Trabajo de Investigación

5/16/2018 Trabajo de Investigación - slidepdf.com

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EFECTOS ANTIOXIDANTE, ANTIPROLIFERATIVO,

ANTI-INFLAMATORIO Y QUIMIOPREVENTIVO

DE LA Buddleja incana (Quishuar).

El objetivo de este trabajo fue determinar: la capacidad antioxidante,

los niveles de polifenoles y flavonoides, la actividad antiinflamatoria, y

los efectos sobre el sistema inmune, sobre la proliferación de células

tumorales y fibroblastos normales y sobre la inflamación aguda y

crónica in vivo, de los extractos acuoso y metanólico de la planta

peruana Buddleja incana .

La actividad antiinflamatoria se determinó en ratas midiendo la

inhibición de COX-1 y COX-2 en un modelo de inflamación aguda

gastrointestinal. Mientras que la producción de IL-2 y IFN-γ fue

determinada en cultivo de linfocitos humanos mediante la técnicaELISPOT. El efecto sobre la proliferación celular se evaluó sobre la

línea celular de hepatocarcinoma humano (ATCC) mediante la técnica

XTT y fibroblastos normales de ratón. El efecto sobre la inflamación

crónica fue evaluado en el modelo murino usando como agente

inflamatorio y promotor del cáncer cutáneo el Forbol 12-miristato 13-

acetato (PMA) (Sigma Inc.,) y como marcadores de inflamación

crónica y premalignidad las moléculas COX-2 y NF-kB.

Los resultados muestran que la Buddleja incana tiene baja capacidad

antioxidante (0,82 mM/100 g ms) pero alto contenido de polifenoles

(11,78 g Ac gálico/100g ms) y flavonoides (112,86 mg

catequina(+)/100 g ms) en comparación con 14 plantas estudiadas



previamente. Tiene alto efecto antiinflamatorio al inhibir COX-2 en

yeyuno y estómago de ratas con inflamación gastrointestinal aguda

inducida por Indometacina, manteniendo niveles normales de COX-1.

Actúa favorablemente sobre el sistema inmune al estimular la

producción de IL-2 y IFN-γ en linfocitos humanos normales. In vitro

mostró notable efecto antiproliferativo de la línea celular

hepatocarcinoma humano produciendo una TIC de 83% a dosis de

60µg/mL mientras que la TIC sobre fibroblastos normales fue de 59%.

In vivo demostró inhibición de COX-2 y NF-kB en la piel de ratones

tratados con Forbol por 39 días así como de las lesiones premalignas

encontradas en el grupo control.

Se concluye en que la Buddleja incana tiene moderados efectos

antioxidantes, alto porcentaje de polifenoles y flavonoides, notableefecto antiproliferativo sobre células de carcinoma hepático

humano(HepG2) y bajo sobre fibroblastos normales, inhibe la

inflamación gastrointestinal aguda y cutánea crónica in vivo, y tiene

efectos quimiopreventivos de la promoción del cáncer cutáneo

inducido experimentalmente por Forbol 12-miristato 13 acetato, al

inhibir, tanto lesiones histológicas, como, la producción del Factor

Nuclear kappa B y Ciclooxigenasa-2.



Figura 1. Ratones luego del tratamiento con PMA. Se muestran animales representativos

de cada grupo, G-I: grupo control que recibió suero fisiológico topical. G-II: tratadossolamente con PMA, notar áreas alopécicas con pequeñas granulaciones. G-III. Grupo

control del solvente. G-IV: grupo tratado con PMA y decocción de B. incana por vía oral,

notar ausencia de lesiones cutáneas en área tratada.



Figura 2. Histopatología de la piel de los 4 grupos de estudio. G-I piel normal de ratón. G-II: tratados con PMA, apreciar notable hiperplasia epidermal y dermal. G-III: tratados con

solvente. G-IV: PMA + decocción de B. incana oral, se aprecia ligera hiperplasia

epidermal. Flecha amarilla indica epidermis. Tinción H/E. 10X.



Figura 3. Patrón histológico de inflamación crónica y lesiones pre neoplásicas del grupo G-

II con Forbol. (A) hiperplasia epidermal, atrofia folicular, vasculitis e hiperemia. (B)

Dermis con atrofia glandular, células balonizantes, necrosis, intensa proliferación celular.

(C) Aumento de matriz extracelular y colágeno, hiperplasia de fibroblastos, polimorfismo

celular con células muy basófilas, figuras mitóticas. (D) Células balonizantes en epitelio

glandular, anisocitosis y anisocariosis, necrosis. H/E. 40X.



Figura 4. Inmunohistoquímica de doble marcación para detectar COX-2 y NF-kB. (A) G-I

(control)ausencia de inmunoreactividad (0). (B) G-II(Forbol) intensa marcación de COX-2

(+++) en epidermis (flechas azules) y regular marcación de NF-kB(+) (flecha amarilla).(C) G-IV ( B. incana)muy escasa marcación de COX-2 (0) (flecha azul) y ausencia de NF-

kB. (D) G-II dermis con expresión de COX-2 (++) (flechas azules)y abundante NF-kB

(+++). 40X.

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