtodo para clulas y fibras nerviosas) TEJIDOS: Cerebro, Cerebelo, Mdula espinal. FIJACIN: formol al 10% TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Sol. de Nitrato de Plata durante 2 horas, al 20% esta solucin. 3.- Lavar muy bien con agua destilada. 4.- Sol. Impregnadora a 37c durante la noche. 5.- Quitar de las laminillas el exceso de solucin y pasarlas a la solucin reductora durante 2 minutos. 6.- Lavar bien con agua de la llave, agua destilada. 7.- Diferenciar con Cloruro de Oro. 8.- Lavar en agua destilada.

9.- Sol. de Ac. Oxlico de 3 a 5 minutos. Checar al microscopio hasta que los axones toman un tono azul oscuro. 10.- Baos en agua destilada. 11.- Tiosulfato de Sodio durante 5 minutos. 12.- Lavar con agua de la llave. 13.- Deshidratar con alcoholes de 96%, absoluto y aclarar con xilol. RESULTADOS: Axones......................................................................................azul oscuro. Nervios......................................................................................negros. Terminaciones nerviosas..........................................................negras. Contraste...................................................................................gris o rosa. SOLUCIONES: I.- Nitrato de Plata al 20% Nitrato de plata...........................................................................20.0 gr. Agua destilada............................................................................100.0 ml. II.- Sol. Acido Brico. Acido Brico...............................................................................1.24 gr. Agua destilada...........................................................................100.0 ml. III.- Sol. Borato de Sodio. Borato de sodio (borax).............................................................19.0 gr. Agua destilada........................................................................... 100.0 ml. IV.- Sol. Nitrato de plata al 1%. Nitrato de plata.......................................................................................1.0 gr. Agua destilada........................................................................................100.0ml V.- Sol. Piridina al 10%. Piridina................................................................................................... 10.0 ml. Agua destilada....................................................................................... 90.0 ml. VI.-Sol. Impregnadora Sol. Acido Brico.................................................................................... 55.0 ml. Sol. Borato de Sodio.............................................................................. 45.0 ml. Agua destilada ......................................................................................394.0 ml. Sol. Nitrato de Plata............................................................................... 1.0 ml. Sol. Piridina ........................................................................................... 5.0 ml. VII.- Sol. Reductora Hidroquinona ......................................................................................... 1.0 gr. Sulfito de Sodio ..................................................................................... 10.0 gr. Agua destilada ......................................................................................100.0 ml. VIII.- Sol. Cloruro de Oro al 0.2% Cloruro de Oro al 1% acuoso ............................................................. 20 ml. Agua destilada .................................................................................... 80 ml.

HOLZER Tcnica No. 35 (Mtodo para fibras gliales) TEJIDOS: Cerebro, Cerebelo, Mdula Espinal FIJACIN: formol al 10% o alcohol-formol. TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Sol. Acido Fosfomolbdico-alcohol durante 3 minutos. 3.- Sol. Alcohol Absoluto-Cloroformo hasta decolorar. 4.- Teir con Solucin de Cristal Violeta durante 30 segundos. Secarla. 5.- Sol. Bromuro de Potasio durante 1 minuto. Secar. 6.- Sol. Diferenciadora durante 30 seg. aproximadamente. 7.- Baos en Xilol, varios cambios, checar al microscopio despus del primer bao. 8.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Fibras gliales...........................................................................violeta. Contraste.................................................................................violeta plido. SOLUCIONES: I.- Ac. Fosfomolbdico-alcohol. Ac. fosfomolbdico al 5%.......................................................... 50.0 ml. Alcohol de 96%.........................................................................100.0 ml. Prepararlo al momento de usarse. II.- Sol. Alcohol absoluto-Cloroformo. Alcohol absoluto 100%.............................................................. 40.0 ml. Cloroformo................................................................................. 160.0 ml. III.- Sol. Cristal Violeta. Cristal Violeta.............................................................................. 5.0 gr. Alcohol absoluto 100%................................................................ 20.0 ml. Cloroformo....................................................................................80.0 ml. IV.- Sol. Bromuro de Potasio. Bromuro de Potasio...................................................................... 100.0 gr. Agua destilada.............................................................................. 1000.0 ml. V.- Sol. Diferenciadora. Anilina...................................................................................................120.0 grl. Cloroformo............................................................................................180.0 ml. Hidrxido de Amonio 28%.................................................................... 20 gotas.

