2017

TRABAJO PRACTICO 1. Introducción al laboratorio de microbiología. Bioseguridad

Objetivos:

Que el alumno sea capaz de incorporar las nociones de bioseguridad, lavado de manos,

preparación de solución de hipoclorito de sodio, decontaminación de mesadas y desechar

correctamente los residuos producidos.

Introducción

Se entiende por Bioseguridad al conjunto de principios, normas, técnicas y prácticas que

deben aplicarse para la protección del individuo, la comunidad y el medio ambiente, frente

al contacto con agentes que son potencialmente nocivos.

La Bioseguridad se debe pensar como una doctrina de comportamiento destinada a lograr

actitudes y conductas.

Es importante para tal fin, conocer los aspectos fundamentales que estén relacionados con

el cumplimiento de las normas de calidad que tiendan a la protección del personal, del

paciente (si los hubiera), las muestras de los pacientes (que debe tomarse como Única e

irrepetible), de la comunidad y el medio ambiente. Esto implica la adopción sistemática de

una serie de medidas orientadas a reducir o eliminar los riesgos que puedan producir las

actividades que se desarrollan en la institución.

La mayoría de los accidentes se dan por que existen: errores humanos, desconocimiento de

las normas, excesos de confianza, malos hábitos del personal, uso inadecuado de los

equipos de protección.

Las infecciones pueden entrar por:

- Tracto digestivo por ingestión o transferencia de microorganismos desde dedos

contaminados, lapiceras que se apoyadan en superficies contaminadas y se llevan a la boca.

- Mucosas: nasal, conjuntiva, aerosoles y manos contaminadas.

-Piel – vía percutánea: inyección, cortes o escoriaciones.

-Respiratoria: es la más importante. El 80% de las infecciones contraídas en el laboratorio

son de origen aéreo por inhalación de aerosoles que transportan microorganismos (ej:

virus).

Siempre hay que tener en cuenta que la infectividad de un microorganismo depende del

tamaño del inóculo, la susceptibilidad individual, la virulencia del agente y el sitio de

invasión.

Los Equipos de Seguridad- Barrera Primaria: son los elementos de protección personal:

guantes, delantales, botas, respiradores, mascaras faciales, anteojos o antiparras

de seguridad.

Niveles de seguridad. Requerimientos recomendados para los distintos niveles de

bioseguridad en Microbiología. Ver tabla abajo.

NIVEL 1 Agentes para los que no se ha comprobado que produzcan

enfermedad en adultos sanos = Laboratorio de enseñanzas.

NIVEL 2 Agentes asociados a enfermedades humanas de riesgo moderado

para el operador y medio ambiente (transmisión por ingestión,

daño percutáneo, contacto con mucosas)

NIVEL 3 Agentes indígenas o exógenos con potencial de transmisión por

aerosol, causantes de enfermedades graves o letales para

operador y riesgo moderado para el medio ambiente

NIVEL 4 Agentes exóticos que producen enfermedades mortales, que

pueden producir epidermias o de vías de transmisión

desconocidas. Elevado riesgo para el personal y el medio

ambiente

SOLUCIONES DECONTAMINANTES, PREPARACIÓN Y USO. Los desinfectantes químicos se utilizan para decontaminar (=desinfectar) superficies,

ambientes y material de laboratorio que no resista la esterilización en autoclave o por calor

seco.

HIPOCLORITO DE SODIO

El decontaminante más usado en procesos de higiene y desinfección biomédicos es la

lavandina, nombre común del hipoclorito de sodio, un agente químico que es capaz de

eliminar a la mayoría de los microorganismos.

Al diluir la lavandina en agua, se genera el principio activo, el ácido

hipocloroso, en un equilibrio que depende del pH:

NaClO + H2O = NaOH + HClO

Mecanismo de acción: oxida en forma irreversible grupos –S-S- de ciertas enzimas vitales

para los microorganismos inactivándolas. El HClO reacciona con casi cualquier molécula,

consumiéndose, es decir, la solución se agota en su principio activo a medida que actúa, por

esto hay que adecuar la relación entre agente decontaminante y material contaminado. Para

un buen proceso de decontaminación también es necesario utilizar el producto químico con

una concentración y tiempo de contacto adecuados.

USO CORRECTO de la LAVANDINA CONCENTRACIÓN. 1%y al 10%

USO

-Para limpieza de superficies poco contaminadas:

Mesadas

Pisos

Paredes, etc.

-Para decontaminar material delaboratorio muy contaminado:

Jeringas, tubos, etc.

Superficies muy contaminadas.

Cultivos.

PREPARACIÓN 1% = 1/100 = 1 + 99 Partiendo de la solución comercial, tomar 1 ml y llevar a 100 con agua corriente fría. 10% = 1/10 = 1+ 9 Partiendo de la solución comercial (55 g/l de cloro activo), tomar 10 ml y llevar a 100 con

agua corriente fría. Mediante el empleo de elementos no volumétricos, como por ejemplo

un vaso plástico, se agregará una parte de lavandina concentrada más 9 partes de agua.

El volumen a preparar dependerá de la cantidad de material o la superficie a decontaminar.

TIEMPO 30 min. 30 min. (se acostumbra dejar 24 Hs.)

