12

4

Referencias

1 – Inyector

2 – Conector de Columnas

3 – Horno del Cromatógrafo

4 – Detector de Masas

3

Columnas 1 y 2

1

4

Columna

1

Columna

2

2

3

0,0

2,0

4,0

6,0

8,0

10,0

12,0

14,0

11,0 11,5 12,0 12,5 13,0 13,5 14,0 14,5 15,0

TIC (x 106)

Time (min)

p-c

ym

en

e

1,8

-cin

eo

l +

β-p

hell

an

dre

ne

(-)-

lim

onen

e

A

0,0

1,0

2,0

3,0

4,0

5,0

6,0

7,0

8,0

9,0

19,0 19,2 19,4 19,6 19,8 20,0 20,2 20,4 20,6 20,8 21,0

TIC (x 106)

Time (min)

β-f

ela

ndre

no

(-)-

lim

on

en

o

(+)-

lim

on

en

o

1,8

-cin

eo

l

B

0,3

0,8

1,3

1,8

2,3

2,8

3,3

18,0 18,5 19,0 19,5 20,0 20,5 21,0 21,5 22,0

TIC (x 106)

Time (min)

C

β-f

ela

ndre

no

γ-t

erp

ineno

2,0

4,0

6,0

8,0

10,0

12,0

14,0

16,0

18,0

17,0 17,5 18,0 18,5 19,0 19,5 20,0 20,5 21,0

TIC (x 106)

Time (min)

β-f

ela

nd

ren

o

(-)-

lim

on

en

o

(+)-

lim

on

en

o

α-f

ela

ndre

no

D

0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

16,3 16,5 16,8 17,0 17,3 17,5 17,8 18,0

TIC (x 106)

Time (min)

(+)-β

-pin

en

e

(-)-β

-pin

en

e

E

1,8

2,3

2,8

3,3

3,8

4,3

4,8

14,0 15,0 16,0 17,0 18,0 19,0 20,0 21,0 22,0

TIC (x 106)

Time (min)

F

(+)-β-p

ineno

(-)-β-p

ineno

(-)-

lim

on

en

o

(+)-

lim

on

en

o

SEPARACIÓN Y CARACTERIZACIÓN ENANTIOMÉRICA DE TERPENOS DE ACEITES ESENCIALES DE EUCALYPTUS: HIBRIDACIÓN INTERESPECÍFICA COMO FUENTE DE REPELENTES DE AEDES ALBOPICTUS

Tesista: Cecilia V. Naspi - Director: Héctor M. Masuh

Aceite Esencial

HPLC

Fracciones

Hexano Extracción Líquido-líquido

Extracto Orgánico

CG-EM – DB5MS

CG – Quiral

Exceso Enantiomérico

Enantiómero mayoritario – Enantiómero minoritario

Enantiómero mayoritario + Enantiómero minoritario X 100

Análisis cromatográfico

CG-EM – DB5MS

CG- Quiral

Monodimensional : Cyclosil-β

Bidimensional : DBWAX +Cyclosil-β

Monodimensional : Cyclosil-β

Bidimensional : DBWAX +Cyclosil-β

CG- EM

CG-FID : Cyclosil-β

Extracción de aceite esencial de Eucalyptus nitens por hidrodestilación y análisis por GC-MS

Aceite Esencial

Aparato de Clevenger modificado

Fraccionamiento de aceites esenciales por cromatografía líquida de alta resolución y análisis por cromatografía gaseosa quiral: Cálculo de exceso enantiomérico de monoterpenos

Sistema cromatográfico bidimensional para el estudio de la composición enantiomérica de monoterpenos

Actividad repelente de aceites esenciales contra Aedes albopictus

Ciclodextrina Permetilada

Centro de

Investigaciones de

Plagas e Insecticidas

(UNIDEF-CONICET)

J B. de La Salle 4397

(B1603ALO),

Buenos Aires, Argentina.

3,0 8,0 13,0 18,0 23,0 28,0 33,0 38,0

1

2

3

4

5

6 7

8

9

10

Cromatograma (TIC) del aceite esencial en columna DB-5MS 1. Isobutil isobutirato (6.64%) 2. Isoamil n-butirato (5.13%) 3. p-cimeno (21.65%) 4.1,8-cineol (23.22%) 5. γ-terpineno (7.72 %) 6. 4-terpineol (1.54%) 7. α-terpineol (2.44%) 8. sesquiterpeno desconocido (11.58%) 9. sesquiterpeno desconocido (1.82%) 10. sesquiterpeno desconocido (5.90%)

Principales componentes del aceite esencial de E. nitens

Columnas DBWAx y Cyclosil-β en serie

Sistema cromatográfico bidimensional 1. Inyector

2- Conector de columnas 3. Horno del cromatógrafo

4. Detector de Masas

(A) Aceite esencial de Eucalyptus tereticornis en sistema monodimensional (Cyclosil-β) y (B) Aceite esencial de Eucalyptus tereticornis en sistema bidimensional (DB-WAX + Cyclosil-β) (C – E) Fracciones obtenidas de HPLC de E. tereticornis en sistema bidimensional (columna DB-WAX + Cyclosil-β) (F) Fracción obtenida de HPLC de E. grandis x E.tereticornis en sistema bidimensional (columna DB-WAX + Cyclosil-β).