KLUVER BARRERA Tcnica no. 36 (Mtodo para mielina y clulas nerviosas) TEJIDOS: Cerebro, Cerebelo, Mdula espinal FIJACIN: formol buffer al 10%. TCNICA: cortes en parafina a 15 micras. PROCEDIMIENTO: 1.- Desparafinar e hidratar hasta alcohol de 96%. 2.- Sol. Luxol Fast Blue a 56-60C durante la noche. 3.- Baos en alcohol de 96% para quitar el exceso de colorante. 4.- Lavar con agua destilada. 5.- Empezar a diferenciar con un bao rpido de 30 seg. de Carbonato de Litio. 6.- Continuar la diferenciacin en alcohol de 70% hasta distinguir lo plido con lo blanco. 7.- Lavar con agua destilada. 8.- Finalizar la diferenciacin con baos de Carbonato de Litio, alcohol de 70% hasta que las fibras tomen un tono azul plido. 9.- Baos en agua destilada. 10.- Sol. Cresil Violeta durante 6 minutos. Filtrar y calentar la sol. a 57C, justo antes de usarse. 11.- Diferenciar en alcohol de 96%. 12.- Deshidratar en alcohol absoluto y aclarar con xilol. 13.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Mielina......................................................................................azul a verde. Clulas......................................................................................rosa a violeta. SOLUCIONES: I.- Sol. Luxol Fast Blue al 0.1%. Luxol fast blue.............................................................................0.1 gr. Alcohol de 96%...........................................................................100.0ml. Disolver el reactivo en alcohol, agregar 0.5ml. de cido actico glacial al 10% a cada 100.0 ml de solucin estable. II.- Sol. Cresil violeta al 0.1%. Cresil violeta ..............................................................................0.1 gr. Agua destilada............................................................................100.0ml. Nota: Justo antes de usarse agregar 15 gotas de cido actico al 10%, filtrar y calentar a 57C . III.- Sol. Carbonato de litio al 0.05% Carbonato de litio.........................................................................0.05 gr. Agua destilada............................................................................. 100.0ml. IV.- Sol. alcohol al 70% Alcohol absoluto...........................................................................70.0 ml. Agua destilada..............................................................................30.0 ml.

OBSERVACIONES: En el paso #2 se puede dejar 24hrs a temperatura ambiente(colocar 1hr. antes en el horno) En el paso # 7, examinar la laminilla(s) al microscopio, repetir la diferenciacin si es necesario, comenzando en el paso # 5. En el paso # 10,se puede contrastar con Schiff, durante 6 minutos ms, standarizar. NOTA: La sustancia blanca se tie de azul. SEVIER-MUNGER Tcnica no. 37 (Mtodo para tejido nervioso) TEJIDOS: Cerebro, Cerebelo, Mdula espinal FIJACIN: Formol Buffer al 10%. TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Sol. Nitrato de Plata precalentada a 60C, sumergir las laminillas durante 15 minutos. 3.- Lavar laminilla por laminilla en agua destilada y pasarla a un vaso de Coplin limpio. 4.- A la sol. de trabajo de Plata Amoniacal se le agregan 10 gotas de la sol. de Formol, agitar ligeramente las laminillas cuando se este agregando el formol, dejarlas durante 5 a 30 minutos hasta que las secciones tomen un color caf dorado. 5.- Lavar bien con agua destilada. 6.- Sol. Tiosulfato de Sodio durante 2 minutos. 7.- Lavar con agua destilada. 8.- Deshidratar en alcoholes de 96%, absoluto y aclarar con xilol. 9.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Neuritas perifricas pequeas y largas............................................negras. Axones..............................................................................................negras. Mielina...............................................................................................caf claro. Colgena y msculo..........................................................................caf. Grnulos argentafinos........................................................................negros. SOLUCIONES: I.- Nitrato de plata al 20%. Nitrato de plata ...................................................................................20 gr. Agua destilada.................................................................................. 100 ml. II.- Nitrato de plata al 10%. Nitrato de plata....................................................................................10 gr. Agua destilada.............................................................................. 100.0 ml. III.- Sol. de Formol al 2%. Formol 37-40%....................................................................................2.0 ml. Agua de la llave...................................................................................98.0 ml.

