Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)

5/26/2018 Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)

I. INTRODUCCIN

El calamar gigante o pota (Dosidicus gigas), es una especie pelgica ocenica que

realiza migraciones hacia la costa relacionadas con procesos de alimentacin y

reproduccin. Tiene una amplia distribucin en el Pacico !riental, desde "#$ico hasta

%hile, y las reas de mayor concentracin se ubican rente a las costas de Per& y "#$ico.

'a Pota, es un recurso hidrobiolgico de gran abundancia en nuestro Pas y de bao

precio en el mercado por lo que dierentes inestigadores ienen trabaando en darle un

alor agregado para poder generar mayores utilidades, adems de ser una e$celente uente

de protena animal que podra ayudar a meorar los nieles de desnutricin de la poblacin

en pobreza total y pobreza e$trema.

'os dierentes gobiernos del Estado Peruano e instituciones de ayuda internacional,

han enido desarrollando programas de asistencia alimentara en el marco de la lucha

contra la pobreza y la desnutricin. Estos programas tienen como una de sus principales

actiidades el reparto de sustitutos lcteos (papillas lcteas) a sus beneiciarios, las mismas

que tienen a la leche en polo como principal uente de protena animal, lo cual hace que

estos productos tengan un eleado precio. *dems, considerando que estos programas an

dirigidos a la poblacin que se encuentra en situacin de pobreza y de pobreza e$trema,

seg&n estadsticas del +E+ (-/) al a0o --, el 12./ porciento de la poblacin peruana

era pobre, del cual el -/.3 por ciento se encuentra en pobreza e$trema (en la sierra el 43.3

por ciento de la poblacin es pobre y 2/ por ciento se encuentra en pobreza e$trema) y que

nuestro pas no cuenta con los suicientes recursos econmicos para llear la ayuda a toda

esta poblacin (lo que obliga, en cierta medida, a minimizar los costos de esta clase de

programas) se debe buscar uentes de protena animal de bao costo para este tipo de

productos, de iguales o meores caractersticas nutricionales que la leche en polo.


-

Es por ello que la 5acultad de Pesquera de la 6niersidad acional *graria 'a

"olina (6*'"), iene desarrollando estudios de un concentrado de protena de pota con

la inalidad de sustituir parcialmente las uentes de protena tradicional como son la leche

en polo y las protenas del hueo. 7e han obtenido concentrado de protena de pota cuyos

alores de protena alcanzan el 84 por ciento ('azo, -4).

o e$isten antecedentes de estudios de to$icidad del concentrado de protena de

pota por ser un producto nueo, es por ello que antes de utilizar esta nuea uente proteica

se decidi estudiar alg&n posible eecto to$icolgico del producto en su consumo por los

seres humanos como una medida de seguridad alimentara.

1.1 OBJETIVO PRINCIPAL

9eterminar la to$icidad a dosis repetidas (3 das) del concentrado de protena de

pota (Dosidicus gigas) elaborado en la 6*'" en ratas Sprague Dawley.

1.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS

- 9eterminar la patologa clnica (anlisis bioqumico y hematolgico), con la

inalidad de determinar si e$isten cambios signiicatios con respecto al grupo

control.

- Ealuar los resultados histopatolgicos con la inalidad de determinar si e$istencambios signiicatios con respecto al grupo control.

- 9eterminar el eecto de la administracin del concentrado de protena de pota sobre

el peso io en ratas.


II.REVISIN BIBLIOGRAFICA

2.1 ASPECTOS GENERALES DE LA POTA

2.1.1 Clasificaci !a"#$ica

%arrillo (:334), se0ala que la pota o calamar gigante presenta la siguiente

clasiicacin ta$onmica;

Phyllum ; "ollusca

%lase ; %ephalopoda

7ubclase ; %oloidea

!rden ; Teuthoidea

7uborden ; !egopsidae

5amilia ; !mmastrephidae

7ubamilia ; !mmanstrepinae


2

En el %uadro : se puede obserar los alores de la composicin qumica pro$imal

de la carne de pota, seg&n dierentes autores.

C'a+*# 1, C#$%#sici &'($ica %*#"i$al +l $a!# + la %#!a

COPONENTES/sc'l#1

0/sc'l#2

0Fil! c# %il

0Fil! si %il

0

3'$+a+ 8:.: 8./4 81./ 82.P*#!(a c*'+a :4. :?.21 :-.: :-.?G*asa c*'+a :.: .48 :.2 :.4Ci4a :.22 :.: :.2Ca*5#6i+*a!#s . .1 .: ./Sals $i*als :.?

F'!,1 IARPE - ITP 71889:; 2 B*a


1

+"*DPE A +TP (:334) airman que la carne de la pota posee los cidos grasos de

mayor importancia nutricional, el 9ocosahe$anoico (9C*) y Eicosapentanoico (EP*),

ambos omega A /.

En el %uadro / se muestran los cidos grasos presentes en la grasa de pota. %omo se puede

obserar, contiene altos porcentaes de cidos grasos omega A /.

C'a+*# , C#!i+# + >ci+#s ?*as#s l $a!# + la %#!a

ACIDO GRASO 0%:2; "irstico :.2

%:1; Palmitoleico .1%:4; Palmtico :3.3%:4;: Palmitoleico Traz.%:?; "argrico Traz.%:8; Esterico /.1%:8;: !leico 2.%:8;- 'inoleico Traz.%:8;/ 'inol#nico Traz.%-; *raqudico 4.2%-;: Eicosaenoico Traz.

%-;/ Eicosatrienoico .-%-;2 *raquidnico Traz.C2=,@ Eic#sa%!a#ic# 19.=%--;/ 9ocosatrienoico .-%--;2 9ocosatetraenoico ./%--;1 9ocosapentaenoico .-C22,9 D#c#sa6"a#ic# 9.8=

F'!, IARPE - ITP 71889:.

En cuanto a los minerales, determinaron que el mayor contenido de #stos est dado por

el potasio, seguido del sodio, magnesio y calcio (%uadro 2).

C'a+*# , C#!i+# + $ac*#l$!#s l $a!# + la %#!a

ACROELEENTOS7odio (mg:g) :38.-Potasio (mg:g) /-:.3%alcio (mg:g) 3.:"agnesio (mg:) 21.4


4

F'!, IARPE - ITP 71889:.

2.2 CONCENTRADO PROTEICO DE PESCADO

2.2.1 Dfiici

7uzuFi (:38?) deine a los concentrados proteicos de pescado de la siguiente

manera; harina de pescado, que a a ser utilizada como alimento, se obtiene con m#todos

higi#nicos a partir de grandes cantidades de especies heterog#neas. Esto da como

resultados un producto nutritio e higi#nico para consumo humano, que se llama

Gconcentrado de protena de pescadoH, no e$trado con solentes (%PP tipo >). !tro tipo esel concentrado de protena sometido a procesos de e$traccin con solentes. +ndica que es

as como se obtiene dos tipos de concentrado proteico de pescado; G%PP tipo *H, el cual es

ms puro que el G%PP tipo >H. 'os dos son altamente nutritios pero mientras el tipo >

carece de palatabilidad, el tipo * es demasiado caro para suplementar la deiciencia

proteica de las regiones del mundo ms pobres y carece de la aceptacin comercial para ser

usada con otros alimentos en pases aanzados. 'os concentrados proteicos carecen de

capacidad de rehidratacin lo cual crea diicultades a la hora de ser procesados con otros

alimentos. 'a deinicin ms simple de concentrado proteico de pescado es la propuesta

por "adrid et al., (:332) que dice que los concentrados proteicos de pescado son

bsicamente harinas de pescado aptas para el consumo humano.

En el %uadro 1 se muestran las e$igencias t#cnicas para los concentrado proteicos

tipo * (sometidos a la e$traccin de grasas con solentes) y el tipo > (sin e$traccin de

grasas).

C'a+*# @, Es%cificaci#s !cicas %a*a l#s C#c!*a+#s P*#!ic#s + Psca+#

7CPP:


?

F'!, a+*i+ et al. 7188:.

2.2.2 P*#cs# + fa5*icaci

'os principales procedimientos para la elaboracin de los %oncentrados Proteicos

de Pescado (%PP), ueron desarrollados entre :31 y :3?. 'a mayor parte de estos

procedimientos incluye el empleo de un solente orgnico o una mezcla de solentes. 'os

principales procesos de abricacin de %PP se eect&an con isopropanol, etanol,

dicloroetileno y he$ano. Por razones de seguridad se ha limitado el empleo de solentes

muy oltiles (he$ano, #ter de petrleo), que por otro lado estn prohibidos en barcos de

captura. 7e han eectuado estudios con dodecilsulato de sodio (7.9.7), tambi#n llamado

laurilsulato de sodio, en %hile y Escocia (%aiozzi et al., :348 y %onnell, :343

mencionados por 'azo, -4).

Doldn (--) elabor una harina precocida a partir de surimi de also olador

(Prionotus stephanophrys). El producto obtenido ue de alto contenido de protenas y bao

en grasaI sin embargo, seg&n los resultados de la ealuacin sensorial al que ue sometido,

DESCRIPCIN TIPO A TIPO BP*#!(a

3'$+a+

G*asa

Ci4a

A*a

Fl/#*

Lisia +is%#i5l 7*s%c!# a la %*#!(a:

Bac!*ias,

- Bac!*ias !#!als?

- Bac!*ias c#lif#*$s !#!als? 7C:

- Bac!*ias c#lif#*$s fcals? 7C:

- E!*#c#c#s?

- Salmonella?

- Bac!*ias +s+#5la+#*as + lci!ia?

- Cl#s!*i+i#s s'lfi!# *+'c!#*s?

Ol#* ) sa5#*

"n. ?1J

"$. :J

"$. .1J

"$. :1J

"$. .1J

"$. -1 ppm

"n. 4.1J

"$. :2

*usencia

*usencia

*usencia

*usencia

*usencia

*usencia

+nodoro, inspido

"n. 4J

"$. :J

7in lmite

"$. -J

"$. .1J

"$. -1 ppm

"n. 4.1J

"$. :1

"$. :-

"$. :

"$. :-

*usencia

"$. :-

"$. :-

*mplio margen


8

present ligero olor y sabor residual de pescado, lo cual lo podra catalogar como un

concentrado proteico de pescado de tipo >.

