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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
TESIS DE GRADO
PREVIO A LA OBTENCIÓN DEL TÍTULO DE
INGENIERO AGRÓNOMO
TEMA
“IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS
ANTAGONISTAS DE FITOPATÓGENOS DE SUELO Y SU
EFECTO IN VITRO E INVERNADERO EN ESPECIES
HORTICOLAS”
POR:
ROLANDO JAVIER CAPUZ EUGENIO
Director de tesis:
Ing. Agr. MSc. Leticia Vivas Vivas
Guayaquil - Ecuador
2007 - 2009
ii
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
La presente tesis de grado titulada “IDENTIFICACIÓN DE
MICROORGANISMOS ANTAGONISTAS DE FITOPATÓGENOS
DE SUELO Y SU EFECTO IN VITRO E INVERNADERO EN
ESPECIES HORTICOLAS” realizada por el Egdo. ROLANDO
JAVIER CAPUZ EUGENIO, bajo la dirección de la Ing. Agr. M.Sc.
Leticia Vivas Vivas ha sido aprobada y aceptada por el Tribunal de
Sustentación como requisito parcial para obtener el título de
INGENIERO AGRÓNOMO.
TRIBUNAL DE SUSTENTACIÓN
Ing. Agr. Gonzalo Almagro Ing. Agr. MSc. Leticia Vivas VivasPresidente Examinador Principal
Directora de Tesis
Ing. Agr. Valeriano Bustamante. Ing. Agr. Washington Peñafiel Examinador Principal Examinador Alterno
Guayaquil – Ecuador
i
2007 – 2009
DEDICATORIA
Primero a Dios, por que gracias a la ayuda de él he podido culminar una
etapa en mi vida.
A mis padres Rómulo Vicente Capuz Bermeo, María Zoila Eugenio
Guaman, por su esfuerzo constante en conseguir que su hijo tenga un
futuro prometedor. Y a mi abuelita Soledad Bermeo Procel por su apoyo
incondicional.
Mis hermanos Alfonso, Sergio, Douglas y sobrinos Joel y Jair por su
incesante apoyo, a mi familia en general que de manera directa o
indirectamente me apoyaron para cumplir con mi meta.
ii
AGRADECIMIENTO
El escritor deja constancia de sus más sinceros agradecimientos a personas e
instituciones que brindaron su cooperación para que se realice este trabajo de
investigación.
Al Departamento Nacional de Protección Vegetal, Sección Fitopatología, de la
Estación Experimental del Litoral Sur “Dr. Enrique Ampuero Pareja” del Instituto
Nacional Autónomo de Investigaciones Agropecuarias INIAP
A la Universidad de Guayaquil “Facultad de Ciencias Agrarias”.
De manera muy especial a la Ing. Msc Leticia Vivas Directora del Proyecto
PIC 2006-1-13 ”Alternativas biológicas para combate de insectos plagas y de
fitopatógenos de suelo en cultivos hortícolas en las provincias de Guayas y Manabí”.
y Directora de Tesis, por sus constantes consejos y motivación durante el transcurso
del trabajo.
A los señores agricultores de campos hortícolas de las provincias del Guayas,
Manabí y Santa Elena por colaborar con el presente trabajo.
A los Ing. Agr. Agr. M.C. Myriam Arias Jefa de la Sección de Entomología, Ing.
Alfonso Espinoza Jefe de la Sección de Fitopatología Al Ing Jimmy Pico
Responsable DNPV Estación Experimental de la Amazonía Central por su apoyo y
colaboración en este presente trabajo de investigación.
A mis compañeros por brindarme su apoyo y colaboración: Héctor R, Nelson
Moreano Vicente.., Diana I., Bertin O., Leodan M., Luis R., Fernando D., Alexandra
Tomalá.
Y a todo el personal técnico y administrativo del INIAP E.E.L.S que me brindaron su
amistad y ayuda en todo lo que estuvo a su alcance.
iii
Las investigaciones, resultados,
conclusiones y recomendaciones del
presente trabajo, son de exclusiva son
responsabilidad del autor.
_____________________________
ROLANDO JAVIER CAPUZ EUGENIO
Email:[email protected]
iv
Índice
Página
I INTRODUCCION…………………………………………………….. 1
Objetivo general………………………………………………... 3
Objetivo específicos……………………………………………. 3
II REVISION DE LITERATURA……………………………………… 4
A. Microorganismos fitopatógenos del suelo en cultivos
hortícolas……………………………………………………
4
1. Fusarium oxysporum f. sp. Lycopersici…………… 4
2. Pythium sp………………………………………… 5
3. Rhizoctonia sp……...……………………………… 6
4. Sclerotium rolfsii ………………………………… 7
5. Ralstonia solanacearum ………………………… 8
B. Microorganismos antagonistas de fitopatógenos del suelo.. 9
1. Trichoderma…………………………………………… 9
2. Gliocladium…………………………………………… 12
III MATERIALES Y MÉTODOS………………………………………. 14
A. Ubicación del ensayo………………………………………. 14
B. Factores en estudio…………………………………………. 14
C. Fases de investigación……………………………………… 15
1. Laboratorio………………………………………………… 15
1.1.1 Causales de enfermedades…………………… 15
1.1.2. Microorganismos antagonistas de
fitopatógenos de suelo…………………… 16
1.1.3. Multiplicación de fitopatógenos y antagonistas 16
1.1.4. Pruebas de patogenecidad…………………… 17
1.1.5. Diseño experimental…………………………. 17
2. Invernadero……………………………………………….. 17
2.1. Dosis del antagonista……………………………... 18
2.1.1. Procedimiento………………………………... 18
2.1.2. Tratamiento…………………………………... 19
v
2.1.3. Diseño experimental…………………………. 19
2.2. Formas de Aplicación…………………………….. 20
2.2.1. Procedimiento………………………………... 20
2.2.2. Tratamientos…………………………………. 21
2.2.3. Diseño experimental…………………………. 21
3. Variables registradas………………………………………... 22
3.1 Microorganismos…………………………………. 22
3.2 Antagonistas……………………………………… 22
3.3. Severidad…………………………………………. 22
IV RESULTADOS………………………………………………………... 23
4.1. Identificación de microorganismos antagonistas de
fitopatógenos de suelo y causales de
enfermedades…………………………………….. 23
4.2. Selección de cepas eficientes de antagonistas de
fitopatógenos de suelo en condiciones de
laboratorio e invernadero…………………………. 24
4.2.1. Laboratorio……………………………………….. 24
4.2.2 Multiplicación de fitopatógenos y antagonistas….. 27
4.2.3. Invernadero………………………………………. 28
4.2.3.1. Dosis de aplicación……………………………. 28
4.2.3.2 Formas de aplicación ………………………….. 34
V DISCUSIÓN………………………………………………………….. 41
VI CONCLUSIÓNES ……………………………………………………. 43
VII RECOMENDACIÓNES………...…………………………………….. 44
VIII RESUMEN……………………………………………………………. 45
IX SUMMARY……………………………………………………………. 46
X BIBLIOGRAFÍA………………………………………………………. 47
XI ANEXO………………………………………………………………... 51
vi
Índice de Cuadros
Pág.
Cuadro 1. Crecimiento micelial (mm/h)1/ de cepas de Trichoderma de la provincia del Guayas 2008……………………………... 25
Cuadro 2. Crecimiento micelial (mm/h)1/ de cepas de Trichoderma de la provincia de Santa Elena 2008…………………………. 26
Cuadro 3. Crecimiento micelial (mm/h) de cepas de Trichoderma de la provincia de Manabí. 2008…………………………….. 27
Índice de figurasFigura 1. Frecuencia de microorganismos antagonistas
y fitopatógenos. 2007-2008………………………………...24
Figura 2. Porcentaje promedio de cuatro evaluaciones del crecimiento
micelial de dos cepas de T. asperellum en tres sustratos……28
Figura 3. Porcentaje promedio de crecimiento micelial de dos cepas
de T. asperellum en tres sustratos…………………………...28
Figura 4. Severidad causada por S. rolfsii en plántulas
de tomate tratadas con T. asperellum cepa G-08,
en función de dosis de aplicación
E. E. L. S. 2009……………………....................................... 29
Figura 5. Severidad causada por S. rolfsii en plántulas
de pimiento tratadas con T. asperellum cepa G-08,
en función de dosis de aplicación
E. E. L. S. 2008…………………………………………….. 30
Figura 6. Severidad causada por S. rolfsii en plántulas
de sandia tratadas con T. asperellum cepa G-08,
en función de dosis de aplicación
E. E. L. S. 2009…………………………………………….. 31
Figura 7. Severidad causada por S. rolfsii en plántulas
de tomate tratadas con T. asperellum cepa SE-34,
en función de dosis de aplicación
vii
E. E. L. S. 2008-2009………………………………………. 32
Figura 8. Severidad causada por S. rolfsii en plántulas
de pimiento tratadas con T. asperellum cepa SE-34,
en función de dosis de aplicación
E. E. L. S. 2009……………………………………………. 33
Figura 9. Severidad causada por S. rolfsii en plántulas
de sandia tratadas con T. asperellum cepa SE-034,
en función de dosis de aplicación
E. E. L. S. 2009……………………………………………. 34
Figura 10. Severidad causada por S. rolfsii en plántulas
de tomate tratadas con T. asperellum cepa G-08,
en función de formas de aplicación
E. E. L. S. 2008…………………………………………….. 35
Figura 11. Severidad causada por S. rolfsii en plántulas
de pimiento tratadas con T. asperellum cepa G-08,
en función de formas de aplicación
E. E. L. S. 2009…………………………………………….. 36
Figura 12. Severidad causada por S. rolfsii en plántulas
de sandia tratadas con T. asperellum cepa G-08,
en función de formas de aplicación
E. E. L. S. 2009…………………………………….............. 37
Figura 13. Severidad causada por S. rolfsii en plántulas
de tomate tratadas con T. asperellum cepa SE-34,
en función de formas de aplicación
E. E. L. S. 2008……………………………………………... 38
Figura 14. Severidad causada por S. rolfsii en plántulas
de pimiento tratadas con T. asperellum cepa SE-34,
en función de formas de aplicación
E. E. L. S. 2009…………………………………………….. 39
Figura 15. Severidad causada por S. rolfsii en plántulas
de sandia tratadas con T. asperellum cepa SE-034,
en función de formas de aplicación
viii
E. E. L. S. 2009…………………………………………....... 40
Índice de anexo
Pag.
