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Trabajo Práctico
Sistema Reproductor en Mamíferos
Cambios en la Fisiología Ovárica-Uterina durante el ciclo estral
Ciclos Reproductivos
Sucesión periódica de ciertos procesos o etapas de la fisiología ovárica que se dan como consecuencia de variaciones hormonales y se manifiestan en cambios morfo-funcionales en los órganos reproductivos femeninos (vagina, útero, oviductos).
Tipos de ciclos en mamíferos
En primates
La hembra es receptiva durante todo el ciclo.
Finaliza con la necrosis del endometrio
Menstrual Estral
En la mayoría de los mamíferos
La hembra sólo es receptiva durante un período del ciclo (celo o estro).
No hay necrosis del endometrio.
Clasificación de las Especies según su ciclo estral
Especies Monoéstricas: 1 ciclo por año con una fase de anestro prolongada. Ej: perra.
Especies Poliéstricas: 2 o + ciclos por año.Continuas: Ciclos estrales durante todo el
año. Ej: vaca, cerda, rata, ratona.
Estacionales: Ciclos sólo se producen en una estación determinada del año. Ej: oveja, cabra, yegua.
C I C L O E S T R A L
PROESTRO ESTRO METAESTRO
DIESTRO
Foliculogénesis
Crecimientorápido
Maduración
Ovulación Comienza a
las 10 hsPost-pico de
LH
Luteogénesis inicial
Luteogénesis
maduraLuteólisis
Proestro Estro Metaestro Diestro
Regulación hormonal eje HH-Ovario
Etapas del Ciclo Estral
Proestro: periodo de crecimiento folicular que se inicia con la regresión del cuerpo lúteo y culmina con la aparición del estro (FSH)
Estro: periodo de receptividad sexual, al final del cual se produce la ovulación (LH )
Metaestro: periodo de desarrollo inicial del cuerpo lúteo que comienza al final del estro (PG)
Diestro: periodo de actividad del cuerpo lúteo
maduro posterior a la ovulación y finaliza con la lúteolisis (PG y E)
Manifestación externa CELO
Cambios conductuales aumentan posibilidad de apareo
Duración total del ciclo estral en ratón: 4-5 días
Ciclo Ovárico en Roedores
Factores que modifican el ciclo estral
Estado hormonal/hormonas exógenas Disruptores endocrinos
Contaminantes Tóxicos (pesticidas, herbicidas) Drogas de uso y abuso (psicofármacos, alcohol,
cocaína) Estado Nutricional Estrés Cambios ambientales (temperatura, fotoperíodo) Intervenciones quirúrgicas de órganos reproductores
Objetivos del TP
Conocer el ciclo estral en mamíferos usando un modelo experimental de hembras de ratón
Observar e interpretar los cambios en el ciclo estral y en el aparato ovárico- uterino-vaginal durante el ciclo estral
Estudios y Procedimientos del Trabajo Práctico
Primer Paso:Pesar los animales (peso corporal total en
mg)
Estudio del Ciclo estral del ratón por la técnica de Citología Vaginal:
Extracción del Frotis Vaginal Fijación y Coloración Observación al Microscopio Determinación del estado del ciclo por
cuantificación de los tipos celulares: Identificar y esquematizar los tipos celulares
según sus características morfológicas calcular %
Fijación y coloración1) Fijación en metanol 1 min. (campana)
2) Pasaje por alcohol 50% 1 min.
3) Lavado con agua destilada 1 min.
4) Coloración con hematoxilina 10 min.
5) Lavado con agua corriente 30 seg.
6) Pasaje por agua destilada 1 min.
7) Pasaje por alcohol 70% 1 min.
8) Coloración con Orange G 6 min.
9) Pasaje por alcohol 70% 1 min.
10) Coloración con Eosina 30 seg.
11) Pasaje por alcohol 70% 1 min.
Principales células reconocibles en un Frotis Vaginal
Superficiales
Parabasales
Leucocitos
Queratinizadas
Intermedias
Citología Vaginal en los estadíos del ciclo
Proestro Estro Metaestro Diestro
Parabasales 30% -- pocas 60-70%
Intermedias 60% Pocas 30% 30%
Superficiales Pocas 30% 30% pocas
Queratinizadas -- 70% 30% ---
Leucocitos-- -- Pocos
(ojo)Muchos
(ojo)
Células epiteliales parabasales (PB) e intermedias (IN)Eritrocitos y neutrófilos (+)
PROESTRO
PB
IN
+
Celulas Superficiales (SP) y Queratinizadas (Q).