'azo (-4) elabor un concentrado de protena a partir de pota precocida. 9icho

producto elaborado por la 5acultad de Pesquera de la 6niersidad acional *graria 'a

"olina (6*'"), ue el que se ha ealuado en la inestigacin. En el %uadro 4 se

muestran los resultados de la ealuacin sensorial realizada al concentrado de protena de

pota. Estas caractersticas se mantienen inalterables hasta los 3 das de almacenamiento, a

temperatura ambiente.

C'a+*# 9, Rs'l!a+#s +l a>lisis ss#*ial +l c#c!*a+# + %*#!(a + %#!a.

CARACTERSTICAS 1 DA 8= DA

C#l#* >lanco lechoso >lanco cremoso

Ol#**gradable y suae,

sin olor a pota

*gradable y suae,

tenue olor a pota

Sa5#**gradable y neutroI

sin sabor a pota

*gradable,

tenue sabor a pota

T"!'*a 7uae al tacto ypulerulenta

7uae al tacto ypulerulenta

F'!, La4# 72==9:.

2. CONCENTRADO DE PROTEINA DE POTA

Es una protena concentrada en polo, de consumo humano directo, con un alor

biolgico del 3J, con una concentracin de 84J de protena y /J de grasas (2J de las

cuales son omega / y 4). 7e obtiene de la raccin muscular de la pota (Dosidicus gigas) y

en su proceso no se utiliza la piel, sceras, cartlagos ni tentculos y se elabora sin el uso

de solentes ni agentes qumicos de ninguna especie (Doldan y 'azo, -1).

El %uadro ? muestra la composicin qumica pro$imal del concentrado de protena de

pota. Estos resultados son similares, en cuanto al contenido de protena, ceniza y humedad, a

lo propuestos por el %omit# %onsultio sobre Protenas para el %oncentrado Proteico de

Pescado del tipo *. 'a mayor dierencia se dio en el contenido de grasas ('azo, -4).


3

C'a+*# , C#$%#sici &'($ica %*#"i$al +l c#c!*a+# + %*#!(a + %#!a

COPONENTE 0

Protenas 84.2 reportados por "adrid et al.(:332).

C'a+*# , Rs'l!a+#s +l a>lisis $ic*#5i#l?ic# +l c#c!*a+# + %*#!(a + %#!a

ANLISIS ICROBIOLOGICOS RESULTADOSC#!# + a*#5i#s %laca K : ucgE. coli *usencia

S. aureus *usencia3#?#s 7$#6#s ) lci+#s ?*as#s l c#c!*a+# + %*#!(a + %#!a.
http://es.wikipedia.org/wiki/Cardiopat%C3%ADahttp://es.wikipedia.org/wiki/Dietahttp://es.wikipedia.org/wiki/Cardiopat%C3%ADahttp://es.wikipedia.org/wiki/Dieta


:

ACIDO GRASO NOBRE RESULTADOS%:4; Mcido he$adecanoico -4. J%:4;: NA? Mcido he$adecenoico ./ J%:?; Mcido heptadecanoico :. J

%:8; Mcido octadecanoico ?.8 J%:8;: NA3 Mcido octadecenoico :.2 J%:8;: NA? :.2 J%:8;- NA4 Mcido octadecadienoico .2 J%:8;/ NA4 Mcido octadecatrienoico .- J%-; *cido eicosanoico .2 J%-;: NA:: @ -;: NA3 *cido eicosenoico 8./ J%-;- NA4 .- J%-;/ NA/ ./ J%-;2 NA/ *cido eicosatetraenoico :.1J

%-;1 NA/ *cido eicosapentaenoico :-.3J%-:;1 NA/ .- J%--; *cido beh#nico ./ J%--;: NA3 -. J%--;2 NA4 .: J%--;1 NA4 .1 J%--;1 NA/ *cido docosapentaenoico .2 J%--;4 NA/ *cido docosahe$aenoico /:./ J%-2;: NA3 .4 J

F'!, E'*#fis Da$a* AS + Dia$a*ca 7R#l+> ) La4# 2==@:.

En el cuadro : se puede apreciar el contenido de aminocidos hallados en el concentrado

de protena de pota, de los cuales present una distribucin de los ocho aminocidos

esenciales similar a los presentados por la leche en polo y el hueo deshidratado. 'a

cantidad de triptano, aminocido limitante en el concentrado de pota, ue similar al que

presenta la carne de res (5*!, :3?).

C'a+*# 1=, C#!i+# + a$i#>ci+#s +l c#c!*a+# + %*#!(a + %#!a

AINOACIDOS ESENCIALES RESULTADOS'isina ?.3 g: gTriptano .32 g: gTreonina 2.: g: gBalina 2./ g: g"etionina /. g: g+soleucina 2.8 g: g'eucina ?.3 g: g5enilalanina /.8 g: g

Cistidina -.: g: gT#!al . ?1== ?NO ESENCIALES


::

*rginina 4.? g: g*cido asprtico 3.1 g: g7erina 2./ g: g*cido glutmico :2.1 g: gProlina /.1 g: g

ci+#s

R K EscialsT#!al " 1==

8=.9 ?1== ?

2.0 F'!, E'*#fis Da$a* AS + Dia$a*ca 7R#l+> ) La4# 2==@:.

2. FUNDAENTOS DE TOICOLOGIA

7ilbergeld (-:) deine a la to$icologa como el estudio de los enenos o, en una

deinicin ms precisa, la identiicacin y cuantiicacin de los eectos adersos asociados

a la e$posicin a agentes sicos, sustancias qumicas y otras situaciones. 'a to$icologa

abarca desde estudios de inestigacin bsica sobre el mecanismo de accin de los agentes

t$icos hasta la elaboracin e interpretacin de pruebas normalizadas para determinar laspropiedades t$icas de los agentes. *porta una importante inormacin tanto a la medicina

como a la epidemiologa de cara a comprender la etiologa de las enermedades, as como

sobre la plausibilidad de las asociaciones que se obseran entre #stas y las e$posiciones,

incluidas las e$posiciones proesionales.

7eg&n Depetto (:33?), un t$ico es una sustancia que puede producir alg&n eecto

nocio sobre un ser io, y como la ida, tanto egetal como animal, es una contin&asucesin de equilibrios dinmicos, los t$icos son los agentes qumicos, o sicos, capaces

de alterar algunos de estos equilibrios.

9e acuerdo con esto, cualquier sustancia puede actuar como t$ico, ya que tanto los

productos e$genos como los propios constituyentes del organismo, cuando se encuentran

en #l en e$cesias proporciones, pueden producir trastornos t$icos. 9ichos compuestos

e$genos se denominan $enobiticos.


:-

9e aqu que se deria que el concepto de to$icidad posea un carcter relatio. o

hay sustancias at$icasI cualquier producto qumico actuar como t$ico, a unas

determinadas condiciones del sueto, de la dosis y del ambiente. Este concepto ue

enunciado por Paracelso (siglo OB+), cuando airmo que Gtodo depende de la dosisH. 6na

sustancia que administrada en peque0as cantidades produzca da0o, ser ms t$ica que

otra sustancia que precisa de mayor dosis para originar el mismo da0o. Por eemplo, el

agua es indispensable para la ida, muchos organismos estn constituidos en ms de sus

dos terceras partes por aguaI sin embargo, un e$ceso de agua ingerida, o una enema rectal

de agua destilada, puede producir la muerte por into$icacin hdrica. El o$geno o la

glucosa son imprescindibles para la mayora de los organismos, pero sabemos que su

e$ceso conduce a graes trastornos y a la muerte. 9e la misma manera, la ida se hace

imposible en una atmsera de o$geno puro, porque se consume rpidamente el cido

gammaaminobutrico, moderador de la transmisin neriosa central, y como consecuencia,

se producen graes alteraciones neriosas, conulsiones y la muerte (Depetto, :33?).

Depetto (:33?) deine a la to$icologa como la ciencia que estudia las sustancias

qumicas y los agentes sicos en cuanto son capaces de producir alteraciones patolgicas a

los seres ios, a la par que estudia los mecanismos de produccin de tales alteraciones y

los medios para contrarrestarlas, as como los procedimientos para detectar, identiicar y

determinar tales agentes y alorar su grado de to$icidad.

'a to$icologa de los alimentos o tambi#n conocida como to$icologa

bromatolgica, es una especialidad de la to$icologa ambiental, cuyo inter#s esta

creciendo rpidamenteI en consecuencia, estn aumentando los programas acad#micos

que abarcan la ense0anza, el adiestramiento y la inestigacin de esta materia

(7hibamoto y >eldanes, :33/).

2..1 Fac!#*s i$%lica+#s la i!#"icaci

7eg&n Balle y 'ucas (-) la accin de un agente t$ico sobre un organismo io

denominado como into$icacin, es un proceso relatiamente compleo, en el cual estn

inolucrados muchos actores. 7in embargo, hay por lo menos cinco actores que estnntimamente ligados al enmeno de la into$icacin;


:/

a. Ca*>c!* !"ic# +l a?! "#5i!ic#

*unque un agente que produce una into$icacin puede ser qumico o sico, en

to$icologa de alimentos se reiere e$clusiamente a sustancias qumicas. 6n t#rmino muy

usado en el rea armacolgica para deinir cualquier sustancia e$tra0a al organismo en

cuestin, es la de agente $enobitico. o obstante como Paracelso mencion; Gno hay

sustancia que no sea enenosaH, que indica que el eecto ben#ico y da0ino de una

sustancia depende de la dosis. 7in embargo, para cada sustancia qumica hay un

determinado grado de to$icidad.

5. Sis!$a 5i#l?ic#

El sistema biolgico sobre el cual act&a el agente t$ico es de suma importancia, ya

que el eecto ariar notablemente seg&n el organismo. 9icho actor debe ser tomado en

cuenta, ya que es bien conocido que entre las dierentes especies de animales y el hombre

hay una gran ariacin en la sensibilidad hacia los agentes t$icos. El conocimiento del

origen, desarrollo y curso de una into$icacin en un animal particular debe ser establecido

para con bases cienticas, e$trapolarlo al hombre.

c. V(a # *'!a + a5s#*ci

Es bien conocido que un mismo agente t$ico puede producir eectos muy

dierentes, dependiendo de la ruta por la cual el sistema biolgico lo absorba. %omo

eemplo tenemos el caso del disolente he$ano, el cual si una persona adulta inhala sus

apores, en un lapso de : a / minutos puede perder el conocimientoI sin embargo, esta

misma persona puede ser capaz de beber hasta algunas decenas de mililitros sin que se

obsere eecto alguno de to$icidad aguda. 'o anterior se debe a que para que un agente

$enobitico produzca su eecto t$ico debe llegar a los receptores especicos,

atraesando una o arias membranas tisulares (5abre y Truhaut, :3?4).

a que histricamente la principal a de administracin por la cual se absorbe unagente $enobitico ue la oral, en la actualidad se reconocen dos grandes rutas de


:2

administracin, que son la enteral, se usa el tracto gastrointestinal, (oral, sublingual y

rectal) y la parenteral, se reiere a todas las as en las que se eita el paso por el aparato

digestio como se obsera en la igura :.