Cuadro1 A. Recolección de muestras y identificación de
antagonista y fitopatógenos en el cultivo de
tomate, Guayas 2007 -2009………………………………... 52
Cuadro 2 A Recolección de muestras y identificación de
antagonista y fitopatógenos en el cultivo
de pimiento, Guayas 2007 – 2009…………………………. 53
Cuadro 3 A Recolección de muestras y identificación de
antagonista y fitopatógenos en el cultivo
de sandia, Guayas 2007 – 2009…………………………… 54
Cuadro 4 A Recolección de muestras y identificación de
antagonista y fitopatógenos en el cultivo de
tomate, Manabí 2007 – 2009………………………………. 54
Cuadro 5 A Recolección de muestras y identificación de
antagonista y fitopatógenos en el cultivo de
pimiento, Manabí 2007 – 2009……………………………. 55
Cuadro 6 A Recolección de muestras y identificación de
antagonista y fitopatógenos en el cultivo de
sandia, Manabí 2007 – 2009……………………………….. 55
Cuadro 7 A Recolección de muestras y identificación de
antagonista y fitopatógenos en el cultivo de
tomate, Santa Elena 2007 – 2009…………………………. 56
Cuadro 8 A Recolección de muestras y identificación de
antagonista y fitopatógenos en el cultivo de
pimiento, Santa Elena 2007 – 2009……………………….. 56
Cuadro 9 A Recolección de muestras y identificación de
antagonista y fitopatógenos en el cultivo de
sandía, Santa Elena 2007 – 2009…………………………… 57
Cuadro 10 Secuenciación de genes de rRNA de
ix
las cepas G-08 y SE-034…………………………………. 58
Cuadro 11. Severidad causada de S.rolfssi en plántulas
de tomate, en el estudio de de dosis de
Trichoderma asperellum cepa G08 2009…………………… 59
Cuadro 12 Severidad causada de S.rolfssi en plántulas
de pimiento, en el estudio de de dosis de
Trichoderma asperellum cepa G08 2009……………………. 59
Cuadro 13 Severidad causada de S.rolfssi en plántulas
de sandía, en el estudio de de dosis de
Trichoderma asperellum cepa G08 2009……………………. 60
Cuadro 14 Severidad causada de S.rolfssi en plántulas
de tomate, en el estudio de de dosis de
Trichoderma asperellum cepa SE-034 2009………………... 61
Cuadro 15 Severidad causada de S.rolfssi en plántulas
de pimiento, en el estudio de de dosis de
Trichoderma asperellum cepa SE-034 2009………………. 61
Cuadro 16 Severidad causada de S.rolfssi en plántulas
de sandia, en el estudio de de dosis de
Trichoderma asperellum cepa SE-034 2009……………... 62
Cuadro 17 Severidad causada de S.rolfssi en plántulas
de tomate, en el estudio de formas de
aplicación de Trichoderma asperellum cepa G-08 2009……. 63
Cuadro 18 Severidad causada de S.rolfssi en plántulas
de pimiento, en el estudio de formas de
aplicación de Trichoderma asperellum cepa G-08 2009……. 64
Cuadro 19 Severidad causada de S.rolfssi en plántulas
de sandia, en el estudio de formas de aplicación
de Trichoderma asperellum cepa G-08 2009…………….. 64
Cuadro 20 Severidad causada de S.rolfssi en plántulas
de tomate, en el estudio de formas de aplicación
de Trichoderma asperellum cepa SE-034 2009…………... 65
Cuadro 21 Severidad causada de S.rolfssi en plántulas
x
de pimiento, en el estudio de formas de aplicación
de Trichoderma asperellum cepa SE-034 2009………….... 66
Cuadro 22 Severidad causada de S.rolfssi en plántulas
de sandía, en el estudio de formas de aplicación
de Trichoderma asperellum cepa SE-034 2009………….. 66
Cuadro 23 De sustratos para la multiplicación de Trichoderma
asperellus con la cepa de G-08…………………………….. 67
Cuadro 24 De sustratos para la multiplicación de Trichoderma
asperellus con la cepa de SE-034………………………… 67
xi
I. INTRODUCCIÓN
En Ecuador, los cultivos de tomate, pimiento y sandia, en el 2006 ocuparon alrededor
de 7.445 ha y en su mayoría distribuidos en unidades de producción agrícola
(UPA` s) de menos de una hectárea según datos de SICA (2006). En estos cultivos
se detectaron frecuentemente afectados por insectos y fitopatógenos foliares y de
suelo que provocan pérdidas en rendimiento y consiguiente aumento en los costos de
producción por efectos de control; tal es el caso que en la provincia de Manabí los
productores invierten alrededor del 50 % del costo de producción en plaguicidas
(Carvajal, 1997).
En los cultivos hortícolas las enfermedades son uno de los principales problemas
fitosanitarios, entre ellos, la marchitez, causada por varios fitopatógenos en los que
se incluyen hongos y bacterias cuya incidencia puede provocar mortalidad de plantas
hasta en un 80% durante la etapa de floración e inicio de cosecha, especialmente en
monocultivo. La enfermedad Oídium sp. (Cenicilla del melón) causa pérdidas de
hasta un 40 % sin los controles adecuados; así mismo Pseudoperonospora cubensis
(Mildiu velloso de la sandia) reduce la producción hasta un 80 %, debido a los daños
irreversible en la pulpa de los frutos por la falta de azúcar y color, tornándolos no
aptos para la comercialización; Corynespora sp. agente causal de la mancha del tiro
al blanco del pepino afecta hasta un 90 % por la casi total destrucción del follaje al
no haber control oportuno (Zambrano y Mendoza, 1997).
1
En los últimos 40 años el uso de productos químicos en la agricultura ha aumentado
llevando a una dependencia de los mismos, lo cual ha originado daños en los
sistemas agrícolas y ecosistemas. Por otra parte, se ha generado resistencia de los
fitopatógenos a estos productos por lo que causan resurgimientos y brotes
secundarios de las enfermedades (El Agro, 2005).
En la naturaleza existen microorganismos antagonistas que actúan en forma natural
sobre algunos fitopatógenos, especialmente de suelo. Estudios sobre la actividad
biocontroladora in vivo de la cepa A34 de Trichoderma harzianum sobre Sclerotium
rolfsii en tomate indicaron la eficacia a partir de la ausencia de síntomas en plantas
tratadas (Reyes et al., 2002), igualmente en Costa Rica sobre Rhizoctonia solani,
Sclerotium rolfsii, S. cepivorum y Trichoderma se han desarrollado varias
formulaciones comerciales (Fernández - Larrea, 2001).
Por otra parte los géneros Pseudomonas y Bacillus son las bacterias más
importantes debido a su actividad antagonista. Pruebas in vitro con estas dos
bacterias aislado en plátano y arroz mostraron la capacidad de inhibir el crecimiento
de hongos fitopatógenos de suelo como Fusarium oxysporum f. sp lycopersici, F.
moniliforme y F. solani (Fernández-Larrea, 2001).
2
Por lo expuesto, esta investigación tuvo los siguientes objetivos:
Objetivo general:
Desarrollar sistemas de control biológico de fitopatógenos de suelo en cultivos
hortícolas.
Objetivos específicos:
1. Identificar microorganismos antagonistas de fitopatógenos de suelo en los
cultivos de tomate, pimiento y sandía.
2. Seleccionar cepas eficientes de antagonistas de fitopatógenos de suelo en los
cultivos citados en condiciones de laboratorio e invernadero.
3
II. REVISIÓN DE LITERATURA
A. Microorganismos fitopatógenos del suelo en cultivos hortícolas
1. Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici
Este fitopatógeno se encuentra distribuido en todo el mundo y ataca principalmente
a hortalizas. El hongo sobrevive en restos de cultivo y posee estructuras de
resistencia que le permiten perdurar en el suelo hasta por 6 años. El desarrollo
óptimo es favorecido por temperaturas cálidas con un rango de 12 a 28 °C, alta
humedad relativa y días cortos de baja intensidad lumínica. Otros factores que
influyen positivamente en su desarrollo son los suelos ácidos y arenosos con pH
bajo, pobres en nitrógeno y alto suministro de potasio (Agrios, 2004).
Los síntomas en las plántulas consisten en que las hojas más viejas se doblan, se
marchitan y luego mueren (CATIE, 1990 y Suquilanda 2003). En plantas adultas los
síntomas iniciales son amarillamiento de las hojas bajeras. También al inicio del
ataque el daño se nota por el marchitamiento pasajero de las plantas con el calor del
mediodía. La afección puede empezar en un solo lado de la planta, pudiendo quedar
la otra parte completamente normal. Las hojas amarillentas se marchitan y se mueren
(ICA, s.f.; CATIE, 1990). El hongo vive en el suelo y puede ser diseminado por
agua de riego o por vientos fuertes (CATIE, 1990).
Las hojas amarillentas se marchitan y mueren. Al cortar transversalmente el tallo de
una planta marchita, se observa una decoloración de los tejidos cercanos a la corteza
4
(xilema), que son los vasos conductores de agua. Las plantas que logran sobrevivir
producen más pequeños que los normales. Generalmente el ataque se presenta
acompañado de un ahuecamiento del tallo en las ramas superiores (Suquilanda,
2003).
2. Pythium sp.
Las diversas especies de Pythium son componentes normales de la flora microbiana
del suelo, donde probablemente subsisten como saprófitos y a menudo como
parásitos de escasa importancia sobre raíces fibrosas; la población de los esporangios
como de las oosporas esta determinada principalmente por la temperatura del medio;
las temperaturas por arriba de 18 °C favorecen al crecimiento de los tubos
germinales, mientras que las temperaturas entre 10 y 18 °C inducen a la
germinación por medio de zoosporas (Agrios, 2004).
Es una enfermedad bastante común en los semilleros o en plantas recién emergidas.
El primer síntoma que se observa es el encorvamiento de las plantas, que se doblan al
nivel del suelo y caen, en las plantas infectadas se encuentran sobre el eje hipocotíleo
unas pequeñas manchas mas blandas y oscuras, que se reúnen y forman un anillo del
tallo que se pudre y es causa del encorvamiento de la planta, amarilleo y secamiento
(Urquijo, Rodríguez y Santaolalla, 1970).
Este hongo se reconoce a menudo por la existencia de oosporas. El cuerpo fructífero
asexual es un esporangio, según las distintas especies el esporangio puede ser
filamentoso y apenas diferenciable del micelio. Afecta a plantas jóvenes, la infección
5
se produce por lo general debajo del nivel del terreno dónde las plántulas se
encuentran en estado de desarrollo. Es atacado el sistema radicular fibroso y las
raicillas se reblandecen y mueren, mientras los efectos sobre la parte aérea de la
planta se manifiesta por retraso en el crecimiento, marchitez repentina o muerte; al
nivel del suelo sobre tallos suelen aparecer lesiones corticales (Agrios, 2004).
Esta enfermedad puede ser preemergente o post emergente, es decir que en el primer
caso la planta no alcanza ni a salir, mientras que en el segundo caso el hongo ataca
cuando la planta recién han germinado estrangulándole el cuello y doblándola
(Suquilanda, 2003).
3. Rhizoctonia sp.
Es un patógeno de suelos, causa pudrición en plántulas de semillero (damping off)
en el cuello y raíces. La forma sexual de R. solani es Pellicularia filamentosa, hongo
de la clase basidiomicetes (Malaguti, 1997).
Se desarrolla con mayor facilidad en suelos húmedos, mal drenados o compactos. La
enfermedad puede ser emergente o post-emergente: en el primero la plántula no
alcanza a emerger del suelo, mientras que en el segundo los tallos a nivel del suelo
presentan un adelgazamiento y necrosis de los tejidos, se doblan y mueren (CATIE,
1990).
Se presenta sobre la superficie del suelo y resulta en un decaimiento de la plántula, se
caracteriza por un estrangulamiento en el cuello de la plántula de color marrón
6
oscuro. Las raíces son también afectadas y por consiguiente la muerte de la plántula
(Arbaiza, 2002).
4. Sclerotium rolfsii
Este hongo puede vivir en el suelo durante muchos años a través de sus formas de
resistencia (esclerocios), pequeños cuerpos esféricos de color café oscuro del tamaño
de una semilla de repollo y similar en apariencia (ICA, s.f).
Agrios (2004), menciona que el hongo S. rolfsii produce un micelio abundante de
color blanco y ramificado que forma numerosos esclerocios, en ocasiones produce
basidiosporas en los bordes de las lesiones cuando el clima es húmedo y la
temperatura se ubica entre 30 y 35 °C.
Se presenta en las raíces, tallos, hojas y flores, produce una marchitez súbita y
progresiva acompañada de amarillamiento, sequedad en hojas y tallos. Este hongo
causa una lesión a nivel del cuello formándose un micelio blanquecino que produce
podredumbre en ambientes muy húmedos (Agrios, 2004).
Este patógeno puede vivir en el suelo durante muchos años a través de sus formas de
resistencia (esclerocios), que son pequeños cuerpos esféricos de color café oscuro del
tamaño de una semilla de repollo y similar en apariencia. Los primeros síntomas se
presentan en forma de marchitez y decaimiento de la planta, ya que el ataque se
localiza a nivel del cuello. El hongo también puede atacar al fruto, donde se
manifiesta en forma de manchas. En la zona de la corona existe un secamiento
7
cubierto por los crecimientos algodonosos del hongo de color amarillo un poco
hundidos (Suquilanda, 2003).
El primer síntoma es el marchitamiento general de planta, que puede ser progresivo y
ocasionar la muerte de la planta. En la base del tallo de las plantas se puede observar
una podredumbre y formación de micelio blanquecino con numerosos esclerocios
pequeños, esféricos, de color marrón o mostaza. Finalmente, las plantas enfermas se
marchitan y mueren la parte aérea (Arbaiza, 2002).
5. Ralstonia solanacearum
La bacteria Ralstonia (= Pseudomonas) solanacearum, biovar 2A posee dos fuentes
de inoculó: tubérculos-semilla infectados y suelos contaminados, pudiendo ser
diseminada por el agua de riego y por el suelo adherido a zapatos y herramientas. Así
mismo, el desarrollo de la enfermedad depende principalmente de temperaturas altas,
siendo escasa en suelos fríos, apareciendo los síntomas cuando la temperatura diurna
es superior a 20 °C y la temperatura promedio del suelo es mayor de 14 °C
(Hernández et al., 2005).