Conclusiones

Es de suma importancia conocer la composición enantiomérica de los aceites esenciales y cómo es modificada por la hibridación entre especies de Eucalyptus. El

análisis quiral por GC-MS con una única columna no siempre resuelve todos los componentes presentes en muestras complejas como los aceites esenciales. Para ello

se construyó un sistema bidimensional donde la primera columna separa a los terpenos que luego son resueltos en sus enantiómeros en una segunda columna

quiral. Cuando el sistema bidimensional no logra resolver los componentes debido a coeluciones, el uso de técnicas de prefraccionamiento por HPLC permite obtener

fracciones más puras que son fácilmente analizables por GC-MS. Estos estudios son el punto de partida para el análisis posterior de la actividad

repelente y electróantenográfica de los terpenos obtenidos a partir de los aceites esenciales de Eucalyptus.

Introducción Aedes albopictus es un mosquito transmisor del dengue y la fiebre amarilla. Una alternativa para evitar la infección es el uso de repelentes basados en aceites esenciales (AE) y sus componentes. La hibridación interespecífica de Eucalyptus es una estrategia que permite modular la composición enantiomérica de los terpenos presentes en los AE. Los AE de E. grandis, E. camaldulensis, E. tereticornis, E. badjensis, E. nitens y sus híbridos se analizaron mediante cromatografía GC-MS en columnas quirales para conocer la composición enantiomérica de monoterpenos. Estos estudios son el punto de partida para el análisis posterior de la actividad repelente y electroantenográfica de los terpenos obtenidos del aceite esencial de Eucalyptus.

a Los compuestos se indican según el orden de elucion; b Indice Relativo de Retencion; c Exceso Enantiomerico (e.e.) expresado como porcentaje, el enantiomero predominante se muestra entre parentesis; - significa “no presente en el aceite esencial; d Exceso Enantiomerico calculado a partir del prefracionamiento con HPLC y por analisis GC-MS bidimensional (DB-WAX+Cyclosil-b). e Exceso Enantiomerico calculado a partir del prefracionamiento con HPLC y por analisis GC-MS monodimensional (Cyclosil-b). n.c terpenos que están siendo analizados para el cálculo de la composición enantiomérica

Compuestos

Enantiomericosa

RRI b

Exceso Enantiomerico / Enantiomero Predominante c

E. grandis E. tereticornis E. grandis x E.

tereticornis

E.

camaldulensis

E. grandis x E.

camaldulensis E.badjensis E.nitens

E.badjensis x

E.nitens

(S)-(-)-α-pineno 977 89.0 / (+) 47.2 / (+) 84.8 / (+) 56.2 / (+) 87.4 / (+) 73.6 / (+) n.c. 82.9 / (+)

(R)-(+)-α-pineno 980

(S)-(-)-camfeno 1010 74.3 / (+) - 43.3 / (+) - 10.1 / (+)e - - -

(R)-(+)-camfeno 1015

(R)-(+)-β-pineno 1025 34.7 / (-) 50.2 / (-)d 83.8 / (-) 30.13 / (-)d 80.7 / (-) 76.7 / (-) - -

(S)-(-)-β-pineno 1031

(S)-(-)-limoneno 1059 61.5 / (+)e 29.2 / (+)d 5.1 / (+)d n.c. 22.3 / (+)e 52.4 / (+)e n.c. n.c.

(R)-(+)-limoneno 1075

(R)-(-)-linalool 1219 75.1 / (+) 82.1 / (+) - 88.7 / (+) - - - -

(S)-(+)-linalool 1226

(S)-(+)-4-terpineol 1301 64.5 / (+) 82.6 / (-) 11.2 / (-) 82.4 / (-) - - n.c. -

(R)-(-)-4-terpineol 1308

(S)-(-)-borneol 1344 88.6 / (+) - 20.6 / (-) - 11.8 / (+) - - -

(R)-(+)-borneol 1348

(S)-(-)-α-terpineol 1352 66.1 / (+) 31.1 / (+) 7.2 / (-) 15.6 / (+) 26.5 / (+) 16.5 / (+) n.c. 17.2 (+)

(R)-(+)-α-terpineol 1362

Exceso enantiomérico de monoterpenos en aceites esenciales de Eucalyptus