F'!, Vall ) L'cas 72===:.

Fi?'*a 1, V(as + a+$iis!*aci + "#5i!ic#s 7a5s#*ci:.

Para que un agente $enobitico pueda maniestar su eecto ben#ico (remedio) oda0ino (eneno), debe atraesar y alcanzar los receptores especicos del rgano o teido,

por lo cual debe ser capaz de atraesar las dierentes barreras biolgicas. *s tenemos que

de todas las anteriores as o rutas de absorcin de un agente $enobitico su elocidad de

absorcin es dierente como se puede obserar en el cuadro ::.

C'a+*# 11, V(as # *'!as + a+$iis!*aci ) s'


:1

+. Ti$%# + i!*acci +l a?! !"ic#

El eecto de un agente t$ico sobre un sistema biolgico se traduce en una

alteracin del equilibrio isiolgico (homestasis), por lo que una into$icacin es una

enermedad y como tal debe considerarse bao un criterio patocrnico, es decir

estimando su curso o eolucin en uncin del tiempo, as podemos clasiicarla como

into$icacin aguda, crnica o subaguda.

'a into$icacin aguda se deine como la e$posicin hacia un agente $enobitico

que produce una maniestacin casi inmediata (en ocasiones en minutos) con una sola

administracin del t$ico, que puede llear al into$icado a la muerte, o a una

recuperacin total o parcial, de la cual pueden quedar o no secuelas o lesiones

persistentes. En muchos de los casos de una into$icacin aguda se presenta un

enmeno de reersibilidad con e$cepcin de la muerte.

En general la into$icacin subaguda(llamada tambi#n subcrnica), no implica

un menor grado de graedad de la into$icacin aguda, sino que se presenta una

eolucin de la into$icacin con trastornos subclnicos. *unque este tipo de

into$icacin requiere la administracin repetitia del t$ico, al inicio no se presentan

trastornos isiblesI sin embargo, a corto plazo se pueden presentar eidencias de la

into$icacin y algunos to$iclogos consideran que para que se presente #sta, se debe

e$poner el sistema biolgico al t$ico en un lapso que puede ariar de un mes a tres

meses.

'a into$icacin crnica se presenta como consecuencia a la repetida e$posicin

hacia el agente t$ico. Esta absorcin se produce con cantidades relatiamente peque0as

del t$ico, que por s mismo no producen trastornos isibles en un inicio, pero la

acumulacin del agente $enobitico en el organismo (normalmente en un rgano o teido

especico) y con el transcurso del tiempo, se presentan estados patolgicos, y en la

mayora de los casos son de carcter irreersible.


:4

. E"c*ci +l a?! !"ic#

'a e$crecin de los t$icos se eect&a por medio de la orina, bilis, heces y una alta

proporcin de los compuestos oltiles, por el aire e$pirado. "enores cantidades se

eliminan por la leche, el sudor y la salia, y que aunque cuantitatiamente no sean

releantes, en algunos casos cobra importancia, como es el caso de madres en

lactancia que sean umadoras, bebedoras o drogadictas.

El meor sistema de e$crecin es la a urinariaI ya que en un adulto, las arteriolas

precedentes de la arteria renal aportan un luo de :.- a :./ lmin. (apro$imadamente el

-1J del gasto cardaco) as, la e$crecin urinaria es la ms importante para eliminar del

organismo las sustancias t$icas ingeridas en la dieta. El ri0n e$creta los t$icos por la

misma ruta que e$creta las sustancias endgenas.

'os capilares glomerulares tienen poros relatiamente grandes (2 *ngstroms), que

permiten el paso de sustancias de peso molecular de hasta ?,I por lo tanto, salo

protenas de alto peso molecular, se pueden iltrar en el glom#rulo. 'os &nicos t$icos que

no se iltran, son los que estn unidos a protenas de alto peso molecular. Todos los

compuestos que se encuentran en la orina tubular podrn e$cretarse con ella o reabsorberse

pasiamente a la corriente sangunea. 'as sustancias polares o hidrosolubles generalmente

no se absorben y pasan a la orinaI sin embargo, los compuestos con alto coeiciente de

particin lpidoagua sern reabsorbidos, pasiamente a tra#s de las membranas tubulares.

a que las sustancias con un alto grado de liposolubilidad no pasan al tubo renal o son

reabsorbidas, es necesario que el sistema biolgico para eliminarlas deba transormarlas

introduci#ndoles grupos uncionales a la mol#cula (especialmente hidro$ilos) para que se

aumente su polaridad o conugarlas con sustancias acarreadoras, que incrementen su

hidrosolubilidadI al primer obetio contribuye el eleado niel de enzimas o$idasas en el

teido renal. *dems, en este proceso de e$crecin renal es de suma importancia el pC, y

en este caso ser coneniente que el compuesto ionizable se encuentre en su orma inica

para que se acilite su e$crecin (Codgson y 'ei, :383).


:?

* tra#s de la bilis, debido a sus cualidades tensoactias, el hgado elimina

sustancias de eleado peso molecular (S/), ya sean polares o no polares y

ionizadas o no ionizadas. ormalmente, la e$crecin se realiza contra un gradiente de

concentracin. 'a elocidad de ormacin de bilis es mucho menor que la de orinaI una

importante dierencia anatmica entre el hgado y el ri0n, es que el primero dispone de

una doble a de aporte sanguneo constituido por la ena porta y por la de la arteria

heptica. 'a sangre del hgado, contrariamente a la del ri0n, circula a una elocidad

relatiamente lenta, lo que da tiempo para que las sustancias liposolubles penetren en los

hepatocitos y puedan ser secretadas por la bilis. o obstante que la bilis ierte

directamente al intestino delgado, #stos compuestos son e$cretados con las heces o en

ocasiones son biotransormados por las bacterias intestinales de tal orma que se pueden

reabsorber, en el &ltimo caso se establece un ciclo que se conoce como %iclo

Enteroheptico (7hibamoto y >eldanes, :334).

2.@ PROCESO DE BIOTRANSFORACIN

'os humanos y muchos otros animales estn constantemente e$puestos en su medio

ambiente a una asta ariedad de agentes $enobiticosI los cuales pueden ser de origen

natural o ormados por interencin del hombres. En general los compuestos ms

lipolicos son ms cilmente absorbidos a tra#s de la piel, pulmones o del tracto

gastrointestinal. 'a constante e$posicin a este tipo de sustancias podra resultar en su

acumulacin dentro del organismo, al menos que se presente un sistema eicaz de

eliminacin. %on e$cepcin de la e$halacin, para que un agente $enobitico pueda ser

eliminado del organismo, requiere que sea soluble en ase acuosa, lo anterior unciona para

compuestos no oltiles y en consecuencia sern e$cretados por la orina y las heces, que

son las predominantes rutas de eliminacin. 7in embargo, los compuestos lipolicos que se

encuentran e los luidos de e$crecin tienden a diundir hacia las membranas y en

consecuencia son reabsorbidos, mientras que los compuestos solubles en agua son

e$cretados, lo que deara aparentemente una acumulacin de los agentes $enobiticos

lipolicos dentro del organismo (=laassen et al, :384).


:8

[email protected] Pa#*a$a ?*al

9e acuerdo a la estructura de la membrana celular, esta le coniere una selectiidad

en la absorcin tanto de las sustancias endgenas como $enobiticas. Esta selectiidad

permite que e$istan as de absorcin especica para los nutrimientos hidrosolubles con un

gasto energ#tico (transporte actio), pero por otra parte aunque la mayora de los

organismos ios son casi impermeables a la gran mayora de las sustancias hidrosolubles

no deseables, no pueden preenir la absorcin de la mayora de las sustancias liposolubles.

En la igura - tenemos resumido en un esquema ilustratio, las principales as de

absorcin y eliminacin tanto de compuestos endgenos como e$genos (7hibamoto y

>eldanes, :334).

F'!, Vall ) L'cas 72===:.

Fi?'*a 2, P*ici%al-s


:3

[email protected] A5s#*ci

'os animales superiores han desarrollado un n&mero de sistemas metablicos que

conierten los agentes $enobiticos liposolubles en metabolitos hidrosolubles capaces de

ser e$cretados por las as de eliminacin. * esta actiidad bioqumica se le ha

denominado proceso de >iotransormacin, el cual se ha diidido a su ez en dos grandes

grupos de actiidad enzimtica; reaccin de 5ase + y 5ase ++ (*nders, :381).

a. Racci#s fas I.

'a uncin de este tipo de reacciones, es modiicar la estructura qumica de la

mol#cula, por introduccin de grupos uncionales como son hidro$ilo, amino, carbo$ilo

entre otros. Tambi#n, se puede obtener una mayor polaridad del agente $enobitico por

e$posicin de grupos uncionales como es el proceso de hidrlisis. Posiblemente la

o$idacin es la reaccin ms importante de las reacciones de ase +I en general estas

reacciones estn mediadas por el sistema de o$idacin microsomal que contiene el

citrocromo PA21, tambi#n conocido como Gsistema o$idasa de uncin mi$taH, el cual

requiere del coactor nicotinAadeninAdinucletidoAreducido (*9PC) como donador inicial

de electrones y o$geno molecular como o$idante (Balle y 'ucas, -).

5. Racci#s + fas II.

Este tipo de reacciones metablicas son de biosntesis por lo cual requieren de un

gasto energ#tico (ormacin de enlaces qumicos)I por lo tanto, son reacciones enzimticas

que aparte de requerir de ciertos coactores, necesitan de substratos de alta energa como es

el *TP.

'as reacciones de ase ++ tambi#n se denominan como reacciones de conugacin,

inolucran la adicin a los compuestos $enobiticos de mol#culas endgenas, las cuales

generalmente son polares y de alta disponibilidad por parte del organismo. Estos grupos

endgenos son adicionados a grupos uncionales presentes ya en los compuestos

$enobiticos, o que ueron introducidos o e$puestos en la ase + del proceso de

biotransormacin. El propsito inal es de obtener mol#culas polares y con bao

coeiciente de particin lpidoagua, para que se acilite su e$crecin al disminuir

substancialmente su carcter lipolico (=laassen et al, :384).