Los síntomas característicos de R. solanacearum son necrosis de las yemas,
desintegración de los haces vasculares, frutos pequeños y marchitez. La aparición de
la enfermedad puede ser una consecuencia de la siembra continua de especies
solanáceas, uso de herramientas contaminadas, escorrentía y/o la siembra de semilla
infectada (García, 1999).
8
B. Microorganismos antagonistas de fitopatógenos del suelo
El uso de microorganismos antagonistas para el control biológico de fitopatógenos de
suelos es una de las herramientas del manejo integrado de plagas. El control
biológico es la utilización de organismos vivos para reducir la población de
determinados organismos nocivos. Los organismos utilizados pueden ser enemigos
naturales de los dañinos o individuos de la misma especie manipulados de modo que
perjudiquen a sus propios congéneres (Daxl, 1994).
El control biológico de los patógenos es la destrucción total o parcial de las
poblaciones de estos por medio de otros organismos (Agrios, 2004). Por otra parte,
Nicholls (2008) menciona que el control biológico consiste en el uso de uno o mas
organismos para reducir la densidad de una planta que causa daño al hombre. Así el
control biológico puede definirse como uso de organismos benéficos (enemigos
naturales) contra aquellos que causan daño.
1. Trichoderma
Trichoderma es un tipo de hongo anaerobio facultativo que se encuentra de manera
natural en la mayoría de suelos agrícolas y en suelos no perturbados. Pertenece a la
subdivisión Deuteromicetes que se caracterizan por no poseer o no presentar un
estado sexual determinado. De este microorganismo existen más de 30 especies,
todas con efectos benéficos para la agricultura y otras ramas (Páez, 2006).
Se ubica en sitios que contienen materia orgánica o desechos vegetales en
descomposición, como también en residuos de cultivos, especialmente en aquellos
9
que son atacados por hongos fitopatógenos. Trichoderma es un hongo que ataca,
parasita y desplaza a otros hongos que producen enfermedades en las plantas (Arias,
2004; Suquilanda, 2003).
Diferentes especies de hongos fitopatógenos son controlados por Trichoderma, entre
los que se citan a: Colletotrichum gloeosporioides en cultivos de papa, tomate, fríjol,
fresa, flores, tomate; Fusarium moniliforme en maíz; Phytophthora infestans en
papa, pepino de agua; Phytophthora spp en tabaco, flores, frutales; Pythium sp. en
varios cultivos; Fusarium oxysporum en papa, tomate, fríjol, plátano, maíz, clavel;
Rhizoctonia solani en zanahoria, tomate, lechuga, col, café, papa, cebolla, ajo,
pimentón; Macrophomina phaseolina en maíz, fríjol, melón, ajonjolí; Sclerotinia
sclerotiorum en habichuela, tomate, lechuga, col, café, papa, cebolla, ajo, pimentón;
Botrytis cinérea en papa, tomate, fríjol, fresa, flores, tomate (Páez, 2006).
Estudios realizados en Cuba, in vitro con un grupo de aislamientos de Trichoderma
pertenecientes al cepario del Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal
(INISAV), confirmaron la efectividad del aislamiento de Trichoderma harzianum
cepa A34 para la reducción de patógenos del suelo como Phytophthora parasitica,
Rhizoctonia solani y Sclerotium rolfsii (Sandoval y López, 2002).
Estudios realizados por Cejas et al. (2000), con preparados fúngicos líquidos a base
de Trichoderma harzianum fueron eficaces para la protección de las plantas contra
hongos fitopatógenos del suelo, entre ellos: Phytophthora parasitica, Phytophthora
capsici, Pythium aphanidermatum, Sclerotium rolfssii.
10
Investigaciones realizadas en Colombia han determinado la gran importancia de
Trichoderma como agente de biocontrol, por ser este hongo un habitante natural de
los suelos (Ruiz y Leguizamon, 1996).
Entre las ventajas de Trichoderma está el parasitismo directo sobre otros hongos,
además, secreta enzimas (celulosas, glucanasas, lipasas, proteasas y quitinasas) que
ayudan a disolver la pared celular de las hifas del huésped, facilitando la inserción de
estructuras especializadas para absorber los nutrientes del interior del hongo huésped.
Al final del micelio el hongo parasitado queda vacío y con perforaciones provocadas
por la inserción de las estructuras especializadas (El Agro, 2005).
La habilidad del Trichoderma spp. para activar sistemáticamente los mecanismos de
resistencia de las plantas contra hongos patógenos ha sido demostrada en muchos
estudios. Estos hongos fueron capaces de modificar la respuesta demás de 10
monocotiledoneas y dicotiledóneas, incluyen gramíneas, solanáceas y cucurbitáceas,
a la infección de los hongos R. solani, B. cinérea, Colletotrichum sp, Phytophthora
sp, Alternaria, las bacterias Xanthomonas, Pseudomonasl la mayoría d estos
experimentos han sido realizado a nivel de laboratorio en los se demostró que
colonización puede ser foliar o en la raíz. Las cepas fueron clasificadas como T.
viride, T. harzianum y T. artoviride y finalmente T. asperellum (Lanzuise et
al.,2003).
Estudios realizados en Venezuela para multiplicación de Trichoderma sp. con
sustratos de arroz paddy, cascarilla de arroz y fibra de caña de azúcar con diferentes
dosis para el control de Fusarium oxysporum f sp. reportan que las mejores
11
formulaciones fueron la cascarilla de arroz , fibra de caña de azúcar y arroz paddy
( Jiménez et al., 2003).
Cepas de Trichoderma pueden producir masivamente en medios como afrecho de
trigo, granos de cebada, arroz o levadura, sacarosa, etc El arroz partido fue el mas
adecuado para incrementar la biomasa de Trichoderma produciendo el mayor
numero de conidios/gr de sustrato ( Visintin et al., 2005).
En trabajos realizados en Costa Rica, para controlar la enfermedad de Ralstonia
solanacearum se utilizaron enmiendas orgánicas como la broza de café, cachazas y
tres tipos de compost mezcladas con suelo ( Hernandez y Bustamante 2001).
Trichoderma asperellum inoculado en diversos sustratos reduce de manera
consistente las enfermedades Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici en plantas de
tomate y Rhizoctonia solani en plantas de pepino( Sant et al., 2003).
2. Gliocladium
Es un hongo filamentoso que se distribuye extensamente en el suelo, G. roseum, se
encuentra en asociación con otros en forma natural (Agrios, 2004). Se han
identificado varias razas del hongo Gliocladium virens para el control de Sclerotinia
y Rhizoctonia así como de la enfermedad de la podredumbre de los semilleros por
Fusarium y Pythium (Lampkin, 2001).
12
El hongo G. roseum es común de encontrar en asociación con otras especies en
forma natural y es descrito como un micoparásito de hifas y esclerocios. Existen
varios informes de la presencia de G. roseum en materiales senescentes,
descompuestos o esterados por enfermedades o por el contacto con herbicidas. Se
conoce que este hongo se desarrolla en los tejidos como un parásito no patogénico.
Aparentemente, el antagonismo de G. roseum contra patógenos como Botrytis
cinerea, Venturia inequalis, Verticillium dahliae, Sclerotinia sp., entre otros, ocurre
por micoparasitismo y/o por competencia por nutrientes y por nichos en las plantas
(Vargas y Wang, 1999).
Sutton et al. (1997), demostraron en ensayos de campo que G. roseum logró reducir
la incidencia de B. cinerea en frutos de fresa de 76 a 48 % y en estambres de 93 a
79 % en ocho cultivares. En ambos casos fue tan efectivo como los tratamientos con
captan.
Estos mismos autores, indican que G. roseum también es conocido como
micoparásito de hifas, esporas, esclerocios y otros cuerpos fructíferos de varios
hongos, entre ellos, B. cinerea. Además, produce inhibidores fúngicos y enzimas
(glucanasas) que degradan las paredes y así induce la pérdida de turgencia y causa
lisis de las hifas del patógeno. La inducción de resistencia a G. roseum en las plantas
hospederas ha sido comprobada preliminarmente en plantas de tomate, mediante
técnicas de inoculación y detección de ARNm para proteínas relacionadas con la
patogénesis.
13
III. MATERIALES Y MÉTODOS
A. Ubicación del ensayo
La colección de material vegetativo con síntomas de enfermedad de cultivos
hortícolas y suelo de la rizósfera se realizó en campos de productores en las
provincias del Guayas, Manabí y Santa Elena, durante los años 2007-2009.
La identificación de los fitopatógenos de suelo, microorganismos antagonistas,
pruebas de patogenicidad en condiciones de laboratorio e invernadero se efectuaron
en el Departamento Nacional de Protección Vegetal, Sección Fitopatología, de la
Estación Experimental del Litoral Sur “Dr. Enrique Ampuero Pareja” del Instituto
Nacional Autónomo de Investigaciones Agropecuarias INIAP. El centro
experimental esta ubicado a 26 km al este de Guayaquil en la vía Duran – Tambo,
parroquia Virgen de Fátima, cantón Yaguachi, provincia del Guayas. Se ubica en las
coordenadas 2º 15` 15” latitud sur y 73º 38` 40” longitud occidental y a 17 msnm1/,
con una pluviosidad de 1154.3 mm, temperatura media anual 26.5 ºC y 76.2 % de
humedad relativa media anual2/.
B. Factores estudiados
Se estudió el efecto de microorganismos antagonistas sobre fitopatógenos de suelo en
tomate, pimiento y sandía.
1/. INAMHI 2/ Fuente Fuerza Aérea Ecuatoriana, Base Taura, promedio de doce años (1995-2007)
14
C. Fases de investigación
Este estudio tuvo dos fases: laboratorio e invernadero.
1. Laboratorio
Las muestras de campo fueron codificadas para el aislamiento del antagonista y
del fitopatógeno y pruebas de confrontación.
1. 1. Identificación de microorganismos causales de enfermedades y
antagonistas de fitopatógenos de suelo
1. 1. 1. Causales de enfermedades
En muestras de tejido vegetal y suelo de campos de productores
hortícolas de las provincias de Guayas, Manabí y Santa Elena se procedió
a identificar, aislar, purificar y multiplicar los causales para las pruebas
in vitro. La identificación fue mediante observación directa y con
crecimiento del hongo en medio de cultivo papa dextrosa agar (PDA).
La observación directa consistió en adherir un pedazo de cinta adhesiva
transparente en el tejido vegetal infectado que se colocó en una gota de
ácido láctico sobre un portaobjeto; cuando por este método no se pudo
identificar el causal las muestras fueron colocadas en funda plástica que
contenía papel absorbente humedecido con agua estéril y se dejo por 72
15
horas; también se procedió al aislamiento en medio de cultivo PDA.
Estas muestras fueron desinfectadas con una solución de hipoclorito de
sodio al 1 % y lavadas tres veces con agua destilada estéril para eliminar
residuos de cloro y evitar que afecten el normal crecimiento de los
patógenos.
1.1.2. Microorganismos antagonistas de fitopatógeno de suelo
Para la identificación del antagonista se procedió a la siembra de suelo
procedente de campos hortícolas, en el laboratorio se procedió a hacer
una solución de un gramo de suelo en 100 ml de agua destilada estéril
(ADE), la cual se disolvió hasta 10-4. La siembra se realizó en PDA en
dos modalidades: 1) siembra directa de cada una de las diluciones y 2) las
diluciones fueron sometidas a 60 ºC durante 10 minutos en baño maría;
una vez que se observaron los crecimientos se procedió a la
identificación mediantes claves especializas.
1.1.3 Multiplicación de fitopatógeno y antagonista
Una vez aislado e identificado el fitopatógeno y el antagonista se
procedió a multiplicarlos en medio de cultivo PDA. Para la
multiplicación masiva del antagonista se utilizó cuatro sustratos: 1) tamo
de arroz, 2) arroz en cáscara, 3) fibra de caña de azúcar y 4) arroz pilado.
Cada uno de estos sustratos fueron previamente esterilizados en
autoclave a 15 psi y 121 °C durante 25 minutos.