ESTRO
Q
SP
Células epiteliales parabasales (PB) e intermedias (IN) y neutrófilos (+)
IN
DIESTRO
PB
+
Tabla por grupo
Número de jaula
PB IN SP Q Leucocitos
Fase del ciclo
Número de jaula
Proestro
Estro Metaestro
Diestro Otro
Tabla general
Estudio sobre Ovario y Útero Disección del aparato genital femenino.
Útero Bicorneo
Reconocimiento y observación de las partes bajo lupa:
Ovarios Oviducto Cuernos uterinos Cérvix
Separación de ovarios, oviducto y útero
Ovario
Oviductos
útero
Ayuda experimental: Eliminar toda la grasa del útero, cortar el cervix al ras del útero y separar los ovarios, poner el útero sobre un papel para facilitar la eliminación de la grasa. Pasar a papel de aluminio y pesar. Luego poner en una caja de Petri con solución fisiológica y observar a la lupa.
Estudio del estado Uterino Pesado del útero (mg) Observar y describir aspecto general:
color, irrigación, volumen, grosor y tamaño.
Calcular Índice Útero Somático (IUS)
Número de jaula
Peso Corporal (mg)
Peso Útero (mg)
IUS Estado del Ciclo
IUS = peso útero/ peso corporal x 100
Estudio del estado Ovárico Observar cuerpos lúteos (CL) y folículos (FL) Cuantificar presencia de CL.
Número de jaula
Fase del ciclo
Cantidad de CL
Ayuda experimental: Eliminar la mayor cantidad
de grasa posible de los ovarios para favorecer su visualización. Colocar el
ovario en una caja de Petri con solución fisiológica y
observar bajo la lupa.
Stage Ovary Uterus Vagina Smear
Diestrus
Small follicles only are present with large corpora lutea from the previous ovulation. These secrete for only a very short time unless pregnancy or pseudopregnancy intervene.
Small and anaemic, low motility, lumen small and slit-like. Cells of the uterine mucosa columnar; polymorphonuclear leucocytes in stroma; endometrial glands collapsed, atrophic.
Epithelium thin, mitotic figures infrequent. Leucocytes abundant in stroma, migrate through the epithelium into vaginal lumen.
Stringy mucous in which are entangled many leucocytes and a few nucleated epithelial cells.
Proestrus Some follicles grow rapidly.
Become more vascular, water content increases, organ distends. Contractility more pronounced. Epithelial cells become higher (continuing into estrus). Leucocytes disappear from mucosa. Endometrial glands hypertrophy.
Epithelum thickens, numerous mitoses in inner layers. Old layers of epithelium line the lumen. Leucocytes no longer migrate through the epithelium. Superficial epithelial cells slough off into lumen.
Largely small, round, nucleated epithelial cells, singly or in sheets. None to few leucoytes.
Estrus
Ovulation in the rat is spontaneous and occurs about 10 hours after the beginning of estrus. "Heat" (receptivity) lasts about 13 hours. Usually 10-20 eggs ovulated each time.
gains maximum vascularisation. Epithelial cells reach maximum development. No leucocytes.
Outer layer of epithelial cells become cornified and sloughed into the lumen. In early estrus these cells retain their nuclei, but in later stages no nuclei visible and the cells are irregular, flat, cornified plates. The skin around the vaginal orifice becomes swollen.
Contains hundreds of large cornified cells (squames) with degenerate nuclei. Towards the end of estrus the smear becomes "cheesy" - masses of adherent cornified cells.
MetestrusMany corpora lutea, which secrete only for a very short time, and small follicles.
Epithelium continues vacuolar degeneration and replacement. Leucocytes in stroma. Decrease in size and vascularity.
Deeper layers of the estrous epithelium now line the lumen, the older, superficial layers having become cornified and sloughed off. Reduction of mitotic activity in epithelium. Leucocytes in stroma and migrating through the epithelium into the lumen.
Many leucocytes and a few cornified cells.