-

2.9 DESCRIPCIN DE RGANOS FRECUENTEENTE EVALUADOS PARA

OBSERVAR DAMOS POR PRODUCTOS TOICOS

2.9.1 L#s Ri#s

a. G*ali+a+s

'os ri0ones (5igura /) son rganos grandes, roizos, con orma de habichuela que

estn situados en el retroperitoneo a ambos lados de la columna ertebral. 7e e$tienden

desde la duod#cima #rtebra torcica hasta la tercera #rtebra lumbar y el ri0n derecho

est ubicado apenas ms alto que el izquierdo (Doss, -1).

F'!, J'&'i*a ) Ca*i*# 72==@:.

Fi?'*a , C#*! Es&'$>!ic# +l Ri.

5. La Nf*#a

'a nerona es la unidad estructural y uncional undamental del ri0n. %ada ri0n

esta constituido por entre : y 2 millones de neronas. %ada nerona est ormada por una


--

>oUman. %omo consecuencia, la cpsula de >oUman adopta orma de copa y adquiere por

tanto doble pared, de manera que el epitelio reiste las asas capilares y delimita la pared

opuesta de la cpsula. Por tanto, el corp&sculo renal est ormado por glom#rulo y de la

cpsula de >oUman. El epitelio que recubre cada capilar es el epitelio glomerular o la capa

isceral de la cpsula de >oUman y el que reiste la pared opuesta se llama epitelio capsular o

la capa parietal de la cpsula de >oUman. En el teido renal en io el conunto de capilares

glomerulares llena la cpsula, pero como consecuencia de la retraccin e$perimentada por el

procesado histolgico del rgano, queda generalmente un espacio entre los capilares y la

cpsula que se denomina espacio capsular o espacio de >oUman. Esta regin del corp&sculo

renal en la que se sit&an las arteriolas aerente y eerente se designa polo ascular. !puesto al

polo ascular se halla el polo urinario, en donde el epitelio capsular se contin&a con el epitelio

c&bico del t&bulo contorneado pro$imal (9ellman y >roUn, :3?4).

En la 5igura 1 se puede apreciar el corp&sculo renal.

F'!, J'&'i*a ) Ca*i*# 72==@:. Fi?'*a @, C#*%/sc'l# *al.


-/

+. C#*!s 6is!#l?ic#s + la c#*!4a *al

En los cortes histolgicos la distincin entre los t&bulos contorneados distales y los

pro$imales, ambos presentes en la zona cortical y ormados por epitelio c&bico, se sustenta

en los datos siguientes; sus c#lulas son ms peque0as (mayor n&mero de n&cleo en cada

corte transersal), no poseen borde en cepillo y son menos acidilas (poseen menor

cantidad de mitocondrias). El t&bulo contorneado distal est situado unto al corp&sculo de

"alpighi de la misma nerona y, en ese punto, su pared se modiica (unqueira y %arneiro,

-1).

En las 5iguras 4 y ? se obsera cortes histolgicos de la corteza renal.

F'!, J'&'i*a ) Ca*i*# 72==@:.

Fi?'*a 9, Vis!a %a#*>$ica + la c#*!4a *al &' s!a c#s!i!'i+a %*ici%al$!%#* !/5'l#s c#!#*a+#s %*#"i$als 7P: !/5'l#s c#!#*a+#s +is!als 7D: )?l#$*'l#s 7G:. Tici + %a*a**#sailia ) a4'l + !#l'i+ia. P&'# a'$!#.


-2

F'!, J'&'i*a ) Ca*i*# 72==@:.

Fi?'*a , R?i c#*!ical +l *i &' $'s!*a l#s ?l#$*'l#s ) l#s !/5'l#s *als.Tici + 6$a!#"ilia ) #sia. P&'# a'$!#. 7J'&'i*a ) Ca*i*# 2==@:.

2.9.2 El 3(?a+#

a. G*ali+a+s

El hgado es la ms grande de las glndulas y la scera ms oluminosa del

organismo. Pesa alrededor de :.1 g corresponde ms o menos al -,1J del peso corporal

total del adulto. Est ubicado principalmente en la regin del abdomen llamada

hipocondrio derecho aunque tambi#n se e$tiende un poco hacia el hipocondrio izquierdo y

est protegido por la parrilla costal (Doss, -1).

El hgado est diidido anatmicamente por surcos proundos en dos lbulosgrandes (derecho e izquierdo y en otros dos ms peque0os (lbulo cuadrado y lbulo


-1

caudado o de 7piegel). Esta diisin anatmica slo tiene importancia topogrica porque

relaciona los lbulos hepticos con otros rganos abdominales. 'a diisin en segmentos

uncionalesquir&rgicos que corresponden a la irrigacin sangunea y el drenae biliar tiene

mayor importancia clnica (Doss, -1).

5. El 6(?a+# +?*a+a f>*$ac#s ) !#"ias

'os hepatocitos participan en la degradacin de rmacos, to$inas y protenas

e$tra0as al organismo ($enobiticos). "uchos rmacos y to$inas no son hidrosolubles,

por lo que no pueden eliminarse de la circulacin con eicacia por los ri0ones. El hgado

conierte estas sustancias en orma ms solubles en agua. Este proceso lo realizan los

hepatocitos en dos ases (Doss, -1);

'a fase I, llamada oxidacin, comprende la hidro$ilacin (adicin de un grupo

AAA!C) y la carbo$ilacin (adicin de un grupo AAA%!!C) en un compuesto e$tra0o. Esta

ase ocurre en el retculo endoplasmtico liso y las mitocondrias de los hepatocitos.

%omprende una serie de reacciones bioqumicas con protenas que colectiamente reciben

el nombre de citocromo P21.

'a fase II, llamada conjugacin, comprende la asociacin (conugacin) de la

sustancia e$tra0a con cido glucornico, glicina o taurina. Este proceso torna el producto

de la ase + todaa ms hidrosoluble de modo que se pueda eliminar con acilidad por los

ri0ones.

c. L#5'lill#s 3%>!ic#s

7eg&n 9ellmann y >roUn (:3?4) la estructura lobulillar puede interpretarse de tres

modos dierentes, dependiendo de las relaciones uncionales que se consideren. Ellobulillo heptico, llamado en ocasiones lobulillo clsico, es una unidad estructural

organizada alrededor de la ena central. 'os contornos de los cortes transersales de este

lobulillo tienen orma he$agonal apro$imadamente, con los sinusoides irradiando desde la

perieria a la ena central en la que desembocan. 'as reas portalesse hallan presentes en

apro$imadamente tres de los seis ngulos del lobulillo heptico. Estas zonas, de orma

triangular, de teido conuntio contienen ramas de la ena porta, arteria heptica, asos

linticos, uno o ms conductillos biliares y nerios. El lobulillo heptico estespecialmente bien delimitado en el cerdo, ya que se halla completamente rodeado por


-4

tabiques de teido conuntio. En otras especies los tabiques son menos isibles y el

par#nquima de un lobulillo aparece mezclado con los lobulillos adyacentes, sin una lnea

de delimitacin clara.

El lobulillo portales una unidad uncional centrada alrededor del canalculo biliar

del rea portal. 7e deine como un rea triangular compuesta de par#nquima de tres

lobulillos hepticos adyacentes, que desaguan por el canalculo biliar localizado en la zona

portal. 9e esta orma, el ee del lobulillo portal es el canalculo biliar interlobulillar del

rea portal y la perieria se halla delimitada por tres enas centrales.

*dems de las unidades uncionales tradicionales de la estructura antes descrita, se

ha propuesto una tercera unidad, el cino heptico. Este es apro$imadamente una zona

oal del par#nquima, cuyo ee gira alrededor de la rama terminal de la ena porta y el

comienzo de los conductos biliares. 6na ena central se halla en cada e$tremo del cino y

un rea portal en un lado. 7e hacen ostensibles tres zonas de diersa actiidad metablica

entre el ee y la ena central, que se producen por la disminucin del aporte de nutrientes y

de o$geno conorme la sangre luye hacia la ena central. 9e esta orma, las c#lulas de la

zona : reciben la mayor parte del o$geno y nutrientes, mientras que las de las zonas - y /

reciben progresiamente menos.

7eg&n Doss (-1), los hepatocitos en cada cido heptico se describen dispuestos

en tres zonas elpticas conc#ntricas que rodean el ee menor;

'a zona : es la ms cercana al ee menor y a la irrigacin proeniente de las ramas

penetrantes de la ena porta y de la arteria heptica. Esta zona corresponde a la perieria de

los lobulillos clsicos. 'a zona / es la ms leana al ee menor y la ms cercana a la ena

centrolobulillar (#nula heptica postsinusoidal). Esta zona corresponde al centro del

lobulillo clsico cuyos hepatocitos rodean la ena centrolobulillar. 'a zona - est entre las

zonas : y / pero no tiene lmites ntidos.

'a descripcin en zonas es importante en la descripcin y la interpretacin de los

modelos de degeneracin, regeneracin y eectos t$icos especicos del par#nquima

heptico en relacin con el grado o la calidad de la perusin ascular de los hepatocitos.'as c#lulas de la zona : son las primeras en recibir o$geno, nutrientes y to$inas desde la


-?

sangre sinusoidal y son las primeras en e$hibir alteraciones morolgicas tras la

obstruccin de la a biliar (estasis biliar). Estas c#lulas tambi#n son las &ltimas en morir si

hay trastornos de la circulacin y son las primeras en regenerarse. En cambio, las c#lulas

de la zona / son las primeras en surir necrosis isqu#mica (necrosis centrolobulillar) en las

situaciones en las que la perusin y las primeras en acumular lpidos.

En la 5igura 8 se obsera cortes histolgicos de los lbulos hepticos.

F'!, J'&'i*a ) Ca*i*# 72==@:.