PRECAUCIONES:

Lavandina Diluida -Lavandina Concentrada:

NO usar agua caliente para las diluciones. Las soluciones deben prepararse en el día y no

usarse más allá de las 24 Hs de su preparación.

NUNCA mezclar con detergentes ni con compuestos ácidos, pues al combinarse se

descompone el HClO, perdiendo la acción germicida.

NO usar para decontaminar equipos metálicos, las soluciones de

lavandina son corrosivas.

NO agotar el principio activo porexceso de material.

ASEGURAR el contacto íntimo entre el material y la solución, por ejemplo en el caso de

jeringas y tubos.

Mantener en su envase original bien tapado.

Conservar en lugar fresco y oscuro, pues el paso del tiempo, la luz y las altas temperaturas

inactivan al hipoclorito.

Antes de comenzar el trabajo de laboratorio en microbiología, se prepararán las soluciones

decontaminantes necesarias. La superficie de trabajo debe estar limpia para ser

decontaminada con Solución de lavandina al 1%. Además la mesada debe estar libre de

elementos innecesarios, por esto, la ropa de abrigo, bolsos, carpetas, etc, deben

permanecer SIEMPRE fuera del ambiente de trabajo, evitando también el “transporte” de

agentes biológicos del laboratorio al exterior del mismo.

COMO ACTUAR FRENTE ACCIDENTES :

1. Rotura de recipientes y derrames de material potencialmente

infeccioso (tareas de descontaminación).

-Colocarse las barreras primarias adecuadas (guardapolvos, guantes gruesos resistentes,

calzado protector de goma y, si hiciera falta, protección respiratoria apropiada.

- Cubrir el material derramado y los recipientes rotos, con papel absorbente.

- Cubrirlos con desinfectante y dejar actuar durante el tiempo necesario [solución de

hipoclorito de sodio 10% durante 30 minutos].

- Transcurrido dicho tiempo retirar todo. Manipular los fragmentos de vidrio con pinzas.

- Restregar la zona contaminada, con el desinfectante.

- Descartar los paños o el papel absorbente utilizados para la limpieza como residuo

patológico.

- En caso de contaminación de papeles manuscritos o impresos, en lo posible copiar la

información y descartar los originales como material contaminado.

2. Derrames sobre la mesada de trabajo.

- Avisar de inmediato a todos los presentes y evitar el ingreso de

cualquier persona a la zona afectada.

- Colocarse la protección adecuada (bata y delantal de plástico, máscara respiratoria,

guantes de látex).

- Contener el derrame mediante papel absorbente, polvos (absorbentes sanitarios del tipo de

diatomeas u otros).

-Aplicar el desinfectante desde el borde hacia el centro del derrame [para superficies

metálicas utilizar etanol 70%, para pisos, emplear hipoclorito de sodio 10-20 g/L (1-2%) de

cloro activo] y dejar actuar durante 30 minutos.

-Limpiar con agua y detergente.

-Desinfectar nuevamente.

Si bien la mayoría de los trabajadores de la salud reconoce la importancia del lavado de

manos, la MAYORÍA NO LO PRACTICA!!!

El lavados de manos consiste en un procedimiento que implica unos segundos -minuto

necesarios para una buena antisepsia de manos por frotación que debe realizarse en todos

los ámbitos, y en especial en los lugares de atención primaria (guardias, consultorios) y

centros de internación para prevenir infecciones ( nosocomiales)

Debe ser llevada a cabo con una técnica adecuada y efectiva para ANTES y DESPUES

de las jornadas laborales en particular en determinadas actividades vinculadas a la ámbito

salud y así eliminar algunos microorganismos que pueden ocasionar algún perjuic

ACTIVIDADES DEL TRABAJO PRACTICO N° 1:

OBJETIVOS:

- Evidenciar la importancia del lavado de manos

- Preparación y uso correcto de la solución de

lavandina

MATERIALES:

- Placa de petri

- Agar Nutritivo

- Lavandina comercial

- Jabón (líquido y en pan)

- Alcohol en gel

- Solución iodada

PROCEDIMIENTO:

A) PREPARACIÓN DE LA SOLUCION DE HIPOCLORITO DE SODIO AL 1% Y AL 10%

1% = 1 parte lavadina + 99 partes de agua corriente

10% = 1 parte lavandina + 9 partes de agua corriente

B) LAVADO DE MANOS

1) Dividir la placa de Agar nutritivo a la mitad, y rotulando ANTES Y DESPUES

2) Tocar suavemente el agar con las yemas de los dedos (sin lavado previo) el sector

rotulado “ANTES”

3) A continuación cada grupo procederá al Lavado de manos con una de las siguientes

opciones:

- Jabón líquido

- Jabón en pan

- Alcohol en gel

- Solución iodada

4) Tocar nuevamente la placa de agar nutritivo en la sección rotulada “DESPUES”

con las yemas de los dedos limpios

5) Observación a las 24 hs de las placas y concluir los resultados obtenidos

C) EVALUAR CONTAMINACION AMBIENTAL 1) Colocar una placa de agar nutritivo abierta sobre la mesada durante todo el

desarrollo del trabajo práctico

2) Se cierra la misma al finalizar el TP y se incubará con el resto de las placas

utilizadas por 24 hs

3) Evaluación de los resultados