IV.- Tiosulfato de sodio al 5%. Tiosulfato de sodio................................................................................5.0 gr. Agua destilada.......................................................................................100.0ml. NOTA: En la solucin # 4, preparar con 24 hrs de anticipacin las soluciones, guardar en refrigeracin. Trabajar con pinzas y agua destilada. V.- Carbonato de sodio. Carbonato de sodio hidratado ...............................................................8 gr. Agua destilada.......................................................................................30.0 ml. VI.- Sol. de trabajo de Plata Amoniacal. A 50 ml. de sol. de plata al 10 % agregar gota a gota hidroxido de amonio primero para precipitar la sol. y despus aclararla (agitando siempre) completamente. Agregar 0.5 ml. de la sol. de carbonato de sodio, agitar vigorosamente y agregar 25 gotas de hidrxido de amonio, agtese hasta que aclare completamente, fltrese antes de usar. SCHLEIFSTEIN Tcnica No. 38 (Mtodo para cuerpos de Negri) TEJIDOS: Cerebro, Cerebelo, Mdula espinal FIJACIN: Zenker. TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: use laminilla de control. 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Remover los precipitados de Mercurio con Yodo y aclarar con Tiosulfato. 3.- Sol. de trabajo de Schleiftein, calentar la laminilla hasta que empiece a evaporarse la solucin, despus se enfra a temperatura ambiente. 4.- Lavar rpidamente con agua de la llave. 5.- Diferenciar individualmente cada una de las laminillas en baos de Alcohol 96%, absoluto y aclarar con xilol. 6.- Deshidratar con Alcohol 96%, absoluto y aclarar con xilol. 7.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Cuerpos de Negri................................................................... magenta intenso. Citoplasma..............................................................................azul violeta. Eritrocitos................................................................................cobre. SOLUCIONES: I.- Sol. Stock de Schleiftein. Fuscina bsica........................................................................1.8 gr. Azul de metileno......................................................................1.0 gr. Glicerina.................................................................................. 100.0 ml. Alcohol Metlico.......................................................................... 100.0 ml.

II.- Sol. Hidrxido de Potasio. Hidrxido de Potasio................................................................ 0.01 gr. Agua de la llave........................................................................4000 ml. III.- Sol. de trabajo de Schleiftein. Sol. Stock de Schleiftein............................................................10 gotas. Sol. de Hidrxido de Potasio.......................................................20 ml. Mezclar la solucin justo antes de usarse. FITE FARACO Tcnica No. 39 (Mtodo para bacilo de la lepra B.A.A.R.) TEJIDOS: Piel FIJACIN: formol al 10% TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: use laminilla de control. 1.- Desparafinar a travs de 2 cambios de Xilol-Aceite de Cedro de 12 minutos cada uno. 2.- Secar la laminilla con papel filtro (tambin puede dejar secar al aire). 3.- Sol. Carbol Fuscina de Z-N durante 30 minutos. 4.- Lavar con agua de la llave durante 5 minutos. 5.- Diferenciar individualmente las laminillas con Sol. de Ac. Sulfrico al 1% hasta que las secciones tomen un tono rosa. 6.- Lavar con agua de la llave durante 1 minuto. 7.- Contrastar con Sol. de trabajo de Azul de Metileno. 8.- Lavar bien con agua de la llave. 9.- Dejar secar al aire. 10.- Aclarar con Xilol durante unos minutos. 11.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Bacilo de lepra....................................................................rojos. Filamentos de nocardia.......................................................rojos. Contraste.............................................................................azul. SOLUCIONES: I.- Sol. Xilol-Aceite de cedro. Aceite de cedro...................................................................una parte. Xilol.....................................................................................dos partes. II.- Sol. Carbol Fuscina. Nota: ver tcnica # 42. III.- Sol. Acido Sulfrico al 1% Acido sulfrico......................................................................1.0 ml. Agua destilada......................................................................99.0 ml.