Fi?'*a , ic*#f#!#?*af(a +l 6(?a+#. A: Va C!*al 7VC:. B: Es%aci# %#*!a&' c#!i 'a *a$a + la a*!*ia 6%>!ica 'a *a$a + la


-8

bronquios intrapulmonares se dicotomizan, dando lugar a bronquiolos de dierentes

rdenes, designados con los nombres primarios, secundarios, terciarios o terminales y

bronquiolos respiratorios. Los conductos alveolares se e$tienden posteriormente a los

bronquiolos respiratorios y no son realmente ms que un conducto en los que se abren

numerosos al#olos uno al lado del otro. 'as grandes estructuras sacciormes en las que se

abren los al#olos que las rodean se llaman sacos alveolares. 'os intercambios de gases

tienen lugar a niel de los alvolos. En la 5igura 3 se puede apreciar las ramiicaciones del

aparato respiratorio (9ellman y >roUn, :3?4).

F'!, J'&'i*a ) Ca*i*# 72==@:.

Fi?'*a 8, P*ici%als *a$ificaci#s +l A%a*a!# Rs%i*a!#*i#.


-3

2. RELACION DOSIS RESPUESTA

'a relacin dosisefecto es la relacin entre la dosis y el eecto a niel indiidual. 6n

incremento de la dosis puede incrementar la intensidad de un eecto o su graedad. Puede

obtenerse una cura de dosisAeecto a niel de todo el organismo, de la c#lula o de la

mol#cula diana. Cay algunos eectos t$icos, como la muerte o el cncer, que no tienen

grados, sino que son eectos Gde todo o nadaH (Colmberg, -:).

'a relacin dosisrespuesta es la relacin entre la dosis y el porcentae de indiiduos que

presentan un determinado eecto. *l incrementarse la dosis lo normal es que aumente el

n&mero de indiiduos aectados en la poblacin e$puesta. El establecimiento de las

relaciones dosisAeecto y dosisArespuesta es esencial en to$icologa. En los estudios

m#dicos (epidemiolgicos) suele utilizarse como criterio para aceptar una relacin causal

entre un agente y una enermedad el hecho de que el eecto o la respuesta sean

proporcionales a la dosis (Colmberg, -:).

En la realizacin de un e$perimento donde se quiere determinar la relacin

GdosisArespuestaH de un determinado $enobitico sobre un deinido organismo, se

deben considerar como mnimo los siguientes actores; a) 7eleccin del tipo de respuestapara ser monitoreada en t#rminos cuantitatios. b) 9einicin del organismo de prueba

(sistema biolgico). c) Perodo de e$perimentacin o duracin del ensayo. d) 7erie

de dosis a probar; dosis simple (lo que generalmente implica un estudio de to$icidad

aguda)I dosis repetitia a corto plazo (estudio subagudo)I dosis repetitia a largo plazo

(to$icidad crnica). e) Ba de administracin (Balle y 'ucas, -).

'a respuesta de un organismo hacia un agente $enobitico no aria &nicamente conlas dierentes especies animales (ariabilidad interespecie)I sino que #sta, normalmente

tambi#n puede ariar dentro de la misma especie (ariabilidad intraespecie (Balle y 'ucas,

-).


/

2..1 D#sis l!al $+ia 7DL@=:

'a 9'1 (dosis letal) es la dosis que produce una mortalidad del 1 J en una

poblacin animal. 'a 9'1 sola considerarse en la bibliograa ms antigua como unamedida de la to$icidad aguda de las sustancias qumicas. * mayor 9'1, menor to$icidad

aguda. 9e una sustancia qumica muy t$ica (con una 9'1 baa) se dice que es potente.

o hay una correlacin necesaria entre la to$icidad aguda y la to$icidad crnica

(Colmberg et al., -:).

En el cuadro :- se tiene una clasiicacin del grado de to$icidad de un agente

$enobitico, en el cual se aprecia que sustancias con alores de 9'1 menores de : mg=g

por a oral de son sumamente t$icas, y de las cuales podemos encontrar presentes

en los alimentos.

C'a+*# 12,Ra?# + !#"ici+a+ a?'+a

D#$iaci

ADINISTRACIN9'1

9osis oral &nica(rata)

9'19osis cutnea

&nica

(coneo)

%'1V+nhalacin deapor 2 horas

(rata)

Posible dosisoral letal a unhombre adulto

E$tremadamentet$ico

K : mg=g K 1 mg=g : : gota, : grumo

*ltamentet$ico

:A1 mg=g 1A1 mg=g :A: : cucharita (2ml)

"oderadamentet$ico

1A1 mg=g 1A/1 mg=g :A:, / g

'igeramentet$ico

.1A1 g=g ./1A./ g=g :,A:, -1 g

Prcticamente no

t$ico

1A:1 g=g /A-1 g=g :,A:, : '

Delatiamenteinocuo

S :1 g=g -1 g=g S :, S : '

%oncentracin letal media, e$presada en ppmF'!, Dic6$a ) G*a*+ 71898:.

2..2 Rs%'s!a Ac'$'la!i


/:

animales de prueba (por eemplo, ratn), se les administra un compuesto a dierentes series

de concentraciones y en base a una ruta preestablecida. 'as dosis que se administren,

deben ser tales, que no todos los animales mueran, ni que todos sobreian. *dems la

dosis inicial debe ser lo suicientemente baa para que no maniieste ning&n eecto

aderso o que interiera con la determinacin. En grupos subsecuentes la dosis, se

incrementa en base logartmica o e$ponencial. 'a dosis inal, debe causar la muerte en

todos los animales de prueba (Balle y 'ucas, -).

7eg&n 9eshpande (--), los agentes t$icos pueden ser clasiicados en una

ariedad de ormas. Por eemplo, pueden ser clasiicadas en uncin de sus rganos diana

(hgado, ri0ones, pulmones, piel, sistema nerioso, sistema hematopoy#tico, etc.), su

utilizacin (pesticidas, disolentes, aditios alimentarios, etc.), su origen (animal, egetal,

microbiano, to$inas), y sus eectos (cncer, mutaciones, da0o heptico, etc.). Tambi#n

pueden ser agrupados en uncin de su estado sico (gas, polo, lquido), sus requisitos de

etiquetado (e$plosios, inlamables inlamabilidad, o$idante), sus propiedades qumicas

(aminas aromticas, hidrocarburos policclicos, hidrocarburos halogenados, etc.), o su

potencial t$ico, como se muestra en el cuadro :/.

C'a+*# 1, Clasificaci + la T#"ici+a+

CLASIFICACION PROBABLE DOSIS ORAL LETAL

EDIA PARA 3UANOSPrcticamente no t$ico S :1 gFg'igeramente t$ico 1L:1 gFg"oderadamente t$ico .1L1 gFg"uy t$ico 1L1 mgFg

E$tremadamente t$ico 1L1 mgFg7upert$ico K 1 mgFgF'!, Ds6%a+ 72==2:.

2. DOSIS LETAL EDIA Q TODOS ALTERNATIVOS


/-

'a 6nin Europea parece decidida a acabar con la actual situacin de

desconocimiento sobre los riesgos reales que las sustancias y preparados qumicos suponen

para la salud humana y el medio ambiente. * partir de :38: se estableci un sistema de

notiicacin de sustancias nueas para garantizar el control de los productos

comercializados. *unque para las Gnueas sustanciasH se e$ige una ealuacin bastante

completa, de las Ge$istentesH o comercializadas antes de :38: e$iste un absoluto

desconocimiento sobre sus caractersticas to$icolgicas (Depetto et al, -2).

Para las ms de /, sustancias producidas en cantidades superiores a : T" ser

necesario conocer urgentemente sus propiedades to$icolgicas y ecoto$icolgicas

antes de -:-. Para ello puede ser necesario utilizar ms de :- millones de animales

ertebrados. 7in embargo, la nuea estrategia pretende omentar los ensayos sin animales.

9e hecho, los ensayos de sustancias producidas entre : y : T" deberan limitarse a

m#todos in !itro. os encontramos por tanto en un momento crucial y una oportunidad

para considerar la utilidad de los procedimientos que sern ms necesarios,

incluyendo los de to$icidad aguda, irritacin, corrosiidad, ecoto$icidad, etc. (Depetto et

al, -2).

E$isten protocolos de los dierentes ensayos to$icolgicos que se realizan in !i!o,

de acuerdo con los criterios de la "rgani#ation for $cono%ic &ooperation and

De!elop%ent(!E%9). En #stos se han introducido dierentes criterios de reduccin del

n&mero de animales y de reinamiento de las t#cnicas, si bien e$isten pocos m#todos de

reemplazo que hayan sido aceptados en el plano legislatio.

'a armonizacin de los protocolos utilizados en todo el mundo ha reducido de

orma signiicatia el uso de animales con estos ines. 9esde :38- la !E%9 ue la primera

organizacin internacional en establecer unos criterios de armonizacin de los ensayos

realizados en animales, siendo aceptados por todos los pases miembros de dicha

organizacin.

'a !%9E ha sustituido el ensayo de la determinacin de la toxicidad aguda por

va oral(9'1 seg&n T< 2:) por sus tres alternatias (2-, 2-/ y 2-1). Estos ensayos


//

reducen signiicatiamente el n&mero de animales empleados, y en muchos casos, el dolor

y estr#s asociado a los mismos. 9esde ulio del -:, la comunidad reguladora no usa ms

el ensayo de la 9'1.

E$iste un gran inter#s por conocer si es posible predecir la 9osis 'etal por a oral

en Data a tra#s de m#todos in itro. Para ello, Calle y


/2

(%*). 'os procedimientos ms prometedores in itro son el cultio de c#lulas dendrticas

humanas a partir de mononucleares peri#ricos ealuando la liberacin de +'A:W o la

produccin de sus *Dm, unto al empleo de modelos de piel humana reconstituida,

cultios de c#lulas de 'angerhans, cultios de queratinocitos y cocultios de c#lulas T y

c#lulas dendrticas.

El %entro Europeo para la Balidacin de "#todos *lternatios (E%B*") ha

propuesto una estrategia para ealuar la capacidad de sensibilizacin d#rmica (Xorth

y >alls, --) que comenzara por la b&squeda de datos preios sobre el compuesto,

seguida de la ealuacin de las propiedades isicoqumicas del mismo y la estimacin

mediante sistemas predictios computacionales. * continuacin se realizara un estudio

de los parmetros de particin, un ensayo in itro de sensibilizacin, y inalmente, si

no se han podido e$cluir los eectos, el ensayo de ndulo lintico local.

'a 9irectriz 2? de la !%9E de estudio por dosis repetidas de -8 das ue reisada

en :331 para permitir su uso como primera etapa para detectar eectos inmunot$icos

(>arloU et al., --). 7e incluy la pesada del timo y el estudio histopatolgico de las

placas de Peyer, timo, ndulos linticos y m#dula sea. Para una meor ealuacin se

sugiri posteriormente realizar un estudio histopatolgico especializado de las c#lulas y los

rganos linoides y linticos, y en caso de detectar alteraciones, aplicar un ensayo de

eritrocitos de carnero.