16
1.1.4. Pruebas de patogenicidad
Con las colonias puras del fitopatógeno Sclerotium rolfsii y de las cepas
del antagonista Trichoderma se procedió a efectuar la prueba de
antagonismo in vitro. En ambos casos se tomó un disco de 5 mm de
crecimiento micelial y se procedió a colocarlo en un extremo de la caja
petri que contenía medio de cultivo PDA. En el extremo opuesto se
colocó un disco con el crecimiento del antagonista de 10 días de repique,
luego se dejó en incubación a temperatura ambiente y la evaluación se
realizó cada 12 o 24 horas hasta cumplir 120 horas y los resultados se
expresan en milímetro por horas. Por cada antagonista se usaron 25
cajas petri.
1.1.5. Diseño experimental
Para la interpretación de los resultados de los microorganismos
identificados se utilizaron histogramas de frecuencia.
Para la prueba de antagonismo de cada una de las cepas de Trichoderma
se utilizó un diseño completamente al azar con 25 unidades
experimentales. El número de tratamientos fue variable de acuerdo al
número de cepas identificadas en cada provincia.
2. Invernadero
Con las dos cepas del antagonista seleccionado en la fase de laboratorio, se
procedió al estudio de invernadero, que consistió en estudiar dosis del
antagonista y forma de aplicación.
17
2.1. Dosis del antagonista
2.1.1. Procedimiento
Se utilizaron fundas plásticas con capacidad de 1.5 kg que contenían
suelo estéril, las mismas que fueron inoculadas con el fitopatógenos
Sclerotium rolfsii y siete días después se agregó el antagonista en los 5
cm superficiales del suelo; posteriormente, se procedió a la siembra de
cada una de las plántulas de tomate hibrido Heatwave vffnt, pimiento
Quetzal y sandía Charleston Grey. Se utilizaron 10 fundas por cada
cultivo y por cada tratamiento.
Las evaluaciones de severidad se realizaron semanalmente durante dos
meses, se utilizó la escala 0 – 5 propuesta por el CIAT para
enfermedades de la raíz y tallo; donde:
0 = Sin síntomas visibles de la enfermedad;
1 = Decoloración ligera, ya sea sin lesiones necróticas o con un 10 % de
los tejidos de las raíces y hojas cubiertos con lesiones;
2 = Aproximadamente el 20 % de los tejidos están cubiertos con lesiones,
puede observarse decoloración fuerte;
3 = Aproximadamente el 30 % de los tejidos están cubiertos con
lesiones, se combinan con ablandamiento y pudrición;
4 = Aproximadamente el 50 % de los tejidos están cubiertos con
lesiones, se combinan con ablandamiento y reducción considerable del
sistema radical.
18
5 = Aproximadamente el 75 % o mas de los tejidos están afectados por
estado avanzado de pudrición, en combinación con la reducción severa
del sistema radical.
2.1.2. Tratamientos
La prueba de dosis por cada cepa tuvo 10 tratamientos los que se detallan
a continuación:
No. Tratamientos Dosis(g)
1 Antagonista 5
2 Antagonista 10
3 Antagonista 15
4 Antagonista 20
5 Antagonista 25
6 Antagonista 30
7 Suelo estéril
8 Suelo sin esterilizar
9 Suelo con Captan 5
10 Semilla con Captapan 5
2.1.3. Diseño Experimental
Se utilizó un diseño completamente al azar con 10 unidades
experimentales y las comparación de las medias se realizó mediante la
prueba de rangos múltiples de Duncan p=0.05. El esquema del análisis
de varianza fue el siguiente:
19
Fuente de variación Grados de libertad
Total 99
Tratamientos 9
Error experimental 90
2.2. Formas de aplicación
2.2.1. Procedimiento
La inoculación del fitopatógeno se realizó 14 días antes del transplante,
se usó suelo estéril con la metodología descrita en el ensayo de dosis para
los tratamientos 1 al 4. En los tratamientos 1 y 2 el antagonista se aplicó
siete días antes de siembra y en forma sólida (crecimiento de esporas
sustrato arroz pilado); en el tratamiento 1 fue a la superficie del suelo; el
tratamiento 2 se incorporó con cáscara de cacao. Los tratamientos 3 y 4
fueron aplicados en forma líquida (1x106 conidios/ml), el tratamiento 3
fue incorporado siete días antes del transplante y el tratamiento 4 siete
días después de la siembra. Se utilizaron cuatro testigos que consistieron
en suelo estéril, suelo de campo hortícola, suelo desinfectado con Captan
y suelo tratado con biológico comercial (GP).
Se usaron los cultivares de tomate Floradade, pimiento Irazu largo y
sandía Charleston Grey. Las evaluaciones de severidad fueron semanales
durante dos meses y se utilizó la escala del CIAT descrita anteriormente.
20
2.2.2. Tratamientos
El estudio tuvo 8 tratamientos los que se describen a continuación:
21
Tratamiento Características
1 Aplicado a la superficie del suelo, siete días antes
de la siembra.
2 Incorporación al suelo con M.O y del antagonista
siete días antes de la siembra.
3 Aspersión al suelo del antagonista siete días antes
de la siembra.
4 Aspersión al suelo del antagonista siete días
después de la siembra.
5 Suelo estéril.
6 Suelo sin esterilizar (campo hortícola).
7 Suelo tratado con fungicida.
8 Suelo tratado con antagonista comercial.
2.2.3. Diseño experimental
Se utilizó un diseño completamente al azar con 10 unidades
experimentales. La comparación de las medias se realizó mediante la
prueba de rangos múltiples de Duncan p=0.05. El esquema del análisis
de varianza fue el siguiente:
Fuente de variación Grados de libertad
Total 79
Tratamientos 7
Error experimental 72
3. Variables registradas
3.1. Microorganismos fitopatógenos
Se registró cada uno de los fitopatógenos encontrados en los muestreos
efectuados en campo hortícolas.
3.2. Antagonistas
22
En el laboratorio se registró la eficiencia y agresividad del antagonista,
esto permitió determinar dosis letal media (DL50) y el tiempo letal medio
(TL50); también en el laboratorio se estableció la velocidad de
crecimiento del hongo y se expresará en mm.hr.-1
3.3. Severidad
Se utilizó la escala del CIAT ya descrita anteriormente en
procedimientos.
IV. RESULTADOS
4.1. Identificación de microorganismos antagonistas de fitopatógenos de suelo y
causales de enfermedades.
En la Figura 1 se muestran las barras de frecuencia general de microorganismos
en muestras de suelo y tejidos de tomate, pimiento y sandía, procedentes de
campos hortícolas de las provincias de Guayas, Manabí y Santa Elena
En la provincia del Guayas se muestrearon 72 fincas en el cultivo de tomate
(Cuadro 1 anexo), 66 con pimiento (Cuadro 2 anexo) y 16 con sandía (Cuadro
3 anexo), se encontró 30, 30 y 9 muestras con Trichoderma en su orden; las
23
muestras con Rhizoctonia y Sclerotium las frecuencias fluctuaron ente 2 y 4, las
demás no tuvieron ningún crecimiento.
En la provincia de Manabí se recolectaron 14 muestras en el cultivo de tomate
(Cuadro 4 anexo), 58 en pimiento (Cuadro 5 anexo) y 2 (Cuadro 6 anexo) en
sandía, solamente se encontró 2 muestras con Trichoderma, 4 campos cultivados
con tomate que presentaron Rhizoctonia y uno en el cultivo de pimiento.
En Santa Elena, se recolectaron 9 muestras en el cultivo de tomate (Cuadro 7
anexo), 42 en pimento (Cuadro 8 anexo) y 2 en sandía (Cuadro 9 anexo), dos
muestras en el cultivo de tomate tuvieron Trichoderma y en pimiento 20, de las
cuales en 2 se observó Rhizoctonia y 2 con Sclerotium, en sandía se recolectó
solamente 1 muestras en las que se encontró 1 Trichoderma.
En el anexo 10 se muestran los resultados de la secuenciación del acido nucléíco
mediante rRNA de las cepas G-08 y SE-034, ambas pertenecen a la especie
Trichoderma asperellum; SE-034 difiere de G-08 porque tiene 6 bases
nitrogenadas más en la cadena del ácido nucléíco.
24
Figura1. Frecuencia de microorganismos antagonistas y fitopatógenos.
2007-2008.
4.2. Selección de cepas eficientes de antagonistas de fitopatógenos de suelo en
condiciones de laboratorio e invernadero.
4.2.1. Laboratorio
En el Cuadro 1 se observa el crecimiento micelial de las cepas de Trichoderma
aisladas de la provincia de Guayas, durante 120 horas con intervalos de 24
horas sobre el fitopatógeno S. rolfsii.
La cepa G-01 a las 24 horas creció 17.3 mm, a las 48 horas 10.8 mm, a 72 horas
6.6 mm, el fitopatógeno S. rolfsii creció 7.9, 8.3 y 6.5 mm en el mismo intervalo
de tiempo. La cepa G-03 creció 21.9, 16.4 y 19.1 mm a las 24, 48 y 72 horas en
su orden y S. rolfsii 1.7, 10.7 y 17.7 mm en el mismo orden; la cepa G04 con
13.0, 11.4 y 5.9 mm con relación a S. rolfsii 2.4, 7.2 y 4.1 mm respectivamente.
La cepa G-08 creció rápido entre 24 (21.5 mm) y a las 48 horas 13.6 mm y
25
producción de esporas (Foto 1), S. rolfsii su máximo crecimiento fue a las 48
horas con 8.9 mm. La cepa G-10 fue 18 mm frente a S. rolfsii que de 5.6 mm se
incrementó a 18 mm a las 72 horas; G-20, G-24, g-27, G-032 y G-034a tuvieron
similar tendencia de crecimiento micelial, durante horas.
Cuadro 1. Crecimiento micelial (mm/h)1/ de cepas de Trichoderma de la
provincia del Guayas. 2008
Cepas Tiempo en horas
24 48 72 96 120Ant. Fit. Ant. Fit. Ant. Fit. Ant. Fit. Ant. Fit.
G-01 17,30 7,94 10,78 8,28 6,64 6,50 2,08 4,98 0,06 1,78
G-03 21,92 1,72 16,42 10,70 19,08 17,70 9,72 11,00 1,16 9,44
G-04 13,00 2,40 11,40 7,24 5,94 4,08 3,30 2,84 2,52 2,10
G-08 21,50 1,02 13,60* 8,86 5,58 5,26 0,98 2,92 0,32 1,88
G-10 18,00 5,60 14,00 8,30 18,00 18,00 9,20 13,00 3,38 13,00
G-20 12,00 6,54 14,00 11,00 7,30 6,80 4,00 4,70 0,68 2,58
G-24 19,00 7,50 15,00 9,60 3,90 5,90 1,10 5,80 0,16 3,76
G-27 20,00 8,38 13,00 9,28 2,80 6,06 1,20 3,84 0,32 2,68
G-32 12,72 4,46 24,22 16,70 21,21 12,34 6,22 6,92 2,06 3,34
G-34 23,00 0,80 25,00 8,10 18,00 9,10 7,90 9,90 1,86 6,70
*Esporulación1/ promedio de 25 unidades experimentales;
Ant: antagonista, Fit: fitopatógeno
Foto 1. Esporulación de T. asperellum cepa G-08.
26
En el Cuadro 2 se muestran los resultados de la prueba de patogenicidad de
cinco cepas de Trichoderma procedentes de la provincia de Santa Elena, las tres
primeras se confrontaron con S. rolfsii y las dos últimas con Rhizoctonia sp. Las
cepas SE-027 y SE-029 tuvieron un máximo crecimiento hasta las 48 horas con
crecimientos de 15 y 11mm para el primero 15 a 25 mm/hora en el segundo,
S. rolfsii a 48 horas tuvo un máximo crecimiento de 9.4 mm/hora. La cepa
SE-034 a las 72 horas creció 61.8 mm frente a S. rolfsii con 38.8mm; esta misma
cepa al confrontarla con Rhizoctonia tuvo un crecimiento máximo de 14 mm a
las 96 horas. La cepa SE-041b tuvo 16 mm de crecimiento a las 96 horas.