IV.- Sol. Azul de Metileno. Nota: ver tcnica no. 42. KINYOUN Tcnica No. 40 (Mtodo para bacterias cido alcohol resistentes B.A.AR.) TEJIDOS: Cualquier rgano con bacilos de Tuberculosis FIJACIN: formol al 10%. TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: usar laminilla de control. 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Sol. Kinyoun Carbol Fuscina a 56c durante 1 hora. 3.- Lavar muy bien en agua de la llave. 4.- Diferenciar con solucin de Alcohol Acido hasta que el tejido tome un tono plido rosado. 5.- Lavar bien con agua de la llave. 6.- Contrastar con Sol. de Azul de Metileno (de trabajo) baos. 7.- Deshidratar con alcoholes de 96%, absoluto y aclarar con xilol. 8.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Bacilos cido alcohol resistentes...........................................rojos. Contraste................................................................................azul plido. SOLUCIONES: I.- Sol. Kinyoun carbol fuscina. Fuscina bsica..........................................................................4.0 gr. Cristales de fenol (diluidos).......................................................8.0 ml. Alcohol de 96%.........................................................................20.0 ml. Agua destilada...........................................................................100.0 ml. II.- Sol. Alcohol Acido al 1%. Ver tcnica No. 42 III.- Sol. Stock de Azul de Metileno. Azul de metileno........................................................................1.4 gr. Alcohol de 96%.......................................................................... 100.0 ml. IV.- Sol. trabajo de Azul de Metileno. Sol. stock de azul de metileno.................................................... 10.0 ml. Agua corriente............................................................................. 90.0 ml. TRUANT Tcnica No. 41 (Mtodo para organismos cido resistentes fluorescentes) TEJIDOS: Cualquier rgano con bacilos de Tuberculosis FIJACIN: formol al 10%.

TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: use laminilla de control. 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Teir ncleos con Hematoxilina de Weigert durante 10 minutos. 3.- Lavar con agua de la llave durante 3 minutos. 4.- Sol. Auramina Rodamina a 60C durante 10 minutos. 5.- Lavar con agua de la llave. 6.- Diferenciar con Alcohol Acido para remover el exceso de colorante. 7.- Lavar con agua de la llave. 8.- Baos con agua destilada. 9.- Deshidratar con alcoholes de 96%, absoluto y aclarar con xilol. 10.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Bacilos con fluorescencia.......................................................amarillo rojizo. SOLUCIONES: I.- Sol. Hematoxilina de Weigert. Nota: ver tcnica No. 7 II.- Sol. Auramina Rodamina. Auramina....................................................................................1.5 gr. Rodamina B................................................................................0. 75 gr. Glicerina......................................................................................75.0 ml. Cristales de fenol........................................................................10.0 ml. Agua destilada.............................................................................50.0 ml. III.- Sol. Alcohol Acido al 1%. Nota: ver tcnica No. 42. ZIEHL-NEELSEN Tcnica No. 42 (Mtodo para bacilos cido alcohol resistentes B.A.A.R) TEJIDOS: Cualquier rgano con bacilos de Tuberculosis FIJACIN: formol al 10%. TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: use laminilla de control. 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Solucin Carbol Fuscina durante 30 minutos. 3.- Lavar bien en agua de la llave. 4.- Decolorar con una solucin de Alcohol Acido hasta tomar un rosa plido. 5.- Lavar en agua de la llave, enjuagar en agua amoniacal rpido y luego con agua. 6.- Contrastar con solucin de trabajo de Azul de Metileno 1 minuto. 7.- Lavar bien con agua de la llave. 8.- Deshidratar con alcohol de 96%, absoluto y aclarar en xilol. 9.- Montar con resina sinttica.