El estudio de 3 das, 9irectriz 28 de la !E%9, puede ser ms sensible, no slo

por el periodo de e$posicin, sino tambi#n por el empleo de mayor n&mero de animales.

'a 1-Y *samblea


/1

laboratorio correctamente realizados y en animales, cuando sea oportunoH. Por lo tanto,

los procedimientos alternatios pueden proporcionar un considerable ahorro en el n&mero

de animales empleados (Depetto et al, -2).

En la /:Z Deunin %onunta de la !%9E en oiembre de - se decidi que

debe ser eliminado el ensayo actual de la determinacin de la to$icidad agua por a oral

(9'1 seg&n T< 2:). 6na decisin que en buena medida ue debida al intenso trabao y

presin eercida durante largos a0os de negociacin y reuniones de e$pertos por los

miembros de la 6nin Europea y de la !E%9 (*sociacin Espa0ola de To$icologa,

-:).

El -1 de Enero de -: ue aprobada una 9irectia de la %omisin Europea que,

entre otras muchas cosas, decreta la eliminacin del m#todo >.: (equialente a la

determinacin de la 9'1 o T< 2:) del *ne$o B de la 9irectia 4?128 que contiene los

m#todos de test oiciales en la E6 para ealuar las propiedades de las sustancias qumicas

(*sociacin Espa0ola de To$icologa, -:).

2.8 ESTUDIOS DE TOICIDAD DE DOSIS REPETIDAS

'os estudios de to$icidad de dosis repetidas tienen como obetio caracterizar el

peril to$icolgico de la sustancia tras la administracin repetida. 9e ellos es posible

obtener inormacin sobre los eectos t$icos, la identiicacin de los rganos blancos, los

eectos sobre las unciones isiolgicas, hematolgica, patolgica, histopatolgica, y la

determinacin del alor !E'. Estos estudios pueden tener duraciones peque0as (por

eemplo, :2 y -8 das) o inolucrar un perodo ms e$tensio de la administracin de la

droga (por eemplo, 3 das, :8 das). (7ouza, -4)


/4

El'"$ ('"$) es el niel sin eecto (aderso) obserado, o la dosis ms alta

que no produce eecto t$ico. Para establecer un !E' se necesitan m&ltiples dosis, una

poblacin amplia e inormacin complementaria para garantizar que la ausencia de

respuesta no es un mero enmeno estadstico. El '!E' es la mnima dosis eectia

obserada en una cura de dosisArespuesta, (es decir, la dosis mnima) que produce un

eecto. 6nfactor de seguridad es un n&mero conencional, arbitrario, por el que se diide

el !E' o el '!E' obtenidos en e$perimentos con animales para establecer una dosis

permisible proisional en los seres humanos. 7uele utilizarse en la esera de la to$icologa

alimentaria, pero puede emplearse tambi#n en la to$icologa laboral (Colmberg et al.,

-:).

El -? de ulio del -4 el 59* (5ood *nd 9rug *dministration) termina de

elaborar la


/?

porcentae considerable de picos y trozos de calamar gigante en el tracto digestio de

especies capturadas (+barra, -4). Dazn por la cual puede alimentarse de especies que

pueden contener algunas to$inas marinas.

*lgunas de las into$icaciones de origen marino son causadas por ingerir pescados y

mariscos que se han alimentado con dinolagelados o algas productoras de to$inas. %on la

tendencia actual de consumo de productos marinos, se podran producir into$icaciones que

pueden ser lees o de mayores consecuencias. Entre los mariscos que se alimentan con

algas estn los meillones, almeas, ostiones y los peces GciguateraH (%olUell, :38/).

Tambi#n pueden presentarse otros problemas y causas como las que se presentan en el

%uadro :2.

C'a+*# 1, I!#"icaci#s + #*i? $a*i#

PROBLEA ALIENTO ICROORGANISOS OBSERVACIONES

Cistamina

%iguatera

Parlisis pormariscos

eurot$icos

9iarrea

Peces Sco%broide(at&n, macarela,

bonito, etc.) otrospeces (sardina,anchoeta)

>arracudaCuachinangoDbalo

"eillones*lmea%aracol, etc.

"ariscosrebeto$ina* y > (poli#ter)

Dinophysis forti-

D. acu%inata

(%hile, pases nrdicos, apn)

*cumulacin de histamina enpescado descompuesto,minutos a horas.


/3

enermedad puede ser de -L/ das, aunque puede prolongarse durante semanas o incluso

a0os en los casos graes. 'a muerte sobreiene como consecuencia de un colapso

circulatorio (Cuss, :33?).

2.1=. T#"ia %a*ali4a! + $#l'sc#s 5i


2

7e ha dado parte de miles de casos de enermedades gastrointestinales causados por

la into$icacin diarreica por ingestin de moluscos bialos (97P) en Europa, apn y

%hile. 'os dinolagelados causantes de la produccin de las to$inas pertenecen a los

g#nerosDinophysis y urocentru%. Estos dinolagelados estn ampliamente distribuidos,

lo que signiica que esta enermedad tambi#n puede producirse en otros lugares del mundo.

*l menos se han identiicado ? to$inas, incluido el cido oFadoico. 'a aparicin de la

enermedad se produce entre la media hora y unas pocas horas despu#s del consumo del

marisco que se ha estado alimentando de algas t$icas. 'os sntomas son desrdenes

gastrointestinales (diarrea, mitos, dolor abdominal) y las ctimas se recuperan en /L2

das. unca se ha registrado ninguna muerte (Cuss, :33?).

2.1=.@ T#"ia '*#!"ica + $#l'sc#s 5i


2:

estructura rgida, soluble en agua y termoestable. %ompite con el cido glutmico por los

receptores de #ste, actindolos y permitiendo la entrada de cloruro, calcio y agua, lo que

llea a la ruptura y muerte celular.

'os sntomas son gastrointestinales y neurolgicos; calambres, diarrea, mitos, nuseas,

dolor abdominal, perdida de la concentracin, p#rdida del equilibrio, entorpecimiento,

debilidad, dolor de cabeza, isin borrosa, conusin, #rtigo, p#rdida de la memoria de

corto tiempo (da0a las c#lulas del hipocampo), coma y muerte. 'a dosis m$ima aceptada

internacionalmente es de - ]gg de marisco (Cuss, :33?).

2.1=. 3is!a$ia

'a into$icacin por histamina es una into$icacin qumica debida a la ingestin de

alimentos que contienen altos nieles de histamina. Cistricamente, esta into$icacin se

denomin into$icacin por escmbridos debido a la recuente asociacin con peces de la

5amilia Sco%bridae, entre los que se incluyen el at&n y la macarela o caballa.

'a into$icacin por histamina es un problema de alcance mundial en los pases

donde los consumidores ingieren pescado que contiene altos nieles de histamina. Es una

enermedad benigna, su perodo de incubacin es muy corto (de pocos minutos a pocas

horas) y la duracin de la enermedad es corta (pocas horas). 'os sntomas ms comunes

son los cutneos, como el rubor acial o bucal, urticaria, o edema localizado, pero tambi#n

puede erse aectado el tracto gastrointestinal (nuseas, mitos, diarrea), o producirse

complicaciones neurolgicas (dolor de cabeza, hormigueo, sensacin de quemazn en la

boca) (Cuss, :33?).


22

.. E l sac*ifici# + l#s *a!#s

- Ceparina 7dica (inhibe la coagulacin de la sangre)

- ^ter.

- eringas desechables est#riles.

- Tieras quir&rgicas

- %aitas plsticas

- 5ormol al :J.

.. Pa*a l#s sa)#s 5i#&'($ic#s ) 6$a!#l?ic#s

- Tubos capilares para microhematocrito.

- Espectrootmetro semiautomtico "etrolab_ :4.

- *nalizador hematolgico automtico 7ysme$ _:8.

- Deactios para la determinacin bioqumica de la concentracin de alb&mina,

creatinina y transaminasa glutamicopir&ica (Tistur.

- *lcohol etlico.

- Oilol.

- Cemato$ilina.

- Eosina al :J.

. ETODOS DE ANLISIS Q PROCEDIIENTO

..1 P*%a*aci +l C#c!*a+# + P*#!(a + P#!a

7e prepar el concentrado de protena de pota seg&n la metodologa seguida por

'azo (-4). El manto de la pota ue limpiado, cortado, laado en agua, precocido, molido,

laado nueamente, centriugado, deshidratado y, inalmente, sometido a una molienda

ina. El producto obtenido presentaba buenas caractersticas organol#pticas. El olor y sabor

ueron agradables y neutrales, sin olor a pota. Estas caractersticas se mantuieron

inalterables durante los tres meses que duro el e$perimento, sin usar ning&n tipo de

preserante o antio$idante. El diagrama de luo del proceso de elaboracin de concentradode protena de pota se muestra en la 5igura :.


21

Pota Bsceras, piel.

"anto de pota Destos de piel, arena.

"anto limpio %ubos de / cm. de lado.

Producto, agua, hielo Eliminacin del olor y sabor.

"anto cortado TZ 81Z%. "anto con meor te$tura.

"anto precocido %riba de 1 mm. "anto molido.

"anto molido Eliminacin de lquido residual.

Producto centriugado Producto seco. Casta humedad de 8J.

Producto seco Producto menor a :1 m.

Fi?'*a 1=, Dia?*a$a +l fl'# +l %*#cs# + la5#*aci +l c#c!*a+# +%*#!(a + %#!a

'*B*9! +

%!DT*9!

'*B*9! ++

PDE%!%+9!

'+"P+*9!

"!'+9! +

%ETD+56


24

9icho 9iagrama de luo ue elaborado en base a lo reportado por Doldn (--) y

'azo (-4) con modiicaciones para el caso especico de la pota. 6na bree descripcin

del mismo es la siguiente;

a. Rc%ci + $a!*ia %*i$a

'a pota entera eiscerada ue recepcionada en caas de plstico con hielo. 7e realiz

el respectio anlisis organol#ptico para determinar el grado de rescura y posteriormente

se procedi a separar el manto, la aleta y la cabeza.

5. Li$%ia+#

El manto preiamente pelado ue abierto para su limpieza, se le retir los restos de

sceras, la pluma y la piel delgada de la parte interna del manto.

c. La


2?