Cuadro 2. Crecimiento micelial (mm/h)1/ de cepas de Trichoderma de la
provincia de Santa Elena. 2008
Tiempo horas
S.E-027 S.E-029 S.E-034 S.E-034 S.E-041bAnt Fit** Ant Fit** Ant Fit** Ant Fit * Ant Fit *
24 15,0 8,6 20,0 6,4 4,2 0,3
48 11,0 8,4 15,0 9,4 7,7 0,0 15,0 0,0
72 1,2 6,0 5,5 5,4 61,8 38,8
96 0,6 5,2 1,6 4,4 5,3 8,1 14,0 0,0 16,0 0,2
120 1,4 1,8 0,1 2,4 0,3 3,9 6,1 0,0 7,0 0,0
1/ promedio de 25 unidades experimentales * Rhizoctonia sp.** S. rolfssiAnt: antagonista, Fit: fitopatógeno
En el Cuadro 3 se presentan los datos de la prueba de patogenicidad de seis
cepas de Trichoderma procedentes de la provincia de Manabí, las que se
confrontaron frente a S. rolfsii. La cepa M-07 su máximo crecimiento fue a las
24 horas con 16 mm, la cepa M-013 creció 13 mm a las 24 horas; M-016 tuvo
20 mm a las 24 horas, las cepas M-052b, M-055a y M-055d a las 72 horas
crecieron 40, 64.4 y 61.1 mm en su orden.
27
Cuadro 3. Crecimiento micelial (mm/h) de cepas de Trichoderma de la provincia de Manabí. 2008.
Tiempo horas
M07 M-013 M-016 M-052b M-055a M-055d
Ant Fit Ant Fit Ant Fit Ant Fit Ant Fit Ant Fit24 16 7,3 13 6,8 14 8,7
48 11 7,8 12 7,3 20 8,5
72 5,3 5,5 5,5 5,4 6,8 5,4 60 40 64,4 40,5 61,1 41,7
96 1,3 5,1 2,4 4,9 1,1 4,1 5,4 8,3 1,74 7,98 5,4 7,58
120 0,82 2,7 2,6 2,6 0,7 0,7 0,2 3,9 1,46 3,46 0,4 1,9
1/ promedio de 25 unidades experimentalesAnt: antagonista, Fit: fitopatógeno S. rolfsii
4.2.2 Multiplicación de fitopatógenos y antagonistas
Para la multiplicación del fitopatógeno S. rolfsii se utilizó medio de cultivo papa
dextrosa agar (PDA).
En las figuras 2 y 3 se observan los porcentajes promedios del crecimiento de
dos cepas de T. asperellum durante 4 días. El mayor crecimiento de ambas cepas
fue en el sustrato arroz pilado con un promedio 43.8 para la cepa G-08 y 19 para
SE-034 iguales estadísticamente entre sí y diferentes de los demás tratamientos.
28
Figura 2. Porcentaje promedio de cuatro evaluaciones del crecimiento micelial de dos cepas de Trichoderma asperellum en tres sustratos.
Figura 3. Porcentaje promedio de crecimiento micelial de dos cepas de Trichoderma asperellum en tres sustratos.
4.2.3. Invernadero
4.2.3.1. Dosis de aplicación
En la Figura 4 se muestran las barras de severidad en plántulas de tomate
causada por S. rolfsii en el ensayo con la cepa Trichoderma G-08. El
tratamiento 4 (20 g de sustrato que contiene 1x206 conidios por gramo) tuvo el
valor más bajo con 0.15% de severidad, igual estadísticamente al tratamiento
Captan que tuvo 0% de severidad; las dosis 5, 10 y 15 gramos de sustrato
tuvieron los valores mas altos con 2.02, 2.31 y 2.13% de severidad e iguales
estadísticamente los dos últimos entre si. Los demás tratamientos tuvieron
valores menores del 1%, las dosis con 25 y 30g fueron iguales estadísticamente
entre si.
29
Figura 4. Severidad causada por S. rolfsii en plántulas de tomate tratadas con
T. asperellum cepa G-08, en función de dosis de aplicación
E.E.L.S.2009
En la Figura 5 se muestran las barras de severidad causada por S. rolfsii en
plántulas de pimiento en el ensayo con el antagonista T. asperellum cepa G-08.
Los tratamientos con valores cero fueron 2, 5, 6, 7 y 10, iguales estadísticamente
entre si. Los tratamientos 1, 4 y 9 alcanzaron valores mas altos
respectivamente con 0.47, 0.35 y 0.42% de severidad, y los tratamientos 3 y 8
con 0.18 % y 0.12% respectivamente fueron iguales entre si.
30
Figura 5. Severidad causada por S. rolfsii en plántulas de pimiento tratadas con
T. asperellum cepa G-08, en función de dosis de aplicación E.E.L.S.
2008
En la Figura 6 se muestran las barras de severidad en las plántulas de sandia, de
acuerdo a los resultados del análisis de varianza existieron diferencias
significativas entre los tratamientos. El tratamiento suelo estéril tuvo el valor
mas bajo de severidad con 0.04 diferente de los demás tratamientos; los valores
mas altos estuvieron entre 1.48 a 2.09 y fueron iguales entre si.
31
Figura 6. Severidad causada por S. rolfsii en plántulas de sandía tratadas con
T.asperellum cepa G-08, en función de dosis de aplicación
E.E.L.S.2009
En la Figura 7 se muestran las barras de severidad causada por S. rolfsii en
plántulas de tomate con el antagonista T. asperellum cepa SE-034. Los
tratamientos con valores bajos fueron el 2 y 8 con 1.72 y 1.76% de severidad en
su orden. Los tratamientos con valores mas altos fueron el 4, 6 y 10 con 2.16,
2.24 y 2.25 % de severidad respectivamente pero diferente estadísticamente
entre si de los tratamientos 1 y 7 con 1.84% y 1.85% que alcanzaron valores de
severidad fueron iguales estadísticamente entre si.
32
Figura 7. Severidad causada por S. rolfsii en plántulas de tomate tratadas con
T. asperellum cepa SE-034, en función de dosis de aplicación
E.E.L.S.2008 - 2009
En la Figura 8 se muestran las barras de severidad causada por S. rolfsii en
plántulas de pimiento en el ensayo con el antagonista T. asperellum cepa SE-
034. Los tratamientos 3, 7 y 8 con valores 1.18 estadísticamente fueron iguales
entre si. Los tratamientos 2, 4, 5 y 10 todos con 1.31% , de severidad
estadísticamente son iguales entre sí.
33
Figura 8. Severidad causada por S. rolfsii en plántulas de pimiento tratadas con
T. asperellum cepa SE-034, en función de dosis de aplicación
E. E. L. S. 2009
En la Figura 9 de acuerdo a los resultados del análisis de varianza existió
diferencias significativas entre los tratamientos, el valor mas bajo fue para el
tratamiento 10 con 0.08% de severidad, y los valores mas alto de severidad
fueron para los tratamientos 1, 2, 3, 4, 5 y 6 con valores de 2.18, 1.60, 2.43, 3.00,
2.15 y 1.91 en su orden y los tratamientos 7, 8 y 9 estadísticamente fueron
iguales con valores 0.86, 0.65 y 1.16% respectivamente.
34
Figura 9. Severidad causada por S. rolfsii en plántulas de sandía tratadas con
T.asperellum cepa SE-034, en función de dosis de aplicación
E. E. L. S. 2009
4.2.3.2 Formas de aplicación
Los resultados de severidad causada por S. rolfsii en plántulas de tomate,
pimiento y sandia del estudio de formas de aplicación en condiciones de
invernadero se muestran en las siguientes figuras.
En la Figura 10 los porcentajes de severidad de fluctuaron entre 0.0 a 0.5, de
acuerdo a los resultados del análisis de varianza no existió diferencias
significativas entre los tratamientos con valor de para la cepa de Trichoderma
asperellum G-08.
35
Figura 10. Severidad causada por S. rolfsii en plántulas de tomate tratadas con
T.asperellum cepa. G-08, en función de formas de aplicación
E. E. L. S. 2009
En la Figura 11; se muestran las barras de severidad para las plántulas de
pimiento de acuerdo a los resultados del análisis de varianza existió diferencias
significativas entre los tratamientos, el valor mas alto fue para el tratamientos 4
con 1.0 y los valores mas bajos fueron los tratamientos 3, 5, 6 y 7 con valor de
0.0 y para los tratamientos 1, 2 y 9 estadísticamente fueron iguales con valores
de 0.33 y 044 para la cepa G-08.
36
Figura 11. Severidad causada por S. rolfsii en plántulas de pimiento tratadas con
T. asperellum cepa. G-08, en función de dosis de aplicación
E. E. L. S. 2009
En la Figura 12; se puede observar las barras de severidad causada por el hongo
S. rolfssi en plántulas de sandia, de acuerdo a los resultados del análisis de
varianza existió diferencias significativas entre los tratamientos, el valor mas
bajo para los tratamientos 4, 6, 7 y 8 con valor de 0.0 a 0.06 estadísticamente
fueron iguales y para los tratamientos 2, 3 y 5 existió diferencia con valores de
0.16 0.48 y 0.88 en su orden.
37
Figura 12. Severidad causada por S. rolfsii en plántulas de sandía tratadas con
T.asperellum cepa G-08, en función de dosis de aplicación E.E.L.S.
2009
En la Figura 13; se observa las barras de severidad causad por S. rolfssi en
plántulas de tomate, de acuerdo a los resultados del análisis de varianza existió
diferencias significativas entre los tratamientos, el valor mas alto fue para el
tratamientos 4 y 5 con valor de 0.41 y 0.98 y los valores mas bajos fueron los
tratamientos 1, 4, 6, 7 y 8 con valores de 0.0 y 0.05 estadísticamente fueron
iguales.
38
Figura 13. Severidad causada por S. rolfsii en plántulas de Tomate tratadas con
T. asperellum cepa. SE-034, en función de dosis de aplicación
E. E. L. S. 2009
En la Figura 14; para las plántulas de pimiento de acuerdo a los resultados del
análisis de varianza existió diferencias significativas entre los tratamientos, los
valores mas alto fueron para los tratamientos 1, 4, 8 con valores de 0.33 y 0.41
y los valores mas bajos fueron los tratamientos 2, 3, 5, 6 y 7 con valor de 0.0
que estadísticamente fueron iguales.
39
Figura 14. Severidad causada por S. rolfsii en plántulas de pimiento tratadas con
T. asperellum cepa SE034, en función de dosis de aplicación
E. E. L. S. 2009
En la Figura 15; se observan las barras de severidad en plántulas de sandia
causadas por S. rolfsii, de acuerdo a los resultados del análisis de varianza
existió diferencias estadísticas. Los tratamientos con valores mas altos fueron el
1 y 4 con 1.36 y 1.21 en su orden, y fueron estadísticamente iguales entre si. Los
tratamientos. Con valores mas bajos fueron el 5, 6 y 7 con valor 0.0,
estadísticamente iguales.
40
Figura 15. Severidad causada por S. rolfsii en plántulas de sandía tratadas con T. asperellum cepa. SE034, en función de dosis de aplicación
E. E. L. S. 2009
41
V. DISCUSIÓN
Identificación de antagonistas y fitopatógenos de suelo
De 281 muestras colectadas en campos cultivados con tomate, pimiento y sandía
en las provincias del Guayas, Manabí y Santa Elena, 95 correspondieron al
género Trichoderma con 33.8% de efecto antagonista superior a la información
efectuada en Costa Rica por Sánchez, Bustamante y Shatottock (1999)
determinaron que de 137 aislamientos 32 mostraron efecto antagónico (23.4%) y
redujeron significativo del tamaño de la lesión en condiciones de laboratorio, de los
cuales se seleccionaron cinco los de mayor potencial para el control de Phytophthora
infestans en tomate.
De los 95 aislamientos de Trichoderma se confrontaron 19 cepas frente a S.
rolfsii y 3 cepas para Rhizoctonia sp en condiciones de laboratorio, se
seleccionaron dos cepas que correspondieron a los aislamientos codificados G-
08 y SE-034 por su capacidad de inhibir rápidamente el desarrollo del
fitopatógeno; resultados similares reportan Sandoval y López (2002) en Cuba en
pruebas in vitro con un grupo de aislamientos de Trichoderma pertenecientes al
cepario del Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal (INISAV),
confirmándose la efectividad del aislamiento de Trichoderma harzianum cepa
A34 para la reducción de patógenos del suelo como Phytophthora parasitica,
Rhizoctonia solani y S. rolfsii.
