LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI STAPHYLOCOCCUS DAN STREPTOCOCCUS

Oleh: Anindita Pramadyasiwi Imas Reza Palupi Laurencia F. R. S. Narendra Wahyu J. Rika Ainun T. Dito Fadilla 072010101007 072010101019 072010101043 072010101045 072010101048 072010101057

FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS JEMBER APRIL, 2008

BAB I PENDAHULUANI. Latar Belakang Pratikum I STAPHYLOCOCCUS Staphylococcus adalah bakteri gram positif yang bentuk bulat dengan rangkaian yang tak beraturan (seperti anggur). Bakteri ini mudah tumbuh pada berbagai perbenihan dan mempunyai metabolisme aktif, meragikan karbohidrat dengan lambat, menghasilkan asam laktat, tetapi tidak menghasilkan gas. Selain itu, bakteri ini menghasilkan pigmen yang berwarna putih sampai dengan kuning tua. Pada umumnya ditemukan di kulit, selaput lendir maupun di sekeliling kita. Staphylococcus berbeda dengan streptococcus, karena bakteri ini menghasilkan enzim katalase. Staphylococcus dapat dibedakan berdasarkan sifatnya menjadi 2 yaitu a. Patogen. Bakteri ini menghemolisis sel darah merah dan menghasilkan plasma koagulase.b. Nonpatogen.

Selain itu, staphylococcus berdasarkan produksai plasma koagulase dibagi menjadi: a. Staphylococcus koagulase positif b. Staphylococcus koagulase negatif Ada 3 spesies staphylococcus yang penting dan banyak berhubungan dengan manusia, yaitu: a. Staphylococcus aureus Merupakan patogen utama bagi manusia. Hampir setiap manusia akan mengalami

beberapa

tipe

infeksi

darinya.

Untuk

membedakan

Staphylococcus aureus dengan Staphylococcus dari spesies yang lain, yaitu: Staphylococcus aureus menghasilkan enzim koagulase sedangkan Staphylococcus dari spesies yang lain tidak. Enzim koagulase ini

mengubah fibrinogen menjadi fibrin ( fibrin ini akan melapisi S. Aureus dan akan melindungi kuman dari phagocytosis) Kemampuan patogenik strain S aureus tertentu, merupakan efek gabungan faktor ekstraseluler, toksin, serta invasi dari strain tersebut. S aureus yang patogen dan invasif cenderung menghasilkan koagulase dan pigmen kuning dan bersifat hemolitik. S aureus menyebabkan pneumonia, meningitis, empiema, endokarditis, atau sepsis dengan pernahanan pada bagian tubuh mana pun, infeksi paru. b. Staphylococcus epidermidis Stafilokokus koagulase negatif merupakan flora normal dan kadang menyebabkan infeksi seringkali berkaitan dengan alat-alat yang ditanam. Bakteri ini merupakan anggota flora normal pada kulit manusia, saluran pernafasan, dan saluran pencernaan. Dan bersifat koagulase negatif dan tidak hemolitik. Selain itu, bakteri ini juga dapat mengakibatkan penanahan tetapi dapat menginfeksi prostesis ortopedik atau kardiovaskular. c. Staphylococcus saprophyticus Bakteri ini relatif sering menyebabkan infeksi saluran kemih pada wanita muda. Digunakan pemeriksaan tes kepekaan Novabiocin untuk membedakan Staphylococcus saprophyticus dengan Stapylococcus

epidermidis. Staphylococcus saprophyticus resisten terhadap novabiocin, sedang S. Epidermidis sensitif. Tabel identifikasi Staphylococcus Test Tes koagulasi Hemolisis Tes mannitol Resistensi Novobiocin S. aureus + + + S. epidermidis +/S. saphrophyticus +/-

