THE PHOSPHORYLATED SODIUM CHLORIDE COTRANSPORTER IN URINARY EXOSOMES IS SUPERIOR TO PROSTASIN

AS A MARKER FOR ALDOSTERONISMNILS VAN DER LUBBE, PIETER M. JANSEN, MAHDI SALIH, ROBERT A. FENTON,

ANTON H. VAN DEN MEIRACKER, A.H. JAN DANSER, ROBERT ZIETSE AND EWOUT J. HOORN ORIGINALLY PUBLISHED ONLINE JULY 30, 2012;

Universidad de Talca Facultad de Ciencias de la SaludDepto. de Bioquímica Clínica e InmunohematologíaEscuela de Tecnología Médica

PROFESORES: TM Mg Cs Elba Leiva

T.M M. Cs. Roxana Orrego

ALUMNO: Fernanda Bremer Talca, 27 de Agosto del 2013

Introducción

Hipótesis:La forma fosforilada del cotransportador de cloruro de (PNCC) o la prostasina podrían servir como biomarcadores para el hiperalosteronismoObjetivo:Proporcionar una prueba de principio de que la abundancia de proteínas sensibles a la aldosterona en exosomas urinarios se incrementa durante el aldosteronismo.

Exosomas urinarios. Cotransportador NaCl/K y cotransportador de NaCl (NCC).

Exosoma urinario. Cotransportador de NaCl Exosomas urinario. En el riñon, NCC y ENaC (canal de Na epitelial) son activados por

aldosterona. La forma fosforilada de NCC (pNCC) representa de mejor

forma la actividad biológica de NCC. ENaC cantidades en exosomas urinarios. Prostasina

actividad de ENaC.

Materiales y Métodos Tres estudios con ratas.

1er Estudio: 10 ratas.

2° Estudio: 15 ratas.

3er Estudio: 12 ratas.

Dosis alta de aldosterona (100μg/Kg/d).

Vehículo, a través mini bomba osmótica.

Dosis alta de aldosterona (100μg/Kg/d).

Vehículo, a través mini bomba osmótica.

Dosis normal de aldosterona (50μg/Kg/d).

Dosis normal de NaCl (0,5%).Dosis baja de NaCl (0,001% a 0,002%).

Aislamiento y análisis de inmunotransferencia de exosomas urinarios.Aislación de exosomas urinarios por un proceso de centrifugación de 2 pasos. Primero se centrifugo a 17000g x 15min a 37°C y luego se sometieron la muestras a una ultra centrifugación a 200000g x 105min a 37°C. El precipitado se suspendió en un tampón de aislamiento.

Aislamiento y análisis de inmunotransferencia de exosomas urinarios.Aislación de exosomas urinarios por un proceso de centrifugación de 2 pasos. Primero se centrifugo a 17000g x 15min a 37°C y luego se sometieron la muestras a una ultra centrifugación a 200000g x 105min a 37°C. El precipitado se suspendió en un tampón de aislamiento.

Estadística.Los resultados se expresaron como una media ± error estándar.Se utlizo Student t, para el grupo de comparaciones y la prueba de post hoc para el análisis de varianza.P ≤ 0,05 fue considerado estadísticamente significativo.

ResultadosPrimer estudio

Segundo estudio

Tercer estudio