42
Las cepas de código G-08 y SE-034 corresponden a la especie T. asperellum
reportada por Sant et al (2003) como eficiente para el control de los
fitopatógenos Fusarium y Rhizoctonia en tomate y pepino, por otra parte,
Casanova et al (2008), lo reportan además para F. oxysporum f. sp. dianthi, F.
oxysporum f. sp. lycopersici, Pyhtium aphadermatum, Sclerotinia spp. y Botrytis
cinerea e incluso para patógenos que producen enfermedades aéreas.
En cuanto a la multiplicación masiva del antagonista en los tres sustratos
evaluados el de mejor crecimiento fue en arroz pilado, debido a resultados
similares de acuerdo a la información de Visitin et al (2005) quienes obtuvieron
buenos resultados con arrocillo, aunque difieren de los estudios de Jiménez et al
(2003) en los reportan que las mejores formulaciones fueron con cascarilla de
arroz, fibra de caña y arroz paddy.
En condiciones de invernadero con la incorporación del antagonista más cáscara
de cacao tuvo efecto sobre la severidad de la enfermedad causada por S. rolfsii,
lo que posiblemente esta relacionado con la presencia de las fibras o celulosa
presente en la cascara de cacao, por otra parte, estudios sobre el control
biológico de la marchitez bacterial en tomate con el uso de enmiendas
orgánicas efectuado por Hernández y Bustamante (2001) indican que la
severidad de la enfermedad se redujo con el uso de compost.
43
VI. CONCLUSIONES
En base a los resultados obtenidos en el presente estudio se concluye:
De 281 muestras suelo y tejido vegetal colectadas de las provincias del Guayas,
Manabí y Santa Elena en los cultivos de tomate, pimiento y sandía, 95
aislamientos correspondieron al Género Trichoderma, de los cuales dos cepas
tuvieron potencial antagonista (G-08 y SE-034) y se identificaron
molecularmente como T. asperellum.
En pruebas de invernadero, Trichoderma cepa G-08 en dosis de 20 g de sustrato
conteniendo 1x206 esporas por gramo, reduce la severidad causada por S. rolfsii
en los cultivos de tomate, pimiento y sandía.
Con la cepa SE-034 en dosis de 15 gramos de sustrato de Trichoderma reduce la
severidad de S. rolfsii para el cultivo de pimiento y tomate; en el cultivo de
sandía con 10 gramos de sustrato que contiene 1x106 conidios/gramo.
La forma de aplicar Trichoderma cepa G-08 sobre S. rolfsii en el cultivo de
tomate debe es 7 días antes del transplante incorporado con materia orgánica
con los primeros síntomas de la enfermedad, la cepa Trichoderma SE-034 para
controlar S. rolfsii en el cultivo de tomate se debe aplicarse 7 días antes del
trasplante incorporado con materia orgánica, en el cultivo de pimiento aplicar 7
44
días antes de la siembra con materia orgánica o en forma líquida. En el cultivo
de sandia se debe hacer en forma liquida 7 días antes del trasplante.
VII. RECOMENDACIONES
En base a los resultados obtenidos se recomienda:
Efectuar estudios de dosis y frecuencia de aplicación en condiciones de campo .
Buscar alternativas con sustratos como fuente de materia orgánica para
incorporarlo con el antagonista para el combate de fitopatógenos de suelo.
45
VIII. RESUMEN
Los cultivos hortícolas son afectados por fitopatógenos de suelo que reducen los
rendimientos y generan aumento en el costo de producción por efectos de
control. El estudio tuvo los siguientes objetivos: 1. Identificar microorganismos
antagonistas de fitopatógenos de suelo en los cultivos de tomate, pimiento y
sandía. 2. Seleccionar cepas eficientes de antagonistas de fitopatógenos de suelo
en los cultivos citados en condiciones de laboratorio e invernadero.
Para el estudio se colectaron muestras de suelo y tejido vegetal en campos de
productores de las provincias de Guayas, Manabí y Santa Elena, en laboratorio
se identificaron 95 aislamientos del género Trichoderma de las cuales dos cepas
tuvieron potencial antagonista (G-08 y SE-034) ambas fueron identificadas
molecularmente como T. asperellum. En condiciones de invernadero se
evaluaron dosis y frecuencias de aplicación.
En el estudio de dosis se determinó que 1 x 206 conidios de T. asperellum cepa
G-08 en los cultivos de tomate, pimiento y sandia tienen efecto en la reducción
de la severidad de la infección de S. rolfsii; por otra parte, la cepa SE-034 con
dosis de 15 gramos par los cultivos de tomate y pimiento; en sandia 10 gramos
de sustrato.
En la frecuencia de aplicación T. asperellum cepa G-08 para el cultivo de
tomate, pimiento y sandía debe aplicarse 7 días antes del trasplante en forma
46
líquida e incorporada con materia orgánica para tratamiento preventivo y con
los primeros síntomas de la enfermedad en forma curativa, igual procedimiento
debe realizarse con la con la cepa SE-034 .
IX.SUMMARY
Horticultural crops are affected by soil pathogens that reduce performance and
generate increased cost of production for control purposes. The study had the
following objectives: 1. Identification of antagonistic microorganisms in soil
phytopathogenic tomato, peppers and watermelon. 2. Select strains efficient
antagonists of soil pathogens on crops mentioned in laboratory and greenhouse
conditions.
For the study were collected soil samples and plant tissues producing fields in
the provinces of Guayas, Manabi and Santa Elena, Laboratory identified 95
isolates of the genus Trichoderma strains two of which had potential antagonist
(G-08 and SE - 034) both were molecularly identified as T. asperellum.
Under greenhouse conditions were evaluated dose and frequency of application.
In the study of dose was determined that 1 x 206 conidia of T. asperellum strain
G-08 in tomato, pepper and watermelon are effective in reducing the severity of
the infection of S. rolfsii, on the other hand, SE-034 strain with two doses of 15
grams of tomato and pepper crops; in watermelon 10 grams of substrate.
In the frequency of application T. asperellum strain G-08 for growing tomatoes,
peppers and watermelon should be applied 7 days before transplantation in
liquid form and incorporated with organic matter for preventive treatment and
47
early symptoms of the disease in a curative, the same procedure should be
performed with the with strain SE-034.
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XI.ANEXO
52
Cuadro 1 A. Recolección de muestras e identificación de antagonista y fitopatógenos en el cultivo de tomate,
Guayas 2007 – 2009
No Código LugarTipo de muestraSuelo Tejido
1 G-006 Vuelta Larga2 G-008 San Miguel-El Moro-Playas Trichoderma Rhizoctonia3 G-016 Vuelta Larga Trichoderma4 G-018 Los Bancos - Taura Trichoderma5 G-019 Los Bancos - Taura Trichoderma6-7 G-020 -G-021 Los Bancos - Taura Rhizoctonia/Sclerotium
8-9 G-022, G-023 Santa Isabel-Vuelta Larga10-11-12- 13-14
G-024,G-025, G-026,G-027,G-028
Santa Isabel-Vuelta Larga Trichoderma
15-16 G-029 ,G-030 Los Bancos - Taura Trichoderma
17 G-036a Beldaco - Roberto Astudillo Trichoderma18 G-036b Beldaco - Roberto Astudillo19 G-037a Playones 2 Trichoderma20 G-037b Playones 221 G-041a Cuatro Cuadras - Taura Trichoderma22-23- 24-25
G-041b ,G-041c,G-041d, G-041e
Cuatro Cuadras - Taura
26-27 G-042a ,G-042b Quince de noviembre - Taura28 G-044a Cristo Rey - Yaguachi Trichoderma Sclerotium29 G-044b Cristo Rey - Yaguachi30 G-044c Cristo Rey - Yaguachi Trichoderma31 G-044d Cristo Rey - Yaguachi32 G-047f San Fernando - Yaguachi33 G-048a Las Mercedes - Yaguachi
34-35 G-049c, G-049d El Cóndor - Yaguachi
36-37 G-050a, G-050b Hda. Sotomayor - Yaguachi38 G-051a El Verdum _ Yaguachi Trichoderma39 G-051b El Verdum _ Yaguachi40-41 G-052a ,G-052b Nueva Era - Yaguachi42 G-053a Hda. Rosa Cristina Trichoderma43 G-053b Hda. Rosa Cristina44 G-054c Las Palmas - Yaguachi45-46- 47-48
G-055a ,G-055b , G-055c, G-055d
Base Aérea Taura (Atras)
49 G-056a Nueva Era - Yaguachi Trichoderma50 G-056b Nueva Era - Yaguachi51-52- 53-54
G-056c G-056d, G-056e G-056f
Nueva Era - Yaguachi Trichoderma
55 G-058a Cristo Rey - Yaguachi Trichoderma Rhizoctonia56 G-058b Cristo Rey - Yaguachi
53
57 G-059 Rcto. 15 de noviembre - Taura Trichoderma
58 G-060a Rcto. Cuatro Cuadras - Taura Trichoderma
59 G-060b Rcto. Cuatro Cuadras - Taura
60-61-62G-062a ,G-062b,G062e Las Palmas - Yaguachi
63 G-063a Rcto. 4 de Mayo - Yaguachi64 G-064c Rcto. Santa Rosa II - Yaguachi65 G-065c Rcto. Santa Rosa I - Yaguachi66 G-068c Agua Santa Trichoderma67 G-068d Agua Santa Sclerotium68 G-068e Agua Santa69-70 G-070a, G-070b Nueva Era - Yaguachi Trichoderma
71 G-071c Buenos Aires72 G-071d Buenos Aires Trichoderma
Cuadro 2 A. Recolección de muestras e identificación de antagonista y fitopatógenos en el
cultivo de pimiento, Guayas 2007 - 2009
No Código LugarTipo de muestra
Suelo Tejido1 G-003 km 4.5 vía Milagro Trichoderma2 G-004 Vuelta Larga Trichoderma3 G-005 Vuelta Larga4 G-007 San Miguel-El Moro-Playas Trichoderma5 G-009 San Juan -Playas Trichoderma6 G-010 San Lorenzo-Playas Trichoderma7 G-011 km 45 vía Guayaquil - Progreso Trichoderma8-9 G-012 ,G-013 km 45 vía Guayaquil - Progreso
10-11 G-014 ,G-015 Vuelta Larga Trichoderma
12 G-034aCristo del Consuelo - Roberto Astudillo
Trichoderma
13 G-034bCristo del Consuelo - Roberto Astudillo
14 G-040a Cerecita Trichoderma
15 G-040b Cerecita