Pratikum II STREPTOCOCCUS

Merupakan bakteri gram positif yang berbentuk bulat yang secara khas membentuk pasangan atau rantai selama masa pertumbuhannya. Termasuk golongan bakteri yang termasuk heterogen. Terdapat dua puluh spesies digolongkan menurut kombinasi sifatnya yaitu sifat pertumbuhan koloni, pola hemolisis pada agar darah (hemolisis , hemolisis atau tanpa hemolisis), susunan antigen pada zat dinding sel yang spesifik untuk golongan tertentu dan reaksi-reaksi biokimiawi dan termasuk juga Streptococcus phyogenes (golongan A), streptococcus agalactia (golongan B), dan enterokokus (golongan D). Sifat kuman Streptococcus termasuk bakteri katalase negatif. Macam streptococcus: a. Hemolisis tipe : Streptococcus phyogenes terjadi hemolisa total dari sel darah merah, dan hemoglobin digunakan secara total oleh kuman, sehingga terbentuk zona jernih di sekitar kuman. Terlihat jelas pada medium blood agar, tetapi tidak terlihat di medium chocolate agar. b. Hemolisis tipe : Streptococcus viridans atau Streptococcus pneumonia. Terjadi hemolisa sebagian dari sel darah merah dan reduksi dari hemoglobin menjadi methemoglobin sehingga muncul zona hijau di sekitar kuman. Hal ini terlihat jelas pada medium chocolat agar, dan juga pada blood agar. c. Hemolisis tipe : Streptococcus faecalis tidak menyebabkan hemolisa pada medium coklat agar maupun agar darah sehingga tidak ada perubahan pada medium blood agar maupun coklat agar. Bahan yang diperiksa tergantung pada lokasi infeksinya, bahan pemeriksaan dapat berupa usapan tenggorok, pus, darah, urine, feces, sputum, LCS, cairan pleura dll.

STREPTOCOCCUS PNEUMONIA

Termasuk diplokokus gram positif dan dalam bentuk rantai. Bakteri ini mudah dilisiskan oleh zat aktif permukaan. Merupakan penghuni normal pada saluran pernafasan bagian atas manusia yang dapat menyebabkan pneumonia, sinusitis, otitis, bronkitis, bakterimia, meningitis, proses infeksi lainnya. Energi diperoleh dari peragian glukosa. Ini diikuti oleh pembentukan asam laktat yang cepat, yang membatasi pertumbuhan. Faktor pneumokokus : a. Kelainan saluran pernafasan b. Alkohol atau intoksikasi obat c. Kelainan dinamika sirkulasi d. Malnutrisi, debilitas umum, anemia sel sabit, hiposplenima, nefrosis, atau defisiensi komplemen Tes diagnostik laboratorium : Darah diambil untuk biakan, dan dahak dikumpulkan untuk mencari pneumokokus dengan memeriksa sediaan apus dan biakan. Dahak dapat diperiksa melalui : 1. Sediaan yang diwarnai Pewarnaan gram dari dahak yang merah-karat menunjukkan ciri-ciri khas organisme, banyak neutrofil polimurnuklear, dan banyak sel darah merah 2. Tes pembengkakan simpai Dahak segar yang diemulsikan dicampur dengan antiserum sehingga mengakibatkan simpai (reaksi quellung) untuk identifikasi pneumokokus dan mungkin penentuan tipe. Eksudat peritoneum dapat juga digunakan untuk tes pembengkakan simpai 3. Biakan Dahak diabiakkan pada agar darah dan dieramkan dalam CO2 atau dalam botol berlilin, biakan darah 4. Penyuntikan dahak pada mencit percobaan secara intraperitoneal 5. Meningitis pneumokokus harus didiagnosis dengan memeriksa segera dan membiakkan cairan seresbrospinal yang mungkin menurunkan daya tahan terhadap infeksi

II. Tujuan Pratikum II.1 II.2 II.3 II.4 katalase. II.5 II.6 hemolisis. Mengetahui perbedaan dari macam-macam staphylococcus dengan Mengetahui perbedaan dari macam-macam streptococcus dengan uji uji koagulase, mannitol, dan novobiosin. Mengetahui bentuk media agar miring dan agar datar. Mengetahui cara pengambilan bakteri dari media agar miring. Mengetahui pengecatan gram. Mengetahui perbedaan staphylococcus dan streptococcus dengan uji

BAB II TATA KERJAPratikum I-Staphylococcus1. Pembuatan preparat dari material langsung untuk pemeriksaan mikroskopik

Bila material berasal dari pus atau sputum, akan didapat morfologi staphylococcus yang khas yakni, merupakan bakteri: a. Berbentuk bulat, diameter kira-kira 1mikrometer. b. Sifat pengecatan : gram positif, makin tua makin ke arah gram negatif. c. Susunan: biasanya mempunyai susunan yang khas menggerombol seperti buah anggur. Tapi dapat juga tunggal, berpasangan atau berempat. Susunan yang tidak khas tersebut bila preparat dibuat dari media cair. 2. Mannitol salt agar Medium ini selektif untuk staphylococcus aureus karena mengandung 7,5% NaCl. Medium ini mengandung indikator pH : phenol red dan gula manitol. Bila ditanami S.aureus akan terjadi fermentasi manitol yang menghasilkan asam, akibat medium berwarna kuning. S. Epidermidis dan S. Saphrophyticus tidak memfermentasi manitol dan medium tetap berwarna merah. Catatan: fermentasi mannitol (+)=S.aureus (kuning) (-)=S.epidermidis dan S.saphrophyticus (merah) 3. Katalase Untuk membedakan staphylococcus dan streptococcus dilakukan tes katalase. Reaksinya : H2O2 H2O + O2 Cara: 1. Tube test Trypticase soy broth + 1 koloni kuman lalu diinkubasi 24 jam dan ditetesi dengan H2O2 3%. 2. Slide test