6. C!*if'?a+#

%on la inalidad de eliminar el lquido residual del laado y reducir el tiempo de secad#.

i. Ds6i+*a!a+#%on aire caliente a 41 Z% hasta una humedad inal de 8J. 7e utiliz un secadero por

coneccin.

. #li+# II

'a molienda se realiz en un molino de martillos hasta una granulometra promedio de

menos de :1 m.

..2 A>lisis Ss#*ial +l C#c!*a+# + P*#!(a + P#!a

Para el anlisis sensorial del %oncentrado de Protena de Pota, se emple el cuadro :1,

dise0ado por 'azo (-4), el cual elabor dicho cuadro sensorial teniendo en cuenta las

caractersticas de color, olor, sabor y te$tura.

C'a+*# 1@, E


28

.. C#$%#sici &'($ica %*#"i$al

'a composicin qumica pro$imal de la materia prima (%oncentrado de Protena de

Pota) se realiz seg&n los m#todos recomendado por agaFura (:3?-).

.. T#"ici+a+ a +#sis *%!i+as %#* 8= +(as

7e lle a cabo seg&n lo establecido en las 9irectrices de la


1

(>%5), en presencia de un e$ceso de colorante en medio tamponeado a pC /.3. El aumento

de absorbancia a 4-1 nm respecto del >lanco de reactio, es proporcional a la cantidad de

alb&mina presente en la muestra.

5.2 D!*$iaci + C*a!iia 7!#+# C#l#*i$!*ic# Ci!ic# # + %'!# fial:

'a creatinina y otros compuestos de la muestra reaccionan con el cido pcrico en

medio alcalino dando un compleo color roo que se cuantiica mediante lectura

otom#trica.

'a determinacin de creatinina puede llearse a cabo por medio de una t#cnica de

punto inal, o por una t#cnica cin#tica eliminndose en ambas el color que se debe a los

cromgenos no creatinina.

En el primer caso, la adicin de cido al medio, destruye el picrato de creatinina

pero no el color ormado por los dems compuestos. Por lo tanto la dierencia entre la

lectura otom#trica antes y despu#s del agregado de cido, permite cuantiicar la creatinina

en orma especica.

En la t#cnica cin#tica, los cromgenos no creatinina, reaccionan dentro de los

primeros / segundos de iniciada la reaccin, que se comporta como cin#tica de primer

orden para la creatinina. 9e manera que entre los / segundos y los 1 minutos posteriores

al inicio de la reaccin, el incremento de color se debe e$clusiamente a la creatinina.

5.. D!*$iaci + la Ac!i


1:

c. A>lisis Aa!#$#%a!#l?ic#

*l da siguiente de la &ltima administracin se procedi a sacriicar por elongacin

cerical para eectuar la e$traccin de los siguientes rganos; ri0n, hgado y pulmn, los

cuales ueron e$aminados macroscpicamente y iados en solucin de ormol al : J para

el posterior estudio histopatolgico. Tambi#n se determin el peso relatio de rganos

(ri0n, hgado y pulmn). 'a metodologa a seguir ue la recomendada por %astillo et al

(-4).

+. A>lisis 6is!#%a!#l?ic#

'as muestras e$tradas de las necropsias se conseraron en ormol al :J, se

incluyeron en paraina y se cortaron en un micrtomo con un grosor de 2 a 1 mm. 7e us la

t#cnica tradicional de coloracin con hemato$ilinaAeosina para la realizacin de los

estudios de histopatologa. 'a metodologa seguida ue la recomendada por %astillo et al

(-4).

.@ ETODOLOGA EPERIENTAL

En la 5igura :: se muestra el dise0o e$perimental que se sigui en la presente

inestigacin.

.9 ANLISIS ESTADSTICO

'os resultados se e$presarn con la media desiacin estndar. Para determinar

dierencias signiicatias entre los grupos se emple el anlisis de arianza (*B*) para

un criterio de clasiicacin de una a (!ne Xay) y se aplic la prueba de comparacin de

medias de TuFey (para ealuar la signiicancia de todas las dierencias entre tratamientos)

y 9unnet (para comparar a cada uno de los tratamientos contra el control),, considerndose

un niel de signiicancia de cinco por ciento (1J). 7e utiliz el programa estadstico

"initab ersin :1.


MATERIAPRIMA

PRUEBA PILOTO EVALUACION PATOLOGICA LABORATORIO CLINICO

Grupos Dosis

(10 ratas*/grupo) (mg/kg)

I 500II 1000

III 2000

IV Control

Factores a controlar1. Anlisis sensorial !alua"i#n $e 1. %&ser!a"i#n $e la a"ti!i$a$ 1.- Dian!stico Anato"o # Patol!ico 1. An$lisis Bio%&'"icos2. Composi"i#n 'umi"a. la oi"i$a$ + "omportamiento (!alua"i#n ,a"ros"#pi"a me$iante ne"ropsia) Creatinina- Al&mina + ransaminasa

agu$a oral 2. Control $el peso $iario glutami"opir!i"a (G).

(. - Dian!stico )isto*atol!ico (. E+$"enes )e"atol!icos(Colora"i#n "on ematoilinaeosina para la emoglo&ina- emato"rito- 3e"uento $e

* 3atas "epa 4prague Dale+ !alua"i#n "ortes istol#gi"os $e los #rganos) 6eu"o"itos (lin7o"itos- mono"itos-

eosino7ilos- &as#7ilos- neutr#7ilos).

TO,ICIDAD A DOI REPETIDA /0DA2

Fi&ra 113 Meto4olo'a E+*eri"ental

Con"entra$o$e rotena

$e ota

Anlisis Anatomoatol#gi"a

Anlisisistopatol#gi"o

Anlisis8io'umi"o

menesematol#gi"os


IV. RESULTADOS Q DISCUSIN

.1 DE LA ATERIA PRIA

.1.1 E


12

'os resultados obtenidos son similares a los reportados por 'azo (-4) y a lo

propuesto por "adrid (er cuadro 1) para el %oncentrado Proteico de Pescado del tipo *

pero con la dierencia que no usamos solentes, por lo tanto es un producto con ms

aceptacin en el mercado.

Fi?'*a 12, C#c!*a+# + P*#!(a + P#!a.

.2 TOICIDAD A DOSIS REPETIDAS POR 8= DAS

'a administracin del %oncentrado de Protena de Pota no demostr alteraciones en

el comportamiento, ni en el e$amen sico de los animales tratados durante el perodo dee$perimentacin, adems de no producir mortalidad en ning&n grupo e$perimental. El

consumo de alimento y agua por los animales de ambos se$os se mantuo similar tanto

para el grupo control, como para los tratados con dierentes dosis del producto.

'a administracin durante los 3 das de la dosis lmite de - mg=g no prooc

muertes de los animales o sntomas indicatios de to$icidad. Este resultado enmarca al

concentrado de protena de pota (Dosidicus gigas) en la categora /sin clasificarH (- K9'1) de acuerdo a las %lases de To$icidad de la %omunidad Europea ya que no se


11

obser mortalidad ni signos t$icos atribuibles a la administracin de la sustancia de

prueba a la dosis de - mgFg que ue la dosis ms alta empleada (


14

adoptado en la


1?

concentracin con alores limites hasta de 41 mgFg para ratones y 4 mgFg para

ratas7*ne$o :).

.2.1 E


18

En el cuadro :3 se muestra como ue la ariacin semanal del peso corporal de las

ratas de todos los grupos. *l analizar el comportamiento semanal del incremento del pesocorporal y el consumo acumulatio de alimentos se obser un incremento similar en

todos los grupos de tratamiento respecto al control. En el *ne$o 1 se puede obserar

gricamente las comparaciones del grupo +, ++ y ++ ersus el grupo +B (%ontrol).

C'a+*# 18, Va*iaci S$aal +l %s# c#*%#*al + las *a!as 7?: !*a!a+as c# lC#c!*a+# + P*#!(a + P#!a 7$+ia a*i!$!ica +s+a* K1=:

D(as +'*a! l !*a!a$i!#

G*'%# Peso +nicial ? :2 -: -8 /1 2- 23 14+ -41.-/. -??.2/4.? -83.422.3 -88.21/. -33.42?.2 /:./23.3 /8.?1/./ /:2.1/.4 /-:.-18.++ -43.?-8.1 -?:.3/-.1 -?2.-2:.: -?8.?2/.: -88.-28./ -88.11:.- -3/./12.- -31.18./ /.418.1+++ -1:.1//.4

V-18.?/4.2

V-41.?2.3 -4?.221.?

V-?2.?28.1

V-??.124.- -8.-28.8 -?:.224.3

V-8-.422.:V

%ontrol -88.4/8.8 /-.224.2 /:4.-12.2 /-?.313.: ///.342.2 //8.3?.? /2/.?43. /1-.4?-.- /1?.?1.4

VpK,1I VVpK,: y pS .1 en los dems

En las pruebas estadsticas para la ariacin semanal del peso corporal de las ratasde todos los grupos (*ne$o 8) se encontraron dierencias signiicatias (pK.1) y de

acuerdo a la prueba de comparacin 9unnet se eriica dichas dierencias entre el grupo

control y el grupo +++ (- mg=g) desde el inicio, semana :, /, 2, ? y 8. Ello se debe a

que las ratas del grupo : ueron las que inicialmente tuieron menos peso en promedio al

inicio de la inestigacin y el grupo control por el contrario el grupo de mayor peso

promedio al inicio. Ello se debi a que por precaucin las ratas de menor peso seg&n los

clculos de dosiicacin del producto (ane$o :2) iban a necesitar menos olumen dedosiicacin y para eitar problemas con la administracin del concentrado de protena de

pota se procedi a agrupar a las ratas de mayor peso en el grupo control ya que ellas no

iban a recibir el producto.

Para esta comparacin solo se tomo como datos los alores de las primeras 8

semanas (14 das), debido a que en la semana 3 se presento un cuadro gripal ocasionado

por cambios climticos. Por ello se decidi trabaar slo con esos datos..


13

.2.2 Bi#&'($ica Cl(ica

'a media aritm#tica desiacin estndar de los datos de >ioqumica (*lb&mina,

%reatinina y *ctiidad Transaminasa asales(al inicio) 2

/.4 ./?-.? L 2.- (Dango)

:.- .:4.8 L :.? (Dango)

4.? .:4/ L :2 (Dango)

VpK,1I VVpK,: y pS .1 en los dems

En el anlisis estadstico (*B*) se obser que para los ndices bioqumicos

ealuados (*lb&mina, %reatinina y T


4

rpidamente ante estr#s, trauma o septis. Esto puede deberse a una acelerada redistribucin

desde el espacio intraascular, una disminucin en su sntesis yo un aumento en su

catabolismo ('eit, -8).

