Teori DasarKromatografi Cair Kinerja Tinggi atau KCKT atau biasa
juga disebut dengan HPLC (High Performance Liquid Chromatography)
dikembangkan pada akhir tahun 1960-1n dan awal tahun 1970-1n. saat
ini. KCKT merupakan teknik pemisahan yang diterima secara luas
untuk analisa dan pemurnian senywa tertentu dalam suatu sampel pada
sejumlah bidang, anatara lain: farmasi, lingkungan, bioteknologi,
polimer dan industry-industri makanan. Kegunaan umum KCKT adalah
untuk pemisahan sejumlah senyawa organic, anorganik, maupun senyawa
biologis; analisis ketidakmurnian (impurities); analisis
senyawa-senyawa tidak mudah menguap (non-volatil); penentuan
molekul-molekul netral, ionic maupun zwitter ion; isolasi dan
pemurnian senyawa;pemisahan senyawa-senyawa yang strukturnya hamper
sama; pemisahan senyawa-senyawa dalam jumlah banyakdan dalam proses
skala industry.
Keterbatasan metode KCKT adalah untuk identifikasi senyawa,
kecuali jika KCK dihubungkan dengan spectrometer massa (MS).
Keterbatasan lainnya adalah jika sampelnya sangat kompleks, maka
resolusi yang baik sulit diperoleh.
Prinsip kerja
Kromatografi merupakan teknik dimana solute terpisah oleh
perbedaan elusi, dikarenakan solute-solut ini melewati suatu kolom
kromatografi. Pemisahan solute-solut ini diatur oleh distribusi
solute dalam fase gerak dan fase diam.
HPLC adalah sebuah instrumen yang menggunakan prinsip
kromatografi ( pemisahan) akibat adanya perbedaan kecepatan elusi
dengan menggunakan fase gerak cair yang dialirkan melalui kolom
menuju detektor dengan bantuan pompa. Cuplikan dimasukkan ke dalam
aliran fase gerakdengan cara penyuntikan. Didalam kolom terjadi
pemisahan komponen-komponen campuran karena adanya perbedaan
kekuatan interaksi antara solute-solute terhadap fase diam. Solut
yang kurang kuat interaksinya dengan fase diam akan keluar dari
kolom lebih dahulu dan sebaliknya, untuk solute yang kuat
berinteraksi dengan fase diam maka solute tersebut akan keluar
kolom dan dideteksi oleh detector pada panjang gelombang tertentu
lalu direkam menggunakan personal computer (PC) yang terhubung
online dengan alat HPLC tersebut dalam bentuk kromatogram.
Instrumentasi KCKT pada dasarnya terdiri dari 8 komponen pokok,
yaitu :
1. Wadah fase gerak
2. System penghantaran fase gerak
3. Alat untuk memasukkan sampel
4. Kolom
5. Detector
6. Wadah penampung buangan fase gerak
7. Tabun penghubung
8. Suatu computer atau integrator atau perekam