RESULTADOS: Bacilos de tuberculosis......................................................rojo brillante. Eritrocitos...........................................................................naranja. Otros elementos del tejido.................................................azul plido. SOLUCIONES: I.- Sol. Carbol Fuscina. a) Fuscina bsica...................................................................4.0 gr. d) Alcohol absoluto.................................................................10.0 ml. c) Cristales de fenol diluidos.................................................. 0.5 gr. b) Agua destilada....................................................................100.0 ml. a) y b) se diluyen por calor leve, se enfra un poco y se le agrega c) y por ltimo d) II.- Sol. Alcohol Acido al 1%. Alcohol de 70%..................................................................100.0 ml. Acido Clorhdrico concentrado............................................1.0 ml. III.- Sol. Azul de Metileno (Stock). Azul de metileno..............................................................1.4 gr. Alcohol de 96%................................................................100.0 ml. IV.- Sol. Azul de Metileno (trabajo). Sol. azul de metileno (stock)............................................ 10.0 ml. Agua de la llave................................................................ 90.0 ml. Nota: En el paso 5 el Agua Amoniacal es para darle ms brillo a la tincin. En el paso 8 el alcohol de 96% puede decolorar el azul de metileno, haciendo la tincin regresiva. El azul que debe quedar es como el de las letras del parafilm. WADE Tcnica No. 43 ( Mtodo para bacilos cido alcohol resistentes B.A.A.R) TEJIDOS: Cualquier rgano con bacilos de Tuberculosis FIJACIN: formol al 10%. TCNICA: cortes en parafina a 5 micras. PROCEDIMIENTO: use laminilla de control. 1.- Desparafinar e hidratar hasta agua destilada. 2.- Sol. Nueva Fuscina durante toda la noche. 3.- Lavar con agua de la llave. 4.- Pasar a solucin de Formol en reactivo durante 5 minutos. CHECAR 5.- Lavar bien con agua de la llave. 6.- Sol. de Acido Sulfrico durante 1 minuto. 7.- Lavar bien con agua de la llave. 8.- Sol. Permanganato de Potasio durante 3 minutos. 9.- Decolorar con Acido Oxlico al 2% de 30 a 60 seg. 10.- Lavar bien con agua de la llave.

11.- Sol. de Van Gieson modificada durante 3 minutos. 12.- Deshidratar rpidamente en alcoholes de 96%, absoluto y aclarar con xilol. 13.- Montar con resina sinttica. RESULTADOS: Bacilos cido alcohol resistentes.........................................azul marino o negro Tejido conectivo....................................................................rojo. Contraste..............................................................................amarillento. SOLUCIONES: I.- Sol. Nueva Fuscina. Cristales de fenol fusionados..................................................2.5 ml. Alcohol absoluto......................................................................5.0 ml. Fuscina Nueva, magenta..........................................................0.5 gr. Agua destilada.........................................................................50.0 ml. Fltrese antes de usar. II.- Sol. Acido Sulfrico al 5% Agua destilada........................................................................95.0 ml. Acido sulfrico.........................................................................5.0 ml. III.- Sol. Permanganato de Potasio al 1% Permanganato de potasio.........................................................1.0 gr. Agua destilada.........................................