Ambil koloni dan hapuskan pada obyek glass bersih. Tetesi beberapa tetes H2O2 3% dan lihat adanya Bila ragu2 tutup dengan cover glass : adanya gelembung gas : tak ada gelembung gas.

gelembung gas.

Positif Negatif Catatan:

Jangan dari kultur yang usianya >24 jam( bisa false negatif). Jangan dari blood/chocolate agar plate karena katalase ditemukan di Uji katalase untuk staphylococcus harus positif (+).

sel darah merah.

4. Koagulase test Pemeriksaan ini bertujuan untuk membedakan Staphylococcus aureus dengan staphylococcus dari jenis lain. Staphylococcus aureus menghasilkan enzim koagulase sedang staphylococcus dari spesies lain tidak. Enzim ini mengubah fibrinogen menjadi fibrin. Fibrin ini akan melapisi Staphylococcus aureus dan akan melindungi kuman dari fagositosis. Bahan:

Plasma EDTA kelinci, dibagi dalam tabung screw cap, setiap tube Tabung bisa disimpan di lemari es 10 hari atau freezer untuk Jangan ambil kuman dari manitol salt agar (hasil bisa negatip) tapi

berisi 0,5 ml plasma.

beberapa bulan.

dari media netral seperti Mueller Hinton. Cara: 1. 2. 3. Tanamkan satu koloni staphylococcus pada 0,5 ml plasma kelinci Inkubasi 37C selama 4 jam. Bila ada gumpalan berarti positip Bila tidak ada gumpalan, inkubasi pada temperatur ruangan selama

24 jam

4. jam 5.

Positip: bila ada gumpalan (walaupun sedikit) pada 4 jam atau 24 Negatip: bila tidak ada gumpalan (setelah 24 jam)

5. Test kepekaan novobiosin Pemeriksaan ini bertujuan untuk membedakan Staphylococcus saprophyticus dengan Staphylococcus epidermidis. S.saprophyticus resisten terhadap novobiosin sedang S.epidermidis sensitif. SKEMA PEMERIKSAAN LABORATORY STAPHYLOCOCCUS Bahan pemeriksaan

Gram

Agar darah Pewarnaan gram

Streptococcus

Katalase + Staphylococcus Koagulase Manitol + -

S.aureus

Novobiosin

S.saprophyticus S.epidermidis Resisten Pratikum II-Streptococcus 1. batang. Pengecatan Gram : tercat gram positif Susunan : biasanya mempunyai susunan yang khas berderet-deret membentuk rantai panjang atau pendek. Tetapi ada juga yang berempat atau berpasangan. Alat tambahan : sebagian besar streptococcus group A, B, dan C mempunyai kapsul yang terdiri dari asam hyaluronat terutama pada kultur yang muda. 2. Penanaman: Pembuatan preparat untuk pengecatan Gram sensitif

Bentuk : Bulat, ada yang agak lonjong atau kadang-kadang memanjang seperti

Bila pada pemeriksaan mikroskopik dari material langsung ditemukan adanya streptococcus, tetapi pada penanaman tidak tumbuh mungkin kuman tersebut streptococcus anaerob (peptostreptococcus). Dari material ditanam pada media agar darah dan tanaman cair. Disamping kaldu darah juga thioglicolat bilamana dicurigai adanya kuman anaerob. Kemudian dieramkan 37oC selama 18-24 jam. Streptococcus akan membentuk koloni bulat, halus, jernih mengkilat dengan diameter 0,1-1 mm. Streptococcus pneumoniae Optochin test: Medium : blood agar plate Cara : dengan ose, ambil 3-4 koloni isolated dan streaking rapat pada area blood agar. Panaskan pinset dan letakkan Optochin disk pada area streaking. Inkubasi : 37oC selama 18-24 jam pada Candle jar (5-7% CO2) Positif : Streptococcus pneumoniae bila diameter zone hambat > 14 mm.

Negatif : Bila diameter zone hambat