16 G-043a Las Palmas - Yaguachi Trichoderma Rhizoctonia17-18 G-043b, G-043c Las Palmas - Yaguachi
19-20-21G-047a ,G-047b, G-047c
San Fernando - Yaguachi
22 G-047d San Fernando - Yaguachi Trichoderma23 G-048b Las Mercedes - Yaguachi Sclerotium24 G-048c Las Mercedes - Yaguachi25-26 G-050c, G-050d Hda. Sotomayor - Yaguachi
27 G-050e Hda. Sotomayor - YaguachiTrichoderma-Rhizoctonia
Trichoderma-Rhizoctonia
28 G-050f Hda. Sotomayor - Yaguachi29-30 G-052c ,G-052d Nueva Era - Yaguachi
31 G-054a Las Palmas - Yaguachi Trichoderma32 G-054b Las Palmas - Yaguachi33 G-055f Base Aérea Taura (Atras) Trichoderma Rhizoctonia34 G-055g Base Aérea Taura (Atras)35 G-057 El Cóndor - Yaguachi36 G-061a Rcto. Caimetal - Taura Trichoderma37 G-061b Rcto. Caimetal - Taura38 G-061d Rcto. Caimetal - Taura Trichoderma39-40 G-062c, G-062d Las Palmas - Yaguachi
41-42 G-064a, G-064b Rcto. Santa Rosa II - Yaguachi
43 G-064d Rcto. Santa Rosa II - Yaguachi Trichoderma44 G-064e Rcto. Santa Rosa II - Yaguachi45 G-065g Rcto. Santa Rosa I - Yaguachi Rhizoctonia -
54
Sclerotium46 G-065h Rcto. Santa Rosa I - Yaguachi47 G-066b Playas - San Antonio50 G-066c Playas - San Antonio Trichoderma51 G-067a El Paraiso Trichoderma52 G-067b El Paraiso53-54 G-067c ,G-067d El Paraiso Trichoderma
55-56 G-067e ,G-067f El Paraiso
57-58 G-067g ,G-067h El Paraiso Trichoderma
59 G-068a Agua Santa Trichoderma60 G-068b Agua Santa61 G-069a Ataco Trichoderma62 G-069b Ataco63 G-071e Buenos Aires Trichoderma
64-65 -66G-075 ,G-076, G-077
Simón Bolívar Trichoderma
Cuadro 3 A. Recolección de muestras e identificación de antagonista y fitopatógenos en el
cultivo de sandia, Guayas 2007 - 2009
NoCódigo Lugar
Tipo de muestra
Suelo Tejido
1 G-001 E. E. BOLICHE Trichoderma Rhizoctonia
2 G-002 E. E. BOLICHE Trichoderma
3 G-031Flor del Bosque - Roberto
AstudilloTrichoderma
4 G-032Venecia de Chimbo - Roberto
AstudilloTrichoderma
5 G-033Cristo del Consuelo - Roberto
AstudilloTrichoderma
6-7 G-035a ,G-035bSan Antonio - Roberto Astudillo
8 G-038 Playones 2 Trichoderma
9 G-039 Playones 1 Trichoderma
10-11 G-040c ,G-040d Cerecita
12-13 G-049e, G-049f El Cóndor - Yaguachi
14 G-066a Playas - San Antonio Trichoderma
15-16 G-074b, G-074c La Chonta - Pedro Carbo
Cuadro 4 A. Recolección de muestras e identificación de antagonista y fitopatógenos en el
cultivo de tomate, Manabí 2007 - 2009
No Código LugarTipo de muestra
Suelo Tejido
1 M-001 Rocafuerte - Valdez
2 M-002 Rocafuerte - Valdez Trichoderma
3M-003 Rocafuerte - Valdez
Trichoderma-Rhizoctonia
4 M-004 Rocafuerte - Valdez Rhizoctonia
5-6-7-8 M-005 ,M-040a, M- Lodana - El Nispero
55
040b, M-040c
9-10 M-041a ,M-041b El Paramo - Jipijapa
11-12-13M-047a ,M-047b, M-059
Lodana - El Nispero
14 M-064 Cady Adentro
Cuadro 5 A. Recolección de muestras e identificación de antagonista y fitopatógenos en el
cultivo de pimiento, Manabí 2007 - 2009
No Código LugarTipo de muestra
Suelo Tejido
1 M-006 Lodana - El Nispero
2-3-4-5-6-7-8-9
M-009 ,M-010, M-011 ,M-012, M-013, M-014, M-018, M-025
Rocafuerte - Valdez
10-11-12-13-14-15-16
M-027 M-028 M-029 M-030 M-034 M-035 M-036
Rocafuerte - Las Peñas
17-18 M-037a M-037b Rocafuerte - Valdez
19-20 M-039a- M-039b Rocafuerte - Resbalon
21-22 M-041c ,M-041d El Paramo - Jipijapa
23-24 M-042a ,M-042b Las Américas - Jipijapa
25-26-27M-044a, M-044b, M-045
Canta Gallo
28-29-30-31-32-33-34-35
M-049a, M-049b, M-049c ,M-051a, M-051b, M-051c ,M-052a, M-052b
Las Peñas
36-37-38-39-40
M-055a, M-055b, M-055c M-056a, M-056b
Mejías Higueron
41-42 M-057a M-057b Paramo
43 M-058a Paramo Rhizoctonia
44-45-46-47
M-058b ,M-058c, M-058d, M-058e
Paramo
48 M-061 Lodana
49-50-51M-062a, M-062b ,M-062c
Cady Adentro
52 M-066 El Tomate - Portoviejo
53 M-067b Saquitopo
54-55 M-068a, M-068b Casas Viejas - Jipijapa
56-57-58M-069a ,M-069b, M-070
Jipijapa
56
Cuadro 6. A. Recolección de muestras e identificación de antagonista y fitopatógenos en el
cultivo de sandia, Manabí 2007 - 2009
No Código LugarTipo de muestra
Suelo Tejido
1-2 M-007 ,M-008 Canta Gallo - Puerto Cayo
Cuadro 7. A. Recolección de muestras e identificación de antagonista y fitopatógenos en el
cultivo de tomate, Santa Elena 2007 - 2009
No Código LugarTipo de muestra
Suelo Tejido
1 SE-003Eloy Alfaro - Pechiche - Chanduy
2 SE-017 Hda. La Victoria - Salinas
3 SE-035d La Azúcar
4-5 SE-042a ,SE-042b Chanduy - Pechiche
6 SE-045b Chanduy - Pechiche Trichoderma
7 SE-048a Manglaralto Trichoderma
8-9 SE-048b ,SE-048c Manglaralto
Cuadro 8 A. Recolección de muestras e identificación de antagonista y fitopatógenos en el
cultivo de pimiento, Santa Elena 2007 - 2009
No Código LugarTipo de muestra
Suelo Tejido
1 SE-002Eloy Alfaro - Pechiche - Chanduy
Trichoderma
2 SE-010 Chanduy - Pechiche
3 SE-011 Chanduy - Pechiche
4 SE-012 Hda. La Victoria - Salinas Trichoderma
5 SE-013 Hda. La Victoria - Salinas Trichoderma
6-7-8SE-014 SE-015 SE-016
Hda. La Victoria - Salinas
9 SE-019 San Rafael Trichoderma
10 SE-020 San Rafael Trichoderma
11 SE-021 San Rafael
12 SE-022 Entrada La AzúcarTrichoderma
Rhizoctonia
57
13 SE-023 Entrada La Azúcar
14 SE-024 La Azúcar Trichoderma
16 SE-025 La Azúcar Trichoderma
Rhizoctonia
17 SE-026 La Azúcar Trichoderma
18 SE-028 El Cerrito Trichoderma
19 SE-029 El Cerrito Trichoderma
20 SE-030 El Cerrito Trichoderma
21 SE-031 El Cerrito
22 SE-032 Chanduy - Pechiche Trichoderma
23 SE-033 Chanduy - Pechiche Trichoderma
24 SE-034c La Azúcar Sclerotium Trichoderma
25 SE-034d La Azúcar Sclerotium
26 SE-035a La Azúcar Trichoderma
27-28-29SE-035b SE-036 SE-037b
La Azúcar
30 SE-038a El Cerrito Trichoderma Trichoderma
31 SE-038b El Cerrito
32 SE-039a Las Juntas
33 SE-039a Olón Trichoderma
34-35 SE-039b SE-039c Olón
36 SE-042c Chanduy - Pechiche
37-38 SE-043 SE-044 Chanduy - Pechiche
39 SE-047b Río Verde Trichoderma
40 SE-047c Río Verde
41 SE-049 La azucar
42 SE-050 Manglaralto
Cuadro 9 A. Recolección de muestras e identificación de antagonista y fitopatógenos en el cultivo de
sandia, Santa Elena 2007 - 2009
No Código LugarTipo de muestra
Suelo Tejido
1 SE-034e La Azúcar Trichoderma
2 SE-045a Chanduy - Pechiche
58
Cuadro 10 . Secuenciación de genes de rRNA de las cepas G-08 y SE-034
59
Cuadro11. Severidad causada de S.rolfssi en plantulas de tomate, en el estudio de de dosis de
Trichoderma asperellum cepa G08 2009.
Tratamientos Repeticiones1/
I II III IV V VI Promedios1 0.5 2.0 2.4 2.5 2.5 2.5 2.02 a
2 1.4 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.31 ab
3 1.5 2.0 2.0 2.3 2.5 2.5 2.13 b
4 0.0 0.0 0.0 0.0 0.4 0.5 0.15 f
5 0.0 0.5 0.5 0.7 1.0 1.0 0.6 cd
6 0.0 0.5 1.0 1.0 1.0 1.0 0.75 c
7 0.0 0.0 0.0 0.5 0.5 0.5 0.25 de
8 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 cd
9 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 ef
10 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 cd
1/DATOS 10 plantas sometidos a la prueba de rangos múltiples de Duncan p=0.05
A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E(valores originales transformados a √ x+1) Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob ------------------------------------------------------------------------ repetición 5 0.78 0.155 4.35 0.0026 tratamientos 9 7.09 0.788 22.06 0.0000 Error 45 1.61 0.036 Non-additivity 1 0.19 0.188 5.85 0.0198 Residual 44 1.42 0.032 ------------------------------------------------------------------------ Total 59 9.47 ------------------------------------------------------------------------ Grand Mean= 1.359 Grand Sum= 81.510 Total Count= 60 Coefficient of Variation= 13.91%
Cuadro 12. Severidad causada en plantulas de S.rolfssi en plantulas de pimiento el estudio de de dosis de
Trichoderma asperellum cepa G08 2008-2009
Tratamientos R e p e t i c i o n e s1/
PromediosI II III IV V VI VII
1 0.3 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.47 a
2 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 c
3 0.2 0.2 0.3 0.3 0.1 0.1 0.1 0.18 b
4 0.0 0.0 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.35 a
60
5 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 c
6 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 c
7 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 c
8 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.4 0.5 0.12 b
9 0.0 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.42 a
10 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 c1/ DATOS 10 plantas sometidas a la prueba de rangos múltiples de Duncan p=0.05
A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E (valores originales transformados a √ x+1) Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob ------------------------------------------------------------------------ repetición 6 0.04 0.006 2.09 0.0700 tratamiento 9 0.46 0.051 18.25 0.0000 Error 54 0.15 0.003 Non-additivity 1 0.03 0.035 15.86 0.0002 Residual 53 0.12 0.002 ------------------------------------------------------------------------ Total 69 0.65 ------------------------------------------------------------------------ Grand Mean= 1.069 Grand Sum= 74.860 Total Count= 70
Coefficient of Variation= 4.95%
Cuadro 13. Severidad causada en plantulas de S.rolfssi en plantulas de sandia, en el estudio de de dosis de
Trichoderma asperellum cepa G08 2008-2009.