7eg&n 5ernndez (-?) en los &ltimos a0os, la isiologa renal en relacin con las

protenas, y especialmente el comportamiento en relacin con la alb&mina, est

adquiriendo un gran inter#s en la inestigacin renal bsica, a la ez que gana una

creciente importancia en la nerologa clnica, as como en la medicina cardioascular. Por

eemplo, la e$crecin de la alb&mina con la orina inal, que conocemos como albu%inuria,

est siendo reconocida, cada ez ms, como un importante actor de riesgo de

enermedades renales y cardioasculares. *unque es eidente una clara correlacin

epidemiolgica, no e$iste a&n una e$plicacin racional para estas relacionesI recientemente

se ha sugerido que el da0o de los podocitos inducidos por la presin arterial

intraglomerular y mediada por los receptores de los mineralcorticoides podra ser la

e$plicacin de esta cone$in entre la albuminuria y el riesgo de las enermedades

cardioasculares.

9omnguez et al (-:) trabaando con ratas Uistar trabaando con dos grupos de

ratas


4:

Fi?'*a 1, Val#*s %*#$+i# + la al5/$ia al iici# ) al fial + la i


4-

Fi?'*a 1, Val#*s %*#$+i# + la C*a!iia al iici# ) al fial + la i


4/

los rangos de alores reportados por otros autores. omura et al. (:3?1) reportan en ratas

hembras Xistar alores de T

erlanga et al.

(:338), por su parte, reportan T


42

Fi?'*a 1@, Val#*s %*#$+i# + la TGP al iici# ) al fial + la i


44

normales de Cemoglobina el rango entre :- L :8 gdl y el %anadian %ouncil on *nimal

%are (:382) alores normales entre ::.1 L :4 gdl.

7e puede airmar entonces que a pesar que e$iste una dierencia altamente

signiicatia entre el grupo + y el control, los alores de hemoglobina se encuentran dentro

de los alores normales para esta especie.

Fi?'*a 19, Val#*s %*#$+i# + la 3$#?l#5ia al iici# ) al fial + la i


4?

El +nstituto acional de !ncologa y Dadiobiologa de la Cabana, %uba (P#rez et al,

-:), manea alores normales de hematocrito para la cepa de la rata Sprague Dawley de

2 L 1:J y la 6niersidad de [aragoza (-1) alores de /1 L 21J y si se obsera el cuadro

-: y la igura :? se er que los alores se encuentran en dicho rango. Podemos airmar

entonces que a pesar que hay una dierencia altamente signiicatia entre el grupo + y el

control, los alores de hematocrito hallados se encuentran dentro de los alores normales

para esta especie.

Fi?'*a 1, Val#*s %*#$+i# + 3$a!#c*i!# al iici# ) al fial + la i


48

signiicatias (pS.1) y de acuerdo a la prueba de comparacin TuFey se eriica que no

hay dierencias signiicatias entre los grupos (*ne$o :). 7in embargo, se obser un

aumento de los leucocitos (glbulos blancos) en todos los grupos, estas son las encargadas

de la deensa contra la ineccin, bien como productoras de anticuerpos (linocitos), bien

participando en la destruccin de microorganismos (neutrilos, eosinilos, basilos y

monocitos).

El %anadian %ouncil on *nimal %are (:382) presenta alores normales de

leucocitos para ratas entre los 2 a : c#lulasmm/.

Fi?'*a 1, Val#*s %*#$+i# + l#s L'c#ci!#s al iici# ) al fial + la i


?

Fi?'*a 18, Va*iaci#s +if*cials %*#$+i# + l#s L'c#ci!#s ?*a'l#ci!#s )

a?*a'l#ci!#s.


?:

c.1 Lif#ci!#s

En los resultados para linocitos (5igura - y ane$o - y /) se encontraron que el

promedio de los alores al inicio ueron para el


8

7eg&n el cuadro -/ el hgado en el ?-J de todos los casos es normal. Presentando

cierto cuadro congestio en el grupo +, y ++ e indicios de hepatomegalia (aumento del

tama0o del hgado) en el grupo ++ y +++ y +B y una rata del grupo +++ presentaba un hgadohipotrico.

En relacin a los pulmones se obsero que slo en el caso del grupo control se

encontraron animales con los pulmones normales en un 1J (/ muestras). En general los

pulmones presentaban ibrosis y hemorragia pulmonar en todos los grupos, incluido el

grupo control.

C'a+*# 2, Ca*ac!*(s!icas $ac*#sc%icas + l#s *?a#s + l#s ?*'%#s c# !*a!a$i!#

) l ?*'%# c#!*#l

*?a# Ca*ac!*(s!icas ac*#sc#%icas G*'%# I7 K 9:G*'%# II

7 K :G*'%# III

7 K :G*'%# IV

7 K 9:

70: 70: 70: 70:3(?a+# Aormal.

A%ongestio hemorrgico

ACepatomegala ligera

ACepatomegala marcada

ACipotrico

1 (8/J)

: (:?J)

AAA

AAA

AAA

1 (?-J)

: (:2J)

: (:2J)

AAA

AAA

1 (?-J)

AAA

AAA

: (:2J)

: (:2J)

1 (8/J)

AAA

AAA

: (:?J)

AAARi#s A ormales.

ACipotricos

A 7ignos hemorrgicos

4 (:J)

AAA

AAA

4 (84J)

: (:2J)

AAA

4 (84J)

AAA

: (:2J)

4 (:J)

AAA

AAAP'l$#s Aormales.

A5ibrosis pulmonar con presencia de

necrosis

A5ibrosis y hemorragia pulmonar

AAA

- (/2J)

AAA

2 (44J)

AAA

- (-8J)

AAA

1 (?-J)

AAA

AAA

AAA

? (:J)

/ (1J)

AAA

AAA

/ (1J)


8?

5. Ti+# 3%>!ic#

7eg&n el "#dico %iruano *ntomo Patlogo 9aniel %arrera Palao (%"P Z

--43?), maniiesta que el estudio del hgado de todos los grupos (incluido el control) no

muestran ning&n tipo de alteracin histolgica estructural en relacin a to$icidad por la

ingesta alimentaria. En el cuadro -1 podemos apreciar los cambios histopatolgicos del

hgado de todos los grupos tratados y del control (grupo +B).

C'a+*# 2@, Ca$5i#s 6is!#%a!#l?ic#s +l 6(?a+# s?/ +#sis + c#c!*a+# +

%*#!(a + %#!a

Es!*'c!'*as Ca*ac!*(s!icas ac*#sc%icas G*'%# I7 K 9:G*'%# II

7 K :G*'%# III

7 K :G*'%# IV

7 K 9:70: 70: 70: 70:

Es!*'c!'*a T*a5c'la*

6%>!ica

A Preserada.

A 9a0ada.

:J

AAA

:J

AAA

:J

AAA

:J

AAAVas#s C!*# l#5'lilla* A %ongestios ligeramente

A o congestios

:J

AAA

:J

AAA

:J

AAA

:J

AAASi's#i+s 6%>!ic#s A %ongestios ligeramente

A o congestios

:J

AAA

:J

AAA

:J

AAA

:J

AAAEs%aci#s %#*!a A ormales.

A %on alteraciones

:J

AAA

:J

AAA

:J

AAA

:J

AAACaal(c'l#s 5ilia*s A ormales.

A %on alteraciones

:J

AAA

:J

AAA

:J

AAA

:J

AAA

En las 5iguras //*, //> y //% se obsera el teido heptico de aspecto normal derata del grupo + (9osis 1 mg=g) a dierentes aumentos. tese los l#5'lill#s 6%>!ic#s

7LB:que son descritos clsicamente como he$agonales, es decir, un polgono de seis lados,

es muy raro encontrar alguno que se ea con esta orma e$acta, lo que tenemos que hacer

es buscar en espacios abiertos la


V. CONCLUSIONES

- 'a administracin del concentrado de protenas de pota (Dosidicus gigas) elaborado

en la 6*'" no caus alteracin histolgica estructural en el hgado ni en los

ri0ones.

- 'a 9'1 del concentrado de protena de pota elaborado en la 6*'" se encontr

por encima de - mgFg de peso corporal, caliicndose seg&n el 7istema


:8

ANEO 1. INFORE DE LA PRUEBA PILOTO REALIZADA EN

RATAS Q RATONES

INTRODUCCION

El ensayo de to$icidad aguda que se realiz esta sueto a la dosis m$ima que

pueda soportar el animal y tambi#n la orma de administracin. E$istieron inconenientes

respecto a la preparacin de la solucin en base a concentrado de protena de pota a

administrar debido a su poca capacidad de solubilizacin en agua y suero isiolgico por lo

que se pudo e$perimentar, en tal sentido se procedi a preparar dosis ascendentes a las

concentraciones de :J y -J y se administro aleatoriamente a los animales de

e$perimentacin. En el presente ensayo no se encontr mortalidad debido al producto.

'a To$icidad aguda por lo general se deine como el cambio aderso que ocurren

inmediatamente o poco tiempo despu#s de una &nica o bree perodo de e$posicin a una

sustancia o sustancias o eectos adersos que ocurren dentro de un corto tiempo de

administracin de una dosis &nica de una sustancia o habida cuenta de dosis m&ltiples

dentro de las -2 horas.

O5!i


::1

ANEO . RESULTADOS BIOUICOS Q 3EATOLGICOS FINALES 78= DAS TRATAIENTO:

Al5&"ina Creatinina TGP )5 )to Le&cocitos A5astona4os e"enta4os Monocitos E#sifil#s Basfil#s Lin6ocitosN7 Rata :inal :inal :inal :inal :inal :inal :inal :inal :inal :inal :inal :inal

1 ;.2 1.; 9.0 1.0 1.0 0.0 2;.0

2 ;.> 1.; 12.0 19.2 9;.0 >?00.0 1.0 29.0 0.0 0.0 0.0 >5.0

; ;.0 1.5 12.0 19.2 9;.0 ?>50.0 2.0 2;.0 1.0 0.0 0.0 >9.0

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Tesis Toxicidad Concentrado de Proteina de Pota (Final3)