Tratamientos R E P E T I C I O N E S1/
PromediosI II III IV V VI VII
1 0.3 0.6 0.9 2.1 2.6 2.7 2.7 1.78 a2/
2 0.5 0.5 1.2 2.1 2.6 2.8 2.8 1.78 a
3 0.6 0.9 1.7 2.7 2.7 2.6 2.6 1.97 a
4 0.4 0.4 1.4 1.8 2.1 2.1 2.2 1.48 a
5 0.9 1.4 1.6 1.6 2.0 2.3 2.3 1.72 a
6 0.9 1.4 1.6 2.0 2.4 2.4 2.5 1.88 a
7 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.2 0.2 0.04 b
8 0.0 0.0 1.8 2.2 3.1 3.6 3.9 2.09 a
9 0.0 0.0 0.4 2.2 2.7 3.1 3.1 1.64 a
10 0.3 0.3 0.6 2.5 2.7 2.9 3.0 1.76 a
1/DATOS 10 plantas sometidas a la prueba de rangos múltiples de Duncan p=0.05
A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E
61
(valores originales transformados a √ x+1)Degrees of Sum ofSource Freedom Squares Mean Square F-value Prob
------------------------------------------------------------------------repetición 6 5.12 0.854 32.77 0.0000
tratamiento 9 2.47 0.275 10.54 0.0000Error 54 1.41 0.026Non-additivity 1 0.38 0.381 19.68 0.0000Residual 53 1.03 0.019------------------------------------------------------------------------Total 69 9.00------------------------------------------------------------------------
Grand Mean= 1.571 Grand Sum= 109.970 Total Count= 70
Coefficient of Variation= 10.28%
Cuadro 14. Severidad causada de S.rolfssi en plantulas de tomate, en el estudio de de dosis de
Trichoderma asperellum cepa se034 2008-2009
1/DATOS 10 plantas sometidas a la prueba de rangos múltiples de Duncan p=0.05
A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E
62
Tratamientos R E P E T I C I O N E S1/
PromediosI II III IV V VI VII
1 0.3 1.5 3.1 3.2 3.2 3.2 3.2 2.52 de
2 0.9 2.2 2.3 2.1 2.1 2.2 2.2 2.0 f
3 0.9 2.7 2.7 2.6 2.6 3.1 3.2 2.54 cd
4 0.9 4.1 4.2 4.2 4.2 4.4 4.6 3.8 ab
5 1.4 3.3 4.0 4.0 4.1 4.1 4.1 3.5 b
6 1.0 4.5 4.5 4.8 4.8 4.8 4.8 4.1 a
7 0.0 2.8 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 2.5 de
8 0.1 2.5 2.5 2.6 2.6 2.5 2.5 2.1 ef
9 0.0 3.3 3.5 3.5 3.5 3.5 3.9 3.2 c
10 0.5 4.4 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 4.27 a
(valores originales transformados a √ x+1) Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob ------------------------------------------------------------------------ repetición 6 6.30 1.050 91.46 0.0000 tratamiento 9 2.52 0.280 24.39 0.0000 Error 54 0.62 0.011 Non-additivity 1 0.14 0.140 15.41 0.0003 Residual 53 0.48 0.009 ------------------------------------------------------------------------ Total 69 9.44 ------------------------------------------------------------------------
Grand Mean= 1.976 Grand Sum= 138.290 Total Count= 70
Coefficient of Variation= 5.42%
Cuadro 15. Severidad causada de S.rolfssi en plantulas de pimiento, en el estudio de de dosis de
Trichoderma asperellum cepa SE-034 2009
Tratamientos Repeticiones1/
I II III IV V VI Promedios
1 0.0 0.0 0.0 0.2 0.2 0.2 0.1 d
2 0.4 0.5 0.5 1.0 1.0 1.0 0.73 b
3 0.0 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.41 c
4 0.3 0.9 1.0 1.0 1.0 1.0 0.86 b
5 0.3 0.9 1.0 1.0 1.0 1.0 0.86 b
6 0.3 1.0 1.5 1.5 1.5 1.5 1.21 a
7 0.0 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.41 c
8 0.0 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.41 c
9 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0 c
10 0.0 0.0 1.0 1.5 1.5 1.5 0.91 b
1/DATOS 10 plantas sometidas a la prueba de rangos múltiples de Duncan p=0.05
A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E (valores originales transformados a √ x+1)
Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob ------------------------------------------------------------------------ repetición 5 0.51 0.102 12.30 0.0000 tratamiento 9 0.86 0.096 11.60 0.0000 Error 45 0.37 0.008 Non-additivity 1 0.10 0.101 16.47 0.0002 Residual 44 0.27 0.006 ------------------------------------------------------------------------ Total 59 1.74 ------------------------------------------------------------------------ Grand Mean= 1.268 Grand Sum= 76.060 Total Count= 60 Coefficient of Variation= 7.17%
Cuadro16 . Severidad causada en plantulas de S.rolfssi en plantulas de sandia, en el estudio de de dosis de
Trichoderma asperellum cepa se034-2009
63
Tratamientos Repeticiones1/
I II III IV V VI Promedios
1 0.3 1.8 2.0 2.0 3.5 3.5 2.18 bc
2 0.2 1.5 2.0 2.0 2.0 2.0 1.6 d
3 2.0 2.6 2.5 2.5 2.5 2.5 2.43 b
4 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 a
5 1.0 1.9 2.5 2.5 2.5 2.5 2.15 bc
6 1.5 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 1.91 cd
7 0.0 0.5 1.0 1.0 1.3 1.4 0.86 e
8 0.0 0.4 0.5 1.0 1.0 1.0 0.65 e
9 0.0 1.0 1.5 1.5 1.5 1.5 1.16 e
10 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.5 0.08 f 1/DATOS
10 plantas sometidas a
la prueba de rangos múltiples de Duncan p=0.05
A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E(valores originales transformados a √ x+1) Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob ------------------------------------------------------------------------ Repetición 5 1.12 0.225 10.65 0.0000 Tratamie 9 4.39 0.488 23.16 0.0000 Error 45 0.95 0.021 Non-additivity 1 0.00 0.002 0.12 Residual 44 0.95 0.022 ------------------------------------------------------------------------ Total 59 6.47 ------------------------------------------------------------------------ Grand Mean= 1.589 Grand Sum= 95.340 Total Count= 60 Coefficient of Variation= 9.14%
Cuadro 17. Severidad causada de S.rolfssi en plantulas de tomate, en el estudio de formas de aplicación de
Trichoderma asperellum cepa G-08 2009
64
Tratamientos Repeteciones1/
I II III IV V VI Promedios
1 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 n.s
2 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 n.s
3 0.2 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.45 n.s
4 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 n.s
5 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 n.s
6 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 n.s
7 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 n.s
8 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 n.s
1/DATOS 10 plantas sometidas a la prueba de rangos múltiples de Duncan p=0.05
A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E (valores originales transformados a √ x+1)
Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob ------------------------------------------------------------------------ Repetición 5 0.00 0.000 1.00 0.4321 Tratamiento 7 0.40 0.056 160.34 0.0000 Error 35 0.01 0.000 Non-additivity 1 0.00 0.005 19.98 0.0001 Residual 34 0.01 0.000 ------------------------------------------------------------------------ Total 47 0.41 ------------------------------------------------------------------------ Grand Mean= 1.052 Grand Sum= 50.510 Total Count= 48 Coefficient of Variation= 1.78%
Cuadro18 . Severidad causada de S.rolfssi en plantulas de pimiento, el estudio de de formas de aplicación
de Trichoderma asperellum cepa G-08 2009
65
Tratamientos Repeticiones1/
I II III IV V VI Promedios1 0.0 0.0 0.1 0.1 0.1 0.1 0.06 d2 0.0 0.0 0.0 0.0 0.5 0.5 0.16 c3 0.4 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.48 b4 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 d5 0.4 0.9 1.0 1.0 1.0 1.0 0.88 a6 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 d7 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 d8 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 d
1/DATOS 10 plantas sometidas a la prueba de rangos múltiples de Duncan p=0.05A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E
(valores originales transformados a √ x+1) Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob ------------------------------------------------------------------------ repetición 5 0.04 0.009 3.08 0.0209 tratamiento 7 0.90 0.129 44.71 0.0000 Error 35 0.10 0.003 Non-additivity 1 0.01 0.007 2.55 0.1195 Residual 34 0.09 0.003 ------------------------------------------------------------------------ Total 47 1.05 ------------------------------------------------------------------------ Grand Mean= 1.115 Grand Sum= 53.540 Total Count= 48 Coefficient of Variation= 4.81%
Cuadro 19 . Severidad causada de S.rolfssi en plantulas de sandia,en el estudio de de formas de aplicación
de Trichoderma asperellum cepa G-08 2009
1/DATOS 10 plantas sometidas a la prueba de rangos múltiples de Duncan p=0.05
66
TratamientosRepeticiones1/
I II III IV V VI Promedios
1 0.0 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.41 b
2 0.0 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.41 b
3 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 c
4 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 a
5 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 c
6 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 c
7 0.0 0.0 0.5 0.5 0.5 0.5 0.33 b
8 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 c
A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E (valores originales transformados a √ x+1) Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob ------------------------------------------------------------------------ Repetición 5 0.02 0.005 2.04 0.0976 Tratamiento 7 0.76 0.109 44.67 0.0000 Error 35 0.09 0.002 Non-additivity 1 0.02 0.018 8.84 0.0054 Residual 34 0.07 0.002 ------------------------------------------------------------------------ Total 47 0.87 ------------------------------------------------------------------------ Grand Mean= 1.085 Grand Sum= 52.070 Total Count= 48 Coefficient of Variation= 4.56%
Cuadro 20. Severidad causada de S.rolfssi en plantulas de tomate,en el estudio de de formas de aplicación
de Trichoderma asperellum cepa SE-034 2009
Tratamientos Repeticiones1
I II III IV V VI Promedios
1 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 c
2 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 c
3 0.0 0.0 0.5 0.5 0.5 0.5 0.41 b
4 0.9 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 0.98 a
5 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 c
6 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 c
7 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 c
8 0.3 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.05 c1/DATOS 10 plantas sometidas a la prueba de rangos múltiples de Duncan p=0.05
A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E (valores originales transformados a √ x+1) Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob ------------------------------------------------------------------------ Repetición 5 0.00 0.000 0.19 0.9661 Tratamiento 7 0.90 0.129 79.82 0.0000 Error 35 0.06 0.002 Non-additivity 1 0.01 0.011 8.00 0.0078 Residual 34 0.05 0.001 ------------------------------------------------------------------------ Total 47 0.96 ------------------------------------------------------------------------ Grand Mean= 1.076 Grand Sum= 51.660 Total Count= 48
67
Coefficient of Variation= 3.73%
Cuadro 21. Severidad causada de S.rolfssi en plantulas de pimiento el estudio de de formas de aplicación
de Trichoderma asperellum cepa se034 2009
Tratamientos Repeticiones1/
I II III IV V VI Promedios
1 0.0 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.41 a
2 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 b
3 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 b
4 0.0 0.0 0.5 0.5 0.5 0.5 0.33 a
5 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 b
6 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 b
7 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 b
8 0.0 0.0 0.5 0.5 0.5 0.5 0.33 a1/DATOS 10 plantas sometidas a la prueba de rangos múltiples de Duncan p=0.05
A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E (valores originales transformados a √ x+1) Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob ------------------------------------------------------------------------ Repetición 5 0.05 0.011 3.23 0.0169 tratamiento 7 0.29 0.041 12.48 0.0000 Error 35 0.12 0.003 Non-additivity 1 0.08 0.082 81.50 0.0000 Residual 34 0.03 0.001 ------------------------------------------------------------------------ Total 47 0.46 ------------------------------------------------------------------------ Grand Mean= 1.060 Grand Sum= 50.860 Total Count= 48 Coefficient of Variation= 5.43%
Cuadro 22. Severidad causada de S.rolfssi en plantulas de sandia, en el estudio de de formas de aplicación
de Trichoderma asperellum cepa SE-034 2009
Tratamientos Repeticiones1/
I II III IV V VI Promedios
1 0.0 0.4 1.8 2.0 2.0 2.0 1.36 a
2 0.0 0.5 0.5 1.0 1.0 1.0 0.66 b
3 0.0 0.0 0.5 0.5 0.5 0.5 0.33 c
4 0.3 1.0 1.5 1.5 1.5 1.5 1.21 a
5 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 d
6 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 d
68
7 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 d
8 0.0 0.0 0.5 0.5 0.5 0.5 0.33 c1/DATOS 10 plantas sometidas a la prueba de rangos múltiples de Duncan p=0.05
A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E (valores originales transformados a √ x+1) Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob ------------------------------------------------------------------------ repetición 5 0.47 0.095 6.71 0.0002 tratatamiento 7 1.82 0.260 18.45 0.0000 Error 35 0.49 0.014 Non-additivity 1 0.39 0.388 125.08 0.0000 Residual 34 0.11 0.003 ------------------------------------------------------------------------ Total 47 2.78 ------------------------------------------------------------------------ Grand Mean= 1.195 Grand Sum= 57.340 Total Count= 48 Coefficient of Variation= 9.93%
Cuadro 23. De sustratos para la multiplicación de Trichoderma asperellus con la cepa de G-08
Tratamiento 1 6.105 A
Tratamiento 2 1.508 B
Tratamiento 3 1.112 B
A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E (valores originales transformados a √ x+1) Degrees of Sum ofSource Freedom Squares Mean Square F-value Prob------------------------------------------------------------------------repetición 3 11.88 3.958 1.31 0.3559tratatamiento 2 61.62 30.812 10.17 0.0118Error 6 18.18 3.030Non-additivity 1 18.11 18.114 1431.99 0.0000Residual 5 0.06 0.013------------------------------------------------------------------------Total 11 91.68------------------------------------------------------------------------Grand Mean= 2.908 Grand Sum= 34.900 Total Count= 12Coefficient of Variation= 59.85%
Cuadro 24. De sustratos para la multiplicación de Trichoderma asperellus con la cepa de SE-034
Tratamiento 1 4.015 A
Tratamiento 2 1.268 B
Tratamiento 3 1.055 B
69
A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E (valores originales transformados a √ x+1) Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob ------------------------------------------------------------------------ repetición 3 6.00 2.001 1.15 0.4034 tratamiento 2 21.81 10.904 6.25 0.0341 Error 6 10.46 1.744 Non-additivity 1 10.43 10.428 1448.16 0.0000 Residual 5 0.04 0.007 ------------------------------------------------------------------------ Total 11 38.28 ------------------------------------------------------------------------ Grand Mean= 2.113 Grand Sum= 25.350 Total Count= 12 Coefficient of Variation= 62.51%
70
![[CARTER, Angela] a Menina Do Capuz Vermelho](https://img.pdfslide.tips/doc/110x75/55cf9320550346f57b9bf386/carter-angela-a-menina-do-capuz-vermelho.jpg)
